09-SOP-046-01 禽网状内皮组织增生症病毒检验操作规程
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禽网状内皮组织增殖症病原检测及其抗体检测分析胡杰;蒋维维;李毅【期刊名称】《上海畜牧兽医通讯》【年(卷),期】2017(000)005【摘要】运用PCR方法对8种日龄(0、21、35、75、126、168、245、315 d)的400份棉拭子、水样和环境样本以及12个批次的疫苗样本进行禽网状内皮组织增殖症病毒(REV)病原检测;用间接ELISA方法对2208份8个日龄的鸡血清样品进行REV抗体检测.结果发现,400份棉拭子、水样和环境样本R EV病原检测全部为阴性,16个批次的疫苗有2个批次疫苗检测R EV病原阳性.抗体分布特点是刚出壳时R EV抗体滴度主要集中在3000~10000,占81.88%,抗体阳性率为90.58%;21~35 d抗体下降明显,抗体阳性率仅为0~1.09%;70 d抗体为0的鸡群占50.72%,1077~1500滴度之间的血清占30.43%;126~315 d抗体滴度主要集中在12000以上,占53.26%~65.94%.【总页数】3页(P21-23)【作者】胡杰;蒋维维;李毅【作者单位】广西动物疫病预防控制中心南宁530001;广西鸿光农牧有限公司容县537500;广西鸿光农牧有限公司容县537500【正文语种】中文【相关文献】1.禽网状内皮组织增殖症研究进展 [J], 李井春2.应用改良阻断ELISA检测禽网状内皮组织增殖病血清抗体 [J], 杨汉春;高云3.禽血清网状内皮组织增殖病毒抗体的检测 [J], Sasa.,T;金光明4.基于p30-gp90融合蛋白的禽网状内皮组织增生症病毒抗体间接ELISA方法的建立 [J], 栾晓宁;郭龙宗;马广斌;李玉燕;王一新;巩新民5.郑州地区鸡场禽白血病和禽网状内皮组织增殖症感染情况检测与分析 [J], 陈海燕因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
禽网状内皮组织增生病病毒分子生物学特性与免疫抑制*马春霞,郑世民*(东北农业大学动物医学学院,黑龙江哈尔滨150030)摘要:禽网状内皮组织增生病病毒为反转录病毒科禽类C型反转录病毒。
禽网状内皮组织增生病病毒感染后主要引起感染家禽免疫功能抑制和慢性肿瘤,该病的控制对养禽业的健康发展和生物制品质量的提高具有重大影响。
文章对禽网状内皮组织增生病病毒的生物学特性与引起免疫抑制机制的研究新进展进行了简要综述。
关键词:禽网状内皮组织增生病病毒;生物学特性;免疫抑制禽网状内皮组织增生病是由反转录病毒科禽网状内皮组织增生病病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)引起的鸡、鸭、鹅、火鸡和其他禽类发生的一种病理综合征,是严重危害禽类的传染性肿瘤病之一,包括急性网状细胞肿瘤、矮小综合征、淋巴和其他组织的慢性肿瘤。
REV最早是1958年从患内脏型淋巴瘤的火鸡脾脏中分离,经过火鸡和鸡300次连续传代而获得的病毒。
由于该病毒所引起的肿瘤以网状内皮组织增生为特征,故称为“网状内皮组织增生病”,并将该病毒命名为REV-T,即T株[1]。
目前,美国、英格兰、以色列、澳大利亚、德国、南非和日本等国家已先后分离到不同毒株。
REVs主要包括REV-T株、鸡合胞体病毒(Chick syncytia virus,CS)、脾坏死病毒(Spleen necrosis virus,SNV)、鸭传染性贫血病毒(Duck infectious anaemia,DIA)及C45株(宇文延清等,2003年),不同毒株的抗原相关性已被确定,而且都能引起禽类免疫抑制。
禽网状内皮组织增生病在我国家禽中的感染率已达20%~30%[2],REV感染不仅能引起肿瘤,还可以引起感染鸡胸腺、法氏囊等免疫器官萎缩,使鸡的免疫功能下降、甚至丧失,导致免疫抑制,使感染鸡极易继发感染其他病毒病和细菌病。
研究表明[3],马立克病病毒(Marek’s disease virus,MDV)、鸡贫血病病毒(Chicken infectious anemia,CAV)和REV等免疫抑制性病毒在生产鸡群中的混合感染是导致当前养禽业生产性能下降的重要因素之一。
