HPLC法测定松针中二氢槲皮素含量

松针化学成分及含量测定研究进展发表时间：2017-02-08T14:03:30.103Z 来源：《医药前沿》2016年12月第36期作者：李风华[导读] 近年来，国内外学者通过现在技术发现：松针是松树主要药用部位。

（浙江省杭州市桐庐中医院浙江杭州 310015）【摘要】本文综述松针主要化学成分及其含量测定研究。

为松针进一步研究提供参考。

【关键词】松针；化学成分；含量测定【中图分类号】R927.2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）36-0379-03松针为松科(Pinaceae)松属(Pinus)植的针叶。

松针始载于《本草纲目》，药用价值悠久，味酸，苦涩，性温，无毒。

入心、脾、肝经。

用于祛风活血，明目，安神，解毒，杀虫止痒。

现代研究表明，松针提取物具有镇静、镇痛、抗炎、抗氧化、减缓衰老、抗疲劳、抗突变、降血糖、降压、抑菌等作用[1]。

对性功能减退、糖尿病、便秘、青年人的经常感冒、青春痘、过敏性鼻炎、肥胖等有特殊的疗效。

1.松针化学成分近年来，国内外学者通过现在技术发现：松针是松树主要药用部位，松针中含有萜类、黄酮、糖类、粗蛋白、氨基酸、甾醇、精油及微量元素等。

1.1 挥发油目前研究较多的是松针挥发油，其含量较高，具有特殊的香气，挥发油主要含有单萜和倍半萜，以及少量萜烯的醇、酯类化合物；单萜和倍半萜以α-蒎烯、β-蒎烯、月桂烯、β-丁香烯、柠檬烯、石竹烯等成分为主[2]。

其中β-石竹烯、α-蒎烯、β-蒎烯、α-石竹烯、柠檬烯、乙酸龙脑酯含量较高且对照品易得，可作为马尾松的特征组分。

1.2 莽草酸莽草酸(Shikimic acid)作为抗禽流感药物磷酸奥司米韦(商品名：达菲)的合成原料，自1885年首次分离出以来，对它的研究步伐就一直没有停止过。

张爱民[3]利用硅胶柱色谱分离纯化技术从马尾松针水煎液的甲醇部位分离得到莽草酸。

李宁等对7种松柏植物的莽草酸含量进行测定，结果发现以雪松（3.93%）含量最高[4]。

二氢槲皮素高效液相检测方法
1. 色谱条件
1.1. 色谱柱：ODS-2 C 18(250×4.6mm,5µm)
1.2. 流速：1.0ml/min
1.3. 检测波长：291nm
1.4. 进样量：10.0µL
1.5. 流动相：甲醇-0.1%磷酸水溶液(39:61)
1.6. 柱温：35.0℃
2. 溶液的制备
2.1. 对照品溶液的制备
精密称取二氢槲皮素2mg 于10ml 容量瓶中，用甲醇超声溶解，冷却至室温定容，摇匀即得。

（注：称量误差保证在±10%之内。

）
2.2. 供试品溶液的制备
精密称取本品粉末约5mg 于25ml 容量瓶中，用甲醇超声溶解，冷却至室温用甲醇稀释至刻度，摇匀。

用0.45μm 滤膜过滤即得。

3. 样品的测定
在上述条件下，待仪器基线平稳后，分别精密吸取对照品溶液10μl 和供试品溶液10μl 注入液相色谱仪进行测定，用外标一点法计算。

211122A W A C W C ⨯⨯⨯=
A 1：对照品峰面积
A 2：样品峰面积
W 1：对照品质量（mg ）
W 2：样品质量（mg ）
C 1：对照品含量
C 2：样品含量。

《落叶松木中二氢槲皮素提取纯化工艺研究》一、引言二氢槲皮素是一种具有广泛生物活性的天然化合物，其独特的化学结构及生理功能使其在医药、保健、化妆品等领域具有重要应用价值。

