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红树植物内生放线菌的分离鉴定和2株海洋链霉菌活性代谢产物的分离鉴定本研究以红树林植物为研究材料,分离红树植物内生放线菌,并在菌株鉴定基础上,对其细胞毒活性、抗菌活性进行评价,为红树植物内生放线菌资源的开发和利用提供依据。
通过乙醇、氯化汞对样品进行表面消毒,选用1/10ATCC172培养基,结合放线菌酮、制霉菌素、甲氧苄氨嘧啶、新生霉素等抗生素作为选择培养方法,对内生放线菌进行选择性分离。
从来自海南清澜港红树林保护区的18种红树植物3种半红树植物样品中,分离到139株内生放线菌。
内生放线菌在不同红树植物中的分布存在差异。
对分离到的139株菌通过菌落形态、培养特征、细胞壁氨基酸、全糖分析和16S rDNA序列分析,分类鉴定到属。
本研究分离到的139株内生放线菌共分为2个属,分别是小单孢菌（Micromonospora）和链霉菌属（Streptomyces）。
本研究所选择的分离方法获得的内生放线菌,小单孢菌占绝对优势。
采用MTT法和美蓝酶标仪法对所分离到的内生放线菌进行体外细胞毒活性和抗菌活性检测,共有45株菌显示对肝癌SMMC-7721细胞有细胞毒活性,占总菌株数的32.3%。
共分离到抗MRSA活性菌株31株,占总菌株数的22.3 %。
所有测试菌株均未检测到抗白色念珠菌活性。
我们研究证实红树植物内生放线菌,作为一种新颖的微生物资源,有着很大的研究开发潜力。
通过对菌株0616208和124092的细胞毒活性的遗传稳定性分析,其中菌株124092的ID<sub>50</sub>保持在5120,菌株0616208的ID<sub>50</sub>也在480左右,发现它们都具有较好的遗传稳定性。
对2株具有细胞毒活性的放线菌的来源性进行分析,结果表明: 2株菌株均在纯海水配制的YE平板上比在纯蒸馏水配制的YE平板上生长较好,并且都有一定的耐盐性,菌株0616208对NaCl的最高耐受性在13～15%,菌株124092对NaCl 的最高耐受性在10～13%,所以它们很可能是来源于海洋的微生物。
广西北部湾放线菌的分离筛选及活性产物的鉴定王聪;王坤;姜明国;谭学才;雷福厚;杜方凯;邱子言;孙坤来【摘要】为从广西北部湾的泥样和植物中分离海洋放线菌,筛选具有抑菌活性的菌株,分离活性化合物.研究采用普通稀释法分离菌株,对发酵产物进行抑菌活性测试,利用活性追踪分离活性化合物,并通过波谱方法确定化合物结构.结果表明从6个海泥样品和3个植物样品中共分离73株放线菌,筛选得到具有抑香蕉枯萎病和金黄色葡萄球菌活性的菌株7株,并从其中的1株链霉菌Streptomyces sp.MDCW-126的次级代谢产物中分离鉴定了星形孢菌素.从广西北部湾分离的药用活性菌株资源具有开发和深入研究价值.【期刊名称】《天然产物研究与开发》【年(卷),期】2019(031)007【总页数】7页(P1170-1176)【关键词】广西北部湾;放线菌;抑菌活性;星形孢菌素【作者】王聪;王坤;姜明国;谭学才;雷福厚;杜方凯;邱子言;孙坤来【作者单位】广西民族大学化学化工学院,广西林产化学与工程重点实验室,广西高校食品安全与药物分析化学重点实验室;广西民族大学化学化工学院,广西林产化学与工程重点实验室,广西高校食品安全与药物分析化学重点实验室;广西高校微生物与植物资源利用重点实验室,广西民族大学海洋与生物技术学院,南宁530006;广西民族大学化学化工学院,广西林产化学与工程重点实验室,广西高校食品安全与药物分析化学重点实验室;广西民族大学化学化工学院,广西林产化学与工程重点实验室,广西高校食品安全与药物分析化学重点实验室;广西民族大学化学化工学院,广西林产化学与工程重点实验室,广西高校食品安全与药物分析化学重点实验室;广西民族大学化学化工学院,广西林产化学与工程重点实验室,广西高校食品安全与药物分析化学重点实验室;浙江海洋大学食品与医药学院,浙江省海洋生物医用制品工程技术研究中心,舟山316022【正文语种】中文【中图分类】R284.1;R931.77海洋环境的特殊性造就了海洋放线菌种类及其次生代谢产物的多样性，可能产生很多具有新颖骨架结构、显著生物活性的次生代谢产物，受到研究者的广泛关注[1,2]。
南海红树林微生物多样性分析及真菌SK1代谢产物研究的开题报告一、研究背景在全球气候变暖、海洋污染加剧的背景下，红树林生态系统逐渐成为保护和研究的焦点。
红树林是一种特殊的生态系统，其微生物多样性非常丰富，同时其树干、根系及水体中还寄生着大量的真菌。
这些微生物在红树林生态系统的生态过程和生态功效中发挥着重要的作用。
因此，研究南海红树林微生物多样性以及真菌SK1代谢产物具有重要的科学意义和经济价值。
二、研究内容1.红树林微生物多样性的分析本研究将采集南海红树林不同部位的土样、水样和树干样等，通过高通量测序技术对样品进行微生物基因测序，进而分析红树林微生物在不同环境下的组成、物种多样性以及微生物群落结构等信息。
2.真菌SK1代谢产物的研究真菌SK1是一种新型真菌，具有潜在的生物药物和工业应用价值。
通过红树林根部和水体中的真菌SK1的分离和培养，收集其代谢产物并进行活性筛选和结构鉴定，探索其潜在的应用价值。
三、研究意义本研究将为红树林生态系统的保护提供科学依据，有助于深入了解红树林微生物多样性及其对生态系统的作用。
同时，真菌SK1代谢产物的研究有望为药物和工业领域提供新的研究思路和应用价值。
四、研究方法1.微生物多样性分析采集样品→ DNA提取→ 16S/18S/ITS PCR扩增→高通量测序→生物信息学分析2.真菌SK1代谢产物的研究采集样品→纯化培养→提取代谢产物→活性筛选和结构鉴定五、研究进度安排2022年9月-2023年6月1. 9月-11月：文献调研、采样策划及样品采集2. 12月-2023年3月：微生物多样性分析3. 2023年4月-6月：真菌SK1代谢产物研究六、预期成果1. 发表SCI论文1-2篇2. 参加学术会议1次3. 准备毕业论文七、研究团队指导教师：XX教授研究生：XX。
红树植物内生真菌的分离鉴定及抗菌活性菌株的筛选陈昭华;伍菱;杨秋明;王骥妍;朱敏佳;杜希萍【摘要】本文对厦门集美红树植物无瓣海桑(Sonneratia apetala),海马齿(Sesuvium portulacastrum)和秋茄(Kandelia candel)的多个部位进行内生真菌的分离和形态鉴定,并采用菌饼法对分离到的内生真菌进行抗菌活性筛选.结果显示,从3种红树植物的根、茎、叶中分离得到25株内生真菌,分别隶属8个类群,以链格孢属和曲霉属为主,分别占菌株总数的28.0％和24.0％;有19株菌株对至少一种指示菌有抑制作用,占菌株总数的76.0％.研究结果表明,红树植物来源的内生真菌数量多,种属丰富,同时具有良好的抗菌活性,是研究抗菌活性化合物的重要资源.【期刊名称】《激光生物学报》【年(卷),期】2013(022)003【总页数】4页(P263-266)【关键词】红树植物;内生真菌;分离鉴定;抗菌活性【作者】陈昭华;伍菱;杨秋明;王骥妍;朱敏佳;杜希萍【作者单位】集美大学生物工程学院,福建厦门361021;集美大学生物工程学院,福建厦门361021;集美大学生物工程学院,福建厦门361021;集美大学生物工程学院,福建厦门361021;集美大学生物工程学院,福建厦门361021;集美大学生物工程学院,福建厦门361021;福建省食品微生物与酶工程重点实验室,福建厦门361021;福建省高校食品微生物与酶工程技术研究中心,福建厦门361021;厦门市食品与生物工程技术研究中心,福建厦门361021【正文语种】中文【中图分类】Q939内生真菌(endophyte)是指生活于健康植物组织内部、不引发植物产生明显病症的一类真菌。
不但对促进宿主植物的生长发育，增强抗逆性起到重要作用，而且许多内生真菌能产生与宿主相同或相似的生物活性物质［1-2］。
目前已从植物内生真菌中发现多种具有抗肿瘤、抗病毒、降血糖、抗菌、杀虫、免疫抑制、酶抑制剂或激活剂等活性代谢产物，在医药业、农业的生物防治方面都显示出重要的应用价值［3-6］。
产体外抗鼻咽癌物质红树林土壤细菌筛选及其活性成分分析黄议莹;李喆;潘信利;黄媛林;胡文进;李菲;王巧贞;黄庶识;周晓莹;温文胜【期刊名称】《广西科学》【年(卷),期】2022(29)5【摘要】研究一株通过活性筛选获得的、具有抗鼻咽癌(Nasopharyngeal Carcinoma,NPC)活性物质生产潜力的细菌,对其所产活性物质进行分离纯化,以探讨其抗肿瘤研发价值。