禽活疫苗中网状内皮组织增生症病毒污染的检测方法比较作者:***来源:《家禽科学》2021年第03期摘要:本研究随机抽取4种市售活疫苗,利用RT-PCR法、IFA检测法和SPF鸡检查法,检测活疫苗中的禽网状内皮组织增生症病毒的污染,比较三种检测方法的优劣以找到更好检测的方法。
試验结果表明,RT-PCR法虽然方便、快捷,但RT-PCR法检测会产生假阳性,影响结果的判定;SPF鸡检查法操作简单结果可靠,但该方法试验周期较长,成本高;IFA检测法与传统鸡检查法相比具有快速、准确、成本低的优点,利于推广应用。
关键词:IFA检测法;RT-PCR;SPF鸡检查法;禽网状内皮组织增生症病毒;家禽活疫苗禽网状内皮组织增生症(Reticuloendotheliosis,RE)是指由反转录病毒科网状内皮组织增生症病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)引起的禽类以急性网状细胞肿瘤、生长抑制综合征、淋巴组织及其他组织慢性肿瘤形成为特征的一群病理综合征[1-2]。
由于REV可以通过种蛋垂直传播,如果使用污染有REV的鸡胚生产的疫苗会造成疫苗中污染REV,这是REV独特的传播途径之一[3]。
REV是活疫苗污染中常见的一种外源病毒,当被污染的疫苗免疫鸡群后可引起雏鸡免疫抑制和矮小综合征,从而给家禽养殖业造成巨大经济损失。
国内外均有因REV污染疫苗引起严重损失的案例和报道[4-6]。
对禽源活疫苗进行REV污染检测,确保疫苗使用的有效性和安全性,是防止REV传播的重要手段。
目前对疫苗中REV污染的检测,我国应用方法主要包括细胞培养法和接种SPF鸡检查法,其中接种SPF鸡检查法被认为是经典的“金标准”,检测结果相对可靠容易判定,但缺点是检测周期长。
通常情况下,家禽活疫苗中REV等外源病毒的污染需要用非常灵敏、特异性强、检测周期短的方法来进行检测。
RT-PCR法、IFA检测法和SPF鸡检查法,目的就是为了找到更为合理的检测家禽活疫苗中禽网状内皮组织增生症病毒的检测方法。
2020年山东省种鸡场禽网状内皮组织增生症流行病学调查作者:李玉杰邢林林孙圣福曹振山徐聪徐鸿陈静来源:《家禽科学》2021年第09期摘要:为了解2020年山东省种鸡场禽网状内皮组织增生症流行情况,对我省内8个种鸡场内的种鸡进行随机抽样,利用商品化酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒对850份血清进行抗体的检测。
结果显示,REV抗体阳性率为1.65%。
因此,山东省内已出现禽网状内皮组织增殖症感染情况,且出现在种鸡场中,应引起足够的重视,制定REV净化方案,创建REV阴性场。
关键词:禽网状内皮组织增生症;流行病学调查;山东省;ELISA中图分类号:S858.31 文献标识码:B 文章编号:1673-1085(2021)9-0035-03禽网状内皮组织增殖症(Reticuloendotheliosis,RE)是由禽网状内皮组织增殖症病毒群(Reticuloe-ndotheliosis virus group,REV)引起禽类的一群病理综合征,包括免疫抑制、急性致死性网状内皮细胞瘤、矮小综合征及淋巴组织和其他组织形成的慢性肿瘤等。
是家禽的一种恶性疾病,最常影响鸡和火鸡,但也影响水禽,如鸭和鹅以及其他鸟类[1]。
该病同鸡马立克病、鸡淋巴细胞白血病类似,都能引发动物机体病毒性肿瘤病。
并且REV感染不仅能引起肿瘤,还可以引起免疫抑制,REV引起的免疫抑制会降低疫苗接种所达到的抗体水平,进而导致继发感染的易感性增高,给养禽业造成严重的经济损失。
另外,通过接种被REV污染的生物制品,也会导致该病在鸡群传播,并且在本病的传播上具有重要作用。
本研究利用商品化的REV抗体检测试剂盒,对省内8个种禽场的REV进行流行病学调查,统计分析REV的阳性率、感染程度等,探讨我省REV流行情况,为制定禽网状内皮组织增殖症的防治措施奠定基础。
1 材料与方法1.1 检测样品在2020年12月到2021年1月,我单位对山东省内分布于7个地市的8个种禽场进行鸡血清的采样,采取随机抽样的方法,抽样数量按照发现疫情公式计算(置信度95%,预期流行率3%),将采样数量按照存栏比例分配到不同群体和栋舍后随机抽样。
