ELISA一步法和两步法检测HBsAg的比较

用两种方法检测乙肝表面抗原结果分析目的了解用ELISA法检测乙肝表面抗原和用化学发光法检测表面抗原两者之间的结果情况。

方法采集320例就诊人员的血液标本，分别用化学发光法与ELISA法检测。

结果320份标本中，发光法检测出40份阳性，280份阴性。

ELISA 法检测出42份阳性，278份阴性。

经χ2检验两者无显著性差异（P>0.05）。

结论ELISA法成本比较低，耗时长，实验的影响因素比较多，易出现假阳性。

化学发光法成本高，所需时间短，干扰因素少，不易出现假阳性。

标签：乙肝表面抗原；ELISA；化学发光流行病学调查结果显示，我国的乙型病毒肝炎感染性约达10%，乙肝的实验检测对其防治具有非常重大的意义[1]。

乙型肝炎病毒乙肝表面抗原（HBsAg）是乙肝病毒的外壳蛋白，它可存在于患者的血液、唾液、乳汁、汗液、泪水、鼻咽分泌物、精液及阴道分泌物中。

随着科学越来越进步，检测的手段也越来越多。

自20世纪70年代至今，诸多高敏感性的检测方法被广泛应用于临床免疫学的检测中，当中应用最为广泛的就属酶联免疫法（enzyme linked Immunosor bent assay，ELISA）[2]。

近几年，化学发光微粒子免疫分析法（chemiluminescent microparticle immunoassay，CMIA）正逐渐发展，是一种敏感性较强的临床免疫学检测方法，有效解决了低浓度乙型肝炎病毒乙肝表面抗原的检测难题[3]。

现用ELISA法，化学发光法，这两种方法检测的相关性进行探讨。

1 资料与方法1.1一般资料标本来自于我院2016年3月1日～3月5日体检人员，共320例，男198例，女122例，年龄18～72岁，平均年龄为（39.5±8.4）岁。

1.2标本采集用红头采血管，真空抽取静脉血3 ml，标本静置后离心提取血清。

1.3检测试剂与仪器一种采用雅培化学发光HBsAg定量检测试剂盒，标本离心后，按照雅培I2000化学发光仪的操作规程检测。

两种ELISA试剂盒检测HbsAg结果比较目的通过对无偿献血者血液标本采用两种ELISA试剂盒检测HbsAg结果的比较，探讨血站血筛试剂的选择策略，保证输血安全。

方法对金标法HbsAg 阴性的标本采血留样后，采用2种不同的ELISA试剂盒进行2次HbsAg检测。

结论2种试剂盒对于绝大部分阳性标本结果一致，只有对极少数弱阳性反应标本检测结果存在差异。

标签：金标法；ELISA；HbsAg乙型肝炎病毒（HBV）是引起肝炎的主要病原体之一，采用ELISA法检测HbsAg是目前对献血者血液进行初、复检最常用的方法。

尽管HbsAg试剂盒均通过国家“批批检”，但由于各试剂厂家生产工艺、包被乙肝表面抗体纯度等不同，其灵敏度、特异性会存在一定的差异[1]。

本文对两种ELISA试剂盒HbsAg检测结果进行了比较，现报告如下。

1 材料与方法1.1 标本来源来自2013年2-6月无偿献血者血液标本9588份。

1.2 试剂一检试剂：意大利索灵由北京荣都科技有限公司提供。

二检试剂：北京万泰生物药业股份有限公司提供。

以上试剂盒均为中国药品生物检定所批检，在有效期内使用。

各批次试剂用于日常检测前，均由本站质检科抽检进行有效性检测。

1.3 仪器TECAN RSP150、FREEDOM EVO全自动加样器（瑞士TECAN公司），FAME24/20全自动酶免分析仪（瑞士HAMILTON公司）上述仪器均符合国家相关标准。