以鼻咽癌肿瘤细胞株TW03和5-8F作为测试对象,利用细胞计数试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK8)法从广西北海采集的红树林土壤中筛选出具有体外抗鼻咽癌活性物质生产潜力的细菌,通过基因分析、细菌形态以及生理生化特性对活性菌株进行分类鉴定,通过柱层析分离和活性测试追踪法从菌株的发酵液中获得具有体外抗鼻咽癌活性的化合物,并应用核磁共振波谱和低分辨质谱鉴定其结构。
结果表明,经16S rRNA和看家基因(atpD和rpoB)的多位点序列分析鉴定菌株归属于链霉菌,命名为Streptomyces sp.MCCG 218。
从该菌株的发酵液中分离得到一个活性化合物1,经图谱分析和文献比对确认该化合物为巴弗洛霉素A1衍生物(17,18-dehydro-24-demethyl-bafilomycin A1),其对鼻咽癌细胞株TW03和5-8F表现出较强的细胞增殖抑制活性,半抑制浓度(Half Inhibitory Concentration,IC_(50))值分别为2.7μmol/L和9.2μmol/L。
红树林来源链霉菌MCCG 218能够生产具有抑制鼻咽癌细胞增殖活性的化合物巴弗洛霉素A1衍生物。
【总页数】8页(P846-853)【作者】黄议莹;李喆;潘信利;黄媛林;胡文进;李菲;王巧贞;黄庶识;周晓莹;温文胜【作者单位】广西医科大学第一附属医院耳鼻咽喉头颈外科;广西科学院;广西科学院;广西医科大学生命科学研究院【正文语种】中文【中图分类】Q939.1【相关文献】1.红树林细胞毒活性放线菌的筛选及其所产活性物质的初步研究2.产高活性抗癌物质卵黄状多囊菌JSW103(粘细菌)的筛选3.山口红树林根际土壤可培养细菌r多样性及其活性筛选4.产高活性抗癌物质的粘细菌的定向筛选5.一株具抗肿瘤活性的红树林细菌筛选及成分分离因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
一株具有抗菌活性红树林土壤放线菌的分离和鉴定作者：黄大林,袁桂峰,徐雅娟,骆耐香,陈建宏,刘菁,蒋莲秀,陈森洲来源：《湖北农业科学》2011年第04期摘要：分离和鉴定具有抗菌活性的红树林土壤放线菌。
基于形态特征、生理生化特性和１６ＳｒＤＮＡ序列分析，研究通过稀释分离法从广西北海红树林的高盐泥样中分离到１株细菌。
系统进化分析表明，分离菌株与链霉菌属ＡｕｒａｎｔｉｏｇｒｉｓｅｕｓＡＹ９９９７７３具有９９％的同源性，因此，ＢＨ０９５１初步被鉴定为链霉菌属ＡｕｒａｎｔｉｏｇｒｉｓｅｕｓＡＹ９９９７７３的变种。
说明放线菌ＢＨ０９５１具有抗菌活性，本研究能为本菌株乃至广西北海红树林的微生物资源的开发和利用提供初步数据。
关键词：放线菌；链霉菌属；抗菌活性；１６ＳｒＤＮＡ；系统发育分析中图分类号：Ｓ１５４．３８＋４，Ｑ９３９．１３文献标识码：Ａ文章编号：0439－８114（２０11）04－0734-03ＩｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆ MａｎｇｒｏｖｅｓｏｉｌＡｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓｗｉｔｈ Aｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ AｃｔｉｖｉｔｙＨＵＡＮＧＤａ－ｌｉｎ，ＹＵＡＮＧｕｉ－ｆｅｎｇ，ＸＵＹａ－ｊｕａｎ，ＬＵＯＮａｉ－ｘｉａｎｇ，ＣＨＥＮＪｉａｎ－ｈｏｎｇ，ＬＩＵＪｉｎｇ，ＪＩＡＮＧＬｉａｎ－ｘｉｕ，ＣＨＥＮＳｅｎ－ｚｈｏｕ（ＴＲＳｏｆＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ＆Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，ＧｕｉｌｉｎＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕｉｌｉｎ，５４１００４，Ｇｕａｎｇｘｉ，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＩｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＡｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓｓｐ. ｏｆｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｆｒｏｍｍａｎｇｒｏｖｅｓｏｉｌ were proceeded．Ｂａｓｅｄｏｎｔｈｅｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ，ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ，ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓａｎｄ１６ＳｒＤＮＡｓｅｑｕｅｎｃｅｈｏｍｏｌｏｇｙａｎａｌｙｓｉｓ，ａｎｉｓｏｌａｔｅｄｂａｃｔｅｒｉｕｍｆｒｏｍｔｈｅｓａｍｐｌｅｓｏｆｓａｌｔ－ｈｉｇｈｓｏｉｌｆｒｏｍＢｅｉｈａｉｍａｎｇｒｏｖｅｆｏｒｅｓｔｗａｓｉｄｅｎｔｉｆｅｄ．Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃａｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｅｓｔｒａｉｎｂａｓｅｄｏｎｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆ１６ＳｒＤＮＡｓｅｑｕｅｎｃｅｒｅｖｅａｌｅｄｔｈａｔｉｔｗａｓｃｌｏｓｅｌｙｒｅｌａｔｅｄｔｏＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓａｕｒａｎｔｉｏｇｒｉｓｅｕｓＡＹ９９９７７３ｗｉｔｈ９９％ｉｄｅｎｔｉｔｙ．Ｓｏ， tｈｅｉｓｏｌａｔｅｄｓｔｒａｉｎｗａｓｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄａｓｏｎｅ variety ｏｆＳ．ａｕｒａｎｔｉｏｇｒｉｓｅｕｓＡＹ９９９７７３．ＩｔｓｈｏｗｅｄｔｈａｔＡｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓｓｐ．ＢＨ０９５１ｗａｓｏｆａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌａｃｔｉｖｉｔｙ．Ａｎｄｔｈｕｓ it ｗｏｕｌｄｐｒｏｖｉｄｅｔｈｅｏｒｉｇｉｎａｌｄａｔａｆｏｒｄｅｖｅｌｏｐｔｉｎｇａｎｄｅｘｐｌｏｉｔｔｉｎｇｔｈｅｓｔｒａｉｎｏｆＢＨ０９５１ａｎｄｔｈｅｏｔｈｅｒ aｃｔｉｎｏｍｙｃｅteｓｒｅｓｏｕｒｃｅｓｏｆｔｈｅｍａｎｇｒｏｖｅｆｏｒｅｓｔｓｏｉｌｏｆＧｕａｎｇｘｉＢｅｉｈａｉ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ： aｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅ；Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ； aｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌａｃｔｉｖｉｔｙ；１６ＳｒＤＮＡ； pｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃａｎａｌｙｓｉｓ自抗生素发现以来，微生物来源的药物随着人们的需求在不断地增加，近年来海洋微生物资源研究成为科学界关注的热点领域之一。
海南红树林底泥海洋放线菌的抗菌及抗群体感应活性筛选莫杰;钱生辉;钱嘉兴;缪莉
【期刊名称】《生物学杂志》
【年(卷),期】2024(41)1
【摘要】采用滤纸片法以紫色色杆菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌等为指示菌对84株分离自红树林底泥的海洋放线菌进行抗菌及抗群体感应活性筛选,再对高活性菌株进行活性复筛以及薄层层析化学多样性分析。
结果显示,菌株HN2-56具有很强的抗群体感应活性及较弱的抗菌活性,且代谢产物较为丰富。
对该菌的代谢产物进行初步分离及GC-MS分析,从其活性组分中鉴定出13个可能的化合物,且多个化合物具有一定的生物活性。
活性验证试验发现,化合物4(二乙基甲苯甲酰胺)和12(莪术烯醇)具有抗群体感应活性。
