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20192019年6月第9卷第11期·检验医学·肺炎支原体抗体三种血清学检测方法的对比分析谢文俊厦门市海沧医院检验科，福建厦门 361026[摘要] 目的 比较电化学发光方法（CLIA）、间接免疫荧光抗体法（IFA）和被动凝集法（PPA）在肺炎支原体感染早期检测中的应用价值。
方法 选取我院2017年6月～2018年3月可疑肺炎支原体感染的患者153例，分别采用电化学发光方法、间接免疫荧光法和被动凝集法检测患者血清中的肺炎支原体抗体，比较这三种检测方法阳性检出率的差异，以协助临床早期诊断肺炎支原体感染。
结果 PA法检测出（IgM+IgG）阳性标本和阴性标本数分别为60（39.22%）和93（60.78%）；CLIA检测出（IgM）阳性标本和阴性标本数分别为57（37.25%）和96（62.75%）；IFA检测出（IgM）阳性标本和阴性标本数分别为54（35.29%）和99（64.71%）；以上三种检测方法的阳性检出率差异均无统计学意义（P＞0.05）。
对IFA/PA、IFA/CLIA和CLIA/PA进行一致性分析，CLIA/PA组、CLIA/IFA组和IFA/PA组的Kappa值分别0.903、0.929和0.867，三种检测方法一致性好（Kappa系数均＞0.75）。
结论 电化学发光方法（CLIA）、间接免疫荧光抗体法（IFA）和被动凝集法（PPA）均在检测肺炎支原体中有着较高的一致性，均可用于肺炎支原体抗体的检测，且CLIA法由于检测MP分型抗体具备精密度高、用时短、操作自动化等优势，有望替代IFA法和PA法应用于临床。
[关键词] 肺炎支原体；化学发光免疫分析法；间接免疫荧光抗体法；被动凝集法[中图分类号] R446.6 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2019）11-90-03Comparative analysis of three serological detection methods for mycoplasma pneumoniae antibodyXIE WenjunDepartment of Clinical Laboratory,Xiamen Haicang Hospital,Fujian,Xiamen 361026,China[Abstract] Objective To compare the application values of electrochemiluminescence immunoassay(CLIA),indirect immunofluorescence antibody method(IFA)and particle agglutination(PPA)in the early detection of mycoplasma pneumoniae infection. Methods 153 patients with suspected mycoplasma pneumoniae infection who were admitted to our hospital from June 2017 to March 2018 were selected and they were respectively given electrochemiluminescence immunoassay,indirect immunofluorescence antibody method and particle agglutination to detect mycoplasma pneumoniae antibody in the serum.The differences in the positive detection rates of these three methods were compared to assist the early diagnosis of mycoplasma