近年来，随着人们对天然产物的深入研究，从植物中提取纯化二氢槲皮素已成为研究热点。

落叶松木作为一种重要的林木资源，其富含二氢槲皮素，因此研究其提取纯化工艺具有重要意义。

本文将就落叶松木中二氢槲皮素的提取纯化工艺进行详细研究，以期为相关领域提供参考。

二、材料与方法1. 材料本实验所使用的落叶松木采自我国北方地区，经过粉碎、筛分后得到实验所需的原料。

二氢槲皮素标准品购自国内外知名供应商。

2. 方法（1）提取工艺：采用不同溶剂对落叶松木进行浸泡、渗漉等操作，比较不同溶剂对二氢槲皮素提取效果的影响，确定最佳提取工艺。

（2）纯化工艺：通过吸附、洗脱、结晶等方法对提取液进行纯化，比较不同纯化方法对二氢槲皮素纯度的影响，确定最佳纯化工艺。

（3）分析方法：采用紫外分光光度法、高效液相色谱法等方法对二氢槲皮素的含量及纯度进行测定。

三、结果与分析1. 提取工艺结果与分析通过比较不同溶剂对二氢槲皮素的提取效果，发现乙醇溶液对二氢槲皮素的提取效果最佳。

在适宜的浓度和浸泡时间条件下，二氢槲皮素的提取率可达到较高水平。

同时，通过对浸泡、渗漉等操作条件的优化，可进一步提高二氢槲皮素的提取率。

2. 纯化工艺结果与分析在纯化过程中，采用大孔吸附树脂、硅胶等吸附剂对提取液进行吸附、洗脱等操作。

通过对不同纯化方法的比较，发现结合大孔吸附树脂和硅胶的纯化方法对二氢槲皮素的纯度提高效果最佳。

在适宜的洗脱剂浓度和洗脱时间条件下，二氢槲皮素的纯度可达到较高水平。

同时，通过对结晶条件的优化，可进一步得到高纯度的二氢槲皮素。

3. 二氢槲皮素含量及纯度分析采用紫外分光光度法、高效液相色谱法等方法对二氢槲皮素的含量及纯度进行测定。

结果表明，经过优化后的提取纯化工艺，二氢槲皮素的含量及纯度均得到显著提高。

二氢槲皮素的提取及含量测定的研究进展
柳森;张卫鹏;付警辉;柴婧;郑毅男;刘文丛
【期刊名称】《吉林农业科技学院学报》
【年(卷),期】2012(021)002
【摘要】二氢槲皮素在自然界含量丰富，易获得，且药理活性丰富，可应用于多个行业，市场需求与价值较高。

本文从提取分离和含量测定两个方面对二氢槲皮素的研究进展进行了详细的概述，为今后对二氢槲皮素的研究提供参考依据。

【总页数】3页(P78-80)
【作者】柳森;张卫鹏;付警辉;柴婧;郑毅男;刘文丛
【作者单位】吉林农业大学中药材学院,长春130118;吉林农业大学中药材学院,长春130118;吉林农业大学中药材学院,长春130118;吉林农业大学中药材学院,长春130118;吉林农业大学中药材学院,长春130118;吉林农业大学中药材学院,长春130118
【正文语种】中文
【中图分类】TQ461
【相关文献】
1.响应面法优化酶辅助闪式提取二氢槲皮素工艺 [J], 柴婧;付警辉;张卫鹏;郑毅男;刘文丛
2.落叶松中二氢槲皮素提取工艺优化及其纯化的研究 [J], 张泽生;陈玥舟;王利婷
3.闪式辅助超声提取长白落叶松中二氢槲皮素的工艺研究 [J], 霍云博; 王露瑶; 刘怡辰; 吕萍
4.星点设计-效应面法优化二氢槲皮素提取工艺 [J], 逄弓一郎;卓小玉;刘玉婷;田明
5.二氢槲皮素提取方法的比较和优化 [J], 张宇;苏丹
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高效液相色谱法测定叶下珠中槲皮素的含量
高效液相色谱法（HPLC）是一种常用的分离和定量分析方法，可用于测定槲皮素在叶下珠中的含量。