经16S rDNA序列分析,结合形态观察和系统发育分析,将菌株HN2-56鉴定为链霉菌(Streptomyces chumphonesis)。
该菌株在抗群体感应方面有一定的应用潜力,具有进一步研究的价值。
【总页数】6页(P88-93)
【作者】莫杰;钱生辉;钱嘉兴;缪莉
【作者单位】扬州大学环境科学与工程学院
【正文语种】中文
【中图分类】Q939.132
【相关文献】
1.具有群体感应抑制活性海洋放线菌的筛选与鉴定
2.群体感应抑制活性海洋放线菌的分离筛选及优化培养
3.一株群体感应抑制活性海洋放线菌的筛选与鉴定
4.海洋放线菌 Nocardiopsis dassonvillei JS106 的抗群体感应活性物质研究
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具有抗菌活性红树林土壤放线菌BH0951的分离和鉴定黄大林;袁桂峰;徐雅娟;骆耐香;陈建宏;刘菁;蒋莲秀;陈森洲【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2010(038)019【摘要】以广西北海红树林高盐泥样为材料,采用高氏1号培养基对其中的菌株进行分离纯化,通过抗菌试验筛选出1株放线菌BH0951,该菌株的发酵产物具有较强的抗菌活性,其最适生长温度为28 ℃,最适生长pH值为7.0.提取其总DNA,采用通用引物对其16S rDNA进行PCR扩增,并对扩增产物进行序列测定.结果表明,BH0951为链霉菌属(Streptomyces aurantiogriseus)AY999773的变种.【总页数】3页(P10160-10161,10213)【作者】黄大林;袁桂峰;徐雅娟;骆耐香;陈建宏;刘菁;蒋莲秀;陈森洲【作者单位】桂林医学院微生物学与免疫学教研室,广西桂林,541004;桂林医学院微生物学与免疫学教研室,广西桂林,541004;桂林医学院微生物学与免疫学教研室,广西桂林,541004;桂林医学院微生物学与免疫学教研室,广西桂林,541004;桂林医学院微生物学与免疫学教研室,广西桂林,541004;桂林医学院微生物学与免疫学教研室,广西桂林,541004;桂林医学院微生物学与免疫学教研室,广西桂林,541004;桂林医学院微生物学与免疫学教研室,广西桂林,541004【正文语种】中文【中图分类】S154.3【相关文献】1.一株具有抗菌活性红树林土壤放线菌的分离和鉴定 [J], 黄大林;袁桂峰;徐雅娟;骆耐香;陈建宏;刘菁;蒋莲秀;陈森洲2.具有广谱抗菌活性的红树林稀有放线菌的分离及鉴定 [J], 蒋莲秀;吴越;陈建宏;吴丹;黄大林3.1株具有抗根结线虫活性的红树林土壤放线菌的分离与鉴定 [J], 陈雨晴;黄惠琴;刘敏;鲍时翔4.红树林植物共附生放线菌的分离鉴定及其抗菌活性分析 [J], 楚肖肖;周双清;许云;吴文嫱;夏薇;张荣萍;黄东益;黄小龙5.二株具有抗菌活性红树林土壤放线菌的分离与鉴定 [J], 袁桂峰;黄大林;徐雅娟;刘菁;陈建宏;陈森洲因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
广西北部湾海洋腐木产孢真菌的分离鉴定和抗菌活性菌株筛选龚斌;方怀义;熊拯;义翠花;廖日权;宋静静;张艳秋【期刊名称】《应用海洋学学报》【年(卷),期】2017(036)001【摘要】采集广西北部湾钦州附近月亮湾、钦州港和茅尾海海域海洋腐木，采用稀释法分离纯化得到32株产孢真菌，对真菌的菌落、孢子和菌丝形态进行研究，32株真菌可被分为5种真菌类型，其中第I、II和III种类型的真菌仅分离于月亮湾，第IV和V种类型在3个样品采集地均有分离．通过ITS基因测序表明，32株真菌为5个不同的种，其分别属于子囊菌门（Ascomycota）和接合菌门（Zy-gomycota），可以确定种属的包括伞状霉属（Umbelopsis）和青霉菌属（Penicillium），其中分离的青霉菌属在数量上具有优势，占分离菌株总数的75％，属于优势种属．采用4种指示菌大肠杆菌（E.coli）、蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）、烟草节杆菌（Arthrobacter nicotianae）、副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）检测抑菌活性，发现两株伞状霉属真菌Umbelopsis sp．B10和Umbelopsis sp．B9菌丝体提取物对四种指示菌均具有较强的抑制作用，另外两株青霉属真菌Penicillium sp．A5和Peni-cillium sp．B7的菌丝浸出物分别对革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性副溶血弧菌具有较强的抑制活性．本研究为首次报道广西北部湾海洋腐木真菌及其抗菌活性．%Wood-rotting fungi from ocean is an important source of novel fungal species and biologically active sec-ondary metabolites.In our research,rotten woods from Yueliang Bay,Qinzhou harbour and Maowei sea of Beibu Gulf were collected,and 32 fungi were isolated using gradient dilutedseparation method.Five fungi were identified based on characterization of fungal colonies,spores and some sporangia.Among them,three (morphological typeⅠ、Ⅱ and Ⅲ)were only isolated from YueliangBay,and the other two (morphological typeⅣandⅤ)were isola-ted from all the sampling sites.These fungi belonged to 5 taxa and 2 phylum (Ascomycota and Zygomycota)ac-cording to ITS sequence and phylogenetic reconstruction assay and closely matching to the known Genus Penicilli-um,and Umbelopsis in GenBank Database,and the most abundant taxa were Penicillium (account for 75%).U-sing E.coli,Bacillus cereus,Arthrobacter nicotianae,Vibrio parahaemolyticus as testing strains,the extract from hy-pha of Umbelopsis sp.B10 and B9 showed strong inhibiting activity against these bacteria,and Penicillium sp.A5 andB7 inhibited the growth of Gram-negative bacteria of the tested strainsand Vibrio parahaemolyticus.Our re-search is the first report of wood-rotting fungi and their antibacterial activity from Beibu Gulf in China.【总页数】7页(P96-102)【作者】龚斌;方怀义;熊拯;义翠花;廖日权;宋静静;张艳秋【作者单位】钦州学院海洋学院、广西北部湾海洋生物多样性养护重点实验室，广西钦州535000;钦州学院海洋学院、广西北部湾海洋生物多样性养护重点实验室，广西钦州535000;钦州学院海洋学院、广西北部湾海洋生物多样性养护重点实验室，广西钦州535000;钦州学院海洋学院、广西北部湾海洋生物多样性养护重点实验室，广西钦州535000;钦州学院海洋学院、广西北部湾海洋生物多样性养护重点实验室，广西钦州535000;钦州学院海洋学院、广西北部湾海洋生物多样性养护重点实验室，广西钦州535000;钦州学院海洋学院、广西北部湾海洋生物多样性养护重点实验室，广西钦州535000【正文语种】中文【中图分类】P735【相关文献】1.亚热带木腐真菌产漆酶及其酶学性质 [J], 傅恺;付时雨;张丽;周攀登;詹怀宇2.广西北部湾海洋腐木产孢真菌的分离鉴定和抗菌活性菌株筛选 [J], 龚斌;方怀义;熊拯;义翠花;廖日权;宋静静;张艳秋;3.海洋木栖真菌抗菌活性的初步研究 [J], 林昕;黄耀坚;胡志钰;郑忠辉;苏文金4.山东海岸木生海洋真菌的研究V.格孢腔菌属 [J], 杨志多;金静;李宝笃;罗丽;李桂舫;王远路5.海洋侧孢短芽孢杆菌的分离鉴定及其抗菌活性物质初步研究 [J], 王岩;王红英;钱斯日古楞;丛丽娜因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
