台盼蓝染色实验原理和顺序

台盼蓝染色实验原理和顺序一、原理：台盼蓝（Trypan Blue）是一种生物染色剂，能与细胞核酸结合，使染色细胞呈现出蓝色。

它在生物学实验中被广泛应用于细胞计数、活死细胞鉴定和细胞凋亡检测等方面。

台盼蓝染色实验的原理是：台盼蓝能穿透细胞膜和胞吞体膜，进入胞内与细胞的核酸结合，使细胞呈现出蓝色。

对于活细胞而言，由于细胞膜的完整性，台盼蓝无法穿透细胞膜，因此保持细胞的透明度。

而对于死细胞而言，细胞膜已破损，台盼蓝可以进入细胞内与核酸结合，导致细胞呈现出蓝色。

通过台盼蓝染色可以直观地区分出活细胞和死细胞。

二、顺序：1.收集细胞：将待染色的细胞收集到离心管中，可以是细胞培养物、悬液中的细胞或组织样本。

2.离心：将离心管放入离心机，以适当的离心速度离心，使细胞沉淀在离心管底部。

3.丢弃上清液：将上清液倒掉，留下细胞沉淀。

4.加入台盼蓝溶液：加入适量的台盼蓝溶液（通常浓度为0.4%），使其覆盖细胞沉淀。

5.培养：将离心管放入孵化箱或培养箱中，使细胞与台盼蓝溶液接触，并保持一定的温度和湿度条件下培养。

6.等待染色：根据实验需要，可以选择不同的染色时间，通常为5-15分钟。

7.停止染色：在所选择的染色时间结束后，取出离心管，加入一定量的细胞培养基或缓冲液，停止台盼蓝的作用。

8.离心洗涤：将细胞沉淀洗涤2-3次，去除细胞外的台盼蓝。

9.准备载玻片：在载玻片上涂一层细胞培养基或缓冲液，并将细胞沉淀悬浮于上述液体中。

10.制备覆盖片：取一块覆盖玻片，用镊子夹持，并将玻片的一角轻轻接触到液体表面，由一端缓慢地将玻片放置于载玻片上，使两者尽量平行，避免产生气泡。

11.固定载玻片：将载玻片倒置在平板上，待其干燥。

12.定焦观察：将载玻片放置在显微镜载玻片夹上，利用显微镜观察细胞的染色情况。

通过以上步骤，我们可以成功地进行台盼蓝染色实验，观察细胞的活死情况，并进行细胞计数、活死细胞鉴定等相关研究。

For personal use only in study and research; not forcommercial use台盼蓝染色实验原理台盼蓝（Trypan Blue) 是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性，还常用于检测细胞是否存活。

活细胞不会被染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。

分子式：C34H24N6O14S4Na4，分子量: 960.82，可溶于水（10mg/ml)。

实验原理：正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。

通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡。

因此，借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞。

台盼蓝是组织和细胞培养中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。

注意凋亡小体也有台盼蓝拒染现象。

台盼蓝染色后，通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。

台盼蓝染色只需3-5分钟即可完成，并且操作非常简单。

实验步骤：1、配制4%台盼蓝母液：称取4g台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加双蒸水至100ml，用滤纸过滤，4℃保存。

使用时用PBS稀释至0.4 %。

2、胰酶消化贴壁细胞，制备单细胞悬液，并作适当稀释。

3、染色：细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。

（终浓度0.04%）4、计数：在3分钟内，分别计数活细胞和死细胞。

5、镜下观察，死细胞被染成明显的蓝色，而活细胞拒染呈无色透明状。

6、统计细胞活力：活细胞率（%）= 活细胞总数/（活细胞总数+死细胞总数）×100%注意：1.保存条件：室温保存。

2.有潜在致癌危险，实验时穿实验服并戴一次性手套和口罩操作。

仅供个人用于学习、研究；不得用于商业用途。

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台盼蓝染色鉴别死活细胞的原理通常认为细胞膜丧失完整性，细胞即可被认为已经死亡。

