银屑病中细胞凋亡相关基因bcl-2、Fas、baX的检测

中文摘要目的近年来人们对研究ｃｉｒｑ（宫颈上皮内瘤样病变）中细胞凋亡所扮演的角色很感兴趣，并认识到启动及调节凋亡的机制在决定何种ＣＩＮ病变有可能进展为浸润癌时的重要价值。

目前了解比较深入，较为公认的是ｂｃｌ一２基因及其相关蛋白与凋亡的关系。

本实验通过免疫组化的方法检测ｂｃｌ一２、ｂｏｘ、ｃａｓｐａｓｅ一３蛋白在正常宫颈上皮、ＣＩＮ以及宫颈癌中的表达情况来研究ｂｃｌ一２家族基因对凋亡的调节情况以及他们三者与疾病进展的关系。

方法检测对象为中国医科大学附属第一医院２０００—２００３年手术及宫颈活检组织、ＬＥＥＰ刀手术标本蜡块７９例，患者年龄２ｌ一５６岁，平均年龄４１．６４±２．８６岁，其中正常宫颈组织（ＮＥ）１７例，宫颈上皮内瘤样病变—低度（ＣＩＮ—Ｌ）２１例，宫颈上皮内瘤样病变一高度（ＣＩＮ—Ｈ）１９例，宫颈浸润鳞癌组织（ＳＣＣ）２２例。

凋亡相关基因ｂｃｌ一２、ｂａｘ及ｃａｓｐａｓｅ一３蛋白的表达采用单克隆抗体免疫组化法。

所有标本均经１０％福尔马林固定，常规石蜡包埋，连续切片厚３—５¨ｍ，主要试剂兔抗人ｂｃｌ一２、ｂａｘ、ｃａｓｐａｓｅ一３蛋白单克隆抗体。

ｂｃｌ一２、ｂｏｘ、ｃａｓｐａｓｅ一３蛋白表达均定位于细胞浆，阳性细胞数兰１０％判定为蛋白表达阳性。

采用ＳＰＳＳ软件中卡方检验方法进行统计学分析。

结果１、Ｂｅｌ一２在正常宫颈上皮中无表达．其在ＣＩＮ—Ｌ及ＣＩＮ—Ｈ中的阳性率分别为２８．５７％和６８．４２％，随着ＣＩＮ病变的进展ｂｃｌ－２基因蛋白的表达率呈明显的上升趋势（Ｐ＜Ｏ．０５）。

在宫颈癌中ｂｃｌ—２的阳性表达率仅为２２．７３％，与ＣＩＮ—Ｈ相比明显降低（Ｐ＜Ｏ．０５）。

２．ｂｏｘ在正常宫颈上皮中少量表达，表达率为５．８８％。

其在ＣＩＮ—Ｌ及ＣＩＮ—Ｈ中的阳性率分别为８０．９５％和６３．１６％，随着ＣＩＮ病变的进展ｂａｘ基因蛋白的表达率未呈明显的下降趋势（Ｐ＞０．０５）。

在宫颈癌中ｂａｘ的阳性表达率为３１．８２％，与ＣＩＮ—Ｈ相比有显著降低（Ｐ＜０．０５）。

诱导细胞凋亡的相关基因
1. P53基因：作为肿瘤抑制基因的重要代表之一，P53可以诱导细胞凋亡，并调节DNA修复、细胞周期和细胞老化等生物学过程。

2. BCL-2家族基因：BCL-2家族基因包括促凋亡成员和抑制凋亡成员，其中促凋亡成员如BAX、BAK等可促进细胞凋亡，抑制凋亡成员如BCL-2、BCL-XL等则可以抑制细胞凋亡。

3. CASPASE基因：CASPASE基因编码半胱氨酸蛋白酶，可以参与细胞凋亡的信号转导和执行阶段。

4. TNF家族基因：TNF家族基因包括TNF-α、FasL等，其编码的蛋白质可以引发细胞凋亡信号，因此常用于肿瘤治疗。

5. PI3K/Akt/mTOR信号通路基因：该信号通路在多种肿瘤中异常活化，与凋亡抵抗相关，因此相关基因可作为肿瘤治疗靶点。

青岛大学硕士学位论文凋亡基因bcl-2，bax在大肠癌、癌旁黏膜和正常黏膜中的表达及临床意义姓名：巩秀珍申请学位级别：硕士专业：人体解剖及组织胚胎学指导教师：王守彪;夏玉军2002.4.1互３９８９２中文摘要凋亡基因ｂｃｌ一２，ｂａｘ在大肠癌、癌旁黏膜和正常黏膜中的表达及临床意义摘要目的探讨凋亡基因（ＡｐｏｐｔｏｔｉｃＧｅｎｅ）ｂｃｌ～２和ｂａｘ在大肠癌、癌旁黏膜和正常黏膜中的表达与大肠癌的发生、发展的关系，及其表达与临床病理特征之间的关系和临床意义。

