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药包材微生物限度检查操作规程药包材微生物限度检查操作规程一、目的与范围为保障药包材的卫生质量，规范药包材微生物限度检查操作，本操作规程适用于药包材微生物限度检查。
二、术语与定义1. 药包材：指用于药品包装的材料，如玻璃瓶、铝箔、袋子等。
2. 微生物限度：指药包材中的微生物污染的数量不能超过一定的限度。
3. 检查样品：指从药包材中取样检查的样品。
三、操作流程1. 准备工作1.1 检查人员应在工作前进行手部消毒，并佩戴洁净工作服、帽子和口罩。
1.2 检查仪器设备应进行清洁和消毒，确保无污染。
1.3 首次使用检查样品前，应进行无菌处理。
2. 取样2.1 根据药包材的特点，选择合适的取样方法，如剪刀剪取、刮取等。
2.2 取样时应注意避免污染，避免手部和工具的直接接触。
2.3 取样应充分代表药包材的不同部位和不同批次。
3. 样品处理3.1 将取样的药包材放入无菌容器中，避免接触外界环境。
3.2 添加合适的培养基，保证微生物生长。
3.3 药包材中的微生物落菌数较多时，可对样品进行稀释处理。
4. 培养和观察4.1 将培养基接种完毕后，密封容器，确保无菌。
4.2 将培养基置于适宜的温度和湿度条件下培养。
4.3 观察培养基是否出现细菌、真菌等微生物的生长。
5. 计数和判断5.1 培养基培养一定时间后，根据培养基上的菌落形态、颜色等特征进行初步判断。
5.2 将培养基进行放大培养，使用显微镜观察细菌、真菌的形态和结构，进行进一步鉴定。
5.3 使用计数板对菌落进行计数，记录每种微生物的数量。
5.4 根据国家规定的微生物限度标准，判断样品是否合格。
6. 结果记录和分析6.1 将检查结果记录在相应的记录表中，包括药包材名称、样品编号、微生物种类和数量等信息。
6.2 对合格的样品进行合格认证，对不合格的样品进行处理和记录。
6.3 对不合格的样品进行原因分析，查明污染源，并采取相应的措施进行处理和纠正。
四、操作注意事项1. 所有操作应在洁净室中进行，避免外界空气和微生物的污染。
微生物限度检测是对产品中微生物数量进行定量或定性检测的过程。
以下是一般的微生物限度检测操作步骤：
1. 准备工作：
-清洁和消毒实验室设备、试剂瓶和工作台等。
-准备所需的培养基、培养基平板和培养基管等。
2. 样品处理：
-取得待检样品，确保样品的采集和保存符合规范和要求。
-如果需要，将样品稀释到适当的浓度，以便在培养基上形成可数的菌落。
3. 培养基制备和接种：
-准备所需的培养基，并按照说明书的要求进行制备。
-将适量的培养基倒入无菌平板或管中，并在适当温度下固化。
-在培养基表面均匀涂布待检样品，或将待检样品滴于培养基管中。
4. 培养和孵育：
-将培养基平板放置在恒温培养箱中，按照规定的时间和温度进行培养。
-监控培养过程中的温度和湿度，确保适宜的条件。
5. 菌落计数和鉴定：
-培养结束后，观察培养基上的菌落情况。
-使用显微镜进行菌落计数和鉴定，根据形态、颜色、大小等特征确定菌落类型。
6. 结果分析和报告：
-根据菌落计数和鉴定结果，判断样品的微生物限度是否符合规定的标准。
-撰写检测报告，将结果详细记录并汇总，包括样品信息、检测方法、结果和结论等。
以上是一般微生物限度检测的操作步骤。
具体的操作可能会因实验室和产品类型而有所不同，需要根据相关标准和方法进行调整和执行。
在进行微生物限度检测时，应严格遵守实验室的操作规程和安全要求，确保检测结果的准确性和可靠性。
微生物限度检查操作规程《微生物限度检查操作规程》一、目的微生物限度检查是用于确认产品是否符合微生物水平要求的一种分析方法。
本操作规程的目的是制定微生物限度检查的操作步骤，确保检查结果的准确性和可靠性。
