中性粒细胞体外黏附迁移滞留后蛋白质组变化_百替生物
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检验医学名词解释中毒颗粒在严重感染时中性粒细胞内出现的染成紫黑色的粗大颗粒。
亚铁血红素血红蛋白色素局部,由铁原子及原卟啉区组成。
点彩红细胞红细胞中残存的嗜碱性物质,是RNA变性沉淀的结果。
中性粒细胞核左移外周血中性杆状核粒细胞增多〔出现晚、中、早幼粒细胞以致原粒细胞〕。
血型是人体血液的一种遗传性状,是指红细胞抗原的差异。
血型抗体一般分为二类;"天然"抗体和免疫抗体,都是通过免疫产生的。
病理性蛋白尿蛋白尿持续超过,常为病理性,是肾脏疾病的可靠指标。
肾小管蛋白尿系肾小球滤过膜正常,但原尿中正常滤过的蛋白质不能被肾小管充分回吸收所致。
本周氏蛋白是免疫球蛋白的轻链单体或二聚体,属于不完全抗体球蛋白。
常出现干骨髓瘤患者尿中,有诊断意义。
网织红细胞是介于晚幼红细胞和成熟红细胞之间尚未完全成熟的红细胞。
瑞氏染液是由酸性染料伊红和碱性染料美蓝组成的复合染料,溶于甲醇后解离为带正电的美蓝和带负电的伊红离子。
异型淋巴细胞在某些病毒性感染或过敏原刺激下使淋巴细胞增生,并出现一定的形态变化称为异型淋巴细胞。
退行性变白细胞白细胞出现胞体肿大、结构模糊、边缘不清、核固缩、肿胀或溶解等变化。
核右移外周血中性粒细胞五叶核以上者超过3%称为核右移。
红斑狼疮细胞SLE患者血液〔体液中〕存在LE因子,在体外可使受累白细胞核DNA解聚,形成游离均匀体,被具有吞噬能力的白细胞所吞噬而形成。
内源性凝血系统指凝血始动反响因子Ⅻ的激活[Ⅸa-PF3-Ⅷ-Ca]复合物的形成以及激活因子Ⅹ。
外源性凝血系统指Ⅶ因子激活及因子Ⅲ以组织损伤后所释放出的组织凝血活酶起动外源性凝血途径为特点。
血凝的固相激活指Ⅻ因子接触到一种带电荷的外表,即被激活为Ⅻa的过程〔简意:即Ⅻa激活过程〕。
血凝的液相激活指激肽释放酶原转变为激肽释放酶后迅速激活Ⅻa这一反响作用又称酶激活。
血型红细胞上含有与恒河猴红细胞相同的抗原为Rh血型。
渗透压差是体内水重吸收的动力,浓度差和电位差是一些溶质重吸收的动力。
肝素结合蛋白在肺炎并发脓毒症早期诊断中的价值引言肺炎是一种常见的呼吸道感染病,如果治疗不及时或者合并其他疾病,有可能会引发脓毒症,甚至危及生命。
而早期的诊断对于治疗和预后都具有非常重要的意义。
近年来,研究表明肝素结合蛋白在肺炎并发脓毒症早期诊断中具有一定的价值。
本文将从肝素结合蛋白的功能、肺炎并发脓毒症的病理生理过程以及肝素结合蛋白在早期诊断中的应用等方面进行探讨。
肝素结合蛋白的功能及特点肝素结合蛋白(Heparin-Binding Protein, HBP)是一种由中性粒细胞释放的、能够与抗凝剂肝素结合的蛋白质。
它在炎症和感染过程中发挥重要作用,具有多种生物活性,如促进中性粒细胞迁移、增加血管通透性、诱导血小板激活等。
研究还发现肝素结合蛋白参与了细胞内外基质的弹性蛋白降解、黏着素表达及其下游炎症传导通路的调控等多个生物学过程,故而被认为是疾病状态下的临床生物标志物。
肺炎并发脓毒症的病理生理过程肺炎并发脓毒症是一种严重的感染性疾病,主要由细菌、病毒或其他病原体引起的肺部感染所致。
在感染初期,机体通过炎症反应来抵御病原体的侵袭,但当炎症反应超过一定程度时,就会引发脓毒症。
在脓毒症的发展过程中,机体会释放大量的炎症介质,如白细胞介素、肿瘤坏死因子等,导致全身性炎症反应综合征(SIRS),甚至多器官功能障碍综合征(MODS)。
早期诊断并及时干预对于肺炎并发脓毒症患者的生存至关重要。
肝素结合蛋白在早期诊断中的应用近年来的研究表明,肝素结合蛋白在肺炎并发脓毒症早期诊断中具有一定的价值。
一方面,由于肝素结合蛋白是一种中性粒细胞释放的蛋白质,它的水平与炎症的程度密切相关,因此可以作为炎症反应的生物标志物来帮助早期诊断肺炎并发脓毒症。
肝素结合蛋白也参与了多种炎症反应的调节和传导,因此对于脓毒症的发生也具有一定的预测价值。
具体来说,一项发表于《重症医学》杂志上的研究发现,肝素结合蛋白浓度与脓毒症的发生和严重程度呈正相关关系,因此可以作为判断脓毒症预后的标志物。
