热原与内毒素的区别

热原和细菌内毒素的检查方法我呀，就跟您唠唠这热原和细菌内毒素的检查方法。

您可别一听这名字就觉得头疼，其实啊，这里面也有不少有意思的事儿。

先说这热原，热原这东西啊，就像个隐藏在暗处的小捣蛋鬼。

那咋检查它呢？这就有一套法子。

咱得先准备好一些东西，就像准备打仗前得把武器啥的都备好一样。

得有合适的实验动物，这动物啊，那也是精挑细选的，得健康，看着就活蹦乱跳的那种。

把这热原注射到动物体内，然后就盯着这动物的反应，就像盯着一个调皮孩子看他会不会闯祸一样。

要是这动物体温突然升高了，嘿，那热原可能就藏在这儿呢。

再说说细菌内毒素，这细菌内毒素也不是个好惹的主儿。

检查它的方法和热原还有点不一样呢。

咱有一种试剂，那试剂就像个专门抓细菌内毒素的小警察。

把这试剂和可能含有细菌内毒素的东西放一块儿，要是这试剂变色了或者有啥特殊反应了，就像小警察发现了小偷立马拉警报一样，那就说明有细菌内毒素在里面。

我记得有一次啊，我在实验室里看一个小伙子检查热原。

那小伙子啊，眼睛瞪得大大的，死死盯着那实验动物，那神情就像在守护着什么宝贝似的。

我就问他：“小伙子，这么紧张呢？”他转过头来，脸上有点红扑扑的，说：“老师啊，我就怕一个不小心错过啥反应，这热原可不好找呢。

”我就笑着跟他说：“别太担心，按步骤来，总能发现它的踪迹。

”还有一回，是检查细菌内毒素的时候。

有个小姑娘拿着那试剂，手都有点微微颤抖，可能是怕操作不好。

我就走过去拍拍她的肩膀，说：“闺女啊，放轻松，这就跟做饭似的，按照菜谱一步一步来，准没错。

”她听了我的话，深吸一口气，然后就稳稳地操作起来了。

这热原和细菌内毒素的检查方法啊，虽然有点复杂，但只要您用心去了解，就像了解一个老朋友一样，慢慢就会掌握其中的窍门儿了。

细菌内毒素检查法一、细菌内毒素检查法的定义：●本法是利用鲎试剂与细菌内毒素产生凝聚反应的机理，以判断供试品中的细菌内毒素限度是否符合规定的一种方法。

二、背景介绍：●1、细菌内毒素●2、热原●3、鲎1、细菌内毒素●细菌内毒素是一种革兰氏阴性细菌细胞壁的产物，当其死亡或菌体裂解时释放出的一类具有多种生物活性的毒性物质特性：●（1）.致热性：内毒素作用人体细胞，使之释放内源性热原，刺激下丘脑体温调节中枢，引起发热反应。

●（2）.耐热性：需250度干热30分钟才能彻底灭活。

●（3）.分子极性：多糖链亲水，脂肪链疏水，在水中呈不均匀分布。

●（4）.鲎反应：能与鲎试剂发生多级酶促反应，形成凝胶。

2、热原2.1热原是指临床上引起哺乳动物发热反应的物质2.2细胞分裂素（IL-1, IL-2, IL-6, IL-8 ）内源性热原｛产生细胞分裂素的物质内毒素热原外源性热原｛非内毒素热原（病毒、细菌、真菌、抗体-抗原复合物、细胞分裂素）2.3热原和内毒素的关系：2.3.1热原是否就是内毒素？在学术上仍有争议，热原不仅是细菌内毒素。

但在药检的范畴，细菌内毒素是主要的热原物质，可以说无内毒素就无热原，控制内毒素就是控制热原。

3、鲎3.1鲎(horseshoe crab)是一类与三叶虫(现在只有化石)一样古老的动物。

鲎的祖先出现在地质历史时期古生代的泥盆纪，当时恐龙尚未崛起，原始鱼类刚刚问世，随着时间的推移，与它同时代的动物或者进化、或者灭绝，而惟独只有鲎从4 亿多年前问世至今仍保留其原始而古老的相貌，所以鲎有“活化石”之称。