台盼蓝(Trypan Blue)是检测细胞膜完整性最常用的生物染色试剂。

健康的正常细胞能够排斥台盼蓝，而死亡的细胞，膜的完整性丧失，通透性增加，细胞可被台盼蓝染成蓝色。

依据此原理，细胞经台盼蓝染色后，可通过显微镜，直接镜下计数或拍照后计数，实现对细胞存活率比较精确的定量分析。

染色原理:正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。

通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡。

因此，借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞。

台盼蓝拒染法台盼蓝拒染法是利用台盼蓝只能将死细胞染成蓝色而活细胞不能被染上的方法检测细胞存活率的一种快速简便的方法。

染色原理:正常细胞具有完整的细胞膜结构，而死亡的细胞其细胞膜结构被破坏。

台盼蓝无法通过正常的细胞膜因而正常的细胞不被台盼蓝染上，而死细胞则可被台盼蓝染成蓝色。

流程:（1）将对数生长期的细胞浓度调整为1~10×10细胞/ml，按10~10个细胞接种于96孔板，每孔100 μl；（2）培养细胞24小时后，对其进行不同处理，每个处理设三个平行对照；（3）收集细胞，经台盼蓝染色，在倒置显微镜下计数蓝染及不染色细胞，计算细胞存活率；（4）结果统计：镜下观察，死细胞被染成淡蓝色，而活细胞拒染。

根据下式求细胞活力：活细胞率（%）= 活细胞总数/（活细胞总数+死细胞总数）×100注意事项:台盼蓝染细胞时，时间不宜过长。

否则，部分活细胞也会着色，会干扰计数。

科研试剂，广泛应用于分子生物学，药理学等科研方面，严禁用于人体。

本品为生物染色剂，在细胞毒性试验中用于检测死亡细胞和垂死细胞，也可用于细胞活性的常规评估。

如病毒检验，注入循环系统可使肾小管着色，哺乳动物、低等脊椎动物和昆虫的各种组织活体染色。

细胞活力鉴定——台盼蓝染色法
原理：
细胞损伤或死亡时，台盼蓝可穿透变性的细胞膜，与解体的DNA 结合，使其着色。

而活细胞能阻止染料进入细胞内。

故可以鉴别死细胞与活细胞。

用品：
1. 4%台盼蓝母液：称取4g台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加双蒸水至100ml，用滤纸过滤，4度保存。

使用时。

用PBS稀释至0.4%。

2. 吸管、血细胞计数板、显微镜
步骤：
1、制备单细胞悬液。

并作适当稀释（106细胞/ml）
2、染色：细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。

3、计数：在三分钟内，用计数板分别计数活细胞和死细胞
结果统计：
镜下观察，死细胞被染成淡蓝色，而活细胞拒染。

根据下式求细胞活力：
活细胞率（%）= 活细胞总数/（活细胞总数+死细胞总数）×100
注意事项：台盼蓝染细胞时，时间不宜过长。

否则，部分活细胞也会着色，会干扰计数。

细胞损伤或死亡时，台盼蓝可穿透变性的细胞膜，与解体的DNA 结合，使其着色。

而活细胞能阻止染料进入细胞内。

故可以鉴别死细胞与活细胞。

严格来说，台盼蓝染色检测的是细胞膜的完整性，通常认为细胞膜丧失完整性，即可认为细胞已经死亡。

这被称为染料排除测试。

通过显微镜很容易就能识别出死亡的被台盼蓝染色的细胞，并可使用细胞计数器进行计数。

步骤：(来自supergama)
1、4%台盼蓝母液：称取4g台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加双蒸水至100ml，用滤纸过滤，4度保存。

使用时。

用PBS稀释至0.4%。

（也可买Gibco的成品）;
2、胰酶消化贴壁细胞，制备单细胞悬液，并作适当稀释。

3、染色：细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。

（终浓度0.04%）
4、计数：在三分钟内，分别计数活细胞和死细胞。

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5、镜下观察，死细胞被染成明显的蓝色，而活细胞拒染呈无色透明状。

6、统计细胞活力：活细胞率（%）= 活细胞总数/（活细胞总数+死细胞总数）×100%。

台盼蓝染色实验原理
台盼蓝（Trypan Blue) 是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性，还常用于检测细胞是否存活。

活细胞不会被染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。

分子式：
C34H24N6O14S4Na4，分子量: 960.82，可溶于水
（10mg/ml)。

实验原理：正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。

通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡。

因此，借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞。

台盼蓝是组织和细胞培养中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。

注意凋亡小体也有台盼蓝拒染现象。

台盼蓝染色后，通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。

台盼蓝染色只需3-5分钟即可完成，并且操作非常简单。

实验步骤：
1、配制4%台盼蓝母液：称取4g台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加双蒸水至100ml，用滤纸过滤，4℃保存。