同型半胱氨酸对人外周血内皮祖细胞功能的影响娄晓盈;张泉;曹露;牟娜娜;谭红梅【期刊名称】《中山大学学报(医学科学版)》【年(卷),期】2014(035)003【摘要】[目的]探讨同型半胱氨酸(Hcy)对外周血内皮祖细胞(EPC)迁移、粘附能力的影响.[方法]密度梯度离心法获取单个核细胞,接种于铺有人纤维连接蛋白包被的培养皿,培养7d后免疫荧光鉴定EPC.实验分对照组(Control,CT)、50μmol/L腺苷(adenosine,Ade)组(A50)、50 μmol/L Hcy组(H50)、50 μmol/LHcy+50μmol/L Ade组(A50+H50)和50 μmol/LHcy+50 μmol/L Ade+ 10ng/mL血管内皮生长因子(VEGF)组(A50+H50+VEGF),不同给药组处理后检测内皮祖细胞迁移、粘附功能.各项实验都至少重复3次.[结果]Dil-acLDL(红色)和FITC-lectin(绿色)染色双阳性的细胞可鉴定为EPC.与CT组相比,Hcy、Ade可抑制EPC细胞的迁移(P< 0.05);Hcy、Ade还可抑制EPC细胞粘附到纤维连接蛋白及脐静脉内皮细胞(HUVEC) (P< 0.05).与Hcy、Ade组相比,Hcy联合Ade可进一步显著抑制EPC细胞的迁移和粘附功能(P<0.05).加入VEGF可显著增加EPC 细胞的迁移及粘附功能(P<0.05).[结论]Hcy可显著抑制EPC的迁移粘附能力,加入VEGF后可明显改善这种抑制效应.【总页数】5页(P329-333)【作者】娄晓盈;张泉;曹露;牟娜娜;谭红梅【作者单位】中山大学中山医学院病理生理教研室,广东广州510080;中山大学中山医学院病理生理教研室,广东广州510080;中山大学中山医学院病理生理教研室,广东广州510080;中山大学中山医学院病理生理教研室,广东广州510080;中山大学中山医学院病理生理教研室,广东广州510080【正文语种】中文【中图分类】R54【相关文献】1.黄酒对同型半胱氨酸诱导的内皮祖细胞功能障碍的影响 [J], 蒋承建;潘孙雷;郭艳;孟立平;周昌钻;池菊芳;翟小亚;郭航远2.同型半胱氨酸对外周血内皮祖细胞数量和功能的影响 [J], 王兴祥;尚云鹏;朱军慧;陈君柱;朱建华;陶谦民;郭晓纲;王战坤;张力3.糖基化终末产物对人外周血内皮祖细胞数量及功能的影响 [J], 闫醒军;边忠平;刘勇;黄启荣;崔驰;周秀娟;钟武;施森;何延政4.他汀类药物和促红细胞生成素对人外周血内皮祖细胞数量和功能的影响 [J], 邵诗颖;邹萍;王红祥;李宾公5.淫羊藿苷对人外周血内皮祖细胞增殖功能的影响 [J], 杜海斌;马华;武丽萍;申静;宫建芳因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
Tianjin Med J,November 2023,Vol.51No.11HMGB1和RAGE 在呼吸机相关性肺炎中作用的研究进展黄绚丽,秘乐,徐宇,王红嫚△摘要:呼吸机相关性肺炎(VAP )发病机制复杂,炎症反应在VAP 的病理进程中具有关键作用。
高迁移率族蛋白B1(HMGB1)和晚期糖基化终末产物受体(RAGE )是促发炎症反应的关键介质,且在脓毒症的进程中发挥着重要的作用;而脓毒症是VAP 的主要结局及死因。
二者可能作为早期发现VAP 进展为脓毒症的标志物及治疗靶点。
就HMGB1/RAGE 在VAP 炎症发展中的作用及相关治疗进展进行综述。
关键词:肺炎,呼吸机相关性;HMGB1蛋白质;高级糖化终产物受体;脓毒症;炎症;抑制剂中图分类号:R563.1文献标志码:A DOI :10.11958/20230486Research progress on the role of HMGB1and RAGE in ventilator associated pneumoniaHUANG Xuanli,MI Le,XU Yu,WANG Hongman △Department of Respiratory and Critical Care Medicine,the Fifth Affiliated (Zhuhai)Hospital ofZunyi Medical University,Zhuhai 519100,China △Corresponding Author E-mail:Abstract:The pathogenesis of ventilator associated pneumonia (VAP)is complicated,and inflammatory response plays a key role in the pathological process of VAP.High mobility group protein B1(HMGB1)and advanced glycation end-product receptor (RAGE)are key mediums for inflammatory response and play an important role in the progression of sepsis.Sepsis is the main outcome and cause of death of VAP.Therefore,HMGB1/RAGE