pneumoniae infection. Results The number of positive and negative samples of IgM and IgG detected by PA method were 60(39.22%)and 93(60.78%),respectively.The number of positive and negative IgM samples detected by CLIA was 57(37.25%)and 96(62.75%),respectively.The number of positive and negative IgM samples detected by IFA was 54(35.29%)and 99(64.71%),respectively.There was no significant difference in the positive detection rate of the above three methods(all P＞0.05).Consistency analysis was conducted for IFA/PA,IFA/CLIA and CLIA/PA.The Kappa values of CLIA/PA group,CLIA/IFA group and IFA/PA group were 0.903,0.929 and 0.867 respectively.The consistency of the three detection methods was good(Kappa coefficient＞0.75). Conclusion Electrochemiluminescence immunoassay(CLIA),indirect immunofluorescence antibody method(IFA)and particle agglutination(PPA)all have high consistency in the detection of mycoplasma pneumoniae,which can be used for the detection of mycoplasma pneumoniae antibodies.In addition,CLIA method is expected to replace IFA method and PA method in clinical application because of its advantages of high precision,short time and automatic operation in the detection of MP typing antibody.[Key words]Mycoplasma pneumoniae;Electrochemiluminescence immunoassay;Indirect immunofluorescence antibody method;Particle agglutination肺炎支原体（mycoplasm apneumonia，MP）是学龄儿童和青少年呼吸道感染的主要原因，是继肺炎链球菌之后的第二大社区获得性肺炎的病原体[1-4]。
支原体感染的检测方法及其准确性支原体是一种常见的细菌感染引起的疾病，包括支原体肺炎、尿道炎、阴道炎和结膜炎等。
早期诊断和准确的检测方法对于及时治疗和预防传染至关重要。
本文将介绍支原体感染的检测方法以及其准确性。
一、支原体感染的常见检测方法1. 核酸扩增技术（Nucleic Acid Amplification Techniques，简称NAATs）核酸扩增技术是目前最敏感、最准确的检测方法之一。
常见的核酸扩增技术包括聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction，简称PCR）、实时荧光定量PCR（Real-time Quantitative PCR，简称qPCR）和测序技术等。
