葡萄糖测定的常规方法

测定葡萄糖氧化酶活力的一种简便方法

周建芹 , 陈韶华 , 王剑文

( 1. 苏州大学 医学部药学院 , 江苏 苏州 215123; 2. 苏州大学 医学部实验中心 , 江苏 苏州 215123 )

摘 : 利用靛蓝胭脂红褪色分光光度法测定葡萄糖氧化酶催化葡萄糖溶液产生的过氧化氢浓度 , 经过标 要 准曲线转换得到葡萄糖氧化酶的活力 。研究了缓冲液 pH 值 、水浴温度 、靛蓝胭脂红用量等对葡萄糖氧化 酶活力测定的影响 。结果表明 : 利用靛蓝胭脂红褪色分光光度法测定葡萄糖氧化酶活力时 ,

缓冲液最佳 pH 值为 4、最佳水浴温度为 100 ℃、靛蓝胭脂红最佳用量为 1.

3 mL。此方法的重现性较好 , 反应系统较稳定 。葡萄糖氧化酶在自然界中普遍存在 , 在食品 、 医药和发酵等工业生产及分析检测中用途广泛 , 是 高等院校生物化学 、酶学和酶工程等相关实验课程 中经常选用的一种重要的模式酶 。 在有氧情况下 , 葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化 产 生 葡 萄 糖 酸 和

过 氧 化 氢 : 葡 萄 糖 + O2 葡萄糖酸 + H2 O2 。测定葡萄糖氧化酶 活力常用的方法有 2 种 。一种是滴定法 , 即用碱滴 定葡萄糖氧化酶催化葡萄糖产生的葡萄糖酸 , 这种 方法误差比较大 , 灵敏度比较低 , 尤其是葡萄糖含量比较低时 。另一种是利用葡萄糖氧化酶 — 辣根过 氧化物酶 — 苯胺衍生物或染料隐性体偶联反应体系 测定 。过氧化物酶在有氧存在时 , 催化葡萄糖氧 化 、生成的过氧化氢分解 , 分解出的氧又将苯胺衍 生物或染料隐性体

(如邻 - 联二茴香胺 ) 氧化变 成红色或棕色物质 , 颜色深浅与葡萄糖氧化酶活性 成线性关系 。这种方法非常灵敏 , 但也存在显色物 质不稳定 、在 1 m

in内有明显褪色 、数据重复性不 好等不足 , 而且因为要与辣根过氧化物酶联用 , 因 此这个方法比较昂贵 , 增加了测定成本 。葡萄糖氧 化酶活力测定的困难限制了其在学生实验及课外科 研项目中的应用 , 因此寻找一种廉价 、简便并且灵 敏度高的活力测定方法很有意义 。 本研究采用靛蓝胭脂红褪色法测定葡萄糖氧化 酶活力 。靛蓝胭脂红褪色法测定葡萄糖氧化酶活力 的机理是 : 葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化产生的过氧化氢在一定 pH 值的缓冲溶液中和加热条件下 , 能使靛蓝胭脂红发生褪色反应 , 并且其反应速度在 一定范围内和过氧化氢浓度成正比 , 据此测定出产 生的 过 氧 化 氢 的 量 , 进 而

血糖测定干化学法常用什么方法

血糖测定是衡量血液中葡萄糖浓度的一种重要指标，对于糖尿病患者的管理至关重要。干化学法是其中一种常用的方法，通过对血液中的葡萄糖与试剂发生化学反应，来测定葡萄糖的浓度。

在干化学法中，一般使用酶法或化学法来进行测定血糖浓度。下面将详细介绍干化学法常用的几种测定方法：

1. 葡萄糖氧化试剂法：这是最常用的葡萄糖测定方法之一。其原理是使用含有葡萄糖氧化酶和辅酶的试剂，将血液样品与试剂混合后，在适当的温度和酸碱条件下，葡萄糖经氧化反应，生成葡萄糖酸和过氧化氢。过氧化氢与另一种试剂发生化学反应，生成有色产物，其浓度与葡萄糖的浓度成正比。通过比色法或光度计测定产物的吸光度，可以计算出葡萄糖的浓度。

2. 磷酸葡萄糖酸化试剂法：这种方法是另一种常用的干化学法，同样通过酶的作用和化学反应来测定葡萄糖浓度。在这个方法中，血液样品与含有磷酸葡萄糖酸化酶和磷酸葡萄糖酸化试剂的混合物反应，在适当的温度和酸碱条件下，葡萄糖酸化生成葡萄糖-6-磷酸。进一步与另一种试剂发生化学反应，生成有色产物，其浓度与葡萄糖的浓度成正比。通过比色法或光度计测定产物的吸光度，可以计算出葡萄糖的浓度。

3. 动态酶法：这是一种可以连续测定血糖浓度的方法。其原理是将血液样品与含有葡萄糖氧化酶和过氧化氢酶的试剂混合后，在适当的温度和酸碱条件下，葡萄糖在氧化酶的作用下产生过氧化氢。过氧化氢与染色剂反应生成有色产物，其浓度与葡萄糖的浓度成正比。通过光度计测定产物的吸光度，可以实时监测葡萄糖的浓度变化。

