超氧阴离子自由基检测试剂盒(磺胺比色法)

植物样品的吸光度值和 0.5mM 的 Fe2+的吸光度值相同，则该血浆(血清)样品的总抗氧化 能力为 0.5mM/(0.5g/5ml)=0.5mmol/100g；
血浆(血清)样品的吸光度值和 0.7mM 的 Fe2+的吸光度值相同，则该血浆(血清)样品的总抗 氧化能力为 0.7mM；
细胞(组织)匀浆样品的吸光度值和 0.3mM 的 Fe2+的吸光度值相同，该匀浆液蛋白浓度为 0.2mg/ml，则该细胞(组织)样品的总抗氧化能力为 0.3mM/0.2mg/ml=0.15mmol/g； 0.3mM 的抗氧化物质，其吸光度值和 0.6mM 的 Fe2+的吸光度值相同，则其相对总抗氧化能力为 0.6mM/0.3mM=2。
注意事项： 1、 实验材料应尽量新鲜，样品提取的整个过程最好在 4℃条件下进行；如取材后不能立即 检测，也可以-80℃冻存后再进行测定(应在 1 个月内测定完毕)。 2、 亚铁标准溶液如变为黄色或棕黄色应弃用。 3、 测定 593nm 如有困难，亦可在 585~605nm 范围内进行测定。 4、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
总抗氧化能力(T-AOC)检测试剂盒(FRAP 微板法)即 Total Antioxidant Capacity Assay Kit with FRAP method，简称 T-AOC Assay Kit，是一种采用铁离子还原能力(Ferric Reducing Ability of Plasma,FRAP)来测定样品抗氧化活性的方法，其原理是在酸性条件下样品中的抗 氧化物质还原 Fe3+-TPTZ 产生 Fe2+-TPTZ，呈现出明显的蓝色(紫色)，于 593nm 处有最大 的光吸收，在 Fe3+-TPTZ 过量的情况下测定蓝色物质的生成量即可获得待测样品的还原能 力即总抗氧化能力，由于反应在酸性条件下进行，可以抑制内源性的一些干扰因素，并且由 于血浆等样品中的铁离子或亚铁离子的总浓度通常低于 10μM，因此血浆等样品中的铁离 子或亚铁离子不会显著干扰 FRAP 法的检测反应，本方法可以对血浆、血清、尿液等各种体 液，细胞或组织裂解液、植物或中草药抽提液或各种抗氧化物溶液的总抗氧化能力进行检测。 该试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

报 Chinese Pharmacological Bulletin 2012 Sep； 28（ 9）
溶液 100 μl 和 TPTZ 工作液 100 μl 混和后于 37 ℃ 孵育 20 min， 测 定 A540 。 以 3. 90，7. 81，15. 62， 31. 25，62. 50，125. 00，250. 00 μg · L － 1 FeSO4 作标 准曲线。 2． 5 清 除 羟 自 由 基 实 验 按 Halliwell 等［3］ 的 方 法，依次加入 2 mmol·L － 1 EDTA 50 μl，20 mmol· L － 1 FeCl3 5 μl，20 mmol · L － 1 H2 O2 50 μl，15. 56 mmol·L － 1 2-脱氧-D-核糖 180 μl，各药物溶液 500 μl，pH 7. 4 100 mmol·L － 1 磷酸盐缓冲液 165 μl，2 mmol·L － 1 VC 50 μl，于 37 ℃ 孵育 1 h，加入 1 ml 100 g·L － 1 三氯乙酸（ TCA） ，1 ml 5 g·L － 1 硫代巴 比妥酸（ TBA） ，于沸水中反应 30 min，取 250 μl 测 定 A540 nm。清除率按“2. 1”中公式计算。 2． 6 抑制脂质过氧化实验 按 Wang 等［4］的方法， 测定不同稀释度的药物溶液对 BALB / c 小鼠肝匀浆 中 Fe2 + 诱导引起的脂质过氧化产物丙二醛（ MDA） 的含量。参考 Ljubuncic 等［5］的方法制备 200 g · L － 1 肝匀浆。取肝匀浆 50 μl 与 2. 5 mmol·L － 1 FeSO4 80 μl（ 假诱导管为 80 μl 三蒸水） 混合，加入不 同浓度药物 20 μl，37 ℃ 诱导 1 h。加入 20 g·L － 1 BHT 20 μl，3. 75 g·L － 1 TBA 1 ml，56 g·L － 1 TCA