这些技术可以通过扩增和检测支原体的特定DNA或RNA序列来确定感染是否存在。
2. 细胞培养方法细胞培养方法是传统的支原体检测方法之一。
通过将临床样本（如痰液、尿液或阴道分泌物）接种到特定的培养基中，培养并检测支原体的生长。
细胞培养方法虽然能够提供活体支原体，并确定感染的类型，但是时间周期较长，容易受到培养条件的影响，有一定的局限性。
3. 免疫学方法免疫学方法通过检测宿主机体对支原体感染产生的免疫反应来确定感染的存在。
常见的免疫学方法包括酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，简称ELISA）、免疫荧光染色和免疫组织化学等。
这些方法具有快速、简便的特点，但其准确性受到感染阶段和宿主个体免疫状态等因素的影响。
二、支原体感染检测方法的准确性评估支原体感染的准确性评估主要包括敏感性、特异性和阳性预测值等指标。
1. 敏感性敏感性是指检测方法能够正确识别存在的感染比例。
核酸扩增技术通常具有较高的敏感性，可以检测到低至几十个拷贝的病原体核酸，具有较高的检出率。
2. 特异性特异性是指检测方法能够正确识别无感染的比例。
核酸扩增技术通常具有较高的特异性，可以通过特定的引物和探针来检测目标病原体的特异性序列，减少误报率。
支原体检测试剂盒使用说明书1.试剂：支原体检测试剂盒由武汉源深生物科技有限公司提供。
2.实验方法:巢式PCR的方法检测支原体污染：A.待检细胞汇合率在90％以上时取100 µL细胞上清液到离心管内B.95o C孵育5分钟C.短暂高速离心15秒钟左右D.试剂盒里的组份：引物混合物(Primer Mix) 20 µL阳性对照DNA (Positive Control DNA) 15 µL阴性对照(Internal Control DNA) 20 µL巢式PCR一共需要做2轮PCR，本检测方法不受其他来源（如所培养细胞）DNA的影响，不但提高了检测的灵敏度，同时也提高了特异性。
(1)第一轮PCR:PCR 混合物：向0.2 mL PCR薄壁管中依次加入以下组分，盖紧管盖，轻弹管壁混匀，稍加离心。
E.热循环程序：将准备好的PCR管放入PCR仪，运行如下程序。
PCR 混合物：向0.2 mL PCR薄壁管中依次加入以下组分，盖紧管盖，轻弹管壁混匀，稍加离心。
F. 热循环程序：将准备好的PCR 管放入PCR 仪，运行如下程序。
试验结果：2％ 琼脂糖凝胶电泳，TBE 缓冲液，PCR 产物及Marker 均点样10µL ，于50V 下电泳1hr ，EB 染色15min ，紫外灯下观察。
电泳结果见下图：图中泳道M 为DNA Marker ，1和2为待检测细胞系的第一轮PCR 产物 (1st )，3和4为待检测细胞系的第二轮PCR 产物 (2nd ), 其中1、3为阳性对照管PCR 产物，2、4为阴性对照PCR 产物。
阳性对照管在200bp 左右，和300-400 bp 处各有一条带，证明本次实验准确可靠 (不同的支原体Mycoplasma, such as M. fermentans, M. hyorhinis, M. arginini, M. orale, M. hominis, M. arthritidis, M. hyopneumoniae and Acholeplasma laidlawii 的保守区的片段长度不一，大概在200-400 bp 之间)。
《探针法支原体检测试剂盒》（含内参）说明书（版本20230112）【本说明书会不定期更新，每次收到新的产品时，请到本公司网站重新下载最新版本！】货号QM016包装规格50次/盒储存条件该产品在常温或随冰袋运输，收到产品后，请立即放-20 ℃冰箱低温避光保存。
该条件下，至少5年内有效。
产品用途《探针法支原体检测试剂盒》（qPCR Mycoplasma Detection Kit with Probe）采用支原体特异性引物和支原体特异性荧光探针（报告基因为FAM），用于对样品的支原体基因组DNA进行荧光定量PCR扩增检测。