／方法全部标本取自青岛肛肠医院２０００～２００２年大肠癌病人和正常人。

大肪狺组织为临床病理已经确诊，术前未经放疗和化疗，而且带有癌旁黏膜的癌组织块，共１００例。

正常黏膜组织取自经纤维结肠镜检查的正常人，共ｌＯ倒。

每一例取一个组织块，共１１０块。

每块组织连续切片，片厚４弘ｍ，分三套贴片。

各取一张切片做ＨＥ染色，行常规病理组织学诊断，用于癌、癌旁黏膜及正常组织定位，并给免疫组化染色结果提供对照。

其余两套切片分别进行免疫组织化学法染劬分别测定ｂｃｌ—２和ｂａｘ基因在大肠癌、癌旁黏膜和正常组织中的表达。

ｙ结果癌旁黏膜与癌相比，ｂｃｌ一２的表达有显著性意义（Ｐ＜Ｏ．０５），ｂａｘ的表达有显著性意义（Ｐ＜ｏ．０５）；与正常黏膜相比，ｂｃｌ一２和ｂａｘ在大肠癌和癌旁黏膜中的表达均有显著意义（Ｐ＜ｏ．０５），；其表达的变化与大肠癌的临床病理特征关系不明显（Ｐ＞－０．０５）。

结论ｂｃｌ２，ｂａｘ基因与大肠癌的发生、发展有关，其中癌旁黏膜为移行黏膜，有癌变的可能；ｂｃｌ一２和ｂａｘ基因表达与大肠癌的临床病理特征无关。

关键词大肠癌；癌旁黏膜；基因ｂｃｌ－２；基因ｂａｘ；免疫组织化学∥ｏＶｖ７、／研究生：巩秀珍（人体解剖及组织胚胎学）导师：王守彪夏玉军ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮＯＦＡＰＯＰＴＯＴＩＣＧＥＮＥｂｃｌ一２．ｂａｘＩＮＣＯＬＯＲＥＣＴＡＬＣＡＲＣＩＮＯＭＡ，ＭＵＣＯＳＡＡＤＪＡＣＥＮＴＴＯＣＬＯＮＩＣＣＡＲＣＩＮＯＭＡＡＮＤＮＯＲＭＡＬＣＬＯＮＩＣＭＵＣＯＵＳＭＥＭＢＲＡＮＣＥＡＮＤＩＴＳＣＬＩＮＩＣＡＬＳＩＧＮＩＦＩＣＡＮＣＥＡＢＳＴＲＡＣＴＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｏｆｂｃｌ一２＆ｂａｘｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｉｎｃｏｌｏｒｅｅｔａ［ｃａｒｃｉｎｏｍａ、ｍｕｃｏｓａａｄｊａｃｅｎｔｔｏｉｔａｎｄｎｏｒｍａｌｃｌｏｎｉｃｍｕｃｏｕｓｍｅｍｂｒａｎｃｅａｎｄｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐ—ｍｅｎｔｏｆｔｈｅｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｒｃｉｎｏｍａ，ａｎｄｉｔｓｃｌｉｎｉｃａｌｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ１００ｃａｓｅｓｏｆｃｏｌｏｒｅｃｔａＩｃａｒｃｉｎｏｍａ。

Bcl－2基因家族研究进展任玉伟;宿华威【摘要】Bcl－2家族蛋白是细胞凋亡的关键调节分子，线粒体、内质网等在细胞凋亡的过程中扮演着重要的角色，Bcl－2家族蛋白可直接或间接作用于线粒体来发挥它们的相应功能。

