第9章 病毒的遗传分析

如果编码多肽链中某一氨基酸 的密码子突变为终止密码子，多肽 链合成到此便会中断，从而使多肽 链变短而失去活性。这种突变称为 无义突变（nonsense mutation）。 各种无义突变都是条件致死突变， 因为有相应的无义抑制基因（su＋） 。
这些sus突变型之所以在带有相 应的抑制基因宿主中可产生后代， 是因为翻译过程中，在终止密码子 处插入一个特定的氨基酸，防止在 终止密码子位置上提前终止。如琥 珀突变就有许多种抑制基因，各插 入某个氨基酸以防止提前终止（见 表2）。
表1 不同宿主菌中sus突变噬菌体的表型
噬菌体基因型
野生型 sus amb sus och sus op
宿主菌基因型
su+ su+ amb + + su+ och + + + su+ op + +
注：“+”：产生子代，“-”：不产生子代
根据在带有专一性抑制基因的宿主中 的非致死性，可以将sus突变分为3类：琥 珀突变（amber，amb）、赭石突变（ ochre，och）和乳白突变（opal，op）， 它们相应的密码子为UAG、UAA和UGA。这 些终止密码子不编码任何氨基酸，称为无 义密码子（nonsense codon），是蛋白质 合成的终止信号。
不同速溶性噬菌体的突变在表型上 不同，可分别写成ra－、rb－、rc－等，用 h＋rx－×h－rx＋获得的试验结果如下：
表3 h＋rx－×h－rx＋噬菌斑数目及重组值 每种基因型的%
杂交组合 h＋ra－×h－ra＋ h＋rb－×h－rb＋
hr
34 32
+ -
hr
42 56
- +
hr
12
+ +
hr
12
Benzer的重组测验
可用以下公式计算相邻不同位点的遗传距离：
2 rII重组噬菌体数 Rf 总噬菌体数
由于在E.coli B平板感染后得到的噬菌斑 数为群体总数，在E.coli K12 (λ )的噬菌斑 为基因内重组所得到的野生型的噬菌体数，所 以以上公式可以表示为：
2 在E.coliK( )上生长的噬菌斑数 Rf 在E.coliB上生长的噬菌斑数
二、基因内互补
通常同一顺反子内两个突变是不能互补的 ，但是也有一些例外。这种例外发生于同一基 因内两个不同位点突变致使同一种多肽转变成 两条分别在不同位点上发生变异的多肽链，而 后将这两条多肽构成双重杂合子，这两者配合 起来，有可能表现出不同程度酶活性部位的恢 复，这种现象称为基因内互补（ intragenic/intracistronic complementation），又称等位（基因）互补 （allelies complementation）。
- -
重组值 24%
5.9
6.4 12.30%
h＋rc－×h－rc＋
39
59
0.7
0.9
1.60%
每一杂交得到一连锁图：
ra
24.0
h
12.3
rb
h
1.6
rc
h
三种不同的重组值，表示三个r基因的 座位是不同的，所以有4种可能的连锁图： ra rb rc h
ra
ra ra
rb
h rc
rc h h rc rb rb
确定四个基因的排列顺序时，首先只 考虑rb，rc和h，进行rc－rb+×rc+rb－的杂 交，得到的重组值与rb-h间的距离进行比 较，若rc-rb＞12.3=rb-h，则h位于中间， 即排列顺序为rc-h-rb。 剩下的是ra在h的哪一边？答案是rarc-h-rb和rc-h-rb-ra都正确，因为T2噬菌体 的连锁图也是环状的。
h
rc
rb
图
ra T2的连锁图，只注明4个基因
三、λ 噬菌体的三点测交与作图 Kaiser在1955年最早进行了λ 噬菌体 的重组作图试验。他用紫外线照射处理得 到5个λ 噬菌体的突变系：
s 系：产生小噬菌斑 mi系：产生微小噬菌斑 c 系：产生完全清亮的噬菌斑 co1系：产生除中央一个环之外其余部分都 清亮的噬菌斑。 co2系：产生比co1更浓密的中央环噬菌斑。
表现型 ＋＋＋ s co1 mi s＋＋ ＋ co1 mi s co1 ＋ ＋＋ mi 数目 975 924 30 32 61 51 占总数比例/% 90.82 2.97 5.35 0.86 100 √ 3.83 √ √ √ 6.21 8.32 √ √ 重组值/% s-co1 co1-mi s-mi
2、噬菌斑形态和宿主范围的突变型
噬菌斑形态突变型：突变后有的是由于侵 染宿主细胞后溶菌速度的快慢而形成大小不同 的噬菌斑（plaque）。另一些则是由于被感染 细菌全部或是部分被杀死而形成清晰或混浊的 噬菌斑。 宿主范围的突变型：噬菌体感染细菌时， 首先吸附于细胞表面的专一受体上，这是由受 体的基因控制的，如果受体发生改变，有可能 使噬菌体不能附着，从而该噬菌体的宿主范围 就缩小，另外,噬菌体突变也可以扩大寄生范 围。