may be used as markers and therapeutic targets for early detection of VAP progression into sepsis.This article reviews the role of HMGB1/RAGE in the development of VAP inflammatory and the progress in its treatment.Key words:pneumonia,ventilator-associated;HMGB1protein;receptor for advanced glycation end products;sepsis;inflammation;inhibitors基金项目:国家自然科学基金资助项目(81960023)作者单位:遵义医科大学第五附属(珠海)医院呼吸与危重症医学科(邮编519100)作者简介:黄绚丽(1996),女,硕士在读,主要从事呼吸危重症急救方面研究。
- 59 -[2]郭爱丽,李萌,张楠,等.婴儿不完全川崎病1例[J].中国实验诊断学,2020,24(9):1517-1518.[3]吕雪蕊.完全川崎病与不完全川崎病实验室指标的比较及并发冠脉损害的高危因素分析[D].大连:大连医科大学,2017.[4] AYUSAWA M,SONOBE T,UEMURA S,et al.Revision of diagnostic guidelines for Kawasaki disease (the 5th revised edition)[J].Pediatrics International,2010,47(2):232-234.[5]赖雪芹,赵青,郭健秋,等.N 端前脑钠肽与原田危险评分、小林评分对川崎病病儿冠状动脉病变风险预测价值的对比[J].安徽医药,2020,24(4):688-691.[6]王亮,司萍.川崎病诊断相关生物学标志物的研究现状及进展[J].临床儿科杂志,2020,38(10):789-793.[7]郑小兰,吴刚,张怡,等.川崎病体外研究现状[J/OL].中华妇幼临床医学杂志:电子版,2019,15(4):117-120.[8]张颖,犹登霞,周杰林.典型川崎病与不完全川崎病的临床特征分析[J].中国妇幼健康研究,2018,29(11):1475-1479.[9] YUTA U,YOICHI I, YASUKO U,et al.Case of incomplete Kawasaki disease with no symptoms except fever causing the development of coronary aneurysm[J].International Heart Journal,2019,60(4):1006-1008.[10]张娟,高雪红,马景,等.实验室指标在儿童不典型川崎病早期诊断中的价值[J].新疆医学,2020,50(4):386-388.[11]丛晓辉,阿依布拉克·阿布都艾尼,鲁方圆,等.川崎病患儿停止使用低剂量阿司匹林的判断指标[J/OL].中华妇幼临床医学杂志:电子版,2018,14(6):691-697.[12]吴学勤,毛顺峰.川崎病患儿心率变异性指标与血清NT-proBNP 及cTnI 水平的相关性[J].浙江医学教育,2018,17(3):46-48.[13]孙乐,于宪一.川崎病冠状动脉病变危险因素及其预测[J].中国实用儿科杂志,2017,32(8):575-579.(收稿日期:2021-07-01) (本文编辑:薛琦琪)*基金项目:2021年芜湖市“华佗计划”卫生高层次人才分层培养;安徽医科大学校科研基金项目(2021xkj217)①安徽医科大学附属海螺医院 安徽 芜湖 241000PCT、CRP、NLR对COPD并发肺部感染患者的诊断价值*余国庆① 孙红① 周丽玲① 姚婵娟① 戴瑾① 赵越① 【摘要】 目的:分析外周血降钙素原(PCT)、C 反应蛋白(CRP)和中性粒细胞/淋巴细胞比值(NLR)在诊断慢性阻塞性肺疾病(COPD)并发肺部感染的临床价值。
【基金项目】国家自然科学基金(81873324)【作者单位】1.浙江中医药大学第一临床医学院,杭州310053;2.浙江大学医学院附属浙江医院骨科,杭州310013;3.浙江中医药大学附属第一医院骨伤科,杭州310006【通信作者】童培建,E-mail :*******************·基础研究·葛彦志,黄培洁,瞿杭波,等.基于生物信息学分析鉴定激素性股骨头坏死的关键生物标志物及相关免疫细胞浸润[J].中华骨与关节外科杂志,2022,15(6):467-474.基于生物信息学分析鉴定激素性股骨头坏死的关键生物标志物及相关免疫细胞浸润葛彦志1,2,黄培洁1,瞿杭波2,陈佳烨1,陈祖祥1,陈文娴1,夏清馨1,童培建1,3【摘要】目的:对激素性股骨头坏死(SIONFH )患者外周血清中的基因芯片数据进行生物信息学分析,探究SIONFH 发生的分子机制。