Bcl－2基因家族在缺血再灌注损伤（ IRI）中也有着独特的地位。

而且Bcl－2家族的表达和调控对肿瘤细胞凋亡也具有较大的影响，如何调控Bcl－2家族成员的表达和表达后的针对性治疗，成为今后研究的一个方向。

本文对Bcl－2目前的研究进展作一综述。

%Bcl-2 family proteins are key regulatory molecules of apoptosis.Mitochondria and endoplasmic reticulum etc. play important roles in the process of apoptosis.Bcl-2 family proteins can have direct or indirect effects on mitochondria to play its function.Bcl-2 gene family has also a unique role in ischemia-reperfusion injury ( IRI) .The expression and regulation of Bcl-2 family has great influence on tumor cell apoptosis.How to regulate the expression of Bcl-2 family members and the expression-related target therapy have become a direction of future research.This article summarizes the present research progress.【期刊名称】《大连医科大学学报》【年(卷),期】2015(000)002【总页数】4页(P202-205)【关键词】Bcl-2;细胞凋亡;线粒体;内质网;缺血再灌注损伤【作者】任玉伟;宿华威【作者单位】哈尔滨医科大学附属第二临床医院胆道腹腔镜微创外科，黑龙江哈尔滨150086;哈尔滨医科大学附属第二临床医院胆道腹腔镜微创外科，黑龙江哈尔滨150086【正文语种】中文【中图分类】R3Bcl-2基因于1984年由Tsujimoto首先发现，1988年试验报告Bcl-2基因可使细胞存活时间延长，1990年进一步确证Bcl-2基因具有抗细胞凋亡的功能[1]。

bcl-2凋亡基因表达的检测原理和方法（一）原理：细胞凋亡是一个受基因调控的主动过程，bcl-2是抑制细胞凋亡的原癌基因，正常细胞的激活和发育过程中都有表达，但在发育成熟的细胞中，其表达降低，在低分化或癌变的细胞中，bcl-2高表达与肿瘤的发生、发展相关，bcl-2过量表达常导致对化疗药物的耐药性而阻止细胞凋亡，影响治疗效果，一旦细胞发生凋亡，其bcl-2表达降低，甚至完全消失。

bcl-2家族由bcl-2、bcl-X、bax、mcl-1和A1组成。

进行bcl-2基因表达的检测有两种，一种是用抗bcl-2蛋白抗体的流式细胞仪测定法，检测细胞浆中的bcl-2蛋白量，另一种是采用RT-PCR法测细胞中bcl-2 mRNA的表达。

（二）方法：1、bcl-2蛋白表达的检测：采用流式细胞仪和间接免疫荧光法测定细胞中bcl-2蛋白的量。

收集药物不同剂量、不同作用时间的凋亡肿瘤细胞，用含2%小牛血清的PBS洗2次。

加入2%多聚甲醛室温固定20min，再用PBS配制的Staing缓冲液洗涤。

1500r/min离心5min，弃上清，置-20℃存放过夜。

在冻存的细胞内加入1mlPBS配制的TB穿透液放置5min，用Staing缓冲液洗涤1次后，加2%灭活的人AB型血清1ml，37℃放10min。

加入bcl-2多抗工作液40ul，4℃孵育30min后，对照组不加多抗，随后用PBS洗3次，5 min 1次。

加入FITC荧光标记的二抗工作液40ml4℃孵育30min后，用PBS洗3次，用流式细胞仪检测荧光强度（MFI）的变化，计算bcl-2阳性细胞表达率和bcl-2蛋白表达的平均荧光强度。

