流式细胞仪---

流式细胞仪什么是流式细胞仪？流式细胞仪（Flow cytometry）是一种广泛应用于生命科学领域的实验技术，它能够实现单细胞的快速分析、分类以及划分。

流式细胞仪的原理流式细胞仪的基本结构包括激光源、光学系统、电子学系统和计算机系统。

在样本准备完成后，激光量子将对待检测的细胞进行激励，细胞中的荧光标记物或颜料受到光的激发会发生发射，发射的光传递到光学系统后进行过滤处理后再通过相应接收器接收，传输到电子学系统和计算机进行分析和记录。

流式细胞仪在生命科学领域应用免疫细胞学免疫细胞学是流式细胞仪最广泛的应用领域。

通过对细胞表面分子的特异性检测来实现不同免疫细胞的鉴定和分类。

基于荧光标记同种或异种抗体的原理，使得负责流式细胞仪的计算机可以在短时间内分析千万级别的细胞数。

活细胞筛选通过流式细胞仪可以对生长期的细胞进行筛选，对不同阶段的细胞群体进行分离，可以实现对细胞的遗传和基因表达水平的研究。

分子生物学领域流式细胞仪在分子生物学领域中也起到关键的作用，它能够进行 DNA 浓度分析、测定蛋白质的表达量、检测RNA的表现等。

神经科学领域流式细胞仪还可以在神经科学领域发挥一定的作用，可以检测神经细胞在形态、力学、电生理性质等方面的变化。

流式细胞仪存在的不足流式细胞仪的存在也面临一些问题，例如因为激光的存在会对样本造成一定的损伤，需要非常小心地处理样本。

此外，部分实验者对于样本的操作技能要求较高，需要一定的专业知识和严格的操作规程。

总结流式细胞仪是一种非常有用的生命科学实验技术，主要应用于免疫细胞学、活细胞筛选、分子生物学以及神经科学领域等科学研究。

然而，由于激光的存在，样本操作技能的要求较高，需要仔细对待和操作。

最详细的流式细胞仪实验方法流式细胞仪（Flow cytometry）是一种高精度的细胞分析技术，可用于快速鉴定和分离多种类型的细胞。

本文将介绍一种常用的流式细胞仪实验方法，包括样品准备、细胞染色、细胞分析和数据分析等步骤。

一、样品准备1.收集细胞：制备单细胞悬液，如细胞培养物等。

2.细胞计数：使用细胞计数器或血细胞计数板等工具，计算细胞密度。

3. 调整浓度：根据流式细胞仪系统的要求，将细胞悬液的浓度调整至适当的浓度（一般建议在1×10^5至1×10^6个细胞/ ml之间）。

二、细胞染色1.封闭非特异结合位点：为了减少非特异性结合，可使用FBS（胎牛血清）或BSA（牛血清蛋白）等以阻断非特异位点。

2.添加荧光染料：选择合适的染料，如草酰胺（CFSE）、丙酮染料(ATTO)或FITC等。

按照厂家说明书中建议的浓度将染料添加到样品中，好洗脱或者可用来鉴定细胞的抗体，如表面标记、核酸染色剂或功能性抗体。

3.染色溶液：在4°C下孵育细胞悬液至少30分钟（具体时间根据实验需要决定）。

4.洗涤：向样本管中加入足够的缓冲液，使细胞悬液稀释五倍，并离心沉积细胞。

5.弃去上清液：将上清液弃去，然后用足够的缓冲液再次洗涤沉积的细胞。

6.重悬：向样品管中加入适量的缓冲液，使细胞形成合适的细胞密度。

三、设置流式细胞仪1.打开仪器：确保仪器已开启并运行正常，各通道和检测器已连接好，并预热至适当温度。

2.校正：根据仪器的手册，对流式细胞仪进行校正和标定，以确保流式细胞仪的准确性和稳定性。

3.样品管固定：将样品管插入到流式细胞仪中相应的槽中，以确保准确读取。

4.设置参数：在计算机或流式细胞仪仪器的界面上设置所需参数，如细胞个数、细胞染色等。

四、细胞分析1.利用流式细胞仪：启动流式细胞仪软件，并确保硬件与软件连接正常。

2.定位细胞：在细胞分析开始前，调整激光位置和侦测器的灵敏度，以确保对准确获取细胞。

流式细胞仪及流式细胞术流式细胞仪技术流式细胞仪技术，主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光，经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光/或荧光。

它们经过过滤及光镜系统收集到达一个光电检测器(光电倍增管或一个固态装置)，光检测器把散射光定量转化成电信号，经数字转换器进行数字化后而成整数，然后进行电子存储，以后数据可以调出显示和进行分析。