二、适用范围本操作规程适用于所有需要进行微生物限度检查的产品，包括食品、医药和化妆品等。
三、操作步骤1. 准备工作：清洁实验室工作台面和仪器设备，准备所需的培养基和试剂，并确保仪器设备的正常运转。
2. 取样：按照产品的取样标准，从不同批次或不同位置进行取样，并确保取样的代表性。
3. 样品制备：将取样的产品进行样品制备，包括稀释、搅拌和过滤等步骤，以便于后续的微生物检查。
4. 培养：将样品接种在适当的培养基上，根据不同的微生物种类和要求进行培养，并进行恒温培养一定时间。
5. 计数：在培养一定时间后，对培养基上的菌落进行计数，并按照标准方法进行结果的记录和确认。
6. 结果判定：将检查结果与产品的微生物限度标准进行比对，根据结果作出是否合格的判定。
7. 结果记录：将微生物限度检查的结果进行记录，包括样品信息、操作步骤、检查结果和判定等信息，并将结果报告给相关部门或供应商。
四、注意事项1. 操作人员应具备一定的微生物检测知识和操作技能，严格按照操作规程执行。
2. 实验室应保持清洁、卫生，并进行定期消毒和验证。
3. 实验室设备应定期维护和校准，确保设备的准确性和可靠性。
4. 所使用的培养基和试剂应符合相关标准，存放在干燥、阴凉、避光的环境中。
5. 检查结果应及时报告，并根据结果采取相应的控制措施。
以上就是《微生物限度检查操作规程》的主要内容，希望能够帮助大家更好地进行微生物限度检查，确保产品质量和安全。
微生物限度检查方法(薄膜过滤法)验证方案微生物限度检查方法(薄膜过滤法) 验证方案编码：表一、验证方案的起草与批准1.验证方案起草起草人：起草时期：年月日2.验证小组成员：3.验证方案审核4.验证方案批准批准人：批准日期：二、验证方案1.验证目的和原理验证目的为确认所采用的方法适合于该药品的细菌、霉菌、酵母菌数的测定，特制定本方案。
验证过程应严格按照本方案规定的内容进行，若因特殊原因确需要变更时，应报验证委员会批准。
原理通过比较试验4组中试验菌的恢复生长结果来评价整个检验方法的准确性、有效性和重现性。
2.验证方法步骤验证前的准备：进行微生物限度检查方法（薄膜过滤法）验证前，所有的平皿和稀释剂都应该严格按照相关的灭菌程序消毒，以确保其对试验的结果没有影响。
试验菌应包括G—、G+、酵母菌和霉菌类微生物以基本覆盖样品中可能存在的微生物。
验证试验的操作计划：用3个不同批号产品微生物限度检测方法进行平行试验，通过计算回收率来判断限度检查方法是否对产品有影响。
试验结果可接受标准：用标准菌株评价方法“”的微生物限度检查对检品中微生物的抑制性，试验结果应显示3次独立的平行试验中，稀释剂对照组的菌回收率应不小于70%，试验组回收率也不低于70%。
3.试验实施试验前的准备3.1.1主要仪器设备：恒温培养箱、生化培养箱、电子天平、高压蒸汽灭菌器、净化工作台。
3.1.2操作环境：操作间应该安装空气除菌过滤层装置。
环境洁净度不应低于10000级，局部洁净度为100级（或放置同等级净化工作台）。
操作间或净化工作台的洁净空气应该保持对环境形成正压，不低于。
3.1.3试验样品：批号：批号：批号：3.1.4培养基：3.1.5稀释液：无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液以上经115℃高压蒸汽灭菌30min。
3.1.6验证用微生物名称及其编号实验菌株的来源：编号由菌名首字母—传代代数—制备日期组成。
3.1.7器具：无菌薄膜过滤器：（孔径直径50mm）、无菌移液管（5ml）4.验证方法菌液的制备将大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌接种至10ml的无菌营养肉汤中在30～35℃下培养18～24小时，将白色念珠菌接种至改良马丁液体培养基中，在23～28℃下培养24～48小时。