以下是一种可能的测定方法：
1. 样品准备：将适量的叶下珠样品粉碎并通过筛网去除杂质。

2. 提取：将粉碎的样品加入适量的提取剂中，如乙醇或醋酸甲酯，并进行超声处理或搅拌提取一段时间。

3. 过滤：将提取液经过滤纸或微孔膜过滤，以去除悬浮物和杂质。

4. 色谱条件：
- 色谱柱：使用C18反相色谱柱，柱长为150 mm，内径为4.6 mm。

- 流动相：以甲醇和水为流动相，并逐渐调整它们的比例，以优化槲皮素的分离和检测。

- 流速：一般为1 mL/min。

- 检测波长：选择适当的波长进行检测，一般为254 nm。

5. 标准曲线制备：准备一系列不同浓度的槲皮素标准溶液，并注入色谱仪中进行分析。

使用标准溶液的峰面积和浓度之间建立标准曲线。

6. 叶下珠样品分析：取一定量的提取液注入色谱仪中进行分析。

通过标准曲线
可以计算出样品中槲皮素的含量。

需要注意的是，在进行分析之前，可以根据实际情况对方法进行优化和改进，以获得更准确和可靠的结果。

华西药学杂志W C J ・P S　2006,21(5):489～491比普通片的C max 降低、t m ax 有所延长,表明受试制剂具有缓释特征。

其余均无显著性差异,与文献报道相似[5,6],表明两种制剂生物等效。

运用W agner -Nels on 法也验证了受试缓释片具有体内外相关性。

试验期间,各受试者无因不良反应而终止试验,表明MH 缓释片在试验剂量下表现出良好的安全性。

实验建立的MH 缓释片人体内血药浓度测定方法,无干扰、灵敏度高、重复性好、专一性强、操作简便、成本较低,适用于临床血药浓度的测定和药物动力学的研究。

参考文献:[1]　中华人民共和国国家药典委员会.中国药典[S].二部.北京:化学工业出版社,2000.附录X I X B 193-197.[2]　Kah Hay Yuen,Kok Khiang Peh .Si m p le high -perfomance liq 2uid chr omart ography method for the deter m inati on of metf or m in in human p las ma[J ].J Che motherapy B ,1998,(710):243-246.[3]　Cheng CL,Chou CH.Dete m inati on of metf or m in in human p las maby high -perf omance liquid chr omart ography with s pectr ophot o 2meric detecti on[J ].J Che motherapy B,2001,(762):51-58.[4]　余继英,李章万.RP -HP LC 测定盐酸二甲双胍的血药浓度[J ].华西药学杂志,2002,17(5):343-344.[5]　何林,余继英,吴正中.两种盐酸二甲双胍制剂的吸收比较[J ].华西药学杂志,2004,19(3):179-181.[6]　陈伟力,李雪宁,徐红蓉,等.国产与进口二甲双胍片剂人体生物生物等效性[J ].中国临床药学杂志,2003,12(1):19-21.收稿日期:2005-07作者简介:李剑惠,女,讲师,从事药物制剂及分析。

HPLC法测定夜关门药材中槲皮素的含量
杨莲芳
【期刊名称】《陕西中医》
【年(卷),期】2015(000)010
【摘要】目的：建立夜关门药材中槲皮素含量的测定方法。

方法：采用HPLC法，色谱柱：AgilentHC‐C18（150mm×4．6mm，5μm）；流动相：甲醇‐0．3％
磷酸水溶液（55∶45）；检测波长370nm；流速：1mL·min‐1。