㊀Ｇｕｉｈａｉａ㊀Ｏｃｔ.２０１８ꎬ３８(１０):１２６７－１２７６ｈｔｔｐ://ｗｗｗ.ｇｕｉｈａｉａ－ｊｏｕｒｎａｌ.ｃｏｍＤＯＩ:１０.１１９３１/ｇｕｉｈａｉａ.ｇｘｚｗ２０１８０５０２２引文格式:谭德超ꎬ罗花ꎬ邓家刚ꎬ等.广西沿海四种红树植物抗肿瘤活性的筛选[Ｊ].广西植物ꎬ２０１８ꎬ３８(１０):１２６７－１２７６ＴＡＮＤＣꎬＬＵＯＨꎬＤＥＮＧＪＧꎬｅｔａｌ.ＳｃｒｅｅｎｉｎｇａｎｔｉｔｕｍｏｒａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｆｏｕｒｍａｎｇｒｏｖｅｐｌａｎｔｓｉｎＧｕａｎｇｘｉｃｏａｓｔａｌａｒｅａ[Ｊ].Ｇｕｉｈａｉａꎬ２０１８ꎬ３８(１０):１２６７－１２７６广西沿海四种红树植物抗肿瘤活性的筛选谭德超１ꎬ２ꎬ罗㊀花１ꎬ邓家刚１ꎬ３ꎬ郝二伟１ꎬ３ꎬ易湘茜１ꎬ２ꎬ３ꎬ冯小慧１ꎬ２ꎬ韦林垚１ꎬ２ꎬ夏中尚１ꎬ２ꎬ徐炜杰１ꎬ２ꎬ谢金玲１ꎬ３ꎬ侯小涛１ꎬ２ꎬ３∗(１.广西中医药大学中药药效研究重点实验室ꎬ南宁５３０２００ꎻ２.广西中医药大学药学院ꎬ南宁５３０２００ꎻ３.广西中医药大学农作物废弃物功能成分研究协同创新中心ꎬ南宁５３０２００)摘㊀要:该研究采用超声提取法ꎬ得到红海榄的叶㊁秋茄的茎和叶㊁水黄皮的叶和桐花树的茎的９５％乙醇提取物ꎬ并用ＭＴＳ法检测提取物对前列腺癌ＤＵ１４５㊁ＰＣ３细胞增殖抑制效果ꎬ结果桐花树茎９５％乙醇提取物对ＤＵ１４５细胞增殖抑制作用最强ꎬ对ＤＵ１４５干预２４㊁４８㊁７２ｈ的ＩＣ５０分别为７５.２３㊁８８.８１㊁７６.５３μｇ ｍＬ￣１ꎮ在此基础上ꎬ依次采用石油醚㊁乙酸乙酯㊁正丁醇对桐花树茎９５％乙醇提取物进行梯度萃取ꎬ得到不同极性部位后选择桐花树茎乙酸乙酯部位(ＥＡＣＳ)对１９种肿瘤细胞(ＨＴ￣２９ꎬＳＷ４８０ꎬＤＬＤ￣１ꎬＣＯＬＯ２０５ꎬＰＣ３ꎬＤＵ１４５ꎬＳＫＯＶ３￣ＳꎬＡ２７８０ꎬＳＧＣ￣７９０１ꎬＴｃａ￣８１１３ꎬＭＤＡ￣ＭＢ￣２３１ꎬＨｅｐＧ２ꎬＳＭＭＣ￣７７２１ꎬＢｅｌ￣７４０２ꎬＭＨＣＣ￣９７ＨꎬＨｅｌａꎬＰＡＮＣ￣１ꎬＥＪꎬＡ５４９)和３种正常细胞(ＨＵＶＥＣꎬＥＣ３０４ꎬＲＷＰＥ￣１)进行ＭＴＳ实验检测其抗增殖作用ꎬ用集落形成进一步检测ＥＡＣＳ对细胞ＨＴ￣２９㊁ＤＬＤ￣１㊁ＳＷ４８０㊁ＤＵ１４５㊁ＰＣ３㊁ＳＫＯＶ３￣Ｓ的增殖影响ꎮ结果表明:ＥＡＣＳ对１６个肿瘤细胞和３个正常细胞均具有不同程度的增殖抑制作用ꎬ其中对ＲＷＰＥ￣１的增殖抑制作用最强ꎬ药物作用７２ｈ后的ＩＣ５０为２２.７８μｇ ｍＬ￣１ꎻＥＡＣＳ对细胞ＨＴ￣２９㊁ＤＬＤ￣１㊁ＳＷ４８０㊁ＤＵ１４５㊁ＰＣ３㊁ＳＫＯＶ３￣Ｓ的集落形成均具有抑制作用ꎬ抑制作用强度与浓度成正相关关系ꎮ关键词:红树植物ꎬ抗肿瘤活性ꎬ筛选ꎬＭＴＳꎬ集落形成中图分类号:Ｒ９３２㊀㊀文献标识码:Ａ㊀㊀文章编号:１０００￣３１４２(２０１８)１０￣１２６７￣１０ＳｃｒｅｅｎｉｎｇａｎｔｉｔｕｍｏｒａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｆｏｕｒｍａｎｇｒｏｖｅｐｌａｎｔｓｉｎＧｕａｎｇｘｉｃｏａｓｔａｌａｒｅａＴＡＮＤｅｃｈａｏ１ꎬ２ꎬＬＵＯＨｕａ１ꎬＤＥＮＧＪｉａｇａｎｇ１ꎬ３ꎬＨＡＯＥｒｗｅｉ１ꎬ３ꎬＹＩＸｉａｎｇｘｉ１ꎬ２ꎬ３ꎬＦＥＮＧＸｉａｏｈｕｉ１ꎬ２ꎬＷＥＩＬｉｎｙａｏ１ꎬ２ꎬＸＩＡＺｈｏｎｇｓｈａｎｇ１ꎬ２ꎬＸＵＷｅｉｊｉｅ１ꎬ２ꎬＸＩＥＪｉｎｌｉｎｇ１ꎬ３ꎬＨＯＵＸｉａｏｔａｏ１ꎬ２ꎬ３∗(１.ＧｕａｎｇｘｉＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＥｆｆｉｃａｃｙＳｔｕｄｙｏｎＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａꎬＧｕａｎｇｘｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅꎬＮａｎｎｉｎｇ５３０２００ꎬＣｈｉｎａꎻ２.ＦａｃｕｌｔｙｏｆＰｈａｒｍａｃｙꎬＧｕａｎｇｘｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅꎬＮａｎｎｉｎｇ５３０２００ꎬＣｈｉｎａꎻ３.ＣｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅＩｎｎｏｖａｔｉｏｎＣｅｎｔｅｒｏｆＳｔｕｄｙｏｎＦｕｎｃｔｉｏｎａｌＩｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＲｅｓｉｄｕｅｓꎬＧｕａｎｇｘｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅꎬＮａｎｎｉｎｇ５３０２００ꎬＣｈｉｎａ)收稿日期:２０１８－０８－１４基金项目:国家自然科学基金(２１６６２００６)ꎻ广西科技计划项目(桂科ＡＤ１７１９５０２５)ꎻ广西科学研究与技术开发计划项目(桂科合１５１０４００１￣１１)ꎻ广西教育厅中药学优势学科建设项目(ＺＹＸＺ２０１５００１)[ＳｕｐｐｏｒｔｅｄｂｙｔｈｅＮａｔｉｏｎａｌＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅＦｏｕｎｄａｔｉｏｎｏｆＣｈｉｎａ(２１６６２００６)ꎻＧｕａｎｇｘｉＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＰｒｏｇｒａｍ(ＡＤ１７１９５０２５)ꎻＧｕａｎｇｘｉＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＣｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎＰｌａｎｎｉｎｇ(１５１０４００１￣１１)ꎻＫｅｙＰｒｏｇｒａｍｆｏｒＳｐｅｃｉａｌＳｕｂｊｅｃｔＣｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａｉｎＧｕａｎｇｘｉＥｄｕｃａｔｉｏｎＤｅｐａｒｔｍｅｎｔ(ＺＹＸＺ２０１５００１)]ꎮ作者简介:谭德超(１９９２－)ꎬ男ꎬ广西浦北人ꎬ硕士研究生ꎬ从事中药基础理论及药理学研究ꎬ(Ｅ￣ｍａｉｌ)ｄｅｃｈａｏｔａｎ＠ｆｏｘｍａｉｌ.ｃｏｍꎮ∗通信作者:侯小涛ꎬ博士ꎬ教授ꎬ博士研究生导师ꎬ从事中药活性成分研究ꎬ(Ｅ￣ｍａｉｌ)ｘｔｈｏｕ＠１２６.ｃｏｍꎮＡｂｓｔｒａｃｔ:Ｎｉｎｅｔｙ￣ｆｉｖｅｐｅｒｃｅｎｔｏｆｅｔｈａｎｏｌｅｘｔｒａｃｔｓｆｒｏｍｔｈｅｌｅａｖｅｓｏｆＲｈｉｚｏｐｈｏｒａｓｔｙｌｏｓａꎬｓｔｅｍｓａｎｄｌｅａｖｅｓｏｆＫａｎｄｅｌｉａｃａｎｄｅｌꎬｌｅａｖｅｓｏｆＰｏｎｇａｍｉａｐｉｎｎａｔａａｎｄｓｔｅｍｓｏｆＡｅｇｉｃｅｒａｓｃｏｒｎｉｃｕｌａｔｕｍｗｅｒｅｅｘｔｒａｃｔｅｄｂｙｕｌｔｒａｓｏｎｉｃｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ.Ｔｈｅｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙｏｆ９５％ｅｔｈａｎｏｌｅｘｔｒａｃｔｓｆｒｏｍｔｈｅｓｅｆｏｕｒｍａｎｇｒｏｖｅｐｌａｎｔｓｏｎｐｒｏｓｔａｔｅｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓＤＵ１４５ｗｉｔｈ２４ꎬ４８ａｎｄ７２ｈａｎｄＰＣ３ｗｅｒｅｔｅｓｔｅｄｂｙＭＴＳａｓｓａｙ.Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅａｎｔｉ￣ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｎｐｒｏｓｔａｔｅｃａｎｃｅｒｃｅｌｌＤＵ１４５ｏｆ９５％ｅｔｈａｎｏｌｅｘｔｒａｃｔｏｆＡ.