使用时用PBS稀释至0.4%。

2、胰酶消化贴壁细胞，制备单细胞悬液，并作适当稀释。

3、染色：细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。

（终浓度0.04%）
4、计数：在3分钟内，分别计数活细胞和死细胞。

5、镜下观察，死细胞被染成明显的蓝色，而活细胞拒染呈无色透明状。

6、统计细胞活力：活细胞率（%）= 活细胞总数/（活细胞总数+死细胞总数）×100%
注意：
1.保存条件：室温保存。

2.有潜在致癌危险，实验时穿实验服并戴一次性手套和口罩操作。

台盼蓝染色鉴别死活细胞的原理台盼蓝是一种通过细胞膜渗透进入细胞内部，与细胞核酸结合的染料。

通过这种结合，台盼蓝可以形成与DNA的复合物，并显示在细胞核内。

通常，被存活的细胞吸收的台盼蓝较少，因此细胞核显示浅蓝色。

而死亡的细胞则更容易吸收台盼蓝，导致细胞核变为暗紫色。

基于这个原理，可以通过台盼蓝染色来区分死亡和存活的细胞。

下面是台盼蓝染色的步骤和操作方法：1.准备样本：通过适当的实验操作，准备细胞悬液或细胞培养物样本。

样本可以包括不同类型的细胞，如细菌、动物细胞或植物细胞。

2.取适量样本：取适量的细胞悬液或细胞培养物，并转移至离心管中。

3.离心：用适当的离心速度离心样本，以沉淀细胞。

4.去除上清液：将上清液倒掉，取得细胞沉淀。

5.重悬细胞：向离心管中加入适量的生理盐水或PBS溶液，轻轻搅拌，使细胞沉淀分散均匀。

6.台盼蓝染色：向离心管中加入一定浓度的台盼蓝溶液，充分混匀，使台盼蓝与细胞接触。

7.处理待时间：将样本静置处理一段时间，以确保台盼蓝与细胞充分反应。

8.制备涂片：取一滴台盼蓝处理后的细胞悬液，加到清洁玻璃涂片上。

9.压片：使用另一片玻璃涂片，将细胞悬液均匀地涂布于玻璃涂片上，形成薄层的细胞悬液。

10.观察：将涂片放置在显微镜下，使用高倍镜观察细胞的染色情况。

在台盼蓝染色结果观察过程中，细胞核颜色的浅蓝色代表存活的细胞，而颜色较深的暗紫色代表死亡细胞。

可以利用这个差异对待测细胞进行区分。

此外，台盼蓝染色的结果还可以与其他染色方法相结合，如乙酰肌酸酯酶活性染色，细胞膜完整性等，以更全面地评估细胞状态。

总结来说，台盼蓝染色通过台盼蓝与细胞核DNA的结合，能够区分出存活和死亡细胞，具有操作简便、结果明确的优点。

因此，它在细胞学、细胞毒性研究等领域有着广泛的应用。

台盼蓝染色实验原理
台盼蓝Trypan Blue 是细胞活性染料,常用于检测细胞膜的完整性,还常用于
检测细胞是否存活;活细胞不会被染成蓝色,而死细胞会被染成淡蓝色;分子式：C34H24N6O14S4Na4,分子量: ,可溶于水10mg/ml;
实验原理：正常的活细胞,胞膜结构完整,能够排斥台盼蓝,使之不能够进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞,胞膜的通透性增加,可被台盼蓝染成
蓝色;通常认为细胞膜完整性丧失,即可认为细胞已经死亡;因此,借助台盼蓝
染色可以非常简便、快速地区分活细胞和;台盼蓝是组织和中最常用的死细胞
鉴定染色方法之一;注意也有台盼蓝拒染现象;台盼蓝染色后,通过显微镜下或
显微镜下拍照后计数,就可以对细胞进行比较精确的定量;台盼蓝染色只需3-5分钟即可完成,并且操作非常简单;
实验步骤：
1、配制4%台盼蓝：称取4g台盼蓝,加少量蒸馏水研磨,加至100ml,用滤纸过滤,4℃保存;使用时用PBS稀释至 %;
2、胰酶消化贴壁细胞,制备单细胞悬液,并作适当稀释;
3、染色：细胞悬液与%台盼蓝溶液以9:1混合混匀;终浓度%
4、计数：在3分钟内,分别计数活细胞和死细胞;
5、镜下观察,死细胞被染成明显的蓝色,而拒染呈无色透明状;
6、统计细胞活力：活细胞率%= 活细胞总数/活细胞总数+死细胞总数×100%注意：
1.保存条件：室温保存;
2.有潜在致癌危险,实验时穿实验服并戴一次性手套和口罩操作;。