禽网状内皮组织增生病病毒感染对SPF鸡免疫器官和疫苗免疫效果的影响李凯;高立;祁小乐;高宏雷;高玉龙;王永强;王笑梅【期刊名称】《畜牧兽医学报》【年(卷),期】2016(047)002【摘要】禽网状内皮组织增生病(RE)是禽类的一种重要免疫抑制性疾病,目前对其造成免疫抑制的机制尚不十分清楚.本研究对实验室分离的一株REV流行毒株(HLJR0901株)感染1日龄SPF鸡后对感染鸡免疫器官和免疫功能造成的影响进行研究.结果表明,1日龄SPF鸡感染REV后出现生长迟缓,法氏囊、胸腺萎缩,脾肿大的症状.感染鸡出现法氏囊滤泡淋巴细胞大量坏死减少,间质结缔组织增生;胸腺出血,胸腺小体增多;脾小结明显萎缩,淋巴细胞减少等病理变化.荧光定量PCR检测发现,病毒在感染鸡法氏囊、胸腺和脾内均有分布,且持续存在.SPF鸡感染REV后出现严重的免疫抑制,使AIV灭活疫苗和NDV弱毒疫苗的免疫效果显著下降.本研究为阐明REV的免疫抑制机制提供了重要的实验数据.【总页数】6页(P340-345)【作者】李凯;高立;祁小乐;高宏雷;高玉龙;王永强;王笑梅【作者单位】中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,禽免疫抑制病研究团队,哈尔滨150001;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,禽免疫抑制病研究团队,哈尔滨150001;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,禽免疫抑制病研究团队,哈尔滨150001;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,禽免疫抑制病研究团队,哈尔滨150001;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,禽免疫抑制病研究团队,哈尔滨150001;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,禽免疫抑制病研究团队,哈尔滨150001;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,禽免疫抑制病研究团队,哈尔滨150001【正文语种】中文【中图分类】S852.659.3【相关文献】1.禽网状内皮组织增生病病毒感染SPF鸡对脾细胞中产生IFN-γ的影响 [J], 郑玉姝;赵宏坤;崔治中2.禽网状内皮组织增生病病毒感染SPF雏鸡血液淋巴细胞增殖功能及其细胞周期相关因子变化 [J], 王晓燕;刘文超;付礼胜;高雪丽;刘超男;吕晓萍;郑世民3.禽网状内皮组织增生病病毒感染对SPF雏鸡血液和局部淋巴组织CD4+/CD8+细胞及相关细胞因子表达的影响 [J], 刘丹华;郑世民;刘晓静;吕晓萍;高雪丽;刘超男4.禽网状内皮组织增生症病毒感染雏鸡血液T细胞数量和细胞因子含量变化 [J], 张国勍;边洋;高海婷;刘超男;高雪丽;吕晓萍;郑世民5.禽网状内皮组织增生病病毒和呼肠孤病毒感染SPF鸡对IFN-γ产生的影响 [J], 郑玉姝;赵宏坤;崔治中;赵朴;李宏梅;刘翠艳;李培庆因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
禽痘病毒活疫苗中网状内皮组织增生病病毒的分离鉴定及其序列比较王景艳;李中明;赵鹏;陈浩;崔治中【期刊名称】《中国动物传染病学报》【年(卷),期】2010(018)001【摘要】为了从怀疑污染禽网状内皮组织增生病病毒(Reticuloendotheliosisvirus,REV)的禽痘病毒(Fowl pox virus,FPV)活疫苗中分离病毒,将市场上购买的某些厂家的禽痘弱毒疫苗接种7日龄SPF雏鸡.在5d后采其抗凝血浆接种鸡胚成纤维细胞(chicken embryo fibroblast,CEF),在连续传2代后,用REV特异性单抗做间接免疲荧光试验,确5AREV感染,命名为JS0809.提取感染细胞的DNA,采用PCR扩增env基因.测序分析表明,该毒株的env基因开放阅读框同大部分REV毒株一致,为1761 bp.JS0809的囊膜蛋白基因(envelope protein gene,env)与国内已发表株的同源性高达96.0%~99.