Benzer的互补试验： ①用两个不 同的rⅡ突变型 rⅡA和rⅡB同时 感染E.coli K12 (λ)，结果可以 互相弥补对方的 缺陷，共同在菌 体内增殖，引起 溶菌，释放原来 的两个突变型。
②用rⅡA中 的两个突变型 ，共感染或用 rⅡB中的两个 突变型共感染 E.coli K12 （λ ）菌株，都不 能互补，不产 生溶菌现象。
s ＋ mi
＋ co1 ＋ 合计
5
13 2091
从双交换的类型可知，这3个基因的 次序就是s－co1－mi。s与co1的图距应为 3.83cM；co1 与mi之间则为6.21cM；因为 有双交换的存在，s与mi之间的图距则为 8.32＋2×0.86＝10.04(cM)。 3个基因的遗传图： s co1 mi
② 噬菌体的基因重组发生在噬菌体的DNA 复制以后，因此从单个混合感染的细菌中可以 得到亲代噬菌体和重组噬菌体； ③ 噬菌体不同基因型之间可以发生多次 交换； ④ 在噬菌体中基因重组率可以随着宿主 细胞裂解时间的延长而增加。 因此噬菌体杂交时，应该注意： ① 控制每种亲代噬菌体基因型的投放量。 ② 控制允许发生复制和重组的时间。
第三节
噬菌体突变型的重组测验
一、Benzer的重组测验与基因的精细 结构分析 二、T2 突变型的两点测交与作图 三、λ 噬菌体的基因重组与作图
一、Benzer的重组测验与基因的精细 结构分析
1955年，Benzer ：噬菌体遗传区的精细结构 1、用T4的两种rⅡ突变体共感染E.coli B； 2、形成噬菌斑后收集溶菌液，将此溶菌液等分 成两份； 4、取一份溶菌液，再感染E.coli B；取另一份 溶菌液感染E.coli K(λ )。 5、观察每份溶菌液所产生的噬菌斑的数目。
Kaiser用s co1 mi×＋＋＋杂交，后 代有8种类型。病毒是单倍体，与二倍体 生物不同，亲本组合与重组交换的组合 可直接从后代中反映出来。8个类型中数 目最少的两种类型就是双交换的结果， 频率最高的两种是λ 噬菌体s co1 mi×＋＋＋杂交结果及重组值计算
二、病毒的基因组
根据病毒基因组的结构、以及其转录 mRNA、指导蛋白质合成与病毒复制表达 的特点，基本上可以将其分成6种类型： 双链(ds)DNA病毒基因组 单链(ss) DNA病毒基因组 正链(+) RNA病毒基因组 负链(-) RNA病毒基因组 双链(ds) RNA病毒基因组 反转录病毒基因组
3.83 6.21
虽然将真核生物中两点测交和三点 测交的基本原理和方法应用于噬菌体杂 交，但是两者在杂交机制上是完全不同 的： ①噬菌体在杂交中，每个亲代对子代 所提供的遗传贡献取决于感染细菌时每 种亲代噬菌体的相对数量。如基因型A与 基因型B的亲代比＝10：1，则产生重组 子代的数量A型常多于B型子代数。
r－：噬菌斑形态突变型，快速溶菌，产生大的有 明显界限的噬菌斑。 r+：噬菌斑形态为野生型，缓慢溶解产生界限不 清的小噬菌斑。 h+：能够溶解E.coliB品系，不能溶解E.coliB/2品系 h－：宿主范围突变型，既能溶解E.coliB品系也能 溶解E.coliB/2品系。
h－r+、 h+r－混合感染E.coli B ，子代噬菌体再感染E.coli B和 E.coli B/2，得到四种噬菌斑（透 明、小；半透明、大；半透明、小 ；透明、大）。子代的基因型分别 为h－r+、h+r－、h+r+、h－r－。
第九章 病毒的遗传分析
重点：顺反子的概念；噬菌体的重 组测验、互补测验和缺失作 图。 难点：噬菌体的互补测验和缺失作 图。
第一节 病毒的形态结构与基因组 一、病毒的形态结构 二、病毒的基因组
一、病毒的形态结构
病毒由蛋白质外壳包裹的DNA或RNA 组成。

病毒的分类 通常按宿主类型病毒分为： 1）噬菌体(phage)： 细菌病毒、真菌病毒 2）植物病毒(plant virus): 感染高等植物、藻类等真核生物的病毒 3）动物病毒： 昆虫病毒和脊椎动物病毒
2、温和噬菌体的增殖 其感染周期有两种途径：即裂解 途径和溶源途径，分别称为裂解周 期(lytic cycle)和溶源周期 (lysogenic cycle)。 用紫外线或化学物质如丝裂霉 素C诱导，温和噬菌体可从溶源周期 转变为裂解周期。
诱导
二、噬菌体的突变型
1、条件致死突变型 温度敏感突变（temperature sensitive mutation，ts），野生型噬 菌体能在很大的温度变化范围内感染宿 主并进行繁殖，而热敏感突变型通常在 30℃（许可条件）感染宿主进行繁殖， 但在40～42℃（限制条件）就是致死的 ，不能形成噬菌斑；冷敏感突变型在较 低温度下就致死。