2、RT-PCR法检测细胞bcl-2 mRNA的表达：（1）总RNA提取：为了获得高质量的真核细胞mRNA，必须使用RNA酶抑制剂。

操作过程中应避免RNA酶污染器材和试剂，因此所有剥离、塑料器材先用0.1%DEPC水溶液浸泡12h，然后用无菌的新鲜蒸馏水淋洗数次，塑料器材应采用高压蒸汽灭菌。

凋亡调控蛋白Bcl-2和Bax及p53在结肠癌组织中的表达和意义郑光明;郑起;阎钧;王啸虎;陈义钢【期刊名称】《中国现代普通外科进展》【年(卷),期】2013(16)11【摘要】目的:检测凋亡调控蛋白Bcl-2、Bax和p53在结肠癌中的表达,探讨三者与结肠癌发生、发展的关系.方法:用免疫组织化学方法检测Bcl-2、Bax和p53产物在结肠癌组织中的表达,并统计其表达与结肠癌病理参数的关系,取正常结肠组织作为对照.结果:Bcl-2、Bax和p53在结肠癌组织中的阳性表达率分别为48.2％、64.9％、47.4％.Bcl-2和p53的表达与结肠癌的分化程度密切相关,Bcl-2还和结肠癌浸润深度均密切相关,在中、低分化结肠癌组织中或是浸润深度超过黏膜层的结肠癌中,Bcl-2的阳性表达率更高(P＜0.05).Bax的表达则与结肠癌的分化程度和浸润深度无明显相关,而与结肠癌的Dukes分期相关,Dukes分期越晚,Bax的表达越高(P＜0.05).Bcl-2、Bax和p53三者在结肠癌组织中的表达之间没有统计学相关性(P＞0.05).结论:凋亡相关基因Bcl-2、Bax和p53与结肠癌的病理参数密切相关,在结肠癌的发生、发展中起着重要作用.【总页数】5页(P841-845)【作者】郑光明;郑起;阎钧;王啸虎;陈义钢【作者单位】宝应县人民医院普外科江苏扬州 225814;上海交通大学附属上海市第六人民医院普外科上海200233;上海交通大学附属上海市第六人民医院普外科上海200233;上海交通大学附属上海市第六人民医院普外科上海200233;上海交通大学附属上海市第六人民医院普外科上海200233【正文语种】中文【中图分类】R735.3+5【相关文献】1.胃癌组织中bcl-2、Bax、p16和p53蛋白的表达和意义 [J], 王琳;曹永成;牛爱军;耿明2.细胞凋亡调控蛋白bcl-2和bax在宫颈癌组织中的表达 [J], 李兆艾;张林爱;严宗哲;乔中东;赵敏3.核因子NF-κB与凋亡调控蛋白Bcl-2/Bax在溃疡性结肠炎表达及意义 [J], 王觅柱;邬彩虹4.结肠癌组织中p53和凋亡相关基因bcl-2、bax的表达及其临床意义 [J], 陈卫昌;林茂松;张宝峰;方静;周琼;胡莺;郜恒骏5.多囊卵巢综合征卵巢颗粒细胞凋亡调控蛋白Bcl-2、Bax、p53的表达及其意义[J], Wu Jian;Zheng Baotang;Zhang Lin;Tang Zhongqing;Wang Lan;Su Shenghong;Chen Yan因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

基于Fas /FasL 信号通路探索舒芬太尼对急性心肌梗死大鼠心功能和心肌细胞凋亡的影响金成浩，元顺女，朴龙一首都医科大学附属北京同仁医院麻醉科，北京100730摘要：目的　基于脂肪酸合成酶（Fas ）/脂肪酸合成酶配体（FasL ）信号通路探索舒芬太尼对急性心肌梗死（AMI ）大鼠心功能和心肌细胞凋亡的影响。

方法　选择健康雄性SD 大鼠108只，适应性饲养7天，随机分为对照组、模型组、舒芬太尼低剂量组、舒芬太尼高剂量组、舒芬太尼高剂量 + Fas 阴性对照组、舒芬太尼高剂量 + Fas 慢病毒组，每组18只。

模型组、舒芬太尼低剂量组、舒芬太尼高剂量组、舒芬太尼高剂量 + Fas 阴性对照组、舒芬太尼高剂量 + Fas 慢病毒组通过冠状动脉左前降支结扎法制作AMI 模型；对照组除不结扎冠状动脉左前降支外，其余步骤与AMI 模型相同。

舒芬太尼低剂量组和舒芬太尼高剂量组分别于AMI 模型制作成功后腹腔注射0.1、1 µg /kg 舒芬太尼。

舒芬太尼高剂量 + Fas 阴性对照组和舒芬太尼高剂量 + Fas 慢病毒组分别于AMI 模型制作成功后腹腔注射1 µg /kg 舒芬太尼，尾静脉注射200 nmol /kg NC shRNA 慢病毒或Fas shRNA 慢病毒。

对照组和模型组腹腔注射等量生理盐水。

术后72 h ，采集大鼠尾静脉血，采用ELISA 法检测血清肌钙蛋白T ；采用超声心动图检测左心室射血分数（LVEF ）、左心室缩短分数（LVFS ）、左心室舒张末期内径（LVEDd ）和左心室收缩末期内径（LVESd ）。