ｃｏｒｎｉｃｕｌａｔｕｍｓｔｅｍｓｗａｓｔｈｅｓｔｒｏｎｇｅｓｔａｍｏｎｇｔｈｅｔｅｓｔｅｄｓａｍｐｌｅｓｗｉｔｈＩＣ５０ｖａｌｕｅｏｆ７５.２３ꎬ８８.８１ａｎｄ７６.５３μｇ ｍＬ￣１ｔｏＤＵ１４５ꎬｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ.ＯｎｔｈｉｓｂａｓｉｓꎬｔｈｅｅｔｈａｎｏｌｅｘｔｒａｃｔｏｆＡ.ｃｏｒｎｉｃｕｌａｔｕｍｓｔｅｍｓｗａｓｓｕｃｃｅｓｓｉｖｅｌｙｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈｐｅｔｒｏｌｅｕｍｅｔｈｅｒꎬｅｔｈｙｌａｃｅｔａｔｅａｎｄｎ￣ｂｕｔａｎｏｌｔｏｙｉｅｌｄｆｏｕｒｆｒａｃｔｉｏｎｓꎬｔｈｅｎｔｈｅｅｔｈｙｌａｃｅｔａｔｅｆｒａｃｔｉｏｎｏｆＡ.ｃｏｒｎｉｃｕｌａｔｕｍｓｔｅｍｓ(ＥＡＣＳ)ｗｅｒｅｔｅｓｔｅｄｆｏｒａｎｔｉｃａｎｃｅｒａｃｔｉｖｉｔｉｅｓａｇａｉｎｓｔｎｉｎｅｔｅｅｎｔｕｍｏｒｃｅｌｌｓ(ＨＴ￣２９ꎬＳＷ４８０ꎬＤＬＤ￣１ꎬＣＯＬＯ２０５ꎬＰＣ３ꎬＤＵ１４５ꎬＳＫＯＶ３￣ＳꎬＡ２７８０ꎬＳＧＣ￣７９０１ꎬＴｃａ￣８１１３ꎬＭＤＡ￣ＭＢ￣２３１ꎬＨｅｐＧ２ꎬＳＭＭＣ￣７７２１ꎬＢｅｌ￣７４０２ꎬＭＨＣＣ￣９７ＨꎬＨｅｌａꎬＰＡＮＣ￣１ꎬＥＪꎬＡ５４９)ａｎｄａｎｔｉｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｔｈｒｅｅｎｏｒｍａｌｃｅｌｌｓ(ＨＵＶＥＣꎬＥＣ３０４ꎬＲＷＰＥ￣１)ｂｙＭＴＳａｓｓａｙꎬｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆＥＡＣＳｏｎｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆＨＴ￣２９ꎬＤＬＤ￣１ꎬＳＷ４８０ꎬＤＵ１４５ꎬＰＣ３ａｎｄＳＫＯＶ３￣Ｓｃｅｌｌｓｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｔｈｅｃｏｌｏｎｙｆｏｒｍａｔｉｏｎａｓｓａｙ.ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔＥＡＣＳｅｘｈｉｂｉｔｅｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｄｅｇｒｅｅｓｏｆｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｅｆｆｅｃｔｏｎｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆｓｉｘｔｅｅｎｔｕｍｏｒｃｅｌｌｓａｎｄｔｈｒｅｅｎｏｒｍａｌｃｅｌｌｓꎬａｎｄｈａｄｔｈｅｓｔｒｏｎｇｅｒｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｅｆｆｅｃｔｏｎｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆＲＷＰＥ￣１ｗｉｔｈＩＣ５０ｖａｌｕｅｏｆ２２.７８μｇ ｍＬ￣１ａｆｔｅｒ７２ｈｄｒｕｇｔｒｅａｔｍｅｎｔ.ＥＡＣＳｉｎｈｉｂｉｔｅｄｔｈｅｃｏｌｏｎｙｆｏｒ￣ｍａｔｉｏｎｓｏｆＨＴ￣２９ꎬＤＬＤ￣１ꎬＳＷ４８０ꎬＤＵ１４５ꎬＰＣ３ａｎｄＳＫＯＶ３￣Ｓｃｅｌｌｓｉｎａｄｏｓｅ￣ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｍａｎｎｅｒ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ:ｍａｎｇｒｏｖｅｐｌａｎｔｓꎬａｎｔｉｔｕｍｏｒａｃｔｉｖｉｔｙꎬｓｃｒｅｅｎｉｎｇꎬＭＴＳꎬｃｏｌｏｎｙｆｏｒｍａｔｉｏｎ㊀㊀肿瘤是目前世界上发病率及致死率高的疾病之一ꎮ２０１２年全球肿瘤新增病例约有１４１０万ꎬ死亡病例有８２０万ꎻ欠发展国家的新增病例占５７％ꎬ死亡病例占６５％(Ｔｏｒｒｅｅｔａｌꎬ２０１５)ꎮ中国２０１５年的癌症新发病例达４２９万ꎬ死亡病例２８１万(Ｃｈｅｎｅｔａｌꎬ２０１６)ꎻ中国癌症发病占全球癌症发病的２１.８％ꎬ癌症死亡占全球的２６.９％ꎬ发病率处于世界癌症平均发病水平ꎬ但死亡率相对较高(高婷等ꎬ２０１６)ꎮ目前临床上治疗肿瘤的药物种类及数量较多ꎬ但多数药物均具有恶心㊁呕吐等毒副作用从而限制了其使用范围ꎮ因此ꎬ寻找有效低毒的新型抗肿瘤药物是极为迫切的ꎮ药物的传统来源是陆生植物或微生物的天然产物ꎬ尤其是次生代谢产物ꎬ如阿司匹林㊁青霉素㊁吗啡的发现ꎮ在肿瘤领域的临床用药至少６０％是天然药物来源(Ｄａｓｅｔａｌꎬ２０１５)ꎬ如多柔比星㊁紫杉醇ꎮ相对陆生植物资源的药用研究ꎬ海洋生态系统相当于药用研究领域的新大陆ꎬ且与陆地生态系统差异显著ꎬ有望从丰富的资源中分离出化学结构多样的活性成分(Ｍｏｌｉｎｓｋｉｅｔａｌꎬ２００９)ꎮ红树植物生长于热带和亚热带沿海潮间带(Ｍｅｒｃｅｒ＆Ｈａｍｉｌｔｏｎꎬ１９８４)ꎬ是海洋生态系统的重要组成部分ꎮ高盐㊁高温㊁潮湿㊁强风等潮间带环境ꎬ迫使红树植物通过合成新颖的次生代谢产物来保护自身(Ｓｃｈｏｌａｎｄｅｒｅｔａｌꎬ１９６２ꎻＺｈａｎｇｅｔａｌꎬ２００７)ꎮ环境的特殊性使红树植物相对于其他陆生植物更易产生一些结构新颖的生物活性成分ꎬ从中找到新药先导化合物的可能性极大ꎮ此外ꎬ红树植物在传统医学中应用广泛ꎬ可用于治疗肿瘤㊁糖尿病㊁麻风病㊁眼病㊁肝炎等病症(Ｂａｎｄａｒａｎａｙａｋｅꎬ１９９８)ꎮ基于生理特异性和传统医学应用ꎬ红树植物是值得应用现代医药技术进行深入研究的ꎮ现代研究表明红树植物中的主要化合物有脂肪族醇㊁氨基酸㊁多不饱和脂肪酸㊁萜类㊁黄酮类㊁生物碱类㊁醌类㊁木脂素类㊁甾醇类㊁鞣质㊁杂环化合物等ꎬ并具有抗肿瘤㊁抗病毒㊁抗菌㊁抗高血压㊁抗炎㊁抗氧化㊁虫鱼毒性等生物活性(Ｂａｎｄａｒａｎａｙａｋｅꎬ２００２ꎻＰａｔｒａ＆Ｔｈａｔｏｉꎬ２０１１ꎻ杨维等ꎬ２０１１)ꎮ近年来ꎬ红树植物的抗肿瘤研究证明其具有广泛的抗肿瘤活性ꎬ并从中分离出众多具有抗肿瘤活性的成分(Ｄａｓｅｔａｌꎬ２０１５)ꎬ如桐花树果甲醇提取物对ＶＥＲＯ㊁ＮＩＨ３Ｔ３㊁ＡＧＳ㊁ＨＴ￣２９㊁ＭＣＦ￣７㊁ＭＤＡ￣ＭＢ￣２３１具有较强的细胞毒性ꎬＩＣ５０在０.０００５~０.９９８ｍｇ ｍＬ￣１之间(Ａｋｔｅｒｅｔａｌꎬ２０１４)ꎮ从桐花树中分离出具有抗肿瘤活性的ａｅｇｉｃｏｒｏｓｉｄｅＡ㊁ｓａｋｕｒａｓｏｓａｐｏｎｉｎ㊁ｓａｋｕｒａｓｏｓ￣ａｐｏｎｉｎｍｅｔｈｙｌｅｓｔｅｒ(Ｖｉｎｈｅｔａｌꎬ２０１７)㊁５￣８６２１广㊀西㊀植㊀物３８卷氧￣乙基信筒子醌㊁５￣氧￣甲基信筒子醌(徐岷涓等ꎬ２００８)和Ｅｍｂｅｌｉｎ及其洐生物(Ｔｈｏｔａｅｔａｌꎬ２０１６ꎻ李勇ꎬ２０１０)ꎮ此外ꎬ还从木果楝(Ｘｙｌｏｃａｒｐｕｓｇｒａｎａｔｕｍ)中分离出具有抗肿瘤活性的ｘｙｌｏｇｒａｎａｔｉｎＡ㊁ｘｙｌｏｇｒａｎａｔｉｎＢ㊁ｘｙｌｏｇｒａｎａｔｉｎＣ㊁ｘｙｌｏｇｒａｎａｔｉｎＤ(Ｙｉｎｅｔａｌꎬ２００６)等ꎮ但据文献报道ꎬ目前对于桐花树抗肿瘤作用的系统研究偏少ꎬ对其抗肿瘤作用的机理及活性成分研究仍有待深入ꎮ总的来说ꎬ红树植物仍是一类资源丰富但药物开发研究相对较少的物种(Ｋａｔｈｉｒｅｓａｎｅｔａｌꎬ２００６ꎻＨａｒｓｈａｄꎬ２０１６)ꎮ应当在现有的研究基础上开展更深入的研究ꎬ以期从中分离出更多具有生物活性的天然化合物及开发出优于当前临床治疗肿瘤的药物ꎮ本研究对广西沿海的四种红树植物进行细胞毒性检测来评价它们对前列腺癌细胞ＤＵ１４５㊁ＰＣ３的增殖抑制作用ꎬ并进一步选择作用较强的桐花树进行体外抗肿瘤活性评价ꎮ１㊀材料与方法１.１材料㊁试剂㊁耗材和仪器四种红树植物:红海榄(１０９ʎ４０ᶄ０３.３ᵡＥꎬ２１ʎ３２ᶄ１１.８ᵡＮ)㊁水黄皮(１０９ʎ３９ᶄ５８.４ᵡＥꎬ２１ʎ３２ᶄ０４.９ᵡＮ)㊁秋茄(１０９ʎ４０ᶄ０５.２ᵡＥꎬ２１ʎ３２ᶄ１４.３ᵡＮ)ꎬ２０１６年７月采自广西北海市合浦县山口国家级红树林生态自然保护区ꎻ桐花树(１０８ʎ０３ᶄ４９.７ᵡＥꎬ２１ʎ３２ᶄ０６.