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・５６４・ 广东医学２０１０年３月第３１卷第５期 Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ Ｍａｒ．２０１０，Ｖｏ１．３１。Ｎｏ．５
肝纤维化与肝硬化患者肝内ＣＸＣＬ１ ３和
ＣＸＣＬ１６的表达变化
廖欣鑫，廖彩仙 ，黄勇平，秦安成，袁杰，赖勇强，龚祖元
南方医科大学南方医院肝胆外科（广州５１０５１５）
【摘要】 目的观察肝纤维化与肝硬化患者肝组织中趋化因子ＣＸＣＬ１３和ＣＸＣＬ１６的表达变化。方法 用 ＥＬＩＳＡ方法分另ｑ检测９例正常人和ｌ０例肝纤维化、１１例肝硬化患者肝组织中的ＣＸＣＬ１３和ＣＸＣＬ１６含量。结果 正常对照组、肝纤维化组、肝硬化组的ＣＸＣＬ１３浓度分别为（２．３４±２．０５）ｎｇ／ｇ、（６．０４±２．９７）ｎｇ／ｇ和（１２．１０±
ｌ０．３８）ｎｇ／ｇ；肝硬化组的浓度显著高于正常对照组和肝纤维化组，正常对照组与肝纤维化组的ＣＸＣＬ１３浓度差异 无统计学意义。正常对照组、肝纤维化组、肝硬化组的ＣＸＣＬ１６浓度分别为（１．３２±０．９１）ｎｇ／ｇ、（３．３４ ４－１．８１）ｎｇ／ｇ 和（３．４９ ４－１．９０）ｎｇ／ｇ；肝硬化组和肝纤维化组浓度均显著高于正常对照组浓度，肝硬化组和肝纤维化组的ＣＸＣＬ１６ 浓度差异无统计学意义。结论肝脏发生纤维化损伤时，肝脏表达ＣＸＣＬ１３和ＣＸＣＬ１６的数量都显著增多，但两 者的变化规律不同。肝内ＣＸＣＬ１３水平在肝纤维化阶段开始升高，至肝硬化阶段升高到显著水平。肝内ＣＸＣＬ１６ 水平在肝纤维化阶段就已经升高到显著水平，至肝硬化阶段仍维持在高水平状态。
【关键词】 肝纤维化；肝硬化；ＣＸＣＬ１３；ＣＸＣＬ１６；趋化因子
Ｈｅｐａｔｉｃ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ ｏｆ ＣＸＣＬ１３ ａｎｄ ＣＸＣＬ１６ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｈｅｐａｔｉｃ ｆｉｂｒｏｓｉｓ ａｎｄ ｃｉｒｒｈｏｓｉｓ ａｎｄ ｉｎ ｎｏｒｍａｌ ｃｏｎｔｒｏｌ ＬＩＡＯ Ｘｉｎ—ｘｉｎ，ＬＩＡＯ Ｃａｉ—ｘｉａｎ，ＨＵＡＮＧ －ｐｉｎｇ，ＱＩＮＡｎ—ｃｈｅｎｇ，ＹＵＡＮ ｅ，Ｌ４， 一ｑｉａｎｇ，ＧＯＮＧ Ｚｕ—ｙｌｆｔｎ． Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＨｅｐａｔｏｂｉｌｉａｒｙ Ｓｕｒｇｅｒｙ，Ｎａｎｆａｎｇ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１０５１５，Ｃｈｉｎａ
Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ：ＬＩＡ０ Ｃａｉ—ｘｉａｎ，Ｅ—ｍａｉｌ：ｌｉａｏｃｘ＠ｆｉｍｍｌｚ．ｃｏｎ 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｃｈｅｍｏｔａｃｔｉｃ ｆａｃｔｏｒｓ（ＣＸＣＬ１３ ａｎｄ ＣＸＣＬ１６）ｉｎ ｔｈｅ ｌｉｖｅｒ ｏｆ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｈｅｐａｔｉｃ ｆｉｂｒｏｓｉｓ ａｎｄ ｃｉｒｒｈｏｓｉｓ ａｎｄ ｉｎ ｎｏｒｍａｌ ｃｏｎｔｒｏｌｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｈｅｐａｔｉｃ ｔｉｓｓｕｅｓ ｗｅｒｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｉｎ ｓｕｒｇｅｒｙ ｆｒｏｍ