沙丁胺醇气雾剂微生物限度检查的方法建立和验证第一步是建立微生物限度检查的方法。
下面是一个建立沙丁胺醇气雾剂微生物限度检查方法的步骤：1.样品准备：收集来自生产批次的沙丁胺醇气雾剂样品。
确保样品是符合产品规格的。
2.溶解剂准备：准备适合的溶解剂，例如缓冲盐水。
3.菌种准备：选择合适的微生物菌株，例如大肠杆菌、枯草杆菌等。
用适当的营养基培养菌株，并培养到适当的浓度。
4.制备稀释液：将沙丁胺醇气雾剂样品与溶解剂以一定比例混合，并制备一系列稀释液，以便在不同浓度下进行验证。
5.菌种接种：将适当浓度的菌种接种到不同浓度的沙丁胺醇气雾剂稀释液中。
6.培养：将接种液在适当的温度和时间下培养。
7.平板计数：将培养后的液体均匀分布在含有合适营养基的平板上，通过平板计数法计算浓度。
8.结果解释：根据浓度计算微生物限度。
完成了方法的建立后，下一步是对方法进行验证。
方法验证的目的是确保方法的准确性和可靠性，并提供支撑数据用于测试结果的解读和评估。
方法验证的主要内容包括准确性、精密度、重现性、灵敏度和选择性。
这些是方法验证的基本指标，可以通过以下几个步骤进行验证：1.准确性验证：使用已知浓度的微生物菌种进行验证，计算方法的回收率，确保方法对微生物的准确检测。
2.精密度验证：进行重复检测，计算方法的精密度和变异系数，确保方法的重复性和可再现性。
3.重现性验证：在不同实验室、不同分析者、不同操作条件下进行重复检测，评估方法在不同条件下的一致性和可重复性。
4.灵敏度验证：使用一系列已知浓度的微生物菌种进行验证，确定方法的灵敏度和检测限。
5.选择性验证：使用不同的微生物菌株和样品进行验证，评估方法的选择性。
完成方法的验证后，我们就可以使用该方法来进行沙丁胺醇气雾剂微生物限度检查。
使用验证后的方法可以确保检查结果的准确性和可靠性，保证产品的质量和安全。
微生物限度方法学验证微生物限度方法学验证是指通过一系列的实验和分析，确定某一产品或样品中所含微生物的数量和种类。
它是一种质量控制的重要手段，用于评估产品的微生物污染情况，确保产品符合安全要求。
微生物限度方法学验证通常包括以下几个步骤：1. 确定样品的限度：首先，需要确定限度的范围。
在国家标准和相关规范中，通常会对不同产品的微生物限度进行规定，根据产品的特性和用途，设定了不同的限度要求。
因此，在进行验证之前，需要先明确所要验证的产品的限度。
2. 提取样品：根据所要验证的产品特性，选择适当的方法提取样品。
提取样品的目的是将样品中的微生物完全释放出来，以便后续的实验分析。
3. 预培养或净化：在某些情况下，样品中的微生物数量非常少，无法直接进行分析。
此时，需要进行预培养或净化操作，增加微生物数量或减少其他杂质的干扰。
预培养可以使用适当的培养基，为微生物提供生长所需的营养物质和条件。
净化操作可以通过滤膜、离心等方法，将大部分的杂质去除。
4. 微生物分离和鉴定：将样品进行稀释处理，并分别均匀涂布在适当的培养基上。
在一定的时间和温度条件下，培养基上会出现不同形状和颜色的菌落。
通过观察菌落的特征、形态学和生理学测试，可以大致判断出菌落所属的微生物种类。
5. 统计分析：通过对微生物菌落进行计数，并根据所设定的限度要求进行统计分析。
常用的统计方法包括平板计数法、薄膜过滤法和浸入法等。
统计分析的结果可以得知样品中微生物的数量和种类，进而判断样品是否符合限度要求。
6. 结果判定：根据统计分析的结果，结合所设定的限度要求，判断样品是否合格。
如果样品中的微生物数量和种类在限度范围内，并且符合相关标准要求，那么样品可以被认为是合格的。
微生物限度方法学验证具有一定的复杂性和技术难度，需要操作人员具备一定的实验室技术和知识。
同时，验证过程中要严格控制实验条件，确保实验结果的准确性和可靠性。
此外，验证结果需要及时记录和整理，以便对产品质量的稳定性进行评估和改进。