７ᵡＮ)ꎬ２０１６年７月采自广西防城港市北仑河口红树林保护区ꎮ由广西中医药大学韦松基教授分别鉴定为红海榄(Ｒｈｉｚｏｐｈｏｒａｓｔｙｌｏｓａ)的成熟叶及嫩叶ꎬ水黄皮(Ｐｏｎｇａｍｉａｐｉｎｎａｔａ)的成熟叶及嫩叶ꎬ秋茄(Ｋａｎｄｅｌｉａｃａｎｄｅｌ)的茎和叶(成熟叶及嫩叶)ꎬ桐花树(Ａｅｇｉｃｅｒａｓｃｏｒｎｉｃｕｌａｔｕｍ)的茎ꎮ干燥标本保存于广西中医药大学中药药效研究重点研究室中ꎮ细胞系:人结直肠癌细胞ＨＴ￣２９ꎬＳＷ４８０ꎬＤＬＤ￣１ꎬＣＯＬＯ２０５ꎻ人前列腺癌细胞ＰＣ３ꎬＤＵ１４５ꎻ人卵巢癌细胞ＳＫＯＶ３￣ＳꎬＡ２７８０ꎻ人胃癌细胞ＳＧＣ￣７９０１ꎻ人舌癌细胞Ｔｃａ￣８１１３ꎻ人乳腺癌细胞ＭＤＡ￣ＭＢ￣２３１ꎻ人肝癌细胞ＨｅｐＧ２ꎬＳＭＭＣ￣７７２１ꎬＢｅｌ￣７４０２ꎬＭＨＣＣ￣９７Ｈꎻ人宫颈癌细胞Ｈｅｌａꎻ人胰腺癌细胞ＰＡＮＣ￣１ꎻ人膀胱癌细胞ＥＪꎻ人非小细胞肺癌细胞Ａ５４９ꎻ人脐静脉内皮细胞ＨＵＶＥＣꎻ人血管内皮细胞ＥＣ３０４ꎻ人正常前列腺上皮细胞ＲＷＰＥ￣１ꎮ试剂:９５％乙醇(批号为２０１６０７０６０１ꎬ厂家为成都科龙化工试剂厂)㊁乙酸乙酯(批号为２０１６０９０６０１ꎬ厂家为成都科龙化工试剂厂)㊁正丁醇(批号为２０１６０９２２０１ꎬ厂家为成都科龙化工试剂厂)㊁石油醚(批号为２０１６０６０１０１ꎬ厂家为成都科龙化工试剂厂)㊁水溶性甲臢盐ＭＴＳ(批号为２１９９０４ꎬ厂家为Ｐｒｏｍｅｇａ)㊁培养基ＲＰＭＩ１６４０(批号为３５０００６０２６ꎬ厂家为ＷＩＳＥＮＴ)㊁ＤＭＥＭ(批号为２０１７０３１５ꎬ厂家为江苏凯基)㊁Ｌ１５(批号为１６１１０９ꎬ厂家为江苏凯基)㊁ＭｃＣｏＹ ｓ５Ａ(批号为２０１７０４０７ꎬ厂家为江苏凯基)㊁ＭＥＭ(批号为１６１２２７ꎬ厂家为江苏凯基)㊁Ｆ１２Ｋ(批号为３１９０８５０２０ꎬ厂家为ＷＩＳＥＮＴ)㊁胎牛血清ＦＢＳ(批号为１７３９４６３ꎬ厂家为Ｇｉｂｃｏ)㊁青霉素/链霉素双抗溶液(批号为１８６４８４４ꎬ厂家为Ｇｉｂｃｏ)㊁胰酶０.２５％Ｔｒｙｐｓｉｎ￣ＥＤＴＡ(批号为１８５９５０９ꎬ厂家为Ｇｉｂｃｏ)㊁平衡盐溶液Ｄ￣ＰＢＳ(批号为３１１４２５０１６ꎬ厂家为ＷＩ￣ＳＥＮＴ)ꎬＤＭＳＯ(批号为１０２９Ｂ０３３ꎬ厂家为Ｓｏｌａｒｂｉｏ)ꎮ耗材:９６孔板(批号为３５９９ꎬ厂家为Ｃｏｒｎｉｎｇ)㊁５ｍＬ移液管(批号为４４８７ꎬ厂家为Ｃｏｒｎｉｎｇ)㊁１０ｍＬ移液管(批号为４４８８ꎬ厂家为Ｃｏｒｎｉｎｇ)㊁１５ｍＬ离心管(批号为４３０７９１ꎬ厂家为Ｃｏｒｎｉｎｇ)㊁５０ｍＬ离心管(批号为４３０８２９ꎬ厂家为Ｃｏｒｎｉｎｇ)ꎮ仪器:显微镜(型号为ＥＣＬＩＰＳＥＴＳ１００￣Ｆꎬ厂家为Ｎｉｋｏｎ)㊁生物安全柜(型号为１３８９ꎬ厂家为Ｔｈｅｒ￣ｍｏ)㊁酶标仪(型号为Ｍｕｌｔｉｓｋａｎꎬ厂家为Ｔｈｅｒｍｏ)㊁扫描仪(型号为９０００Ｆꎬ厂家为Ｃａｎｏｎ)ꎮ１.２方法１.２.１细胞培养㊀细胞分别接种在含有１０％胎牛血清㊁１００Ｕ ｍＬ￣１青霉素㊁１００μｇ ｍＬ￣１链霉素的相应培养基中ꎬ于３７ħꎬ５％ＣＯ２恒温孵箱中培养ꎮ不完全培养基及相应的细胞系依次为ＲＰＭＩ１６４０(ＰＣ３ꎬＤＵ１４５ꎬＢｅｌ￣７４０２ꎬＤＬＤ￣１ꎬＥＪꎬＳＧＣ￣７９０１ꎬＳＭＭＣ￣７７２１ꎬＴｃａ￣８１１３ꎬＣＯＬＯ２０５ꎬＥＣ３０４)㊁ＤＭＥＭ(Ａ２７８０ꎬＰＡＮＣ￣１ꎬＨＵＶＥＣꎬＭＨＣＣ￣９７Ｈ)㊁Ｌ１５(ＭＤＡ￣ＭＢ￣２３１ꎬＳＷ４８０)㊁ＭｃＣｏＹ ｓ５Ａ(ＨＴ￣２９ꎬＳＫＯＶ３￣Ｓ)㊁９６２１１０期谭德超等:广西沿海四种红树植物抗肿瘤活性的筛选ＭＥＭ(ＨｅｐＧ２ꎬＨｅｌａ)㊁Ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ￣ＳＦＭ(ＲＷＰＥ)和Ｆ１２Ｋ(Ａ５４９)ꎮ１.２.２样品的制备㊀将红树植物晒干ꎬ分拣茎㊁叶ꎬ粉碎后分别用９５％乙醇超声提取１ｈꎬ滤过后用冷冻真空旋转蒸发仪回收乙醇(低于６０ħ)ꎬ浓缩至无醇味ꎬ６０ħ水浴干燥即得９５％乙醇提取物ꎮ桐花树茎的９５％乙醇提取液在浓缩至无醇味后ꎬ依次进行石油醚㊁乙酸乙酯㊁正丁醇的萃取ꎬ萃取物浓缩干燥得桐花树茎不同极性部位ꎮ取以上的９５％乙醇提取物和桐花树茎乙酸乙酯部位(ＥＡＣＳ)进行肿瘤细胞的细胞毒性筛选ꎮ将提取物溶解于ＤＭＳＯ中ꎬ配成１００ｍｇ ｍＬ￣１的储备液ꎬ提取物不易溶解时ꎬ置于超声仪超声溶解ꎬ并用０.２２μｍ微孔滤膜过滤后分装于ＥＰ管ꎬ保存于－２０ħꎮ１.２.３体外肿瘤细胞增殖抑制实验(ＭＴＳ法)㊀将对数生长期的细胞种植在９６孔板中ꎬ每孔２０００个细胞ꎬ每组设置３个复孔ꎬ置于３７ħꎬ５％ＣＯ２恒温孵箱中过夜贴壁后给药ꎮ９５％乙醇提取物给药梯度各不同ꎬＥＡＣＳ设５个给药梯度组(５０.０㊁７５.０㊁１００.０㊁１５０.０㊁２００μｇ ｍＬ￣１)ꎬ每组给药组分别设置相应的药物颜色扣除孔ꎬ以及培养液对照组㊁ＤＭＳＯ对照组ꎬ设置３块板ꎬ分别进行２４㊁４８㊁７２ｈ的检测ꎮ给药后置于３７ħꎬ５％ＣＯ２恒温孵箱中进行常规培养ꎮ分别在培养２４㊁４８㊁７２ｈ后ꎬ每孔加入２０μＬ完全融化后的ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ９６ＡｑｕｅｏｕｓＯｎｅＳｏｌｕｔｉｏｎＲｅａｇｅｎｔꎬ将细胞放回培养箱中继续培养２ｈꎬ于酶标仪上在４９０ｎｍ波光处读取吸光度值ꎮ细胞活力＝药物干预组/对照组ˑ１００％ꎮ用Ｇｒａｐｈ￣ＰａｄＰｒｉｓｍ５作折线图ꎬ用ＳＰＳＳ２１计算ＩＣ５０ꎮ１.２.４集落形成实验㊀将细胞以每个孔４００个的密度均匀地铺于６孔板中ꎬ２４ｈ之后给予药物ＥＡＣＳ(１２.５㊁２５μｇ ｍＬ￣１)干预ꎬ并设置对照组ꎮ４ｄ后换一次液ꎬ新的液体分别为完全培养基㊁相同浓度的药物组ꎬ８ｄ后终止克隆形成ꎮ将６孔板从培养箱中取出并吸走液体ꎬ用Ｄ￣ＰＢＳ缓冲液清洗两遍后用４％的多聚甲醛固定２０ｍｉｎꎬ吸走４％多聚甲醛后用结晶紫染色液染色１８ｍｉｎꎮ吸走结晶紫并用Ｄ￣ＰＢＳ清洗干净ꎬ将６孔板用扫描仪扫描ꎮ克隆形成率＝克隆形成数/种板细胞数ˑ１００％ꎮ２㊀结果与分析２.１四种广西沿海红树植物对人前列腺癌细胞ＤＵ１４５、ＰＣ３的抑制作用细胞增殖实验表明ꎬ除了红海榄ꎬ秋茄㊁桐花树㊁水黄皮的９５％乙醇提取物对人前列腺癌ＤＵ１４５㊁ＰＣ３增殖均表现出一定的抑制作用ꎬ且抑制作用随着药物浓度的增加而增强ꎬ呈量效关系ꎮ秋茄茎９５％乙醇提取物对ＤＵ１４５㊁ＰＣ３细胞增殖抑制效果在作用了７２ｈ时最强ꎬＩＣ５０分别为８１.４８㊁９７.７７μｇ ｍＬ￣１ꎻ秋茄叶９５％乙醇提取物抑制ＤＵ１４５㊁ＰＣ３细胞的增殖也是在７２ｈ时最强ꎬＩＣ５０分别为９３.２１㊁５９.７５μｇ ｍＬ￣１ꎮ桐花树茎９５％乙醇提取物对ＤＵ１４５细胞增殖抑制作用在２４ｈ时最强ꎬＩＣ５０为７５.２３μｇ ｍＬ￣１ꎻ而对ＰＣ３细胞增殖抑制作用则是在４８ｈ时最强ꎬＩＣ５０为９７.１３μｇ ｍＬ￣１ꎮ水黄皮叶９５％乙醇提取物对ＤＵ１４５㊁ＰＣ３细胞增殖抑制作用均在７２ｈ时最强ꎬＩＣ５０分别为１７０.５７㊁１８４.８２μｇ ｍＬ￣１ꎮ结果见图１和表１ꎮ表１㊀四种红树植物９５％乙醇提取物作用于ＤＵ１４５和ＰＣ３细胞的ＩＣ５０Ｔａｂｌｅ１㊀ＩＣ５０ｖａｌｕｅｓｏｆ９５％ｅｔｈａｎｏｌｅｘｔｒａｃｔｓｏｆｆｏｕｒｍａｎｇｒｏｖｅｐｌａｎｔｓａｇａｉｎｓｔＤＵ１４５ａｎｄＰＣ３红树植物Ｍａｎｇｒｏｖｅｐｌａｎｔ组织Ｔｉｓｓｕｅ干预时间Ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎｔｉｍｅ(ｈ)ＤＵ１４５(μｇｍＬ￣１)ＰＣ３(μｇｍＬ￣１)桐花树Ａｅｇｉｃｅｒａｓｃｏｒｎｉｃｕｌａｔｕｍ茎Ｓｔｅｍ２４７５.２３１４０.７５４８８８.８１９７.１３７２７６.５３１２６.７７秋茄Ｋａｎｄｅｌｉａｃａｎｄｅｌ茎Ｓｔｅｍ２４ ２４０.９８４８１７８.４４１３９.５４７２８１.４８９７.７７叶Ｌｅａｆ２４１１８.３７１２０.０１４８１１６.０４８８.６５７２９３.２１５９.７５红海榄Ｒｈｉｚｏｐｈｏｒａｓｔｙｌｏｓａ叶Ｌｅａｆ２４１９６６.８９８３９.６０４８ １０１６.８９７２水黄皮Ｐｏｎｇａｍｉａｐｉｎｎａｔａ叶Ｌｅａｆ４８７４５.９１２１９.３７７２１７０.５７１８４.８２㊀注: 表示无明显细胞毒性ꎮ下同ꎮ㊀Ｎｏｔｅ: ｉｎｄｉｃａｔｅｎｏｏｂｖｉｏｕｓｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ.Ｔｈｅｓａｍｅｂｅｌｏｗ.０７２１广㊀西㊀植㊀物３８卷㊀㊀在药物干预了４８㊁７２ｈ时ꎬ均是桐花树茎９５％乙醇提取物对ＤＵ１４５细胞增殖抑制作用的ＩＣ５０最小ꎬ表明其对ＤＵ１４５细胞增殖抑制作用最强ꎮ２.２ＥＡＣＳ对１９种人肿瘤细胞和３种人正常细胞的抑制作用ＥＡＣＳ对１９种人肿瘤细胞和３种人正常细胞中的细胞增殖实验结果表明ꎬＥＡＣＳ在药液浓度５０~２００μｇ ｍＬ￣１的范围内对人肝癌细胞ＭＨＣＣ￣９７Ｈ㊁ＳＭＭＣ￣７７２１和人非小细胞肺癌细胞Ａ５４９无明显细胞毒性ꎬ而对其他１６种肿瘤细胞和３个正常细胞均具有不同程度的增殖抑制效果ꎬ抑制作用随着浓度的增加而增强ꎬ呈量效关系ꎮ结果见图２和表２ꎮ以药物作用４８和７２ｈ的ＩＣ５０为参照ꎬ在１６个肿瘤细胞中ꎬＥＡＣＳ对结直肠癌ＣＯＬＯ２０５细胞增殖抑制作用最强ꎬＩＣ５０分别为８３.５１㊁１１７.０３μｇ ｍＬ￣１ꎻ其次是结直肠癌ＤＬＤ￣１细胞ꎬ细胞增殖抑制作用的ＩＣ５０分别为１４２.４５㊁１４６.