９ ｎｏｒｍａｌ ｐｅｒｓｏｎｓ，１０ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｈｅｐａｔｉｃ ｆｉｂｒｏｓｉｓ，ａｎｄ １ １ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃｉｒｒｈｏｓｉｓ．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＣＸＣＬ１３ ａｎｄ ＣＸＣＬ１６ ｉｎ ｈｅｐａｔｉｃ ｔｉｓｓｕｅｓ ｗａｓ ｑｕａｎｔｉｆｉｅｄ ｂｙ ＥＬＩＳＡ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ＣＸＣＬ１３ ｗｅｒｅ ２．３４ ４－２．０５．６．０４±２．９７ ａｎｄ １２．１０ ４－１０．３８ ｎｅ／ｇ ｉｎ ｎｏｒｍａｌ，ｈｅｐａｔｉｃ ｆｉｂｒｏｓｉｓ ａｎｄ ｈｅｐａｔｉｃ ｃｉｒｒｈｏｓｉｓ ｇｒｏｕｐ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＣＸＣＬＩ３ ｉｎ ｓｃｌｅｒｏｔｉｃ ｌｉｖｅｒ ｗａｓ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｉｎ ｎｏｒｍａｌ ｃｏｎｔｒｏｌｓ ａｎｄ ｆｉｂｒｏｔｉｃ ｌｉｖｅｒ，ｂｕｔ ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ｎｏ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ．Ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ＣＸＣＬ１６ ｗｅｒｅ １．３２ ４－０．９１，３．３４ ４－１．８１ ａｎｄ ３．４９ ４－１．９０ ｎ ｇｉｎ ｎｏｒｍａｌ，ｈｅｐａｔｉｃｆｉｂｒｏｓｉｓ ａｎｄ ｈｅｐａｔｉｃ ｃｉｒｒｈｏｓｉｓｇｒｏｕｐ．ＣＸＣＬ１６ｉｎｆｉ・ ｂｒｏｔｉｃ ｌｉｖｅｒ ａｎｄ ｓｃｌｅｒｏｔｉｃ ｌｉｖｅｒ ｗｅｒｅ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｉｎ ｎｏｒｍａｌ ｌｉｖｅｒ，ｂｕｔ ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ｓｔｉｌｌ ｎｏ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ．Ｃｏｎｄｕｓｉｏｎ
Ｗｉｔｈ ｔｈｅ ａｇｇｒａｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｅｐａｔｉｃ ｆｉｂｒｏｕｓ ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ，ｈｅｐａｔｉｃ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ＣＸＣＬ１３ ａｎｄ ＣＸＣＬ１６ ｉｎｃｒｅａｓｅ，ｂｕｔ ｆｏｌｌｏｗ ａ ｄｉｆｅｒ－ ｅｎｔ ｗａｙ．