方法:通过基因表达综合数据库(GEO )获取SIONFH 患者与非SIONFH 患者外周血清中的基因表达谱。
通过R 软件、Perl 语言,借助5个疾病相关数据库、基因本体论、基因/蛋白质相互作用关系检索工具、Cytoscape 分析软件及DA VID 等数据库和分析工具,进行差异表达基因(DEGs )鉴定、功能注释和富集分析,并计算SIONFH 患者外周血清中免疫细胞之间的关系。
结果:从GEO 数据库中下载基因表达序列GSE123568,包括30例SIONFH 患者和10例非SIONFH 患者。
SIONFH 组与非SIONFH 组比较的外周血清的基因本体论(GO )富集分析中,上调的DEGs 在生物学过程中主要富集在免疫反应、细胞防御反应、模式识别受体信号通路、神经炎症反应等方面;在细胞组分中主要富集在分泌颗粒膜、质膜外侧和内溶酶体等方面;在分子功能中主要富集在模式识别受体活性、趋化因子受体活性、免疫受体活性等方面。
下调的DEGs 在生物学过程中主要富集在组蛋白修饰、共价染色质修饰、肽基赖氨酸修饰和RNA 剪接等方面;在细胞组分中主要富集在核斑点、中心粒和前核糖体等方面;在分子功能中主要富集在组蛋白结合、丝氨酸/苏氨酸激酶活性和转录共调节活性等方面。
小鼠il-8蛋白
小鼠IL-8蛋白是由小鼠白细胞介素-8基因编码的蛋白质。
白细胞介素-8是一种重要的炎症因子,参与多种生物学过程,包括免疫反应、炎症反应和肿瘤生长等。
在小鼠中,白细胞介素-8由IL-8基因编码,该基因位于小鼠的第17号染色体上。
小鼠IL-8蛋白具有促进中性粒细胞和嗜碱性粒细胞等炎症细胞的迁移和活化作用,以及促进T细胞和B细胞等免疫细胞的增殖和分化作用。
此外,小鼠IL-8蛋白还可以促进肿瘤细胞的生长和侵袭,参与多种肿瘤的发生和发展。
在应用方面,小鼠IL-8蛋白可以作为药物靶点用于治疗某些炎症性疾病和肿瘤疾病,也可以作为免疫调节剂用于调节免疫反应和减轻炎症反应。
此外,小鼠IL-8蛋白还可以作为生物学指标用于监测某些疾病的发展和预后。
总之,小鼠IL-8蛋白是一个重要的生物学分子,参与多种生物学过程和疾病的发生发展,具有重要的研究价值和临床应用前景。
www.100biotech.com service@100biotech.com 中性粒细胞体外黏附迁移滞留后蛋白质组变化 中南大学湘雅医院 张丕红 杨柳荣 吕春柳 梁鹏飞 曾纪章 任利成 黄晓元 【摘要】目的 观察中性粒细胞体外黏附迁移、滞留后蛋白质组的变化,探讨中性粒细胞在烧伤后炎症反应中的病理生理机制,寻找烧伤炎症的分子标志。方法 采集健康志愿者外周血(分离中性粒细胞和正常血清)、特重度烧伤患者血清和Ⅱo烧伤创面水泡液,运用Transwell建立中性粒细胞与人脐静脉血管内皮细胞体外黏附迁移模型,并将黏附迁
移后的中性粒细胞在烧伤水泡液中培养建立滞留模型,收集黏附迁移后和滞留后中性粒细胞,以正常中性粒细胞做对照,进行二维凝胶电泳、应用PDQuest软件筛选差异表达蛋白点、辅助激光解析电离飞行时间质谱分析获取肽质量指纹图谱,Mascot查询软件搜索数据库,鉴定特征性差异表达蛋白。结果 与正常中性粒细胞比较,黏附迁移、滞留后中性粒细胞蛋白质组学分析,有33个显著差异表达的蛋白点,鉴定出22个蛋白点16种蛋白质。结论中性粒细胞体外黏附迁移及滞留后蛋白质组发生了明显变化,差异表达蛋白质可能在烧伤后炎症失控、免疫紊乱、细胞凋亡延迟、血管通透性增加中起一定作用。 【关键词】中性粒细胞,人脐静脉血管内皮细胞,烧伤血清,烧伤水泡液,蛋白质组学 基金项目:国家自然科学基金资助项目(30571920) 【ABSTRACT】OBJECTIVE To observe the proteomics changes of polymorphorphonuclear neutrophils trans-endothelial migration and sequestration in burn blister fluid in vitro, PMN trans-endothelial migration and sequestration model were built and proteomics analysis was used to identify the biomarkers of inflammation after burn injury and explore the