北京索莱宝科技有限公司
活性氧检测试剂盒 Reactive oxygen species assay kit
货号：CA1410
规格：100-500T
产品内容：
10 mM DCFH-DA in DMSO 活性氧供体 说明书
0.1 ml 1 ml 1份
20 ºC 保存 20 ºC 保存
产品简介：
活性氧(Reactive oxygen species, ROS) 包括超氧自由基、过氧化氢、及其下游产物过氧化物和羟化
物(O2•−, H2O2, •OH, ONOO−, •NO)等，参与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过
程。采用 2,7-dichlorofluorescin diacetate (DCFH-DA)是迄今常用也是较灵敏的细胞内活性氧检探针。
DCFH-DA 没有荧光，进入细胞后被酯酶水解为 dichlorofluorescin (DCFH)。在活性氧存在时 DCFH 被氧化
3. PBS 洗涤细胞 2 次。 三、荧光检测
采用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜图像检测照相，绿色荧光强度代表活性氧水平。也可进行微板荧 光分析仪(multiwell fluorescence plate reader)实时或每 10 分钟分时逐点检测荧光强弱。对于流式细 胞仪可将细胞用胰酶消化 PBS 洗涤后重悬检测。
1. 加入 DCFH-DA 于培养基，推荐初始工作浓度为 10 µM。对不同的细胞和处理，DCFH-DA 工作浓度可 为 100 nM~20 µM，需进行预实验确定合适的浓度。总体稀释倍数应在 1:500~1000 以上以避免 DMSO 对细胞 的影响。以 DMSO 作为溶剂对照。
2. 37 ºC 孵育细胞 30min~至几个小时，通常 30-60min 即可。孵育时间长短与细胞类型、刺激条件、 DCFH-DA 浓度有关。

黄嘌呤氧化酶（XOD ）活性检测试剂盒说明书微量法注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

货号：BC1095 规格：100T/96S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称 规格 保存条件 试剂一 液体120 mL×1瓶 2-8℃保存 试剂二 液体10 mL×1瓶 2-8℃保存 试剂三 液体1mL×1瓶 2-8℃保存 试剂四 液体5 mL×1瓶 2-8℃保存 试剂五 液体8 mL×1瓶 2-8℃保存 试剂六 液体8 mL×1瓶 2-8℃保存 标准品液体1 mL×1支2-8℃保存溶液的配制：1、 试剂三：根据样本量再用试剂二稀释5倍后备用。

用不完的试剂2-8℃可保存1周。

2、 标准品：10μmol/mL 亚硝酸钠。

产品说明：XOD （EC 1.17.3.2）催化次黄嘌呤氧化生成黄嘌呤和超氧阴离子，是活性氧主要来源之一；同时也是核苷酸代谢的关键酶之一。

XOD 主要分布于哺乳动物的心、肺、肝脏等组织中，当肝功能受损时，XOD 大量释放到血清中，对肝损害的诊断具有特异性的意义。

XOD 催化次黄嘌呤产生超氧阴离子，超氧阴离子与盐酸羟胺反应生成NO 2-，NO 2-在对氨基苯磺酰胺和萘乙二胺盐酸盐的作用下，生成紫红色的偶氮化合物，在530nm 有特征吸收峰，根据其生成量可反映XOD 活性的大小。

Hypoxanthine Xanthine + Superoxide anion Superoxide anion + Hydroxylamine Hydrochloride NO 2- NO 2- + 4-Aminobenzenesulfonamide Diazonium SaltDiazonium Salt + N-(1-Naphthyl)-Ethylenediamine Red Azo Dyes (530nm)注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。