%.相对而言,它与早年分离到的毒株的同源性只有96%~97.3%,但与近几年的分离珠的同源性则均高达99.5%~99.8%.它与整合进FPV野毒株中的全基因组REV的env基因同源性很高为99.8%,而与整合进FPV疫苗株中全基因组REV的env基因同源性较低仅为97.3%.本研究证实了在我国生产的某些FPV疫苗中存在REV污染,所污染的REV的env基因更接近最近的流行野毒,这是国内第一次报道从禽痘弱毒疫苗中分离到REV活毒.【总页数】6页(P35-40)【作者】王景艳;李中明;赵鹏;陈浩;崔治中【作者单位】山东农业大学动物科技学院,泰安,271018;山东农业大学动物科技学院,泰安,271018;山东农业大学动物科技学院,泰安,271018;山东农业大学动物科技学院,泰安,271018;山东农业大学动物科技学院,泰安,271018【正文语种】中文【中图分类】S858.326.593;Q7【相关文献】1.含有禽网状内皮组织增生病病毒基因组片段的天然重组禽痘病毒的研究 [J], 丁家波;崔治中;于立娟;孙淑红;姜世金2.寿光鸡中禽网状内皮组织增生病毒的分离鉴定及其env基因序列分析 [J], 王海燕;李志松;李志杰3.鸡马立克病活疫苗中污染禽网状内皮组织增生症病毒检测方法的建立 [J], 李启红;杨承槐;刘丹;夏业才;李慧姣;李俊平4.禽网状内皮组织增生症病毒的分离鉴定、全基因序列分析及致病性试验 [J], 王建丽;郭凯;刘正伟;刘郁夫;刘传高;赵大伟;李慧敏;董楠;陈瑞爱5.禽活疫苗中网状内皮组织增生症病毒污染的检测方法比较 [J], 李雪莲;张雪乾;单峰;刘雪慧;陈学杰;徐太辉;刘相娥因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
不同途径感染禽网状内皮组织增殖病病毒的动态监测徐凤霞;孙万里;张亚文;常爽;王一新;赵鹏【期刊名称】《中国兽医杂志》【年(卷),期】2024(60)4【摘要】为明确鸡群经不同途径感染禽网状内皮组织增殖病病毒(REV)的排毒动态,本试验通过设立无特定病原体(SPF)鸡胚6胚龄卵黄囊感染组、1日龄SPF鸡腹腔感染组以及对上述两组SPF鸡分别加入感染鸡的卵黄囊感染同居组和腹腔感染同居组,建立SPF鸡感染REV模型,同时设置空白对照组,在不同日龄记录各组鸡的体重和死亡情况,并综合运用反转录PCR(RT-PCR)、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和间接免疫荧光试验(IFA)3种检测方法对各感染组进行REV的动态监测。
结果显示:(1)与空白对照组相比,腹腔感染组和卵黄囊感染组SPF鸡体重增长在感染后第21~70天均受到显著抑制(P<0.05),卵黄囊感染组SPF鸡的死亡率在感染后第49和63天显著升高(P<0.05),腹腔感染组SPF鸡的死亡率在感染后第42天显著升高(P<0.05),卵黄囊感染组SPF鸡血浆中REV病毒载量在感染后第21天显著高于腹腔感染组(P<0.05);(2)卵黄囊感染组SPF鸡自出壳即可检测到病毒血症阳性,并在感染后第21天时达到排毒高峰,腹腔感染组SPF鸡在感染后第14天时达到排毒高峰;(3)卵黄囊感染同居组的10只SPF鸡在感染后第7天时即检测到2只鸡呈病毒血症阳性,腹腔感染同居组SPF鸡在感染后第21天时检测到1只鸡呈阳性;(4)3种检测方法中,RT-qPCR和IFA检出REV效果更好。
本试验通过分析不同途径感染REV后鸡群血浆中的带毒状态,为REV感染的科学防控和净化提供参考数据。
【总页数】7页(P11-17)【作者】徐凤霞;孙万里;张亚文;常爽;王一新;赵鹏【作者单位】山东农业大学动物科技学院【正文语种】中文【中图分类】S831【相关文献】1.鸡混合感染J亚群禽白血病病毒与禽网状内皮增殖症病毒的初步研究2.禽网状内皮组织增殖病病毒感染鸡的外周血白细胞动态变化3.SPF雏鸡人工感染禽网状内皮组织增殖病病毒后肝组织的超微结构观察4.clade 1.3 J亚群禽白血病病毒与Ⅱ型禽网状内皮组织增殖病病毒共感染的病原分离鉴定及其囊膜基因分析5.2021年北京市种鸡场禽网状内皮组织增殖病和禽白血病监测因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