又具有很高的药用价值。

3.2鲎试剂鲎的血液中含有铜离子，它的血液是蓝色的。

鲎血液颜色呈蓝色，是因为鲎血浆的主要成分是血蓝蛋白。

这种蓝色血液的提取物——“鲎试剂”。

鲎试剂是由海洋生物鲎的血液提取物制成的“鲎试剂”，能够准确、快速地检测人体是否因细菌感染而致病；鲎试剂在制药行业中，用于检测细菌内毒素。

目前使用的鲎试剂分为美洲鲎试剂和东方鲎鲎试剂两大类。

说到热原检查，我们先了解几个概念，热原、热原反应、内毒素、实验动物。

热原（p yr o g e n）：指能引起恒温动物体温异常升高的致热物质。

它包括细菌性热原、内源性高分子热原、内源性低分子热原及化学热原等。

注射液中的热原主要是指细菌性热原，是某些细菌的代谢产物、细菌尸体及内毒素。

致热能力最强的是革兰氏阴性杆菌的产物，其次是革兰阳性杆菌类，革兰阳性球菌则较弱，霉菌、酵母菌、甚至病毒也能产生热原。

热原反应：临床上在进行静脉滴注大量输液时，由于药液中含有热原，病人在0.5～1h内出现冷颤、高热、出汗、昏晕、呕吐等症状，高热时体温可达40℃，严重者甚至可休克，这种现象称为热原反应。

细菌内毒素：是革兰氏阴性菌的细胞壁成分，当细菌死亡或自溶后便会释放出内毒素。

因此，细菌内毒素广泛存在于自然界中。

如自来水中含内毒素的量为1至100E U/m l。

当内毒素通过消化道进入人体时并不产生危害，但内毒素通过注射等方式进入血液时则会引起不同的疾病。

注射液中如果含有内毒素，就会产生代谢产物，内毒素大量进入血液就会引起发热反应即热原反应。

因此，生物制品类、注射用药剂、化学药品类、放射性药物、抗生素类、疫苗类、透析液等制剂以及医疗器材类（如一次性注射器，植入性生物材料）必须经过细菌内毒素检测试验合格后才能使用。

由于家兔对热原的反应与人基本相似，对热原比较敏感，所以半个世纪以来一直用家兔来检测热原，家兔为保障药品质量和用药安全发挥了重要作用。

鲎试验在某些情况下，比如西药注射液、生理盐水等成分明确的药品，现在大多采用鲎试验来检测，但在一些中药注射剂、血液制品，抗毒素等由于自身特殊性无法通过稀释法消除干扰，还在使用兔法来检测热原，因此鲎试验目前还无法完全取代家兔热原试验。

检查法药典要求一雌兔应无孕，家兔怀孕了会出现腹围会变大，体重也会增大，情绪变得多变，在试验固定台上不容易固定，怀孕后温度波动也会变得不敏感，药物反应小，影响检验结果的准确性。

什么是热原什么是革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌，各指哪些主要细菌?自然界存在多种多样病菌，如何将这些病菌加以鉴别、分类，并选择有效药物进行治疗这是很重要的问题。

革兰氏染色法，能够把细菌分为两大类：采用这种染色方法，是先用龙胆紫来染病菌，所有细菌都染成了紫色，然后再涂以碘液，来加强染料与菌体的结合，再用95％的酒精来脱色20～30秒钟，有些细菌不被脱色，仍保留紫色，有些细菌被脱色变成无色，最后再用复红复染1分钟，结果已被脱色的细菌被染成红色，未脱色的细菌仍然保持紫色，不再着色，这样，凡被染成紫色的细菌称为革兰氏阳性菌；染成红色的称为革兰氏阴性菌。

革兰氏染色法的意义就在于鉴别细菌，把众多的细菌分为两大类，革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。

大多数化脓性球菌都属于革兰氏氏阳性菌，它们能产生外毒素使人致病，而大多数肠道菌多属于革兰氏阴性菌，它们产生内毒素，靠内毒素使人致病。

常见的革兰氏阳性菌有：葡萄球菌、链球菌、肺炎双球菌、炭疽杆菌、白喉杆菌、破伤风杆菌等；常见的革兰氏阴性菌有痢疾杆菌、伤寒杆菌、大肠杆菌、变形杆菌、绿脓杆菌、百日咳杆菌、霍乱弧菌及脑膜炎双球菌等。