生产商和供应商都具有国家法律、法规所规定的相应资质。

科室内建立和实施仪器、设备的评估、确认、维护和校准的持续监控管理制度。

1.4 方法金标法阴性，体格检查和ALT检测结果均合格后采集全血并留取该标本进行ELISA试验。

两种试剂检测全部合格，报HbsAg（-），任何一种试剂阳性，再用同种试剂双孔复检，双孔复检（+），报HbsAg（+）；双孔复检（-），报HbsAg（-）；一阴一阳，报HbsAg（+）。

1.5 统计学方法对两种试剂盒检测结果进行统计学处理，采用χ2检验。

强对集体食堂的管理,对主管人员、采购人员、厨师进行食品卫生知识培训,提高其卫生知识水平,加强法制观念,使他们掌握农药残留量自我快速检测法和安全食用蔬菜的方法,减少集体农药中毒事件的发生。

(4)通过多种媒体向广大消费者宣传食品卫生知识,特别是蔬菜水果食用前的处理方法,农药速测卡的使用方法,以增强自我保护能力,防患于未然。

一般情况下,大白菜、菠菜等病虫害通常发生在幼苗期,施药早,收获时农药残留已逐渐衰减,食用前常规清洗即可;某些根茎类蔬菜如胡萝卜、土豆等,农药大多喷洒在叶片上,果实部分吸收相对较少,一般清洗、削皮即可;韭菜、圆白菜、西红柿等生长和成熟于病虫害严重、温度较高的多雨季节,施药次数多、剂量大,残留量也就比较高,食用前应认真反复清洗。

常见有效的清洗方法有 浸泡法:有资料提示,在清水中浸泡蔬菜水果达6小时会有效除去残留的农药 13 。

碱洗法:有机磷农药遇碱会分解,失去毒性。

用呈碱性的淘米水浸泡蔬菜水果,再用清水反复漂洗,可除去粘附于蔬菜水果表面的农药。

去皮法:农药在果皮上的残留期长,残留量大。

有资料显示,甲基对硫磷在中熟苹果果实中的残留量为果皮>果肉>果心,残留在果皮的农药于喷药后第19天降至0 15ppm以下,而残留在果肉的农药第2天就降至0 15ppm以下 14 。

所以去皮是除去水果残留农药的有效方法。

加热法:有机磷农药热稳定性差,在沸水中浸泡蔬菜1分钟可除去90%以上残留的农药 15 。

此外还有贮藏法等。

广东省提出了 一洗,二浸,三烫,四炒 的综合处理方法来除去蔬菜中残留农药,效果较好。

5 小结有机磷农药在食物中的残留是我国农药残留的主要问题,其残留情况相当普遍。

从地域分布情况来看,南方比较严重。

污染食物以果蔬为主,尤其是叶菜类。

为了有效控制有机磷农药在食物中的残留,预防中毒事件的发生,国家从政府部门、使用者和消费者三方面考虑,制定、出台了一系列干预措施,并取得了一定的成效。

CLIA和ELISA检测血清HBsAg及HBsAb的结果比较许文;邝琳;张振林【摘要】目的：比较化学发光免疫分析(CLIA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清HBsAg及HBsAb的结果。

方法采用CLIA法和ELISA法测定定值血清中的HBsAg和HBsAb，并对两种结果进行比较和分析。

结果测定HBsAg时，ELISA法的批内CV：1IU/ml为9.6%，2IU/ml为7.3%，批间CV：1IU /ml为17.8%，2IU/ml为15.1%，灵敏度为0.25IU/ml，CLIA法的批内CV：1IU/ml为2.33%，2IU /ml为1.07%，批间CV：1IU /ml为6.57%，2IU/ml为3.78%，灵敏度为0.063IU/ml。

HBsAb测定时，ELISA法的批内CV：10mIU/ml为11.8%，20mIU/ml为8.7%，批间CV：10mIU/ml为18.6%，20mIU/ml为15.9%，灵敏度为10mIU/ml，CLIA法的批内CV：10mIU/ml为4.79%，20mIU/ml为3.52%，批间CV：10mIU/ml为7.58%，20mIU/ml为6.13%，灵敏度为2.5mIU/ml。