其优点如下：1、具有操作简便，只要将染色的单个细胞推入仪器中，就会得出数据。

2、具有较高的灵敏度及测定速度，而且每次可测出许多数据，一般情况下，每秒可测5000个细胞，能迅速分析和记数大量细胞，并能准确统计群体中荧光标记细胞的比例。

3、应用广泛，即可用于测定细胞活力、繁殖周期和细胞定型分析，也可区别死亡细胞、分裂细胞和静止细胞群，既可测定DNA和RNA、测凋亡峰，又可测蛋白含量，特别是胞浆蛋白。

基本流程原理：1、将待测细胞染色后制成单细胞悬液，用一定压力将待测样品压入流动室，不含细胞的磷酸缓冲液在高压下从鞘液管喷出，鞘液管入口方向与待测样品流成一定的角度，这样，鞘液就能够包绕着样品高速流动，组成一个圆形的流束，待测细胞在鞘液的包被下单行排列，依次通过检测区域。

2、流式细胞仪通常以激光作为发光源。

经过聚焦整形后的光束，垂直照射在样品流上，被荧光染色的细胞在激光束的照射下，产生散射光和激发荧光。

这两种信号同时被前向光电二极管和90度方向的光电倍增管接收。

散射光不依赖任何细胞样品的制备技术，被称为细胞的物理参数或固有参数，散射光有包括前向角散射和侧向叫散射，前向角散射与被测细胞直径的平方密切相关，侧向角散射光对细胞膜、胞质、核膜的折射率更敏感，可提供有关细胞内精细结构和颗粒性质的信号。

荧光信号也有两种，一种是细胞自身在激光照射下发出的微弱荧光信号，另一种是经过特异荧光素标记后的细胞受激发照射后得到的荧光信号。

流式细胞仪的基本结构
流式细胞仪是一种广泛用于生物医学研究和临床诊断的仪器，它可以用来分析和计数细胞、测定细胞大小、形状和复杂性，并检测细胞表面和内部分子的表达。

流式细胞仪的基本结构包括以下几个主要部分：
1. 激光系统，流式细胞仪使用激光来激发样品中的荧光染料或标记物，从而检测细胞的特定性质。

激光系统通常包括一个或多个激光器，用于产生不同波长的激光光束。

2. 样品注射系统，样品注射系统用于将待测样品引入流式细胞仪。

通常采用注射器或者自动进样系统来实现样品的引入。

3. 流动系统，流动系统包括样品的流动通道、流速控制装置和检测单元。

样品在流动通道中通过激光束，检测单元用于测量样品中的荧光信号。

4. 检测单元，检测单元包括光学透镜、滤光片和光电探测器，用于接收样品中的荧光信号，并将其转换为电信号。

5. 数据分析系统，数据分析系统用于处理和分析从检测单元中获得的数据，通常包括计算机和相应的软件。

流式细胞仪通过这些基本结构的协同作用，可以实现对细胞的高速、高通量、多参数分析，为生物医学研究和临床诊断提供了强大的工具。

随着技术的不断进步，流式细胞仪的功能和性能也在不断提升，使其在细胞生物学、免疫学、肿瘤学等领域的应用变得更加广泛和深入。

1、流式细胞术(英文flow cytometry)是一种生物学技术，用于对悬浮于流体中的微小颗粒进行计数和分选。

这种技术可以用来对流过光学或电子检测器的一个个细胞进行连续的多种参数分析。

目录* 1 原理* 2 流式细胞仪(flow cytometer)* 3 应用* 4 参见原理一束单色光（通常是激光）照到流体力学聚焦的一股流体上。

若干个检测器瞄向流束和激光相交的这个点，其中一个和激光在同一直在线（称作前散射(FSC)），其它几个和激光垂直（旁散射(SSC)和一个或几个荧光监测器）。

当每个悬浮颗粒通过光束时会按某种方式把光散射，同时所带有的荧光化合物被激发并发射出频率低于激发光的荧光。

这些散射光和荧光的组合数据被检测器记录，根据各检测器亮度的波动（每个细胞会显出一个散射或荧光的峰）就能够推算出每个颗粒的物理和化学性质。

前散射与细胞体积相关，而旁散射取决于颗粒的内部复杂程度（比如核的形状、胞质内颗粒的种类或者末的粗糙程度）。

可以检测的参数有：细胞的体积和形态复杂程度、细胞中的色素、DNA（细胞周期分析、细胞动力学、细胞增殖等）、RNA 染色体分析和分选（文库构建、染色体涂染）、蛋白质、细胞表面抗原（CD标记）、胞内抗原（各种细胞因子(cytokine)、次级媒介等）、核抗原、酶活性、pH，胞内离子化的钙、镁，膜电势、膜流动性细胞凋亡(apoptosis)（定量检测DNA降解、线粒体膜电位、通透性变化）、细胞存活能力、监测细胞电通透性、氧爆作用(oxidative burst) 、研究癌细胞中的多重耐药性(multi-drug resistance, MDR) 、谷胱甘肽、各种组合（DNA/表面抗原等等）流式细胞仪(flow cytometer)流式细胞仪又称荧光激活细胞分选器、荧光活化细胞分类计（FACS，Fluorescence Activated Cell Sorter）。