试剂盒内同时含有内参对照质粒mycoIC2和相应的引物和荧光探针（报告基因为VIC），用于监控支原体DNA 提取和qPCR扩增的效率。
本试剂盒可用于检测一切可能含支原体的样品，比如：（1）体外细胞培养的上清；（2）血清；（3）各种体液，如唾液、尿液、鼻腔分泌物等；（4）别的液体样品。
本产品仅供研究使用。
产品简介哺乳动物细胞的培养，支原体（Mycoplasma）污染是个世界性的问题。
支原体污染几乎可以改变细胞的所有参数，导致实验结果的不准确、甚至完全错误（支原体污染对细胞的详细危害，请参考本公司的网站：）。
从2013年开始，《Nature》期刊已正式要求投稿的文章，如涉及细胞培养都要进行支原体检测。
相信会有越来越多的高水平期刊将做出同样的支原体检测要求。
培养法是相对可靠的支原体检测技术，但是该方法非常耗时的，需要数周，不适合作为细胞培养液中支原体污染的快速检测。
此外，通过固体培养法无法检测污染细胞的一种最常见的支原体，即猪鼻支原体（M.Hyorhinis）。
这是因为猪鼻支原体无法在支原体固体培养基上形成可见的菌落。
而猪鼻支原体约占所有支原体污染的20-50%。
有的实验室使用荧光染色法检测支原体，但是该方法灵敏度太低，当检测成阳性时，细胞经常已经严重污染。
培养法和荧光染色法虽然是我国药典收录的支原体检测方法，但是因为其各自都有明显的缺点，不适合作为支原体快速检测的方法。
快速检测试剂盒快速检测试剂盒是一种能够快速、准确地检测样本中特定成分的化学试剂盒。
它具有操作简便、便携、适用范围广等特点，在医疗、食品安全、环境监测等领域得到广泛应用。
检测原理快速检测试剂盒通常采用免疫学和生物学的原理。
它通过检测样本中特定成分与试剂之间的化学反应，来确定被测物的存在与否。
以单克隆抗体为例，对于待测样品中特定的抗原物质，试剂盒中预先涂有与之相应的单克隆抗体，加入样品后，如果样品中含有特定的抗原物质，那么它就会与试剂盒中的抗体结合，形成复合物。
这时，再加入检测剂，如果检测剂可以与复合物特异性结合，那么检测结果就会呈现出颜色变化。
适用范围快速检测试剂盒适用于多种业务领域，包括但不限于：•医疗–快速检测病原菌、炎症、肿瘤标志物等–临床用药监测•食品安全–检测食品中的生物毒素、重金属等–检测水产品中的渔药残留•环境监测–检测大气、水质污染物快速检测与传统检测的比较与传统的化学检测手段相比，快速检测试剂盒具有以下优势：•更省时省力：传统检测通常需要样品的预处理和长时间的化验过程，而快速检测试剂盒的使用只需要数分钟到数小时的时间；•更便携：快速检测试剂盒体积小，重量轻，可携带性强，实验可以在实验室外进行，适用范围更广；•更经济：传统检测通常需要昂贵的仪器设备和化学试剂，而使用快速检测试剂盒成本更低，更易于推广应用。
虽然快速检测试剂盒有许多优点，但也存在一些限制。
它的检测灵敏度和检测范围相对有限，需要严格的操作规程和较高的实验技能。
此外，因为试剂盒的主要应用范围是定性检测，无法测量成分的精确浓度。
结论随着现代科技的飞速发展和人们健康意识的不断提高，快速检测试剂盒在治疗和预防疾病、保障食品安全、环境监测等方面的应用前景越来越广阔。
在未来的发展中，快速检测技术有望在实时监控、个性化诊断等方面展现更广阔的应用前景。
细胞支原体污染常用支原体检测方法和试剂盒介绍（2016年10月16日）哺乳动物细胞的培养，支原体（Mycoplasma）污染是个世界性的问题。
支原体污染几乎可以改变细胞的所有参数，导致实验结果的不准确、甚至完全错误。
从2013年开始，《Nature》期刊已正式要求投稿的文章，如涉及细胞培养都要进行支原体检测。
相信会有越来越多的高水平期刊将做出同样的支原体检测要求。
目前，细胞支原体污染常用的支原体检测方法主要有：一、培养法●原理：将待检测样品先接种到支原体液体培养基中大量繁殖，然后再转接种到支原体固体培养基中，培养一段时间后（大约一个月），如果固体培养中，出现典型的支原体菌落，则说明待测样品有支原体污染。
●优点：支原体培养法是相对可靠的支原体检测技术，也是我国药典认可的方法之一。