药品微生物限度检查方法验证方案2014年1月15日方 案 审 批1方案起草2方案会签 3方案批准 4方案实施目录1. 概述2. 仪器设备3. 供试液的制备4. 细菌、霉菌及酵母菌计数5. 控制菌检查6. 验证品种项目表1微生物限度检查法概述微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法。
检查项目包括细菌数、真菌数、酵母菌数及控制菌检查。
微生物限度检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内进行。
检查全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染。
单向流空气区域、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。
除另有规定外，本检查法中细菌的培养温度为30～35℃，真菌、酵母菌的培养温度为25～28℃，控制菌培养温度为（36±1）℃。
检验结果的报告以1g、1ml、10g、10ml为单位报告。
检验量即一次试验所用的供试品。
除另有规定外，一般供试品的检验量为10g或10ml。
检验时，应从2个以上最小包装单位中抽取供试品，一般应随机抽取不少于检验用量（两个以上最小包装单位）的三倍量供试品。
2 仪器设备2.1 YXQ-LS-30SII型立式压力蒸汽灭菌器2.2 双人净化工作台2.3 150A型培养箱2.4 HH.B11-500型培养箱2.5 202-2型干燥箱2.6 微波炉2.7 架盘天平2.8 YJA-电动匀浆仪3 供试液的制备根据供试品的理化特征与生物学特征，可采取适宜的方法制备供试液。
供试液制备若需要用水浴加热时，温度不应超过45℃。
供试液从制备至加入检验用培养基，不得超过1小时。
液体供试品：取供试品10ml，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，作为1：10的供试液。
固体供试品：取供试品10g，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，作为1：10供试液。
药品微生物限度检查方法验证一般步骤1.样品及确定验证项目样品要求：不含菌或少量菌验证项目：根据药品用药途径、处方、制法确定。
细菌、霉菌及酵母菌计数验证（一般必作）；控制菌检查如为中药制剂必须查标准，根据用药途径、处方、制法确定控制菌检查项目。
特殊的如滴眼剂、用于烧伤、严重创伤等应根据制剂通则项下要求及微生物限度标准来确定。
2. 确定供试液制备方法3. 方法选择预试验（1）目的：确定样品对试验菌有无抑菌活性及计数验证各试验菌的回收试验方法。
（2）查资料，根据样品的功能、主治及所含成分等确定方法选择预试验方案。
（3）根据预试验结果确定各试验菌计数验证方法控制菌验证方法4. 验证试验：选择3个批号样品进行3次独立实验，证明方法的有效性；5. 据验证结果优化试验条件，建立微生物限度检查方法SOP。
6. 写出验证资料。
示教内容11.5.上午：菌液制备方法：一. 新鲜浓菌液制备（要求学员练习操作的内容）新鲜浓菌液接种：细菌大肠埃希菌[CMCC（B）44102]金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]枯草芽孢杆菌[CMCC（B）63501]生孢梭菌[CMCC（B）64941]（厌氧梭菌）铜绿假单胞菌[CMCC（B）10104]培养基：营养肉汤3-5ml、硫乙醇酸盐流体培养基3-5ml接种及培养：1.分别取各试验菌半个--1个菌落分别接种营养肉汤（充分研匀、摇匀），36±1℃培养16-18小时。
2.生孢梭菌新鲜培养物取0.1ml接种硫乙醇酸盐流体培养基（临用前排氧）36±1℃培养18-24小时。