２８μｇ ｍＬ￣１ꎮＥＡＣＳ对３个正常细胞的增殖也具有抑制作用ꎬ对ＨＵＶＥＣ㊁ＥＣ３０４㊁ＲＷＰＥ￣１细胞增殖抑制作用依次增强ꎻ在ＥＡＣＳ干预４８㊁７２ｈ时ꎬＲＷＰＥ￣１细胞增殖抑制作用的ＩＣ５０分别为８７.６４㊁２２.７８μｇ ｍＬ￣１ꎮ由此可见ꎬＥＡＣＳ对细胞增殖抑制作用不具有选择特异性ꎬ不能区分肿瘤细胞与正常细胞ꎮ若进一步对ＥＡＣＳ进行分离ꎬ得到的细胞增殖抑制作用活性成分ꎬ可考虑化学结构修饰ꎬ以期从中得到具有选择特异性的抗肿瘤活性成分ꎮＥＡＣＳ干预ＤＵ１４５细胞ꎬ在２４㊁４８和７２ｈ时ꎬ细胞增殖抑制作用的ＩＣ５０分别是１４４.３６㊁１６６.０２和１５８.６４μｇ ｍＬ￣１ꎻＥＡＣＳ干预ＰＣ３细胞ꎬ在２４㊁４８和７２ｈ时ꎬ抑制增殖的ＩＣ５０分别是３５７.５１㊁２１９.８１和２０３.８１μｇ ｍＬ￣１ꎮ以上６个值均比桐花树茎９５％乙醇提取物对ＤＵ１４５㊁ＰＣ３细胞增殖抑制作用的ＩＣ５０大ꎬ说明桐花树茎９５％乙醇提取物对前列腺癌ＤＵ１４５㊁ＰＣ３细胞增殖抑制作用的活性成分不富集在ＥＡＣＳ上ꎬ而在石油萃取物或者正丁醇萃取物中ꎮ２.３ＥＡＣＳ对ＨＴ￣２９㊁ＤＬＤ￣１㊁ＳＷ４８０㊁ＤＵ１４５㊁ＰＣ３细胞集落形成的影响ＥＡＣＳ对人结肠癌细胞ＨＴ￣２９㊁ＤＬＤ￣１㊁ＳＷ４８０的集落形成干预效果见图３ꎬ对人前列腺癌细胞ＤＵ１４５㊁ＰＣ３及人卵巢癌细胞ＳＫＯＶ３￣Ｓ的集落形成干预效果见图４ꎮ通过克隆形成实验ꎬ进一步证实了ＥＡＣＳ对细胞ＨＴ￣２９㊁ＤＬＤ￣１㊁ＳＷ４８０㊁ＤＵ１４５㊁ＰＣ３㊁ＳＫＯＶ３￣Ｓ的增殖抑制作用ꎮ如图３和图４所示ꎬＥＡＣＳ对这６种细胞的克隆形成的抑制作用强度与浓度成正相关关系ꎬ药物浓度越高ꎬ抑制作用越强ꎮ在与对照组比较的情况下ꎬＥＡＣＳ对ＳＷ４８０的克隆形成无明显的抑制效果ꎬ而对其他５种细胞的克隆形成的抑制效果较强ꎬ均具有统计学意义ꎮ在１２.５μｇ ｍＬ￣１的ＥＡＣＳ干预下ꎬＤＵ１４５细胞克隆形成数与空白对照组比较ꎬ差异具有极显著意义(Ｐ<０.０１)ꎻ而ＤＬＤ￣１㊁ＰＣ３㊁ＳＫＯＶ３￣Ｓ细胞克隆形成数与对照组比较ꎬ差异在浓度为２５.０μｇ ｍＬ￣１时才具有极显著意义(Ｐ<０.０１)ꎮ在２５.０μｇ ｍＬ￣１ＥＡＣＳ干预下ꎬＨＴ￣２９细胞克隆形成数与对照组比较ꎬ差异具有显著意义(Ｐ<０.０５)ꎮ３㊀讨论与结论恶性肿瘤是目前世界上仅次于心血管疾病的第二大致死疾病ꎮ尽管现在有许多可应用于治疗恶性肿瘤的药物ꎬ但是这些药物往往会产生副作用ꎮ红树植物历来被人们用来治疗各种疾病ꎬ其中就包括治疗肿瘤ꎮ红树林植物生长于陆地与海洋的交界处ꎬ环境的特殊性使得红树植物易于产生新颖的次生代谢产物ꎮ目前为止ꎬ研究者发现多种红树植物具有抗肿瘤作用ꎬ并从中分离出了多种具有抗肿瘤活性的化学成分(韦林垚等ꎬ２０１８)ꎮ红树植物的提取物或者从中分离出来的活性成分ꎬ它们的抗肿瘤机理各不相同ꎬ主要有阻滞细胞周期㊁诱导细胞凋亡㊁抑制细胞转移和侵袭㊁抑制肿瘤血管生成等ꎮ从桐花树中分离出的抗肿瘤活性成分５￣氧￣乙基信筒子醌和５￣氧￣甲基信筒子醌阻断肿瘤细胞周期在Ｇ０/Ｇ１期ꎬ并诱导肿瘤细胞凋亡来抗肿瘤(徐岷涓等ꎬ２００８)ꎻ从红海榄中分离出的环木菠萝苷可激活肿瘤细胞的Ｃａｓｐａｓｅ￣３和Ｃａｐａｓｅ７ꎬ从而诱导细胞凋亡(Ｈｕｏｎｇｅｔａｌꎬ２０１４)ꎻ从白骨壤中分离出来的ｎａｐｈｔｈｏ[１ꎬ２￣ｂ]ｓｄｆｇｈｉｊｕｆｕｒａｎ￣４ꎬ５￣ｄｉｏｎｅ通过ＰＩ３Ｋ/Ａｋｔ信号通路抑１７２１１０期谭德超等:广西沿海四种红树植物抗肿瘤活性的筛选表２㊀ＥＡＣＳ作用于１９种人肿瘤细胞和３种人正常细胞的ＩＣ５０Ｔａｂｌｅ２㊀ＩＣ５０ｖａｌｕｅｓｏｆＥＡＣＳａｇａｉｎｓｔｎｉｎｅｔｅｅｎｈｕｍａｎｔｕｍｏｒｃｅｌｌｓａｎｄｔｈｒｅｅｎｏｒｍａｌｃｅｌｌｓ细胞类型Ｃｅｌｌｔｙｐｅ桐花树茎乙酸乙酯部位(ＥＡＣＳ)ＥｔｈｙｌａｃｅｔａｔｅｆｒａｃｔｉｏｎｆｒｏｍＡｅｇｉｃｅｒａｓｃｏｒｎｉｃｕｌａｔｕｍｓｔｅｍｓ细胞系Ｃｅｌｌｌｉｎｅ２４ｈ(μｇ ｍＬ￣１)４８ｈ(μｇ ｍＬ￣１)７２ｈ(μｇ ｍＬ￣１)人结直肠癌细胞ＨｕｍａｎｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｎｃｅｒｃｅｌｌＣＯＬＯ２０５１１１.８０８３.５１１１７.０３ＤＬＤ￣１１２０.６５１４２.４５１４６.２８ＨＴ￣２９ ２７１.９９３５３.００ＳＷ４８０２４３.４５１８６.９１２９７.４６人前列腺癌细胞ＨｕｍａｎｐｒｏｓｔａｔｅｃａｎｃｅｒｃｅｌｌＤＵ１４５１４４.３６１６６.０２１５８.６４ＰＣ３３５７.５１２１９.８１２０３.８１人卵巢癌细胞ＨｕｍａｎｏｖａｒｉａｎｃａｎｃｅｒｃｅｌｌＡ２７８０ ２４３.６６４２０.１５ＳＫＯＶ３￣Ｓ８１８.５０５１５.７０人乳腺癌细胞ＨｕｍａｎｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒｃｅｌｌＭＤＡ￣ＭＢ￣２３１１１０.８２ ２４１.９８人肝癌细胞ＨｕｍａｎｌｉｖｅｒｃａｎｃｅｒｃｅｌｌＢｅｌ￣７４０２２０１.５９ＨｅｐＧ２４８２.２９３４６.２８２１１.１２ＭＨＣＣ￣９７ＨＳＭＭＣ￣７７２１人胃癌细胞ＨｕｍａｎｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｃｅｌｌＳＧＣ￣７９０１１４５.６６２４１.１４３８１.８３人舌癌细胞ＨｕｍａｎｔｏｎｇｕｅｃａｎｃｅｒｃｅｌｌＴｃａ￣８１１３２４４.１４１９３.４４２５７.９９人宫颈癌细胞ＨｕｍａｎｃｅｒｖｉｃａｌｃａｎｃｅｒｃｅｌｌＨｅｌａ１５９.７７２０５.９６１６９.４９人胰腺癌细胞ＨｕｍａｎｐａｎｃｒｅａｔｉｃｃａｎｃｅｒｃｅｌｌＰＡＮＣ￣１３７８.４１人膀胱癌细胞ＨｕｍａｎｂｌａｄｄｅｒｃａｎｃｅｒｃｅｌｌＥＪ２３１.３３１７５.７２１７１.９５人肺癌细胞ＨｕｍａｎｌｕｎｇｃａｎｃｅｒｃｅｌｌＡ５４９人血管内皮细胞ＨｕｍａｎｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌＥＣ３０４１２９.０９１２４.５２１５１.５０人脐静脉内皮细胞ＨｕｍａｎｕｍｂｉｌｉｃａｌｖｅｉｎｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌＨＵＶＥＣ ７２６.４９１６１.９５人正常前列腺上皮细胞ＮｏｒｍａｌｈｕｍａｎｐｒｏｓｔａｔｅｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌＲＷＰＥ￣１１７０.６３８７.６４２２.７８制ＭＤＡ￣ＭＢ￣２３１细胞的转移和侵袭(Ｈｓｉｅｈｅｔａｌꎬ２０１３)ꎻ小花老鼠簕的提取物可抑制ＶＥＧＦ的表达ꎬ从而抑制肿瘤血管生成(Ｍａｈａｓｉｒｉｐａｎｔｈｅｔａｌꎬ２０１２)ꎮ通过文献检索发现ꎬ多种红树植物具有抗肿瘤活性ꎬ并且机理多种多样ꎮ此外ꎬ红树植物的抗肿瘤活性具有一定肿瘤选择性ꎬ如从红海榄叶中提取出来的环木菠萝苷对扁平上皮癌ＫＢ细胞㊁肺腺癌ＬＵ￣１细胞㊁黑色素瘤ＳＫ￣Ｍｅｌ￣２细胞均具有显著的细胞毒性作用(Ｈｕｏｎｇｅｔａｌꎬ２０１４)ꎬ但在本研究中ꎬ红海榄叶９５％乙醇提取物对前列腺癌ＤＵ１４５㊁ＰＣ３细胞无明显细胞毒性ꎮ同一种红树植物对不同肿瘤细胞增殖抑制作用不同ꎬ提示对同一红树植物提取物或者从中分离出来的抗肿瘤活性成分进行扩大肿瘤细胞系筛选是很有必要的ꎮ同时ꎬ要对筛选出的抗肿瘤活性成分进行进一步的抗肿瘤机理研究ꎮ本研究中ꎬ通过对红海榄㊁秋茄㊁水黄皮㊁桐花树不同部位的９５％乙醇提取物抗肿瘤活性的筛选ꎬ发现桐花树茎９５％乙醇提取物对ＤＵ１４５细胞增殖抑制作用最强ꎮ红海榄叶９５％乙醇提取物对２７２１广㊀西㊀植㊀物３８卷注:数值是３个重复的平均值ꎬ以误差线表示标准偏差ꎮ下同ꎮＡꎬＢ.桐花树茎９５％乙醇提取物ꎻＣꎬＤ.秋茄茎９５％乙醇提取物ꎻＥꎬＦ.秋茄叶９５％乙醇提取物ꎻＧꎬＨ.红海榄叶９５％乙醇提取物ꎻＩꎬＪ.水黄皮叶９５％乙醇提取物ꎮＮｏｔｅ:Ｄａｔａｗｅｒｅｔｈｅｍｅａｎｏｆｔｒｉｐｌｉｃａｔｅｓꎬｅｒｒｏｒｂａｒｓｒｅｐｒｅｓｅｎｔｅｄｓｔａｎｄａｒｄｄｅｖｉａｔｉｏｎ.Ｔｈｅｓａｍｅｂｅｌｏｗ.ＡꎬＢ.Ｅｘｔｒａｃｔｏｆ９５％ｅｔｈａｎｏｌｆｒｏｍＡｅｇｉｃｅｒａｓｃｏｒｎｉｃｕｌａｔｕｍ(ｓｔｅｍｓ)ꎻＣꎬＤ.Ｅｘｔｒａｃｔｏｆ９５％ｅｔｈａｎｏｌｆｒｏｍＫａｎｄｅｌｉａｃａｎｄｅｌ(ｓｔｅｍｓ)ꎻＥꎬＦ.Ｅｘｔｒａｃｔｏｆ９５％ｅｔｈａｎｏｌｆｒｏｍＫａｎｄｅｌｉａｃａｎｄｅｌ(ｌｅａｖｅｓ)ꎻＧꎬＨ.Ｅｘｔｒａｃｔｏｆ９５％ｅｔｈａｎｏｌｆｒｏｍＲｈｉｚｏｐｈｏｒａｓｔｙｌｏｓａ(ｌｅａｖｅｓ)ꎻＩꎬＪ.Ｅｘｔｒａｃｔｏｆ９５％ｅｔｈａｎｏｌｆｒｏｍＰｏｎｇａｍｉａｐｉｎｎａｔａ(ｌｅａｖｅｓ).图１㊀四种红树植物９５％乙醇提取物对前列腺癌细胞ＤＵ１４５和ＰＣ３的增殖抑制作用Ｆｉｇ.