●缺点：（1）培养法非常耗时的，需要数周，不适合作为细胞培养液中支原体污染的快速检测；（2）通过固体培养法无法检测污染细胞的一种最常见的支原体，即猪鼻支原体（M.Hyorhinis）。
这是因为猪鼻支原体无法在支原体固体培养基上形成可见的菌落。
而猪鼻支原体约占所有细胞支原体污染的20-50%。
●《培养法支原体检测试剂盒》》主要厂家：读者可以根据《中国药典》中收录的培养法支原体检测方法进行操作。
二、荧光染色法●原理：将待检测样品接种到专门的指示细胞（如：Vero细胞）中，培养一段时间后，用DNA荧光染料（如：Hoechst 33258，DAPI）进行染色，如果除了细胞核被染色外，细胞质也有大量的絮状核酸物质被荧光染料染色，那么这些处于细胞质的核酸物质就是支原体DNA。
●优点：荧光染色法也是我国药典认可的方法之一。
●缺点：（1）该方法灵敏度太低，当检测成阳性时，细胞经常已经严重污染；（2）需要用到专门的指示细胞（如：Vero细胞），如果不用指示细胞而直接对目标细胞进行荧光染色，由于每种细胞繁殖和吸附支原体的能力差异极大，检测的准确性将比用Vero等指示细胞进行检测要低得多；（3）该方法严重依赖实验人员的经验，可重复性较差。
三种快速支原体检测试剂盒检测原理与优缺点比较在细胞培养，特别是传代细胞培养中，支原体污染率达到15-35%。
支原体的侵染会引起细胞功能和基因表达的严重改变，并造成持续危害。
由于支原体污染会严重影响实验结果的可靠性、重复性和一致性，对支原体的常规检测非常重要。
传统的支原体检测方法很耗费时间，通常需要一天至数周，而且操作比较繁琐，准确度不高。
中国药典给定的支原体标准检测方法有两种：培养法和DNA染色法。
培养法方法简单，假阳性率低，但样品需要量高，耗时20天左右，时间漫长。
DNA染色法结果直观，假阳性率低，但需要荧光显微设备，实验操作复杂。
能否找到一种省时、省力且准确性高的方法检测支原体污染呢？目前，市场上具有多款支原体快速检测试剂盒，我们选取了其中3种品牌的快速支原体检测试剂盒，就其检测原理与优缺点进行一下比较。
一、美国CLARK Bioscience品牌一步法检测试剂盒美国CLARK Bioscience公司研发的一步法支原体检测试剂盒One-step Quickcolor Mycoplasma Detection Kit，利用等温扩增的方法，可检测7种常见支原体的基因。
该检测方法与PCR方法类似，检测过程中，只需取少量细胞培养上清，及一个能控制温度的水浴锅或恒温金属浴，其扩增产物的颜色可通过肉眼直接观察判断，整个过程需要1小时左右。
该方法对仪器的要求比较低，理论上灵敏度比较高。
缺点在于检测的支原体种类太少，目前已发现的近200种支原体，只能检测其中的7种，检测范围太窄，也不符合国家药典的规定。
而且肉眼观察结果比较主观，有可能不同的实验人员判读的结果不一致。
二、美国Lonza品牌生物发光法检测试剂盒美国Lonza品牌的MycoAlertTM 和升级的MycoAlertTM PLUS支原体检测试剂盒，采用生物发光的方法，检测支原体酶活性。
其检测的支原体酶广泛存在于180多种支原体中，而不存在于真核细胞中。
几种抗肺炎支原体抗体检测方法临床应用比较探述摘要：目的对抗肺炎支原体应用明胶颗粒凝集法、酶联免疫吸附法和化学发光免疫法检测的临床效果进行研究。
方法选择本院986例疑似肺炎支原体患儿，对所有患儿分别采用明胶颗粒凝集法、酶联免疫吸附法和化学发光免疫法检测肺炎支原体，对比不同检测方法结果准确率、特异度和灵敏度。
结果化学发光免疫法准确率为82.96%，特异度为71.38%，灵敏度为87.46%。
酶联免疫吸附法准确率为71.60%，特异度为58.70%，灵敏度为76.62%；化学发光免疫法准确率、特异度和灵敏度均全面高于酶联免疫吸附法（P＜0.05）。
结论明胶颗粒凝集法、酶联免疫吸附法和化学发光免疫法均可用于儿童肺炎支原体的检测，具备较大的临床推广价值。
而化学发光法免疫法准确率、特异度和灵敏度优于酶联免疫吸附法，应作为主要的检测方式。