霉菌及酵母菌白色念珠菌[CMCC（F）98001]、黑曲霉[CMCC（F）98003]培养基：改良马丁培养基3-5ml；改良马丁琼脂培养基斜面1.取白色念珠菌的菌落接种改良马丁培养基23-28℃培养24小时（可用36±1℃培养18-24）。
2.黑曲霉孢子悬液的制备：沾取黑曲霉孢子接种改良马丁琼脂培养（红字为示教内容基，培养5-7天待培养物黑色孢子生长（全部变黑，已制备好斜面培养物示教）加入5-10ml0.9%氯化钠溶液，小心振挡洗脱表面的黑色孢子1-2次，吸出洗脱液（注意不要触到菌丝体）即为孢子悬液。
二.菌液稀释计数方法细菌：大肠、金葡、枯草、铜绿稀释：营养肉汤作为稀释剂, 按10-2、10-4、10-5、10-6稀释级10-2 ：取新鲜浓菌液0.1ml→9.9ml充分打匀、10-4 ：取10-2 0.1ml→9.9ml充分打匀10-5：取10-4 1ml→9ml充分打匀，取0.2ml×2皿营养琼脂计数10-6：取10-51ml→9ml充分打匀取0.2ml×2皿营养琼脂计数生孢梭菌（厌氧梭菌）：硫乙醇酸盐流体培养基为稀释剂按上述步骤稀释至10-7。
10-5、10-6、10-7、分别用50ml硫乙醇酸盐流体培养基计数，各1-2支。
细菌计数：36±1℃培养24小时计数菌落数。
白色念珠菌： 0.9%氯化钠溶液作为稀释剂按上述步骤稀释至10-5、10-6计数。
黑曲霉浓菌悬液： 0.9%氯化钠溶液作为稀释剂按上述步骤稀释10-4、 10-5、10-6计数。
25-28℃培养24-36小时计数菌落数。
操作要点：1.新鲜浓菌液制备：挑取的菌落充分研匀并摇匀，注意各菌培养时间；2. 稀释菌液时每一步均应充分摇匀；3. 枯草芽孢杆菌新鲜浓菌液会形成膜或沉淀，稀释菌液时必须充分振摇后静置，取其无块状物的菌液；4. 黑曲霉接种时注意不能造成对接种环境的污染；点计菌落数时轻拿轻放以免造成计数误差。
11.5下午三.微生物限度检查方法选择预试验根据样品的溶解性、药效、可能存在的抑菌性等确定预试验方法。
计数（细菌、霉菌及酵母菌）验证一般选择顺序：平皿法、平皿稀释法、中和法+平皿稀释法、薄膜过滤法、离心500r/min3-5分钟上清液+平皿稀释法（细菌）、沉降+平皿稀释法（霉菌），离心沉淀集菌法（3000r/min20分钟）+平皿稀释法、离心500r/min3-5分钟上清液+薄膜过滤法（主要用于细菌计数验证）。
方法应在符合验证要求的前提下，考虑简便可行。
样品：感冒清热颗粒方法：平皿稀释法示教1. 供试液制备方法：样品10g+稀释剂90ml为1：10供试液。
（最低稀释级作为验证供试溶液）。
2.计数验证回收试验：试验组（各1-2皿）菌液组（各2皿）、供试品对照组（各2皿）↓↓↓1ml 0.5ml 0.2ml 0.1ml（+大0.5ml）大0.5ml 细 1ml 0.5ml 0.2ml 0.1ml 1ml 0.5ml 0.2ml 0.1ml（+金0.5ml）金0.5ml 霉 1ml 0.5ml1ml 0.5ml 0.2ml 0.1ml（+枯0.5ml）枯0.5ml1ml 0.5ml （+白0.5ml）白0.5ml1ml 0.5ml （+黑0.5ml）黑0.5ml（共55皿，按规定培养、计数菌落、计算回收率）3.根据回收试验结果确定敏感菌及各试验菌验证方法。
操作要点：1. 试验组：每皿加入1：10供试液应摇匀为均匀混悬液、量要准确、刻度吸管吸取方法一致。
平皿中1：10供试液与菌液尽可能不要接触，立即倾注培养基并充分混合均匀。
2. 计数验证加入50-100cfu 试验菌，菌液的体积以0.4ml-0.6ml为宜；既试验菌液应稀释为100-200cfu/ml ，放置2-8℃备用。
11.6上午验证试验：选择3个批号样品进行3次独立验证实验，证明方法的有效性；以敏感菌方法确定计数方法。