１㊀Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆ９５％ｅｔｈａｎｏｌｅｘｔｒａｃｔｓｏｆｆｏｕｒｍａｎｇｒｏｖｅｐｌａｎｔｓｏｎｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆＤＵ１４５ａｎｄＰＣ３ｃｅｌｌｓ(ｘʃｓꎬｎ＝３)３７２１１０期谭德超等:广西沿海四种红树植物抗肿瘤活性的筛选图２㊀ＥＡＣＳ对１９种肿瘤细胞和３种人正常细胞的增殖抑制作用Ｆｉｇ.２㊀ＩｎｈｉｂｉｔｉｏｎｓｏｆＥＡＣＳｏｎｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆｎｉｎｅｔｅｅｎｈｕｍａｎｔｕｍｏｒｃｅｌｌｓａｎｄｔｈｒｅｅｎｏｒｍａｌｃｅｌｌｓ(ｘʃｓꎬｎ＝３)前列腺癌ＤＵ１４５㊁ＰＣ３细胞增殖抑制作用的ＩＣ５０大于８００μｇ ｍＬ￣１ꎬ推断其对前列腺癌ＤＵ１４５㊁ＰＣ３细胞不具有抗肿瘤活性ꎮ进一步对桐花树茎９５％乙醇提取物进行分离ꎬ并选择了乙酸乙酯萃取物４７２１广㊀西㊀植㊀物３８卷注:∗表示Ｐ<０.０５ꎬ∗∗表示Ｐ<０.０１ꎮ下同ꎮＮｏｔｅ:∗ｍｅａｎｓＰ<０.０５ꎬ∗∗ｍｅａｎｓＰ<０.０１.Ｔｈｅｓａｍｅｂｅｌｏｗ.图３㊀ＥＡＣＳ对人结肠癌细胞ＨＴ￣２９㊁ＤＬＤ￣１㊁ＳＷ４８０集落形成的影响Ｆｉｇ.３㊀ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＥＡＣＳｏｎｃｏｌｏｎｙ￣ｆｏｒｍｉｎｇｏｆＨＴ￣２９ꎬＤＬＤ￣１ａｎｄＳＷ４８０ｃｅｌｌｓ图４㊀ＥＡＣＳ对人前列腺癌细胞ＤＵ１４５㊁ＰＣ３及人卵巢癌细胞ＳＫＯＶ３￣Ｓ的集落形成的影响Ｆｉｇ.４㊀ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＥＡＣＳｏｎｃｏｌｏｎｙ￣ｆｏｒｍｉｎｇｏｆＤＵ１４５ꎬＰＣ３ａｎｄＳＫＯＶ３￣Ｓｃｅｌｌｓ进行多种肿瘤细胞的抗肿瘤活性筛选ꎬ结果表明ＥＡＣＳ对多种肿瘤细胞具有一定增殖抑制作用ꎬ但具有一定的选择性ꎬ对ＭＨＣＣ￣９７Ｈ㊁ＳＭＭＣ￣７７２１㊁Ａ５４９细胞增殖无明显抑制作用ꎮＥＡＣＳ对ＤＵ１４５㊁ＰＣ３细胞增殖抑制作用比桐花树茎９５％乙醇提取物小ꎬ表明在石油醚或者正丁醇萃取物中具有抗肿瘤作用更强的活性成分ꎬ应进一步研究桐花树茎石油醚㊁正丁醇萃取物的抗肿瘤活性ꎮＭＴＳ实验中ꎬＥＡＣＳ在４８㊁７２ｈ的干预下对结肠癌ＣＯＬＯ２０５细胞增殖抑制作用最强ꎬ但因ＣＯＬＯ２０５是半悬浮细胞ꎬ不利于进行集落形成实验ꎬ所以在集落形成实验中选择了细胞增殖抑制作用仅次于ＣＯＬＯ２０５的ＤＬＤ￣１细胞及其同一肿瘤系的ＨＴ￣２９和ＳＷ４８０ꎻ此外还选择了乙醇提取物初筛抗肿瘤活性的前列腺癌ＤＵ１４５㊁ＰＣ３细胞ꎮ通过对红海榄㊁秋茄㊁水黄皮㊁桐花树等广西四种红树植物抗肿瘤活性进行筛选研究ꎬ发现秋茄㊁水黄皮㊁桐花树均具有不同程度的抗肿瘤活性ꎬ其中桐花树的抗肿瘤活性最强ꎮ桐花树乙醇提取物的细胞增殖实验(ＭＴＳ)和ＥＡＣＳ的细胞增殖实验及集落形成实验ꎬ说明桐花树具有显著的抗肿瘤活性ꎬ并为进一步明确桐花树的抗肿瘤活性部位ꎬ从中发现活性成分提供了基础数据ꎮ后期可以该抗肿瘤活性筛选实验为指导ꎬ针对性研５７２１１０期谭德超等:广西沿海四种红树植物抗肿瘤活性的筛选究具有抗肿瘤活性红树植物的化学成分ꎬ以期发现结构新颖㊁疗效显著的天然抗肿瘤药物ꎮ参考文献:ＡＫＴＥＲＲꎬＵＤＤＩＮＳＪꎬＧＲＩＣＥＩＤꎬｅｔａｌꎬ２０１４.ＣｙｔｏｔｏｘｉｃａｃｔｉｖｉｔｙｓｃｒｅｅｎｉｎｇｏｆＢａｎｇｌａｄｅｓｈｉｍｅｄｉｃｉｎａｌｐｌａｎｔｅｘｔｒａｃｔｓ[Ｊ].ＪＮａｔＭｅｄꎬ６８(１):２４６－２５２.ＢＡＮＤＡＲＡＮＡＹＡＫＥＷＭꎬ１９９８.Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌａｎｄｍｅｄｉｃｉｎａｌｕｓｅｓｏｆｍａｎｇｒｏｖｅｓ[Ｊ].ＭａｎｇＳａｌｔＭａｒꎬ２(３):１３３－１４８.ＢＡＮＤＡＲＡＮＡＹＡＫＥＷＭꎬ２００２.Ｂｉｏａｃｔｉｖｉｔｉｅｓꎬｂｉｏａｃｔｉｖｅｃｏｍ￣ｐｏｕｎｄｓａｎｄｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓｏｆｍａｎｇｒｏｖｅｐｌａｎｔｓ[Ｊ].ＷｅｔｌａｎｄｓＥｃｏｌＭａｎａｇꎬ１０(６):４２１－４５２.ＣＨＥＮＷꎬＺＨＥＮＧＲꎬＢＡＡＤＥＰＤꎬｅｔａｌꎬ２０１６.ＣａｎｃｅｒｓｔａｔｉｓｔｉｃｓｉｎＣｈｉｎａꎬ２０１５[Ｊ].ＣＡＣａｎｃｅｒＪＣｌｉｎꎬ６６(２):１１５－１３２.ＤＡＳＧꎬＧＯＵＤＡＳꎬＭＯＨＡＮＴＡＹＫꎬｅｔａｌꎬ２０１５.Ｍａｎｇｒｏｖｅｐｌａｎｔｓ:Ａｐｏｔｅｎｔｉａｌｓｏｕｒｃｅｆｏｒａｎｔｉｃａｎｃｅｒｄｒｕｇｓ[Ｊ].ＩｎｄＪＧｅｏ￣ＭａｒＳｃｉꎬ４４(５):６６６－６７２.ＧＡＯＴꎬＬＩＣꎬＬＩＡＮＧＸꎬｅｔａｌꎬ２０１６.ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆｃａｎｃｅｒｉｎｃｉｄｅｎｃｅａｎｄｍｏｒｔａｌｉｔｙｉｎＣｈｉｎａ[Ｊ].ＣｈｉｎＣａｎｃｅｒꎬ２５(６):４０９－４１４.[高婷ꎬ李超ꎬ梁锌ꎬ等ꎬ２０１６.中国癌症流行的国际比较[Ｊ].中国肿瘤ꎬ２５(６):４０９－４１４.]ＨＡＲＳＨＡＤＭꎬ２０１６.Ｅｘｐｌｏｒｉｎｇｔｈｅｏｃｅａｎｆｏｒｎｅｗｄｒｕｇｄｅｖｅｌｏｐ￣ｍｅｎｔｓ:Ｍａｒｉｎｅｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ[Ｊ].ＪＰｈａｒｍＢｉｏＡｌｌｉｅｄＳｃｉꎬ８(２):８３－９１.ＨＳＩＥＨＣＹꎬＴＳＡＩＰＣꎬＴＳＥＮＧＣＨꎬｅｔａｌꎬ２０１３.ＩｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆＥＧＦ/ＥＧＦＲａｃｔｉｖａｔｉｏｎｗｉｔｈｎａｐｈｔｈｏ[１ꎬ２￣ｂ]ｆｕｒａｎ￣４ꎬ５￣ｄｉｏｎｅｂｌｏｃｋｓｍｉｇｒａｔｉｏｎａｎｄｉｎｖａｓｉｏｎｏｆＭＤＡ￣ＭＢ￣２３１ｃｅｌｌｓ[Ｊ].ＴｏｘｉｃｏｌｉｎＶｉｔｒｏꎬ２７(１):１－１０.ＨＵＯＮＧＰＴꎬＤＩＥＰＣＮꎬＴＨＡＮＨＮＶꎬｅｔａｌꎬ２０１４.Ａｎｅｗｃｙ￣ｃｌｏａｒｔａｎｅｇｌｕｃｏｓｉｄｅｆｒｏｍＲｈｉｚｏｐｈｏｒａｓｔｙｌｏｓａ[Ｊ].ＮａｔＰｒｏｄＣｏｍｍꎬ９(９):１２５５–１２５７.ＫＡＴＨＩＲＥＳＡＮＫꎬＢＯＯＰＡＴＨＹＮＳꎬＫＡＶＩＴＨＡＳꎬ２００６.Ｃｏａｓｔａｌｖｅｇｅｔａｔｉｏｎ 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海洋微生物产生的抗真菌物质研究近年来，随着抗真菌药物的需求不断增加，科学家们开始关注海洋微生物中可能存在的抗真菌物质。
海洋生态系统是一个巨大而神秘的领域，其中生物多样性丰富，足够引起人们的兴趣。
那么，海洋微生物产生的抗真菌物质到底有哪些？本文将探讨相关研究成果。
一、海洋微生物的特殊环境及其抗真菌物质产生机制海洋环境具有高盐度、低温度和不同的压力等特殊条件，这些特殊环境为海洋微生物的生长和生存提供了独特的适应机制。
这些微生物通过适应这些特殊环境，不仅产生了独特的代谢产物，还具备了抗真菌活性。
研究表明，海洋微生物中存在多种可能具有抗真菌活性的代谢产物，如多元酮类、氮杂环化合物和多糖类等。
这些代谢产物具备了一定的生物活性，能够干扰真菌的生存和生长，从而对抗真菌产生一定的抑制作用。
二、海洋微生物抗真菌物质的发现和鉴定方法海洋微生物抗真菌物质的发现是一个复杂而系统的过程。
科学家们通过大量的筛选和鉴定工作，最终确定了多种具有抗真菌活性的海洋微生物代谢产物。
其中，主要的发现和鉴定方法包括：1. 生物活性筛选法：利用真菌对抗真菌物质的敏感性进行筛选，通过评估生物活性来确定其抗真菌性能。
2. 化学分离和纯化：通过色谱等分离技术，将混合物中的抗真菌物质分离出来，并进行纯化，以获取高纯度的样品。
3. 光谱鉴定法：利用核磁共振、红外光谱等技术，对抗真菌物质进行结构分析和鉴定。
4. 基因组学方法：利用基因组学技术研究海洋微生物的基因组，通过分析基因组中的相关基因和调控机制，研究抗真菌物质的产生机制。
以上方法的综合应用，为科学家们揭示海洋微生物抗真菌物质的产生机制和鉴定提供了重要的技术手段。
三、海洋微生物抗真菌物质的应用前景海洋微生物产生的抗真菌物质具备广阔的应用前景。
随着真菌感染病例的增多和传统抗真菌药物的耐药问题，海洋微生物抗真菌物质已成为研究的热点之一。
首先，海洋微生物抗真菌物质能够作为新型的抗真菌药物用于治疗真菌感染疾病，从而满足临床的需求。
