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小鼠血虚证造模方法的比较及四物汤的反证分子生物实验研究部分2002207122 岑川第四组摘要：目的：观察和比较乙酰苯肼和环磷酰胺两种不同造小鼠血虚模型方法的差异性和检查同一基因在不同动物模型中的表达差异以及四物汤治疗的效果。
实验方法：通过正常组、乙酰苯肼组、环磷酰胺组、四物汤组这四组组织切片的观察比较来评价血虚造模方法，及通过RT-PCR法来检测肝组织同一基因的表达差异。
结果：环磷酰胺和乙酰苯肼均有造血虚的作用，四物汤促进血虚证小鼠肝组织基因的表达可能是其生血作用的机制之一。
关键词：血虚环磷酰胺乙酰苯肼四物汤RT-PCR法基因表达近年来,随着对血虚证研究的不断深入,对血虚证动物模型的研究也有新的进展。
尽管动物模型在当前还不能准确反映人体血虚证的全部实质,但作为替代实验对象,已在血虚证发病机制探讨及中药治疗研究等方面发挥了重要作用。
乙酰苯肼和环磷酰胺造模都是血虚造模常用的发法，但由于机制不同，所以有各自不同的特点。
一实验器材和实验方法75%乙醇、氯仿、异丙醇、Trizol、RNAsin(40Ｕ/u)、DNTP（10mＭ）、EB（2mg/ml）、5*TBE、琼脂糖、上下游引物、随机引物（100ug／ul）、20，200，1000u移液枪、电动匀浆机及匀浆管、冷冻式离心机、离心管、电泳仪、PCR仪、剪、镊等正常小鼠组、环磷酰胺造模小鼠组、乙酰苯肼造模小鼠组、四物汤治疗小鼠组各十只煎药：四物汤（生地. 白芍. 当归. 川芎各3g) ,共煎成药汁130ml灌胃给药：治疗组小鼠每天给药四物汤一次，共七天。
前两天每次每只小鼠给药1ml，后五天每次每只小鼠给药0.5ml，其余３组小鼠后四天每只加灌0.5ml生理盐水。
RNA 提取1.取各组实验组任一只小鼠肝组织50-100mg,剪碎，加入1mlTorizol液，快速电动匀浆2.22度，静置5min3.加入氯仿0.2ml,颠倒15s4.22度，静置3min5.离心：4度，15000转/分* 15min6.取上清液0.5ml( 含提取的RNA）7.加入适量异丙醇，混匀8.22度，静置10min9.离心：4度，15000转/分* 10min10.弃上清液11.加入1ml4度75%乙醇（提纯RNA，释放异丙醇）12．离心：４度，10000转／分*５min13．弃上清液，真空干燥５min14．用25ul水溶解，－７０度保存反转录５＊ｂｕｆｆｅｒ ４μlＤＮＴＰ（１０ｍＭ） ２μl随机引物（１００ｕｇ／μl） １μlＤＴＴ（１００ｍＭ） １μlＲＮＡｓｉｎ（４０Ｕ／μl） １μl总ＲＮＡ（２ｕｇ）水 至１８μl６５度，５分钟，冰上，加ＲＮＡｓｉｎ１μl，Ｍ－ＭＬＶ１μl。
血虚证动物模型的标准化研究初探
杨岚;祝彼得;彭成
【期刊名称】《实验动物科学》
【年(卷),期】2006(023)001
【摘要】目的建立标准化的血虚证动物模型.方法采用慢性失血法、溶血法和骨髓抑制法制造三种血虚证模型,观察一般情况和与血发生有关的实验室指标,并用四物汤反证造摸效果.结果三种动物模型均符合血虚证表现,同时出现外周血、骨髓有核细胞数目和细胞周期的改变,四物汤对三种动物模型均有一定疗效.结论建立了三种符合标准化的血虚证模型.