样品：感冒清热颗粒（不含原药材粉）根据预试验结果确定正式验证方法，预试验回收结果如下表：结果： 大肠埃希菌0.5ml 以下/皿（1ml 分注2个皿以上）回收均达到70%以上；枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌0.2ml 以下/皿（1ml 分注5个皿以上）回收均达到70%以上。
白色念珠菌、黑曲霉按平皿法回收均达到70%以上。
菌 种( 代)批 号 回收率% 1ml 0.5 ml 0.2 ml 0.1 ml 大肠埃希菌（4）（1：10）20070102 65 81 81 91 金黄色葡萄球菌（4）（1：10）20070102 0 35 89 94 枯草芽孢杆菌（4）（1：10）20070102 0 43 83 93 白色念珠菌（4）（1：10） 2007010286 90 / 黑曲霉 （4）（1：10）20070102 91 901.计数方法验证：平皿稀释法：大肠0.5ml/皿；金葡、枯草0.2ml/皿。
白念、黑曲霉1ml/皿。
（每个大组作1个批号样品计数方法验证、控制菌大肠埃希菌检查方法验证）试验前准备：各试验菌液（100-200cfu/ml）、1：10供试液、平皿、吸管等、BL增菌液试验组菌液组（各2皿）、供试品对照组↓↓↓0.5ml+大0.5ml（4皿）大0.5ml 细0.2ml（6-10皿）0.2ml+金0.5ml（6皿）金0.5ml0.2ml+枯0.5ml（6皿）枯0.5ml1ml +白0.5ml（2皿）白0.5ml 霉 1ml （2皿）1ml +黑0.5ml（2皿）黑0.5ml（共44皿，按规定培养、计数）（注：若所验证的计数方法成立，供试品对照组采用10个皿就同时完成该批号样品细菌计数测定）2.大肠埃希菌检查方法验证试验组阴性菌对照组供试品对照组↓↓↓BL 100ml BL 100ml BL 100ml10ml 1：10供试液 10ml 1：10供试液 10ml 1：10供试液+大肠10-100cfu +金葡10-100cfu阴性对照：BL 100ml+稀释剂10ml操作要点：1.2.同方法选择预试验3. 正式验证各试验菌验证方法采用预试验结果中回收率在70%以上的方法进行，最终以敏感菌方法确定计数方法；也可采用各菌的回收率均在70%以上的方法进行。
11.7上午离心沉淀集菌法、薄膜过滤法（反复使用集菌器）示教两种方法可应用于有抑菌活性的样品，或与其他方法的联用。
离心500r/min3-5分钟取上清液 + 平皿稀释法（细菌）、沉降+平皿稀释法（霉菌、酵母菌），离心沉淀集菌法（3000r/min20分钟）+平皿稀释法、离心500r/min3-5分钟上清液+薄膜过滤法（主要用于细菌计数验证）。
离心机、刻度离心管（10ml、成对平衡）、吸头、2ml刻度吸管离心500r/min3-5分钟、离心沉淀集菌法（3000r/min20分钟）的操作方法：500r/min3-5分钟（用于细菌检测）：取上清液的方法及要求（上清液不应少于8ml，否则供试液应适当稀释）；3000r/min20分钟弃去上清方法及要求（留管底约2ml，当离心沉淀物超过2ml时供试液应适当稀释）。
薄膜过滤法（反复使用集菌器）操作方法：1. 滤膜（不大于0.45um）的选择及准备：水溶性供试液→水性膜：滤膜用水浸泡15分钟后装膜，121℃20分钟灭菌，不烘干，短时间内使；过滤前用稀释液饱和滤膜。
有机溶剂供试液→有机滤膜：滤膜、滤器过滤前使充分干燥。
2.供试液、菌液的加入：将供试液或菌液加入一定量冲洗液中混匀后再滤过，以免供试液直接吸附在滤膜上不易冲洗或试验菌集中在局部不能分散均匀难以计数。
3.过滤、冲洗：注意供试液、冲洗液覆盖整个滤膜表面，以发挥滤膜的最大过滤效率，少量多次冲洗效果较好。
总过滤量不宜过大，以避免微生物受损伤，。
4.取膜、贴膜：尽量抽干、菌面朝上，贴紧无气泡。