待大鼠心功能检测完成后，腹主动脉取血，采用ELISA 法检测血清TNF -α、IL -6。

所有大鼠断头处死，留取心脏，随机取6只大鼠的心脏组织，TTC 染色，计算心肌梗死面积；随机取6只大鼠的心脏组织，HE 染色，观察心肌组织病理形态变化，采用TUNEL 法检测细胞凋亡情况；取剩余6只大鼠的心脏组织，采用Western blotting 法检测细胞凋亡相关蛋白Bcl -2、Bax 、Caspase -3及Fas /FasL 信号通路相关蛋白表达。

bcl-2 mRNA的表达和细胞凋亡在良、恶性多形性腺瘤发生中的意义吕红兵;金岩;董绍忠;李媛【期刊名称】《口腔医学研究》【年(卷),期】2003(19)6【摘要】目的 :研究bcl- 2和细胞凋亡在多形性腺瘤 (PA)和恶性多形性腺瘤(MPA)发生中的作用。

方法 :选取PA30例 ,MPA10例和正常腮腺组织 10例为研究对象 ,进行bcl- 2原位杂交染色和细胞凋亡的TUNEL染色。

用图像分析仪对bcl- 2的染色结果进行定量分析 ,并计算细胞凋亡指数 ,最后进行统计学分析。

结果 :bcl- 2mRNA染色的阳性信号主要表达在腺管样的上皮细胞中 ,正常组和PA组之间无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ,正常组和MPA组、PA组和MPA组之间均有显著性差异 (P <0 .0 5 )。

凋亡细胞散在分布于腺管样的上皮细胞中。

PA组的凋亡指数明显高于MPA组 (P <0 .0 5 )。

bcl- 2的阳性表达强度与凋亡指数呈显著的负相关。

结论 :bcl -【总页数】3页(P439-441)【关键词】bcl-2;mRNA表达;细胞凋亡;良性多形性腺瘤;恶性多形性腺瘤【作者】吕红兵;金岩;董绍忠;李媛【作者单位】福建医科大学口腔医学院牙体牙髓科;第四军医大学口腔医学院【正文语种】中文【中图分类】R736【相关文献】1.bcl-2 mRNA、baX mRNA表达在三氧化二砷诱导肝癌细胞凋亡中的意义 [J], 李江涛;区庆嘉;刘颖斌;王新保;徐斌2.FK506对肝脏保存再灌注中Bcl-2 mRNA、Bax mRNA表达及肝细胞凋亡的影响 [J], 赵浩亮;韩振国;李正中3.细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Bak mRNA在子痫前期患者胎盘组织中的表达及其意义 [J], 王欣;王小青;刘晓梅;花向东4.细胞凋亡及fas mRNA、bcl-2 mRNA在早期自然流产绒毛和蜕膜组中的表达[J], 夏革清;熊雅丽;孙永玉5.甘氨鹅脱氧胆酸钠致阻塞性黄疸大鼠肝细胞凋亡中bcl-2 mRNA的表达意义 [J], 王剑明;邹声泉因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

bcl-2、bax、caspase-3在细胞凋亡中的作用及其关系董雅洁;高维娟
【期刊名称】《中国老年学杂志》
【年(卷),期】2012(032)021
【摘要】细胞凋亡是细胞在一定的生理或病理条件下，受多种基因精确调控的主动的、程序化的死亡过程，是机体重要的自稳调节机制。

近年来通过大量实验研究表明，线粒体通路在细胞存亡机制中起着至关重要的作用，而在众多的凋亡调控基因中，bcl-2蛋白家族和胱天蛋白酶（caspase）家族目前最受关注，
【总页数】3页(P4828-4830)
【作者】董雅洁;高维娟
【作者单位】承德医学院病理生理学教研室,河北承德067000;河北化工医药职业技术学院
【正文语种】中文
【中图分类】R34
【相关文献】
1.脑缺血后Caspase-3蛋白Bcl-2和Bax基因表达在神经损伤中的作用 [J], 刘广义
2.结直肠癌组织中TAZ表达与Bcl-2、Bax、Caspase-3的关系及临床意义 [J], 冯俊伟;施华;张志勇;王爱军;王红钰;徐晋珩;吴肖;程健;张超;郑宝军
3.Caspase-3基因在肺癌中的表达及其与bcl-2和Bax蛋白表达的关系 [J], 姚峰;陈倩;陶琳;黎辉;刘铭球
4.铝作用下大鼠海马神经细胞凋亡与bcl-2和bax基因转录的关系 [J], 牛侨;王林平;陈艺兰;张红梅;张勤丽;张玲;刘慧君
5.Bcl-2、Bax和Caspase-3在酒精性肝病大鼠肝组织中的表达和五田保肝液的干预作用 [J], 毕业东;苏金玲;安先凤;宋星星;范英昌
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