在治疗上，大多数革兰氏阳性菌都对青霉素敏感；而革兰氏阴性菌则对青霉素不敏感，而对链霉素、氯霉素等敏感。

所以首先区分病原菌是革兰氏阳性菌还是阴性菌，在选择抗生素方面意义重大。

什么是热原热原系指由微生物产生的能引起恒温动物体温异常升高的致热物质。

它包括细菌性热原、内源性高分子热原、内源性低分子热原及化学热原等。

这里所指的“热原”，主要是指细菌性热原，是某些细菌的代谢产物、细菌尸体及内毒素。

致热能力最强的是革兰氏阴性杆菌的产物，其次是革兰阳性杆菌类，革兰阳性球菌则较弱，霉菌、酵母菌、甚至病毒也能产生热原。

热原通常是磷脂多醇与蛋白质结合而成的复合物。

磷脂多醇是复合物的活性中心，致热作用最强。

其化学组成因菌种不同而有所差异。

分子量为5×104～5×105，分子量越大致热作用也越强。

细菌内毒素检测无法完全取代家兔热原法关键词细菌内毒素热原鲎试剂试验用家兔在药品药理检测中，目前有两种常用的热原检测方法细菌内毒素法（鲎试剂法）和家兔法。

虽然细菌内毒素检测法具有简便、快速、灵敏、重现性好等优点，且原来许多利用家兔热原检查法检测的药品均被细菌内毒素检查法所替代。

但由于部分中药注射剂成分较复杂无法通过稀释法消除干扰，再加上鲎试剂对革兰阴性菌以外的内毒素不够灵敏，故细菌内毒素检测法无法完全取代家兔热原检测法。

概述热原系指由微生物产生的能引起恒温动物体温异常升高的致热物质。

它包括细菌性热原、内源性高分子热原、内源性低分子热原及化学热原等。

通常所指的“热原”，主要是指细菌性热原，是某些细菌的代谢产物、细菌尸体及细菌内毒素。

可见细菌内毒素是热原之一种。

细菌内毒素一般可分为外毒素和内毒素两类：外毒素是一种毒性蛋白质，是细菌在生长过程中分泌到菌体外的毒性物质，产生外毒素的细菌主要是革兰阳性菌。

内毒素是革兰阴性菌细胞壁的产物，一般活体细菌不会产生，只有当细菌死亡或黏附在其它细胞时，才会释放出内毒素，而脂多糖是内毒素的主要成分，具有特别强的热原活性。

热原按检查法可分为两种，一种是内毒素热原，是革兰阴性细菌细胞壁的组分；另一种是非内毒素热原，除内毒素外的热原。

目前热原常用的检测方法主要是家兔法和细菌内毒素检测法（鲎试剂法）。

热原检查法（家兔法）可用于检测上述两种原因产生的热原反应；细菌内毒素检查法只检测产品的细菌内毒素含量。

当前医药工业中普遍接受的观点是：在生产质量管理规范（GMP）条件下控制内毒素污染就等于控制了热原污染，这也是内毒素检查法迅速普及的原因。

热原检查法家兔热原检测法的建立：由于家兔对热原的反应与人基本相似，所以半个世纪以来用家兔来检测热原，为保障药品质量和人类用药安全发挥了重要作用。

目前家兔法仍为各国药典规定的检查热原的法定方法。

《中国药典》2010年版规定的热原检查法系将一定剂量的供试品，静脉注入家兔体内，在规定时间内，观察家兔体温升高的情况，以判定供试品中所含热原的限度是否符合规定。

去内毒素的方法及检查方法注：这部分内容为内毒素的检测方法及去除方法。

热原(pyrogen)是微生物产生的内毒素，是由磷脂、脂多糖和蛋白质组成的复合物，微量即可引起恒温动物体温异常升高。

其中脂多糖具有很强的热原活性。

由革兰氏阴性杆菌产生的热原致热能力最强，真菌、病毒也可以产生热原。

【相关链接】热原的危害一、热原的性质及除去热原的方法1．高温法热原的耐热性能良好，60℃加热1h不被分解破坏，100℃不降解，但180℃3～4h、200℃60min或250℃30～45min可使热原彻底破坏。

因此耐热物品如玻璃制品、金属制品、生产过程中所用的容器和其它用具以及注射时使用的注射器等，均可采用此法破坏热原。

但在通常使用的注射剂热压灭菌条件下不足以破坏热原。

2．吸附法热原在水溶液中可被活性炭、石棉、白陶土等吸附而除去。

由于活性炭性质稳定、吸附性强兼具助滤和脱色作用，故广泛用于注射剂生产，但应注意吸附药液所造成的主药的损失。

3．超滤法热原分子量为1×106左右，体积较小，约1～5nm，可以通过一般滤器和微孔滤膜，但采用超滤法如用 3.0～15nm超滤膜可将其除去。

4．蒸馏法热原能溶于水但不挥发，但可随水蒸气的雾滴进入注射用水中，因此制备注射用水时，原水中的热原可经蒸馏除去，但需多次蒸馏，，并加有隔沫装置，单次蒸馏往往效果不理想。

5．酸碱法热原能被强酸、强碱、强氧化剂破坏。

玻璃容器及用具如配液用玻璃器皿、输液瓶等可用重铬酸钾硫酸清洁液或稀氢氧化钠处理，破坏热原。

6．其它包括离子交换法、凝胶滤过法、反渗透法等。

二、热原的检查方法《中国药典》2005年版规定热原检查采用家兔法，细菌内毒素检查采用鲎试剂法。

1．热原检查法由于家兔对热原的反应与人基本相似，目前家兔法仍为各国药典规定的检查热原的法定方法。

《中国药典》2005年版规定的热原检查法系将一定剂量的供试品，静脉注入家兔体内，在规定时间内，观察家兔体温升高的情况，以判定供试品中所含热原的限度是否符合规定。