1.目的
制定禽网状内皮组织增生症病毒检验操作规程,确保禽网状内皮组织增生症病毒检验操作正常进行。
2.适用范围
适用于禽源细胞、胚及用禽源细胞、胚生产的禽源制品的禽网状内皮组织增生症病毒检验,目前公司涉及产品有:
1.鸡胚细胞生产的种毒、活疫苗;
2.鸡胚生产的种毒、活疫苗;
3.定义和缩略词
CEF:鸡胚成纤维细胞
4.角色与职责
QC经理和主检人负责相关操作人员培训,确保操作按照规程进行。
5.健康与安全
无。
6.材料
CO2培养箱(设定温度37.0℃,设定二氧化碳浓度为5.0%)
电热恒温水浴锅(设定温度37.0℃)
倒置荧光显微镜(OLYMPUS)
37℃恒温培养箱
低温高速离心机(2~8℃)
海尔冰箱(2~8℃,-15℃以下)
FITC标记的兔抗鸡IgG(SIGMA)
无水甲醇(北京化工厂)
吐温-20(国药集团)
病毒特异性抗血清
禽网状内皮组织增生症病毒阳性种毒(中国兽医药品监察所)
禽网状内皮组织增生症病毒特异性抗体(中国兽医药品监察所)
100~1000μL单道移液器及配套枪头
20~200μL移液器及配套枪头
0.8μm、0.45μm、0.22μm、0.1μm滤芯
1.5mL离心管及离心管架,4.5mL离心管及离心管架
50~300μL移液器及配套枪头
10mL、5mL一次性吸管
10mL一次性试管
10mL一次性注射器
25cm2一次性细胞瓶
加样槽
500mL蓝盖玻璃瓶
电动移液枪
80~90%CEF单层
1倍M199
10倍M199
新生牛血清
青链霉素双抗(10万IU/mL)
无菌注射水
0.05%胰酶-EDTA(GIBCO或同等资质供货商)
7.程序
7.1.细胞传代
在收获禽白血病第1代细胞时,取0.6mL细胞液加入到含2mL M199营养液的4.5mL 离心管中,混合均匀。
取1个48孔细胞板,按下图进行标注。
写上样品名称(疫苗批号/REV/(-))、传代日期。
用1000µL移液器吸取样品按下图接种,每个样品接种4孔,0.5mL/孔。
置37℃ CO2培养箱内培养5天。
7.2.荧光抗体染色
7.2.1.REV特异性抗体准备
用10mL 一次性吸管吸取5mL PBS加入到一个洁净平皿中。
用50μL移液器吸取REV特异性抗体10μL加入到平皿中,轻轻摇动平皿并用移液器吹打,使其混合均匀。
7.2.2.固定
5天后,将细胞板取出,甩掉细胞板中的培养液,在卫生纸上轻轻拍干。
每孔加入500μL的PBS液,轻轻摇晃细胞板10s后,再将PBS液甩掉,尽量弃尽PBS液。
每孔加入300μL的冷甲醇(-15℃保存),置室温固定15min,弃去甲醇后,自然晾干5min。
7.2.3.加禽网状内皮组织增生症病毒特异性抗体
自然晾干后,每孔加入500μL的PBS液,轻轻摇晃细胞板10s后,再将PBS液甩掉,尽量弃尽PBS液。
每孔再加入100μL 500倍稀释的禽网状内皮组织增生症病毒特异性抗体。
置37℃恒温培养箱中作用1h。
7.2.4.洗涤
用移液枪吸取75μL的吐温-20加入到150mLPBS液中,配制成含有0.05%吐温-20的洗液。
弃去禽网状内皮组织增生症病毒特异性抗体。
用1000μL移液器每孔加入500μL吐温洗液,轻轻摇晃细胞板1min后将洗液弃去,按上述方法再洗涤2次。
按上述相同方法用PBS液洗涤2次。
7.2.5.荧光二抗准备
使用前配制荧光二抗。
用10mL 一次性吸管吸取5 mL PBS加入到一个洁净平皿中。
用50μL移液器吸取荧光二抗25μL加入到平皿中,轻轻摇动平皿并用移液器吹打,
使其混合均匀。
7.2.6.荧光二抗染色
每孔加入100μL 200倍稀释的FITC标记的兔抗鸡IgG(荧光二抗)。
置37℃恒温培养箱中作用1h。
7.2.7.洗涤
按7.2.4方法用吐温洗液洗涤3次,用PBS洗涤2次。
7.3.观察
按照《荧光显微镜使用操作规程》用蓝色激发光(λ=490 nm)观察。
被感染的CEF细胞呈现绿色荧光,有完整的细胞形态,周围未被感染的细胞不着色,视野发暗。
7.4.结果判定
当阳性对照接种的4个孔中全部出现特异性绿色荧光,阴性对照接种的4孔均未出现特异性绿色荧光时,检验结果成立。
被检样品接种的4个孔中,只要有1孔出现特异性绿色荧光,即判定该样品中REV阳性。
8.文件历史
第一版,生效日期:2014-10-29。