结论 ELISA法敏感度相对低，精密度差；CLIA法灵敏度高，精密度好，且自动化程度高，检测更快速，更适合于临床。

【期刊名称】《现代诊断与治疗》【年(卷),期】2014(000)007【总页数】2页(P1467-1468)【关键词】乙肝表面抗原;乙肝表面抗体;酶联免疫吸附试验;化学发光免疫分析【作者】许文;邝琳;张振林【作者单位】珠海市人民医院检验科，广东珠海519000;珠海市人民医院检验科，广东珠海 519000;珠海市人民医院检验科，广东珠海 519000【正文语种】中文【中图分类】R446.1目前，我国大多数医院采用ELISA法检测血清HBsAb和HBsAg，该法虽简便，但ELISA法重复性差，灵敏度低，且当标本中的HBsAg浓度太低时，因灵敏度低而出现假阴性，容易造成漏检，当浓度过高时会因钩状效应(Hook effect)出现假阴性，因此正有逐步被新方法所取代的趋势。

对ELISA方法检测HBSAg结果的分析当前国内临床检测乙型肝炎表面抗原(HBSAg)多采用ELISA双抗体夹心法，其基本原理是:1.将抗体包被在载体后作为固相，加入待测标本，使其中的相应抗原通过免疫学反应结合到固相抗体上，洗涤除去未结合的抗原。

2.加入酶结合物与已结合在固相抗体上的抗原反应，并洗涤除去未结合的游离未结合物。

3.加入酶（常用辣根过氧化物酶）的相应底物，固相化的酶催化底物反应生成有色产物。

在一定温度下一定时间后终止反应，显色物的量与在固相上的抗原有关。

该方法检测HBSAg时，影响的因素很多，有内源性物质和外源性物质两大类。

血清是最常见的ELISA标本，大约有40%的人血清标本中含有类风湿因子，补体，嗜异性抗体，嗜靶抗原自身抗体等非特异性物质，对ELISA测定有干扰作用易造成假阳性或假阴性结果，这不是人为因素造成的。

在临床检验工作中，常因标本量多，紧急要求出检验报告，较难逐个分析其内源性的物质，而忽略它的存在。

而工作中，因血样的采集，储存及操作程序等不当所致的外源性物质的干扰，最易影响ELISA的测定结果。

本文对检验工作中经常出现的如标本溶血，标本被细菌污染，标本储存过久，标本凝固不全等因素进行分析。

1.标本溶血由于各种人为因素引起标本溶血，使红细胞溶解细胞内的过氧化物酶进入血浆，并大量吸附于细胞碎片及纤维蛋白原上,从而造成以辣根过氧化物酶为标记的ELISA测定中，非特异性显色，出现假阳性。

有试验证明溶血标本HBSAg假阳性率达91.7%[1]。

要认真做好标本的保存和处理工作，防止溶血。

2.标本受到污染标本受细菌污染，因菌体中可能含有内源性辣根过氧化物酶同样易产生非特异性显色，出现假阳性。

3.标本放置时间在冰箱中保存过久的标本，血清中IGg可聚合成多聚体，AFP可形成二聚体，在ELISA测定中会导致本底过深，甚至造成假阳性。

采血后若不在当天检测，应置于2-8℃冰箱中，若要储存，则置于-20℃低温冰箱内保存。

探讨两种方法检测HBsAg假阳性和假阴性的影响因素目前HBsAg的检测方法很多，但是在临床实验室检测HBsAg的方法最常用的主要是金标法和酶联免疫吸附试验（ELISA）。

常常会有患者及其他工作人员反映HBsAg检验结果与其他医疗单位不一致，为此常会发生医疗纠纷。

因此，提高HBsAg检测的准确性，避免假阳性和假阴性所造成的不良社会影响，是我们临床检验工作者应该重视的问题。

为了减少HBsAg检测出现假阳性和假阴性，我们有必要对这种现象的原因进行分析，在实际的检测工作中，造成HBsAg检测出现假阳性和假阴性主要受以下因素影响，分述如下：1、金标法假阴性原因1.1 检测时间短,金标法最适判读时间为15~30分钟,若时间太短就会发生一些弱阳性HBsAg标本出现假阴性。