台盼蓝染色实验原理和顺序蓝染是一种传统的织物染色工艺，其原理是利用蓝液中的染料与纤维物质发生化学反应，将染料牢固地固定在纤维素纤维上。

在蓝染过程中，主要包括浸泡、氧化和还原三个步骤。

下面将详细介绍蓝染色实验的原理和顺序。

实验原理：1.染料选择：蓝染色实验中一般选择天然蓝染料，如蓝靛。

这些染料在碱性条件下可以溶解并与纤维素纤维发生反应，形成稳定的染料-纤维素结合物。

2.碱性条件：蓝染实验中通常会添加碱液来改变染液的酸碱性，增强染料与纤维素纤维的反应性。

碱液还可以使染料变得更可溶于水，并提高染色的效果。

3. 氧化还原反应：蓝染实验中涉及到氧化还原反应。

染色初始阶段，染料经过氧化过程与纤维素发生反应，形成游离的蓝色阳离子离子（Indigo），此时纤维变为黄色。

接着，通过还原反应，将染料还原为无色的蓝靛并沉淀附着于纤维素上。

这个过程叫做“固定”。

实验顺序：1.准备：将天然蓝染料（如蓝靛）粉末溶解于适量水中，制成蓝液。

同时准备纱线、棉布等需要染色的织物。

2.处理织物：将织物酒精湿润，然后浸泡在碱性水溶液中，以增强织物吸收染料的能力。

3.浸泡：将处理好的织物放入蓝液中，使其完全浸泡。

浸泡时间根据需要染色的颜色深浅而定，一般为几分钟到几小时不等。

4.取出：将浸泡好的织物从蓝液中取出，让它自然晾干。

这个过程中，纤维上的染料阳离子会与氧发生氧化反应，生成蓝靛沉淀。

5.固定：取出已干燥的织物，将其暴露在空气中，蓝液中的染料阳离子会经过氧化还原反应，转化为稳定的靛蓝色素并与纤维素纤维牢固结合。

6.染色效果增强：染色后，如果需要加强染色效果，可将织物反复进行浸泡和晾干，直至达到理想的颜色深浅。

7.旋洗：完成染色后，可将织物用清水进行旋洗，以去除多余的染料。

8.干燥定型：最后将织物晾干，并进行烘干定型处理，以使染料与纤维更牢固地结合。

总结：蓝染色实验主要包括浸泡、氧化还原和还原三个步骤。

通过选择适当的蓝染料、调节酸碱度和控制染色时间，可以实现理想的染色效果。

台盼蓝染色的原理和步骤
在高中生物中，用血细胞计数板对酵母菌的计数不能专门计数活细胞，但也有染色试剂专门染色活细胞的，结合计数就可以知道活细胞的数目，如台盼蓝就是一种细胞活性染料。

台盼蓝是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性，检测细胞是否存活。

分子式：C34H24N6O14S4Na4。

原理：
台盼蓝可穿透死细胞的细胞膜，使死细胞中的DNA着色，在光学显微镜下可观察到蓝色沉淀，因此可判断此细胞已经死亡，而台盼蓝无法进入活细胞内，故无法使细胞的DNA着色。

步骤
1. 用Hanks液（主要用于细胞培养取材时组织块的漂洗、细胞的漂洗、配制其他试剂等）配制0.1%台盼蓝溶液。

2. 用0.5%胰蛋白酶：0.2EDTA=1：1混合液来消化培养的贴壁细胞。

3. 再加入适量Hanks液制成细胞悬液。

4. 将待染色细胞稀释至所需浓度。

5. 每0.1ml细胞悬液约加新鲜配制的染液一小滴，室温下染3－5min。

6. 染色过的细胞材料，取一滴细胞悬液置血细胞计数板上，在高倍镜下观察计数。

7. 死细胞着浅蓝色并膨大，无光泽；活细胞不着色并保持正常形态，有光泽。

8. 计数1000个细胞中的活细胞和死细胞数目。

9. 统计未染色细胞。

10. 按公式计算出细胞活率：
细胞活率（%）=未染色的细胞数/观察的细胞总数×100%。

注意事项.
染色时间不能太长，否则活细胞也会逐渐积累染料而染成颜色，使检测结果偏低。