现代的流式细胞仪每秒可以实时检测几千个颗粒，并且可以主动分离具有不同特性的颗粒。

流式细胞仪名词解释细胞生物学篇一：流式细胞仪，这在细胞生物学里可真是个超酷的玩意儿呢。

你要是把细胞世界想象成一个超级大的城市，那流式细胞仪就像是这个城市里最厉害的超级侦探。

细胞啊，那可是非常非常小的东西，小到咱们肉眼根本就看不见。

它们就像这个城市里数不清的小居民，每个细胞都有自己的特点和秘密。

流式细胞仪呢，就能够一个一个地去查看这些小居民。

它怎么做到的呢？就像是给每个细胞发了一张特殊的身份证一样。

这个特殊的身份证就是细胞表面或者内部的一些特殊的标记。

比如说，有的细胞可能会带着一种特殊的蛋白质，就像居民戴着一个独特的徽章。

流式细胞仪就能识别出这个徽章。

它就像一个超级灵敏的扫描仪，在细胞的海洋里快速地游动，看到一个细胞就扫描一下。

流式细胞仪工作的时候可有趣啦。

它就像一个流水作业的大工厂。

细胞就像一个个小零件被送进这个工厂。

细胞在一个一个地通过这个仪器的时候，仪器就会给它们进行各种各样的检测。

就好比是在流水线上，每个小零件都要经过质量检测一样。

在细胞生物学的研究里，流式细胞仪的作用可大了。

比如说，科学家们想要知道在一群细胞里，有多少个细胞是正在分裂的。

这就像是在一个大社区里，想知道有多少居民正在搬家一样。

流式细胞仪就能很轻松地把正在分裂的细胞找出来，因为这些细胞会有一些特殊的表现，就像正在搬家的居民会有一些特别的动静。

又比如说，科学家想知道细胞有没有受到病毒的感染。

这就像是在城市里检查居民有没有被坏蛋欺负一样。

如果细胞被病毒感染了，那它的身体里就会有一些不一样的地方，流式细胞仪就能发现这些不一样，就像侦探能发现居民被欺负后的蛛丝马迹。

流式细胞仪真的是细胞生物学研究中不可缺少的得力助手啊。

没有它，科学家们要想了解细胞的各种秘密，那就像在黑暗里摸索，太难了。

所以啊，它就是打开细胞世界大门的一把超级钥匙，让我们能够更好地认识细胞这个奇妙的小世界。

在细胞生物学的研究道路上，流式细胞仪就是那盏照亮前方的明灯，带领着科学家们不断探索细胞的奥秘。

流式细胞仪的发展历史及其原理和应用进展一、本文概述流式细胞仪（Flow Cytometry，FCM）作为一种先进的细胞分析技术，自其诞生以来，在生物医学领域发挥了重要的作用。

本文旨在全面概述流式细胞仪的发展历史，深入剖析其基本原理，以及探讨其在不同领域的应用进展。

我们将从流式细胞仪的初步概念出发，追溯其技术的演进过程，分析其在细胞生物学、免疫学、肿瘤学等领域的应用实例，并展望未来的发展趋势。

通过对流式细胞仪的深入研究，我们希望能够为相关领域的研究人员提供有价值的参考，推动流式细胞仪技术的进一步发展。

二、流式细胞仪的发展历史流式细胞仪（Flow Cytometry，FCM）是一种在液流中快速测量和分析细胞特性的高科技仪器。

自其诞生以来，流式细胞仪在生物医学研究领域发挥了重要作用，其发展历史可追溯至20世纪60年代末。

1965年，美国科学家Wallace H. Coulter首次提出了流式细胞仪的基本概念，并设计出了第一台原型机。

这台机器利用了液流原理和荧光检测技术，可以对单个细胞进行快速、定量的分析。

1970年，Coulter Science公司正式推出了世界上第一台商用流式细胞仪，标志着流式细胞技术的诞生。

随着科技的进步，流式细胞仪在随后几十年中经历了不断的改进和创新。

在硬件方面，流式细胞仪的激光源从最初的单一波长发展到多波长，甚至引入了紫外、红外等多种激光，使得可以同时检测多种细胞参数。

在软件方面，数据分析和处理能力得到了显著提升，可以实现对大量数据的快速、准确分析。

流式细胞仪的应用领域也不断拓宽。

从最初的免疫学研究，到现在的肿瘤学、细胞生物学、分子生物学等多个领域，流式细胞仪已经成为了不可或缺的研究工具。

随着单细胞测序技术的发展，流式细胞仪与单细胞测序技术的结合，为深入研究细胞异质性和疾病发生机制提供了新的手段。

流式细胞仪的发展历史是一部科技进步的缩影。

从最初的原型机到现在的多功能仪器，流式细胞仪在硬件、软件和应用领域都取得了显著的进步。