关键词：肺炎支原体；明胶颗粒凝集法；酶联免疫吸附法；化学发光免疫法；一致性小儿肺炎在儿童呼吸道疾病中相对常见，肺炎支原体是其主要病原体。
由于该病早期阶段特异性症状并不明显，因此漏诊或误诊概率较高，很容易耽误儿童正常治疗。
临床可通过支原体培养，检测患儿是否感染肺炎支原体，但是出结果往往耗时较长，不符合临床快速诊断的理念[1]。
因此，本研究将以986例疑似肺炎支原体患儿为研究对象，对抗肺炎支原体应用明胶颗粒凝集法、酶联免疫吸附法和化学发光免疫法检测的临床效果进行研究，总结如下。
1 资料与方法1.1 一般资料选择本院986例疑似肺炎支原体患儿，其中包含男性543例，女性443例，年龄均值（6.32±1.02）岁。
1.2 方法在患儿入院之际，空腹状态下，采集患儿2mL静脉血，用大约37℃的水对血液样本进行水浴，时间约为30min。
并采用离心设备提取血清，在60min之内完成检测。
若无法第一时间进行检测，应当在-20℃的环境中储存。
采用对应检测方式的试剂盒，对所有患儿分别采用明胶颗粒凝集法、酶联免疫吸附法和化学发光免疫法检测肺炎支原体[2]。
支原体系列产品介绍产品概述：Bioind 与Hebrew 大学Hebrew 医学院支原体实验室的Shlomo Rottem 教授协力开发了EZ-PCR 支原体检测试剂盒，该试剂盒采取了ＰＣＲ方法简化了细胞培养中支原体污染的检测过程。
试剂盒中包含了独特的反应混合液，以及ＰＣＲ中需要的所有试剂。
阳性对照，引物，聚合酶，氯化镁，不需要为ＰＣＲ预先准备什么。
最后ＰＣＲ产物跑完胶后，产物为一个270bp 的片段。
整个检测过程大概耗时５个小时。
引物设计是针对污染细胞的多种支原体，经试验验证了，不会与动物或细菌的ＤＮＡ反应。
实验过程：1. 检测样品准备：加0.5-1.0ml 细胞培养上清液至2ml 离心管中。
短时间以250g 离心样品以沉积细胞碎片。
将上清液移入无菌离心管以15000-20000g 速度离心10分钟以沉淀支原体。
小心地倒出上清液，保留沉淀（并不能总被看到）。
重新用50ul 缓冲液混合彻底。
加热到95 ℃持续3分钟。
待检样品可储存再-20 ℃留待以后使用。
2. PCR 扩增3. 凝胶电泳分析扩增后的产品：4. 阳性对照：通过使用1ul 的阳性对照模板作为检测样品，PCR 的效率可被监测到。
使用带有引物的阳性对照的PCR 产物大小为270个碱基对。
针对客户群体：侧重培养细胞的科研客户群体，不用于临床检验。
产品名称：EZ-PCR 支原体检测试剂盒目录号：20-700-10/20规格：10次/20次保存温度：-20℃保质期：36个月产品名称：BIOMYC-1抗生素溶液目录号：03-036-1D/C/B规格：10ml/20ml/100ml保存温度：-20℃保质期：18个月产品名称：BIOMYC-2抗生素溶液 目录号：03-037-1D/C/B 规格：10ml/20ml/100ml 保存温度：-20℃ 保质期：18个月产品概述：BIOMYC-1基于抗生素太妙菌素，由真菌pleurotus mutilus 产生。
盘点各国药典中的『支原体NAT检测法』，德国MB支原体检测助力科研近年来，随着生物医药领域的迅猛发展，细胞治疗等项目成为了生物医药领域的热点。
与此同时，各国法规和相关机构也在逐步加强对生物制品安全性和可靠性的监管。
其中一个关键问题是“如何确保生物制品在生产过程中没有支原体污染”。
针对涉及细胞培养的生物制品工艺过程，各国法规均相关的检测要求。
传统的培养法和指示细胞法是各国《药典》中都认可的支原体检测方法。
但是这两种相对“古早”的检测手段，有难以避免的缺点：培养法检测周期长、指示细胞法灵敏度低。
导致生物医药相关企业，在生产或产品放行过程中，出现周期拉长的情况。
行业内部对支原体检测时效性和灵敏度要求越来越高，因此NAT方法从众多支原体检测方法中脱颖而出。
目前《欧洲药典》（EP）<2.6.7>，《日本药典》（JP）以及《美国药典》（USP）<63>都已收录NAT方法作为支原体检测方法，但需要对该方法进行方法学验证，与传统方法进行对比，对比项目包括特异性、检测灵敏度等指标，要求NAT法结果不低于传统方法，才可以使用。