1.2 灵敏度较低，金标法>1ng/ml,而ELISA法<1ng/ml也能检出。

1.3 层析过快，HBsAg-Ab1-Au还没来得及与Ab2结合就越过了检测线，这就可能造成假阴性结果。

1.4 后带现象，即HBsAg的钩状效应。

不管是ELISA法还是金标法，因反应原理均为“一步法”，所以当标本中HBsAg强阳性时两者均可出现后带现象，检验结果反而出现假阴性。

1.5 个别标本可能存在HBsAg亚型差异而不易检出。

2、金标法假阳性原因2.1 溶血或红细胞的标本，有时会在检测区出现一条颜色很浅的非特异型层析线，由于金标法主要是通过目视法判定结果，所以常会误认为假阳性，应该引起重视。

2.2 为预防乙肝，部分HBsAg阴性人群在接种乙肝疫苗的1~2周内，血清中有时可检出HBsAg弱阳性，形成一过性HBsAg阳性，这可能是乙肝疫苗主要成分是HBsAg。

建议接种乙肝疫苗后1个月内不应做HBsAg检测。

笔者曾多次发现此类因为注射乙肝疫苗出现的假阳性问题，但用ELISA一步法检测仍为阴性即可消除上述干扰，其机理尚未十分清楚。

2.3 汉坦病毒会造成HBsAg金标法检测假阳性，可能是汉坦病毒与HBsAg存在交叉性，易造成假阳性结果。

ELISA一步法和二步法对HBsAg的检测结果比较李文萍【期刊名称】《山西职工医学院学报》【年(卷),期】2014(000)003【摘要】目的：为了提高临床实验诊断的可信性和准确性，尽可能减少或避免出现假阳性和假阴性。

质控要求必需对HBsAg酶免疫测定的方法进行比对。

方法：采用ELISA 一步法和二步法对体检人群样本进行 HBsAg平行测定，结果不一致样本用 CLIA 重新检测。

结果：一步法阳性检出率为10．12％；二步法阳性检出率为12．19％。

一步法检测的阴性样本中，有20例二步法检测为阳性。

结论：阳性检出率一步法相对较低，二步法较高；方法学比较亦显示二步法优于一步法，建议临床采用二步法检测HBsAg。

%Objective:To enhance reliability and accuracy of clinical laboratory diagnosis to avoid false positive and false negative as much as possible. Comparison of HBsAg enzyme immunoassay method should be finished. Meth-ods:The HBsAg parallel determination was made by means of one-step and two-step method of ELISA. For the speci-mens with different results,CLIA method to re-test was adopted. Results:Based on the one-step method,the positive rate was 10. 12%;as to two-step method,the positive rate was 12. 19%. 20 cases of two-step method test were positive in the negative specimens of one-step method. Conclusions:The detection rate of one-step method is lower than two-step method test. Methodology comparison shows that two-step method issuperior to one-step method. HBsAg two-step method is properly proposed in the clinical detection.【总页数】2页(P25-26)【作者】李文萍【作者单位】汾西矿业集团总医院，山西介休 032000【正文语种】中文【中图分类】R446.11+2【相关文献】1.ELISA一步法和二步法检测HBsAg结果的对比分析 [J], 刘学政;张家均;雷选斌;冉训2.ELISA一步法和二步法检测HBsAg结果的对比分析 [J], 熊阳琼;杨雨文;黄丁能3.ELISA一步法和二步法检测乙肝HBsAg的结果比较 [J], 杨剑4.ELISA一步法和二步法检测临界值范围HBsAg的性能比较 [J], 仲腊春5.ELISA一步法和二步法检测HBsAg及NAT检测HBV-DNA结果分析 [J], 王旭菲;熊丽红;黄丽红因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