pathogenesis of burn sepsis. METHODS Normal human PMN and serum were harvested from healthy volunteers, burn serum isolated from massive burn patients within 48 hrs after burn injury, and burn blister fluid was collected from intact blisters on burn wound within 24 hrs. PMN transmigration followed adhesive via HUVEC stimulated with burn serum and sequestration in burn blister fluid model were established using transwellsTM inserts. The total proteins of PMN in healthy volunteers (A group),
transmigration followed adhesive (B group), sequestration in burn blister fluid (C group) were separated by immobilized pH gradient-based two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis,and these images were analyzed by PDQuest 7.1.0 software. Discrepant expression protein spots were analyzed by Matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry and peptide mass fingerprinting obtained and searched in database to identify of the proteins. RESULTS 33 differentially expressed proteins spot were found between normal PMN group and the others groups, and 22 spots (16 proteins) were identified. CONCLUSIONS Significant differences were found in the proteomics of PMN trans-endothelial migration and sequestration in burn blister fluid compared with normal PMN. Some proteins involve in the inflammation amplification and immune disorder and PMN apoptosis delay, and the others play an important role in capillary permeability. 【KEY WORDS】polymorphonuclear neutrophils, human umbilical vein endothelial cells, human serum, burn blister fluid, proteomics
目前检测全血中性粒细胞(PMN)数目是诊断脓毒症的相当重要的指标,有时PMN出现还空泡化、溶解状等中毒变化,这些形态变化应该有其蛋白质改变的基础。Fessler[1]通过内毒素活化人PMN,发
现与炎症、信号分子和细胞骨架等有关的蛋白质增多。我们前期的研究也发现家兔严重烫伤并铜绿假单胞菌脓毒症时外周血PMN蛋白质组发生了一些变化[2]。为了系统全面地了解烧伤后PMN蛋白质组学
的改变,该实验采用Transwell(见图1),通过构建PMN与人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)体外黏附迁移模型和滞留模型(示意图见图2),模拟体内PMN黏附迁移、滞留过程,采用蛋白质组学技术,分离并鉴定黏附迁移、滞留后蛋白质差异表达蛋白。
1 材料和方法 1.1主要材料 HUVEC株ECV-304由中南大学湘雅医学院医学细胞与分子生物学实验中心提供。 www.100biotech.com service@100biotech.com