2020版《中国药》典（ChP）虽然并未收录NAT法作为支原体检测方法，但其中也提到了“也可采用经国家药品检定机构认可的其他方法”。
不同药典在特异性（Specificity）、检测限（Detection Limit）和耐用性（Robustness）三方面进行了要求。
特异性特异性指在其他成分（如杂质、降解产物、辅料等）可能存在下，采用的检测和分析方法能正确测定出待检物种的能力。
《欧洲药典》中提到，“需要在验证中关注与系统发育关系比较近的其他细菌种属之间的交叉反应，如革兰氏阳性菌包括梭菌属Clostridium、乳杆菌属Lactobacillus和链球菌属Streptococcus。
”检测限检测限是指样品中被测物能被检测出的限度。
对需要进行检测限确认的支原体类型，试剂盒厂家需尽可能多的覆盖法规药典中要求的支原体类型。
细胞培养支原体检测方法1. 引言细胞培养支原体是一种能够感染人类和动物细胞的微生物，它在人类和动物的健康中起着重要的作用。
因此，准确、快速地检测细胞培养支原体对于疾病的预防和控制至关重要。
本文将介绍几种常用的细胞培养支原体检测方法，并对它们的优缺点进行比较。
2. PCR方法PCR（聚合酶链反应）是一种常用的分子生物学技术，可以在短时间内扩增目标DNA序列。
在细胞培养支原体检测中，PCR方法可以通过扩增支原体DNA片段来确认其存在。
PCR方法具有高度敏感性和特异性，并且能够快速得到结果。
3. 免疫荧光染色法免疫荧光染色法是通过将特异性抗体与荧光染料结合来检测特定抗原或微生物。
在细胞培养支原体检测中，可以使用针对支原体表面抗原的抗体进行标记，并通过显微镜观察荧光信号来确认其存在。
该方法具有高度特异性和灵敏性，能够准确地检测支原体。
4. 细胞培养法细胞培养法是一种直接检测细胞培养支原体的方法。
首先，将待检样品接种到细胞培养物中，然后观察细胞的形态和生长情况。
如果存在支原体感染，细胞将出现形态改变和生长异常。
这种方法可以直接观察到感染情况，并且可以进行进一步的分离和鉴定。
5. 电子显微镜法电子显微镜法是一种高分辨率的显微镜技术，可以直接观察到微生物的形态和结构。
在细胞培养支原体检测中，可以使用电子显微镜来观察样品中是否存在支原体，并进一步确定其种类和数量。
这种方法具有高度准确性，但需要专业设备和技术。
6. 蛋白质芯片技术蛋白质芯片技术是一种高通量分析技术，可以同时检测多个蛋白质或抗原。
在细胞培养支原体检测中，可以使用蛋白质芯片来检测支原体相关的蛋白质或抗原。
该方法具有高度灵敏性和特异性，能够快速筛查大量样品。
7. 结论细胞培养支原体检测方法的选择应根据具体需求和实际情况来决定。
PCR方法具有高度敏感性和特异性，适用于快速筛查大量样品；免疫荧光染色法具有高度特异性和灵敏性，适用于准确检测支原体；细胞培养法可以直接观察感染情况，并进行进一步的分离和鉴定；电子显微镜法可以直接观察支原体的形态和结构，具有高度准确性；蛋白质芯片技术可以快速筛查大量样品。
检测你的细胞是否有支原体污染告诉你们这一桌年夜饭都是我做的哦（得意脸）。
一般实验做的好的人，做饭也不会太差。
今年跟大家分享的最后一个帖子就是怎么检测细胞支原体污染。
支原体感染的细胞样子在细胞培养过程中支原体污染经常出现且不易消除，95%以上是由口腔支原体造成（所以细胞培养戴口罩是很必要的，感觉你再怎么小心对待你的细胞都不为过）。
1.支原体污染初期, 在高倍显微镜下（400倍），虽然细胞无明显变化，但是在细胞膜周围或细胞间隙可以发现细小黑色颗粒。
2.细胞培养时间延长, 尽管培养液不浑浊（一般细菌污染培养液会变浑浊）, 但培养液pH值变化明显然后颜色变黄（虽然一般的细胞培养培养基也会变黄，但是速度要慢很多）。
3.在支原体感染较重的时候可以引起细胞变形。
4.如果你们实验室没有常规杀除支原体的操作，那么我相信只要你们在用细胞培养标本去送RNA-seq、LncRNA测序、CirRNA测序时，公司给出的结果都会有支原体污染。