4. 反应级联法：这是一种高灵敏度的血糖测定方法。其原理是将血液样品与多个试剂按照一定的顺序加入，通过多个反应的级联效应，产生有色产物。这些反应一般包括氧化、酰化、缩合等。产生的有色产物的浓度与葡萄糖的浓度成正比。通过比色法或光度计测定产物的吸光度，可以计算出葡萄糖的浓度。

除了上述常用的方法外，还有一些其他的干化学法可供选择，如胆甾-3-酮醇氧化法、酮糖酶法等。这些方法在葡萄糖测定中都具有一定的可靠性和准确性，可以根据不同的实验目的和条件选择适合的方法。

葡萄糖注射液中葡萄糖含量的测定

摘要 运用氧化还原滴定的原理设计葡萄糖注射液中葡萄糖含量的测定方案并具体实施。从而进一步掌握Na2S2O3及I2标准溶液的配制和标定方法，巩固氧化还原滴定的操作技能。学会间接碘量法测定葡萄糖含量的方法和原理，进一步掌握返滴定法技能。其中，葡萄糖分子中含有醛基，能被IO-定量地氧化为羧基。故可将一定量过量的I2在碱性条件下加入葡萄糖溶液中，使醛基完全转化为羧基。再将其酸化，用Na2S2O3标准溶液滴定析出的I2。所用指示剂为淀粉。根据所加I2标准溶液的量及滴定所耗Na2S2O3标准溶液的量结合反应式中各物质之间的计量关系，便可计算葡萄糖的含量。该方法简便易行且准确度高，基本符合实验要求。

关键词 葡萄糖注射液 间接碘量法 返滴定法

1引言

葡萄糖注射液中葡萄糖含量的测定目前有以下几种方法

方案一：旋光测定法

根据葡萄糖分子结构中的五个碳都是手性碳原子，具有旋光性，可采用旋光法测定含量。取出旋光计的测定管，先用蒸馏水为空白对仪器进行校正。用供试液体（5％葡萄糖注射液）冲洗数次，缓缓注入供试液体适量（注意勿使发生气泡）。置于旋光计内，读取旋光度，连续测定3次，取平均值。

方案二：间接碘量法。

碘与NaOH作用能生成NaIO，而C6H12O6能定量地被NaIO氧化。在酸性条件下，未与C6H12O6作用的NaIO可转变为I2析出，只要用标准Na2S2O3溶液滴定析出的I2，便可计算C6H12O6的含量。

本实验采用第二种方案进行葡萄糖注射液中葡萄糖含量的测定。

2实验原理

在碱性溶液中，碘与氢氧化钠作用可生成次碘酸钠（NaIO),葡萄糖能定量的被次碘酸钠氧化成葡萄糖酸（C6H12O7）。过量的NaIO可以转化为NaIO3和NaI。在酸性条件下，NaIO3和NaI作用析出I2，然后用Na2S2O3标准溶液滴定析出的I2，便可计算出葡萄糖的含量。其反应如下：

1 实验十三 葡萄糖含量的测定——碘量法

一、实验目的

1、 学会间接碘量法测定葡萄糖含量的方法原理，进一步掌握返滴定法技能。

2、 进一步熟悉酸滴定管的操作，掌握有色溶液滴定时体积的正确读法。

二、实验原理

I2与NaOH作用可生成次碘酸钠(NaIO)，次碘酸钠可将葡萄糖(C6H12O6)分子中的醛基定量地氧化为羧基。未与葡萄糖作用的次碘酸钠在碱性溶液中歧化生成NaI和NaIO3，当酸化时NaIO3又恢复成I2析出，用Na2S2O3标准溶液滴定析出的I2，从而可计算出葡萄糖的含量。涉及到的反应如下：

1、I2与NaOH作用： I2+2NaOH=NaIO+NaI+H2O

2、C6H12O6和NaIO定量作用： C6H12O6+ NaIO=C6H12O7+NaI

3、总反应式： I2+C6H12O6+2NaOH=C6H12O7+2NaI+H2O

4、C6H12O6作用完后，过量的NaIO发生歧化反应： 3NaIO=NaIO3+2NaI

5、在酸性条件下NaIO3和NaI作用： NaIO3+5NaI+6HCl=3I2+6NaCl+3H2O

6、析出过量的碘用Na2S2O3标准溶液滴定： I2+2Na2S2O3=Na2S4O6+2NaI

实验还涉及到Na2S2O3和 I2溶液的标定

1、Na2S2O3的标定 Cr2O72-+6I-+14H+=2Cr3++3I2+7H2O

I2+2S2O32-=S4O62-+2I-

Cr2O72-~3I2~6S2O32-

32232272232200.256)(6OSNaOSNaOCrKOSNaVcVcVc

2、碘的标定 I2+2S2O32-=S4O62-+2I-