Transwell 3414(3.0μm孔径、24mm直径)购自美国Costar公司。葡聚糖T500、蛋白定量试剂盒、固相pH梯度(IPG)缓冲液和干胶条为瑞典Amershan Pharmacia公司产品。二硫苏糖醇、碘乙酰胺、胰蛋白酶、乙腈、а-氰基-4-羟基肉桂酸和琼脂糖购自美国Sigma公司。IPGphor等电聚焦仪、Ettan DALT垂直电泳槽、Imagescanner扫描仪为瑞典Amersham Biosciences公司产品。Voyager-DE STR 4307 MALDI-TOF-MS质谱仪和Data explorer质谱分析软件购自美国Applied Biosystem公司。PDQuest 7.1.0图像分析软件为美国Bio-Rad公司产品。Mascot distiller质谱信号识别软件和Mascot肽质量指纹图数据查询软件由美国Matrixscience公司提供。 1.2标本收集与处理 取健康志愿者(n=9)外周血20ml,依次采用Ficoll淋巴细胞分离液、葡聚糖T500沉淀红细胞、低渗法裂解残存红细胞分离PMN[3],调整细胞密度至2×106/ml备用;并按随机数字
表法分成三组:A正常对照组、B黏附迁移组、C滞留组,每组3例。于烧伤后24-48小时内收集6例特重度烧伤病人外周血血清,按随机数字表法随机分成两组,一组做黏附迁移实验、一组行滞留实验。患者血清分离后0.22μm滤器过滤除菌,56℃ 30分钟灭活补体,-20℃保存,使用前与DMEM培养液按1:4体积比混合。另于伤后8小时内收集3例重度烧伤患者Ⅱo创面水泡液,依次予0.45μm,0.22μm
滤器过滤除菌后4℃冰箱保存备用[4]。
1.3细胞黏附迁移[5]、滞留模型 前期按DMEM培养液刺激阴性对照组、20%正常血清刺激组、20%烧伤
血清刺激组进行预实验,上室接种HUVEC完全融合48h后下室添加刺激物, 6h、12h、24h后上室再加入正常PMN,90分钟后收集迁移至下室的PMN。发现烧伤血清与正常血清对PMN迁移的影响有显著差异,正常血清组的PMN迁移率仅为烧伤血清组的四至五分之一;烧伤血清刺激时间为12小时较合适,刺激24小时时 HUVEC皱缩脱落、显微镜下可见较多漂浮内皮细胞,刺激6小时时黏附迁移后的细胞较少。资料另文叙述。 本实验收集复苏后传代3次且细胞处于对数生长期的HUVEC,调整细胞密度至3×105/ml,接种1.8ml
细胞悬液于Transwell上室,每天换液一次并用Millicell-ESR电阻仪测定膜两边电阻、相差显微镜下观察细胞形态及融合程度,待膜电阻稳定且显微镜下观察细胞完全融合48小时天后行黏附迁移和黏附迁移后滞留实验。每组3个复孔,每孔下室各添加2.6ml 20%烧伤血清刺激,12小时后上室加入1.8ml 2×106/ml正常PMN,90分钟后收集迁移至下室的PMN,于倒置显微镜下行细胞计数(×400)PMN计数,
计算迁移率(PMN迁移率=迁入下室PMN细胞数/上室加入PMN细胞数×100%),瑞氏-姬姆萨染色观察细胞形态学变化、台盼蓝染色观察细胞存活率。滞留组实验先采用上法,PMN迁移90分钟后移去Transwell上室,轻轻吸出下室烧伤血清,以Hanks液轻轻洗涤迁移后PMN细胞两遍后,各下室加入烧伤水泡液3ml,孵育24小时后收集PMN,行台盼蓝染色,观察细胞存活率,并行滞留后PMN计数。 1.4蛋白质提取与双向凝胶电泳 常规方法提取正常PMN、黏附迁移后和滞留后PMN蛋白质,采用2D Quant Kit定量试剂盒测量蛋白浓度后-75℃冰箱保存备用。双向凝胶电泳时上样总体积450μl(内含蛋白800μg),聚焦总电压时间积约为80,000Vhrs。 1.5凝胶图像扫描与分析 凝胶考马斯亮蓝G-250染色后通过Imagescanner扫描仪以及LabScan扫描软件进行扫描获取图像,使用PDQuest图像分析软件对获得的2-DE图像依次进行点检测、背景消减、标准化、匹配、量化获取斑点的相关信息、比较差异等分析,进行凝胶图像分析。各组间比较采用F检验,P<0.05 为差异有统计学意义。 1.6 MALDI-TOF-MS质谱分析与数据库查询 从凝胶上切取差异蛋白质点脱色、酶解、萃取后在Voyager-DE STR 4307 MALDI-TOF-MS质谱仪中进行分析,获得肽质量指纹图(PMF)。Mascot distiller软件识别PMF,并采用Mascot数据库查询系统进行检索,参数设置:数据库选择NCBI、MSDB、SWISS-PROT,物种分类选择人,允许的未酶切位点选择1,固定修饰选择为半胱氨酸碘乙酰胺修饰,肽片段容差选择±100ppm,离子种类选择MH+和单同位素峰,与目的蛋白吻合的肽片段数至少4个。Mowse Score值