下图是nature杂志给出的如果用细胞系做的实验，需要提供无支原体污染的证据（果子老师，重新ATCC购买细胞哦）Nature.jpg因此在细胞培养过程中进行支原体检测与防治十分必要。
今天先跟大家分享支原体怎么检测，也就是你怎么检测你的细胞有无支原体污染。
常见的支原体检测方法有直接培养法和间接法。
直接培养法这个方法其实对于不做支原体研究的人来说基本用不上，这里就不细讲。
如果需要可以留言交流。
间接法1. DNA荧光染色法在免疫荧光那一期没有具体介绍活细胞怎么做免疫荧光。
这里稍微讲讲活细胞怎么染核。
活细胞可以用Hoechst染色。
可将DNA标示，此种染色方式也可以用来辨识DNA，意思就是细胞内有DNA的都可以识别出来，在正常细胞中就是细胞核及线粒体可以被识别。
那支原体污染时的染色是什么样的呢？首先，支原体有自己的基因组，所以，如果有支原体污染的情况，会在细胞表面或者培养基中发现有小点或者碎片状的荧光，有时候会形成连续的一圈。
细胞培养支原体检测方法
细胞培养支原体检测方法是一种常用的病原体检测手段，适用于呼吸道感染等多种疾病的诊断。
支原体是一种细菌样微生物，常常引起上呼吸道或下呼吸道感染，严重的病例还可能引起心脏、肝、肺等多个器官的并发症。
因此，早期的支原体检测十分关键。
细胞培养支原体检测方法的基本原理是，在专门的培养基上，将样本中含有的支原体分离出来，并在细胞培养的条件下进行培养。
支原体培养成功后，可以进行进一步的鉴定和性状分析，以确认是否是病原体，从而确诊疾病。
具体操作步骤如下：
1. 采集样本：一般采用鼻咽分泌物、痰液、气道吸入物等样本。
采样前需要嘱患者停止使用抗生素等药物。
2. 均匀涂布样本：将样本均匀涂布在培养皿内的培养基上。
3. 培养：将培养皿置于恒温箱内，以满足支原体生长所需的条件。
培养周期一般需7~14天。
4. 观察：在培养周期内观察培养皿内是否出现生长典型的支原体菌落或支原体细胞，根据支原体繁殖的丰度和形态特点，进行初步判断。
此外，检测结果也可以通过核酸检测、荧光抗体法、酶联免疫吸附法等方法进行确认。
细胞培养支原体检测方法的优点是，能够在体外成功培养出支原体，从而进行进一步的鉴定和药敏试验，有助于找到最合适的治疗方案，并控制疾病传播。
但这种方法的缺点也很明显，例如需要较长的培养时间，操作难度较高，并且只能够检测到培养条件适宜的支原体菌种。
总之，对于呼吸道感染等疾病的治疗，及时发现和确诊病原体是十分重要的，其中细胞培养支原体检测方法是一种可靠的检测手段之
一，不仅可以促进疾病的早期诊断和治疗，而且还有助于控制疾病的传播。
各种细胞用快速支原体检测试剂盒和方法优缺点比较
（2016年10月16日）
具体选购步骤：
首先，您应该根据自己实验室的仪器情况，进行选择。
如果您实验室拥有发光检测仪（Luminometer）或者具有发光检测功能的多功能酶标仪以及-80 ℃低温冰箱，我们强烈建议您选购《发光法支原体检测试剂盒》。
《发光法支原体检测试剂盒》具有检测时间短、支原体检出率高、不会产生假阳性和假阴性、可以区分死活支原体等优点。
如果您的实验室没有上述条件，您只能选择《一步法恒温支原体检测试剂盒》或者《PCR法支原体检测试剂盒》。
其次，您可以根据检测时间长短、产品价格、支原体识别率、假阳性和假阴性概率、样品是否需要前处理等进行
综合选择。
最后，作为支原体检测领域的共识：单独使用目前市面上的任何一种支原体检测试剂盒，都无法做到100%正确，既不会漏检（假阴性），也不会多检（假阳性）。
严格的支原体检测，至少需要使用两种，最好使用三种不同原理的支原体检测方法同时进行检测，才能使检测结果接近100%正确。
如果您想得到100%正确的支原体检测结果（比如，开展细胞治疗的客户，进行干细胞培养的客户，生产血清、胰酶、培养液的客户，出售各种原代培养细胞系和肿瘤细胞系的客户等），任选上海易色《一步法恒温支原体检测试剂盒》、《PCR 法支原体检测试剂盒》和《发光法支原体检测试剂盒》中的两种进行检测，将会得到比较满意的结果，检测的正确率应该在99.9%以上。
如果同时使用这三种试剂盒进行检测，检测的正确率应该在99.99%以上。