结果：槲皮素在1．84μg·mL‐1～18．4μg·mL‐1范围内与峰面积呈良好线性关系（r＝0．9992）；平均回收率为97．7％，RSD＝1．99％。

结论：建立的方法灵敏、准确、重现性好，可有效控制夜关门药材的质量。

【总页数】3页(P1423-1425)
【作者】杨莲芳
【作者单位】陕西省中医医院西安710003
【正文语种】中文
【中图分类】R965
【相关文献】
1.HPLC法测定蒙药材胡枝子不同部位中槲皮素的含量 [J], 郑敏;陈广荣;张栓珍;刘静
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晓幸
3.苗药夜关门不同部位中槲皮素的含量测定及HPLC指纹图谱 [J], 冯华;刘英波;刘
亮;潘年松;周德权
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反相HPLC实验测定热淋清试剂中槲皮素的含量刘东【摘要】目的:建立热淋清软胶囊中槲皮素HPLC测定方法.方法:色谱条件:KromasilC18(250mm ×4.6mm,5μm),紫外检测器,检测波长360nm;甲醇-0.4%磷酸(50:50)为流动相.结果:槲皮素在0.208～4.16μg范围内线性关系良好;回收率103.2%,RSD 1.64%.结论:方法准确,精密,重现性好.【期刊名称】《内蒙古石油化工》【年(卷),期】2011(037)021【总页数】2页(P15-16)【关键词】高效液相色谱分分析;槲皮素;色谱条件;甲醇;盐酸;含量测定【作者】刘东【作者单位】锡林郭勒职业学院,内蒙古,锡林浩特,026000【正文语种】中文【中图分类】O657.7+2高效液相色谱分析法又称高压、高速或现代柱液相色谱分析法。

此法在接近室温的条件下操作(温度低更有利于色谱分离),最高不超过流动相的沸点,只要被分析物在流动相中有一定的溶解度,便可实现分离分析。

所以HPLC尤其适合于那些沸点高、分子量大、极性强、对热稳定差的物质(如生化物质、药物、离子型化合物及天然化合物)的分析。

本文采用反相高效液相法测定热淋清软胶囊中槲皮素的含量,方法简便快捷,结果准确,精密度好,可用于热淋清软胶囊的质量控制。

高效液相色谱仪(日本岛津);N 2000色谱工作站;KQ-250型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);TGL-16G高速台式离心机(上海安亭科学仪器厂);FA 1004电子分析天平(上海精密仪器公司天平仪器厂);TU-1800S紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限公司)。