新两步法和一步法检测乙肝表面抗原的比较龚跃云;欧阳芳;吴豫【摘要】目的比较国家食品药品监督管理局新规定的乙肝表面抗原(HBsAg)新两步法和一步法的检测效果.方法采用新两步法和一步法,连续20d每天对20份血清样本进行平行对照检测.对2种方法检测结果不一致的血清进行中和试验和稀释试验.结果 400份血清中有7份一步法检测样本s/co＜1,而新两步法检测s/co＞1,经中和试验7份血清中有3份为HBsAg阳性,4份为假阳性.其中1份因钩状效应(HOOK)使一步法漏检的血清,经稀释试验证明新两步法未能有效克服HOOK效应.结论新两步法检测HBsAg的灵敏度较一步法有所提高,但假阳性率也增大,且不能有效克服HOOK效应.【期刊名称】《临床输血与检验》【年(卷),期】2012(014)003【总页数】3页(P241-243)【关键词】乙肝表面抗原;ELISA;一步法;两步法【作者】龚跃云;欧阳芳;吴豫【作者单位】330002 江西南昌解放军第94医院;330002 江西南昌解放军第94医院;330002 江西南昌解放军第94医院【正文语种】中文【中图分类】R512.6+2;R446.622010年10月国家食品药品监督管理局(The State Food and Drug Administration，SFDA)将HBsAg的酶联免疫吸附试验从一步法变更为新两步法[1]。

为做好 2种试剂的更换衔接工作，笔者对一步法和新两步法两种试剂进行了平行比对试验，现将结果报告如下。

材料与方法1 样本从2011年2月 18日～3月 30日，每天抽取在本院门诊检查 HBsAg的患者血清 20份，连续20 d共对400份血清样本进行一步法和新两步法的平行对照检测。

所抽取的400份血清样本均外观澄清透明，无溶血、脂血现象。

2 仪器和试剂采用厦门英科新创 HBsAg一步法和新两步法试剂盒，一步法试剂批号2010086119，新两步法试剂批号 2010125123。

ELISA一步法检测HBsAg假阴性结果分析发表时间：2014-05-19T09:03:25.263Z 来源：《医药前沿》2014年第6期供稿作者：陈静[导读] 一步法检测,与质控物吸光度比较,从开始出现弱阳性为该标本最低稀释比。

陈静（沈阳市第四人民医院 110031）【摘要】目的探讨采用ELISA一步法检测导致出现(HBsAg) 钩状效应（HBsAg假阴性）的原因。

方法选择我院健康体检者150例，其中，HBeAg阳性HBsAg阴性标本35例,倍比稀释标本后分别应用ELISA二步法和一步法检测HBsAg,观察两种方法的阳性率及不同稀释比与吸光度的变化。

结果检测35份标本原血清结果,一步法HBsAg均为阴性,二步法均为阳性；一步法,大部分标本从原血清至1: 7均为阴性，吸光度值OD为0.076,1: 17稀释后OD值逐渐升高,从1:126至1: 1 023吸光度变化不大(OD值:3.30±0.15),1:2058后OD值逐渐下降；二步法从原血清到1:266吸光度变化不大(OD值:3.20±0.17)),1:524后OD值逐渐下降。

结论 ELISA二步法可避免HBsAg浓度过高致钩状效应所引起的HBsAg检测结果假阴性。

【关键词】酶联免疫吸附(ELISA)实验乙肝病毒表面抗原HBsAg 钩状效应【中图分类号】R441 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2014）06-0198-01酶联免疫吸附(ELISA)实验[1],按其操作步骤分为一步法和二步法。

一步法因为操作更简单而深受广大用户的青睐, 但是在一步法实际工作中，我们发现ELISA一步法钩状效应明显[2]，就会出现HBsAg假阴性，易造成漏检现象。

同时，我们采用二步法检测HBeAg及抗-HBc双项阳性血清标本中的HBsAg，将标本倍比稀释后检测吸光度OD值的变化，对比一步法出现钩状效应，引起HBsAg假阴性结果出现的原因。