ＣＸＣＬ１３ ｂｅｇｉｎｓ ｔｏ ｒｉｓｅ ｉｎ ｔｈｅ ｓｔａｇｅ ｏｆ ｌｉｖｅｒ ｆｉｂｒｏｓｉｓ ａｎｄ ｈａｓ ａ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｉｎ ｃｉｒｒｈｏｓｉｓ ｓｔａｇｅ．ＣＸＣＬ１６ ｉｎｃｒｅａ— ｓｅｓ ｔｏ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｌｅｖｅｌ ｉｎ ｔｈｅ ｓｔａｇｅ ｏｆ ｌｉｖｅｒ ｆｉｂｒｏｓｉｓ，ａｎｄ ｒｅｍａｉｎｓ ｉｎ ａ ｈｉｇｈ ｓｔａｔｅ ｉｎ ｌｉｖｅｒ ｃｉｒｒｈｏｓｉｓ ｓｔａｇｅ． 【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】 ｆｉｂｒｏｓｉｓ；ｃｉｒｈｏｓｉｓ；ｌｉｖｅｒ；ＣＸＣＬ１３／ＢＣＡ一１；ＣＸＣＬ１６；ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ
ＣＸＣＬ１３（ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ ＣＸＣ ｌｉｇａｎｄ １３）由ＬＥＧＬＥＲ 等 在１９９８年发现，具有吸引Ｂ细胞的能力；而ＣＸＣＬ１６
主要对激活的Ｔ细胞起趋化作用 。近年发现它们对
包括骨髓源性肝干细胞（ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｄｅｒｉｖｅｄ ｌｉｖｅｒ ｓｔｅｍ
ｃｅｌｌｓ，ＢＭＤＬＳＣ）在内的骨髓间充质干细胞（ｂｏｎｅ ｍａｌＴｏｗ
ｍｅｓｅｎｅｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ，ＢＭＭＳＣ）也有趋化作用。鉴于实
验和临床研究都已证实，肝病损伤可以引发ＢＭＤＬＳＣ向 肝脏迁移并参与对损伤的修复 “ ，但驱使ＢＭＤＬＳＣ向
肝脏迁移的物质基础不明，肝病患者的肝内ＣＸＣＬ１３和
ＣＸＣＬ１６水平有何变化也不清楚。为此，作者对正常人、
肝纤维化与肝硬化患者肝内ＣＸＣＬ１３和ＣＸＣＬ１６的含量
变化进行了观察。报告如下。
广州市科技攻关计划项目（编号：２０ｏ７ｚ３一Ｅ０３７１） △通信作者。教授，主任医师，硕士研究生导师；Ｅ—ｍａｉｌ：ｌｉａｏｃｘ＠ ｆｉｍｍｕ．ｃｏｎ １资料与方法
１．１一般资料人肝脏组织，样本量为３０例，男１８例，
女１２例。年龄ｌ９～７７岁，平均５０岁。标本均来自２００８
年５月至２００９年５月在南方医科大学南方医院肝胆外 科接受手术（包括肝移植）的患者，肝组织标本在手术中
获取。肝组织切取后立即分为２份，一份甲醛固定后行
组织病理学检查，另一部分放入１．５ ｍＬ ＥＰ管内置于一
８０℃低温冰箱保存待测。
１．２标本分组（１）正常对照组（ｎ＝９）：无乙型肝炎病
史，乙肝两对半显示乙肝表面抗原阴性，肝组织病理学
检查显示肝组织结构正常。（２）肝纤维化组（ｎ＝１０）：有
乙型肝炎病史或乙型肝炎病毒感染史，乙肝两对半显示
乙肝表面抗原阳性，组织病理学检查显示肝内纤维组织
广泛增生，但未见假小叶形成。（３）肝硬化组（ｎ＝１１）：
有乙型肝炎病史或乙型肝炎病毒感染史，乙肝两对半显 广东医学２０１０年３月第３ｌ卷第５期 Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ Ｍａｒ．２０１０，Ｖｏ１．３１，Ｎｏ．５ ．５６５．
示乙肝表面抗原阳性，肝组织病理学检查提示肝内纤维
组织广泛增生，并有假小叶形成。