槲皮素对照品(批号:100081-200406,由中国药品生物制品检定所提供);色谱纯甲醇(北京化学试剂公司);水为纯净水;其它试剂均为分析纯。

热淋清软胶囊。

2.1 色谱条件K rom asil C 18(5μm,200mm×4.6mm),甲醇-0.4%磷酸(50∶50)为流动相;检测波长为360nm;柱温30℃。

HPLC法测定瓦松栓中槲皮素和山柰素的含量孙纪发;王云玲;李具伟【摘要】目的建立一种高效液相色谱法测定瓦松栓中槲皮素和山柰素含量的方法.方法采用高效液相色谱法,用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相A为乙腈,流动相B为1.0％盐酸溶液；检测波长:360 nm.结果在该色谱条件下,槲皮素、山柰素的线性范围分别为0.006 ～0.024 mg·mL-1(r=0.990 8)、0.012～0.047 mg·mL-1(r =0.9952),平均回收率分别为99.91％、101.2％.结论该方法简单准确,重现性好,可作为瓦松栓中槲皮素和山柰素的含量测定方法.【期刊名称】《药学研究》【年(卷),期】2011(030)012【总页数】2页(P703-704)【关键词】瓦松栓;高效液相色谱法;槲皮素;山柰素【作者】孙纪发;王云玲;李具伟【作者单位】瑞阳制药有限公司,山东淄博256100;瑞阳制药有限公司,山东淄博256100;瑞阳制药有限公司,山东淄博256100【正文语种】中文【中图分类】R927.2瓦松的功能主治为凉血止血，解毒，敛疮［1］，用于血痢，便血，痔血，疮口久不愈合，在中国民间广泛应用于多种疾病.瓦松栓是由瓦松经提取制成的纯中药栓剂，具有较强的清热利湿、活血化瘀、去腐生肌、抗病毒等作用，用于治疗细菌或病毒所引起的宫颈糜烂，效果显著［2］.槲皮素和山柰素为瓦松栓的主要成分.为了更好地控制制剂质量，本文采用高效液相色谱法建立了瓦松栓的含量测定方法.该方法简单、重现性好、准确度高，可很好的控制本制剂的质量.1 仪器与试药1.1 仪器 SHIMADZU LC－20ATVP高效液相色谱仪，SHIMADZU SPD－20AVP 检测器、METTLER AE240型电子天平.1.2 试药对照品槲皮素(批号:100081－200406，含量97.3%，中国药品生物制品检定所).对照品山柰素(批号:110861－200304，含量100%，中国药品生物制品检定所);乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯.1.3 供试品来源:瑞阳制药有限公司.2 方法与结果［1］2.1 色谱条件色谱柱:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;流动相:乙腈－1.0%盐酸酸溶液(47∶53);检测波长:360 nm;流速:1.0 mL·min－1;进样量:20 μL.2.2 对照品溶液的制备精密称取槲皮素、山柰素对照品适量，加甲醇制成每1mL 含槲皮素约12 μg、山柰素约24 μg的混合溶液，即得，色谱图见图1.2.3 供试品溶液的制备称取瓦松栓样品4～6 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入乙腈－25%盐酸溶液(36∶14)混合溶液50 mL，密塞，称定重量，置水浴中回流1 h，立即冷却，再称定重量，用乙腈补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得，色谱图见图2.图1 对照品色谱图1.槲皮素，2.山柰素图2 样品色谱图1.槲皮素，2.山柰素2.4 线性关系考察精密称取槲皮素与山柰素对照品适量制成含槲皮素 245 μg·mL －1与山柰素 468.6 μg·mL－1的溶液，精密量取以上溶液各 10 mL、7.5 mL、5mL、3.75 mL、2.5 mL，分别置100 mL量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，制成溶液(1)、(2)、(3)、(4)、(5)，精密量取以上溶液按色谱条件分别测定.以峰面积对相应浓度进行回归处理，得回归方程为:Y槲皮素 =83 691X+93 060，(r=0.990 8);Y山柰素 =86 032X+170 741，(r=0.995 2).结果，槲皮素和山柰素分别在 0.006～0.024 mg·mL－1、0.012 ～0.047 mg·mL－1呈良好的线性关系.2.5 精密度试验精密量取上述对照品溶液进行实验，重复进样5次，每次进样20 μL，按上述色谱条件测定，槲皮素和山柰素的平均峰面积分别为:644 356、1 336 897.RSD分别为:0.53%、0.94%，n=5，结果表明，本方法精密度良好.2.6 重复性试验取同一批样品(08082304批)，按2.3项下的方法制备5份平行样品，分别测定，槲皮素的平均含量为0.009 505%，RSD为0.34%;山柰素的平均含量为0.016 48%，RSD为0.55%，表明重复性良好.2.7 稳定性试验取同一批号的供试品溶液，分别于0、1、2、4、6 h测定，结果槲皮素和山柰素含量的 RSD分别为0.76% 和0.85%，n=5，表明供试品溶液在6 h内稳定性良好.2.8 加样回收率试验取已知槲皮素含量(0.011 18%)与山柰素含量(0.022 51%)的样品6份，每份约4～6 g，分别精密加入槲皮素对照品溶液(50 μg·mL－1)与山奈素对照品溶液(110 μg·mL－1)各2 mL，按2.3 项下方法制备供试品溶液.摇匀，测定，槲皮素的平均回收率为99.91%，RSD为0.67%，山柰素的平均回收率为101.2%，RSD为1.00%.结果见表1.表1 加样回收率实验(%)槲皮素回收率(%)100.1 100.7 98.99 99.19 100.2 100.3 99.91 0编号 1 2 3 4 5 6x RSD.00.67山柰素回收率(%)100.7 99.51 100.2 99.23 99.51 101.9 101.2 12.9 样品测定与结果分别按照2.2、2.3项下操作制备供试品溶液与对照品溶液，分别精密量取20 μL，测定峰面积，计算.结果见表2.表2 瓦松栓样品中槲皮素与山柰素的含量测定批号槲皮素含量(%)山柰素含量(%)总含量(%)每粒含槲皮素和山柰素总量(μg)08010804 0.008 696 0.016 21 0.024 91 1 993 08032805 0.008 180 0.016 41 0.024 59 1 968 08061904 0.005 021 0.013 21 0.018 23 1 458 08080404 0.007 853 0.012 51 0.020 36 1 629 08082304 0.011 18 0.022 51 0.033 69 2 6963 讨论3.1 曾对瓦松栓供试品溶液制备的酸量进行选择分别以乙腈－25%盐酸(45∶5)、(40∶10)、(35∶15)、(30∶20)四种混合液进行筛选优化，最后确定以乙腈－25%盐酸(36∶14)制备供试品溶液.3.2 本方法简单准确，重现性好，可以作为瓦松栓中槲皮素和山柰素的含量测定方法.参考文献:［1］国家药典委员会，中华人民共和国药典2010年版(一部)［S］.北京:中国医药科技出版社，2010:1.［2］孙翠清，朱洲华.瓦松栓与妇炎宁治疗慢性宫颈炎的临床疗效比较［J］.内蒙古中医药，2009，14(5):84 －85.。