Ｉ．３ ＣＸＣＬ１３和ＣＸＣＬ１６的测定 １．３．１ 主要仪器和试剂 微量手动玻璃匀浆器、精密电
子天平（北京赛多利斯仪器公司）、台式高速低温离心
机、３７％孵箱、酶标仪（ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｐｌｕｓ３Ｍ，美国ＭＤ公
司）及ＳｏｆｌＭａｘ Ｐｒｏ微孔板读数软件，人ＣＸＣＬＩ３、人
ＣＸＣＬ１６试剂盒４８Ｔ（美国ＡＤＬ公司）各一个。
１．３．２测定方法肝组织经电子天平称重后移人微量
手动玻璃匀浆器中于冰水中匀浆５ ｍｉｎ，然后按１／８质量
体积比加入ｉ×ＰＢＳ缓冲液将匀浆组织洗下并转移至
１．５ ｍＬ ＥＰ管中，再稀释一倍后，低温高速离心机４℃下
１ ０００ ｘ ｇ离心１０ ｒｎｉｎ，提取上清液移至另一１．５ ｌｌｌ【Ｊ ＥＰ 管中，低温高速离心机４℃下２５ ０００ ｒ／ｎｆｉｎ离心２０ ｍｉｎ．
取上清液测定ＣＸＣＬＩ３、ＣＸＣＬ１６浓度，操作程序按照人
ＥＬＩＳＡ试剂盒的操作说明进行。
１．４肝组织病理学检查 常规石蜡包埋与切片，ＨＥ染
色，光镜观察。
１．５统计学方法用ＳＰＳＳ １３．０统计软件，均数比较采
用ｏｎｅ—ｗａｙ ＡＮＯＶＡ，两两比较采用ＬｓＤ。
２结果
肝脏发生纤维化损害时，肝组织表达ＣＸＣＬ１３和
ＣＸＣＬ１６的数量增多。肝硬化组ＣＸＣＬ１３的浓度显著高
于正常对照组和肝纤维化组，正常对照组与肝纤维化组
的ＣＸＣＬ１３浓度差异无统计学意义。肝硬化组和肝纤维
化组ＣＸＣＬ１６浓度均显著高于正常对照组浓度，肝硬化
组和肝纤维化组的ＣＸＣＬＩ６浓度差异无统计学意义，见 表１。
表１ 正常对照组、肝纤维化组和肝硬化组的肝内 ＣＸＣＬ１３和ＣＸＣＬＩ６的浓度 （ｉ±ｓ）ｎｇ／ｇ
与正常对照组比较 Ｐ＜０．０５， Ｐ＜０．０１；△与肝硬化组比较 Ｐ＜０．０５
３讨论
ＢＭＤ￣Ｃ是近年才发现的一群细胞，它具有肝干细 胞的特性与潜能，在生理状态下定居在骨髓，在肝脏发
生疾病损伤时又可以向肝脏迁移并参与修复损伤。为
什么肝脏损伤会导致ＢＭＤ￣Ｃ向肝脏迁移？驱使
ＢＭＤＬＳＣ向肝脏迁移的物质基础又是什么？这些都不清
楚。从现有资料来看，趋化因子及其受体系统很可能在
其中起重要作用，因为实验研究已证明基质细胞衍生因
子１（ＳＤＦ一１）对ＣＸＣＲ４阳性ＢＭＤＬＳＣ有趋化作用 ］。
临床研究也已观察到肝病患者的肝内ＳＤＦ一１浓度显著 增加。 ＣＸＣＬ１３和ＣＸＣＬ１６对ＢＭＭＳＣ的趋化作用是近年
的研究热点。ＬＩＳＩＧＮＯＬＩ等 的研究表明ＣＸＣＬ１３是促
使ＢＭＭＳＣ起修复作用的一种分子信号；体外趋化实验
证明ＣＸＣＬ１３对骨膜问质祖细胞有趋化作用 。 ＣＸＣＬＩ６可促进ＢＭＭＳＣ在炎症组织中定位 。而且，
ＣＸＣＬＩ３的受体ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＬ１６的受体ＣＸＣＲ６均在
ＢＭＭＳＣ中被检测到 。
ＣＸＣＬ１３和ＣＸＣＬ１６对ＢＭＭＳＣ包括对ＢＭＤＬＳＣ有
趋化作用，但活体发生肝病损伤时引发的ＢＭＤＬＳＣ向肝
脏迁移与肝内ＣＸＣＬ１３和ＣＸＣＬ１６的关系还有待确定。
本研究观察到，肝内ＣＸＣＬ１３水平在肝纤维化阶段开始
升高，至肝硬化阶段升高到显著性水平；肝内ＣＸＣＬ１６水
平在肝纤维化阶段就已经升高到显著性水平，至肝硬化
阶段仍维持在高水平状态。表明肝脏发生纤维化损害
时，肝组织表达ＣＸＣＬ１３和ＣＸＣＬ１６的数量显著增加，但
两种趋化因子的变化规律不尽相同。随着肝纤维化向
肝硬化阶段发展，肝组织表达ＣＸＣＬ１３的水平进一步增
加，肝脏表达ＣＸＣＬＩ６的数量维持在高水平。提示