几种中草药中槲皮素含量的hplc法测定汇编槲皮素是一种天然的黄酮类化合物，广泛存在于植物中。

它具有多种生物活性，如抗氧化、抗癌、抗炎和抗菌等功效。

因此，槲皮素被广泛关注和研究，并被用于制备药物和保健品。

在中草药中，许多种草药中都含有槲皮素。

本文将介绍几种检测中草药中槲皮素含量的HPLC法。

样品制备：样品准备是分析中草药中槲皮素含量的重要步骤。

一般来说，样品制备可以分为两个步骤：提取和净化。

1. 提取提取是将样品中的槲皮素从中草药中取出的过程。

经典的提取方法是加热回流提取法。

其步骤如下：1）将细碎的中草药粉末加入瓶中；2）加入适量的乙醇水溶液（80%）；3）用热水浴加热回流提取2小时；4）离心离去沉淀；5）将过滤液蒸发至干燥并取残渣。

2. 净化净化是将提取出的槲皮素从其他杂质中分离出来的过程。

常用的净化方法是硅胶柱层析法。

其步骤如下：1）将硅胶填充到柱子中；2）将提取后的样品液经过过滤后加入硅胶柱中；3）用纯水洗涤硅胶柱；4）用70%乙醇水溶液洗脱槲皮素；仪器和试剂：1）高效液相色谱仪（HPLC）2）固定相柱：C18列3）检测波长：278 nm4）色谱柱温度：20℃1）槲皮素标准品2）乙腈3）纯水4）甲酸方法：首先，制备一系列不同浓度的槲皮素标准溶液，以建立标准曲线。

然后进行样品测试。

1. 准备0.1 mg/mL 槲皮素标准溶液。

将槲皮素标准品称取10 mg，用100 mL 乙腈溶解，振荡均匀。

然后，用纯水稀释到100 mL。

这样得到0.1 mg/mL的槲皮素标准溶液。

2. 用硅胶柱层析法分离出的样品中槲皮素的含量。

3. 将0.1 mg/mL的槲皮素标准溶液稀释成不同浓度的溶液，制备标准曲线。

4. HPLC法检测槲皮素含量。

将样品液注入HPLC仪器，使用C18固定相柱进行分离。

使用甲酸与乙腈混合为流动相。

以线性梯度模式进行方法运行，以检测槲皮素含量。

结果分析：在已经制备好的标准曲线的基础上，计算出样品液中槲皮素的含量，以得到槲皮素含量的浓度值。