【总页数】5页(P5-9)
【作者】杨岚;祝彼得;彭成
【作者单位】成都中医药大学解剖组胚教研室,成都,610072;成都中医药大学,成都,610072;成都中医药大学科技处,成都,610072
【正文语种】中文
【中图分类】R-332
【相关文献】
1.三种血虚证动物模型的建立及造血损伤的变化特点 [J], 谭洪玲;马增春;肖成荣;王宇光;梁乾德;洪倩;陆倍倍;刘明;高月
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3.失眠血虚证小鼠动物模型的模拟和证候评价 [J], 孙璐;刘海霞;王承灏;吉静;徐文秀;王庆国;程发峰
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5.血虚证动物模型研究概况 [J], 郭平
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![一种气虚血瘀证病证结合动物模型的制作方法及其评价方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s1/m/c853aed9e109581b6bd97f19227916888486b919.png)
(10)申请公布号 CN 101707989 A(43)申请公布日 2010.05.19C N 101707989 A*CN101707989A*(21)申请号 200910236282.4(22)申请日 2009.10.23A01K 67/027(2006.01)A01K 67/02(2006.01)A61M 31/00(2006.01)(71)申请人北京中医药大学东方医院地址100078 北京市丰台区方庄芳星园一区六号(72)发明人张允岭 娄金丽 扈新刚 柳洪胜张锦 李秀 金香兰 张志辰高铭坚 宋莹(74)专利代理机构北京君尚知识产权代理事务所(普通合伙) 11200代理人余功勋(54)发明名称一种气虚血瘀证病证结合动物模型的制作方法及其评价方法(57)摘要本发明提供了一种气虚血瘀证动物模型的制作方法。
具体是通过力竭运动和/或控制基础进食量和/或给服大剂量心得安制备气虚证动物模型；对气虚证动物模型阻塞大脑中动脉后恢复其血流供应，建立脑缺血气虚血瘀症病症结合模型。
(51)Int.Cl.(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书 2 页 说明书 13 页 附图 4 页1.一种气虚血瘀证病证结合动物模型的制作方法，其特征在于：步骤1：通过力竭运动和/或控制基础进食量和/或给服大剂量心得安制备气虚证动物模型；步骤2：对步骤1气虚证动物模型阻塞大脑中动脉0.5h～4h后恢复其血流供应2h～20h，建立脑缺血气虚血瘀证病证结合模型。
2.根据权利要求2所述动物模型的制作方法，其特征在于：步骤1中选用雄性大鼠通过负重力竭性游泳制备气虚证动物模型；步骤2中对步骤1气虚证动物模型用线栓法阻塞大脑中动脉后恢复其血流供应，建立脑缺血气虚血瘀证病证结合模型。
3.根据权利要求1～2中任一所述动物模型的制作方法，其特征在于：步骤1：采用150-250g SD或Wistar雄性大鼠每天负体重的2-10％的重量进行力竭性游泳1-2次，每次5-20min，共游泳1-4周制备气虚证动物模型；步骤2：对步骤1气虚证动物模型阻塞大脑中动脉0.5h-4h后恢复其血流供应2h～20h，建立脑缺血气虚血瘀证病证结合模型。
血虚证小鼠造模及四物汤治疗实验——中药制备及分子生物学指标检测程韵 2002207120 02中基摘要：本次实验是要比较乙酰苯肼和环磷酰胺制造的小鼠血虚证模型的效果，并且用四物汤治疗乙酰苯肼造模组，来证明四物汤疗效并反证乙酰苯肼造血虚效果。
本组实验以RT-PCR 方法检验小鼠肝细胞白蛋白和葡萄糖醛酸酶基因表达的改变；并观察肝、胃、小肠组织切片的病理改变。
小鼠肝细胞白蛋白组电泳结果亮度显示：四物汤治疗组＞乙酰苯肼造模组＞环磷酰胺造模组＞正常对照组，葡萄糖醛酸酶组电泳结果亮度显示除正常组稍亮外其他各组均不明显。
四物汤对乙酰苯肼造模组小鼠的基因表达有部分影响。
组织切片观察除了肝组织在四物汤治疗组水肿有一定程度减轻，其它组织无明显变化。
关键词：血虚证模型乙酰苯肼环磷酰胺四物汤 RT-PCR引言：血虚证是中医的基础病证,主要表现为营血亏损。
而血虚证动物模型是阐明血虚证的本质和病理生理,以及中药治疗血虚证的机理的不可缺少的途径。
血虚证动物模型的造模方法有60 Co γ射线造模法、化学药物造模法、病因造模法和免疫介导造模法，其中化学药物造模法可选用乙酰苯肼或环磷酰胺来造模。
此次实验选取乙酰苯肼和环磷酰胺进行造模，并对乙酰苯肼造模组进行四物汤治疗，观察各组小鼠的病理，生理，生化和分子生物学指标，比较两种造模方法的效果。
本组在此次实验中的任务主要是中药制备及以RT-PCR方法检验小鼠肝细胞白蛋白和葡萄糖醛酸酶基因表达的改变情况。
一．材料与方法：（一）动物及处理：实验选用昆明种雄性小鼠40只（平均体重约25g）。
随机分成四组：正常组、乙酰苯肼组、环磷酰胺组和四物汤组。
每组10只，分笼饲养于内铺垫料的塑料笼，每组1笼。
每天自食足量普通颗粒饲料。
（二）中药制备及给药：生地、白芍、当归、川芎各20g（上海中医药大学综合实验室采购），冷水浸半小时，煎取药汁后按照所需药物浓度比例浓缩为670ml。
取100ml药物放置于动物房冷藏，每日灌胃给药。
血虚证实验动物造模及其证候的检测与评价徐向前2006711038[摘要]通过近年来相关文献综述和评析血虚证动物模型造模方法。
期间该模型的研发工作在持续发展，涉及到多手段、多技术。
目前研究和发展趋势比较集中的是化学药物造模、射线造模，当然还包括其他一些方法。
各造模方法比较集中的问题主要是各造模剂量、时间，以及造模后持续时间尚未确定，以及造模动物的证候检测与评价没有统一的标准，同时对血虚证模型的认识亦在不断深入。
[关键词]血虚证动物模型证候检测评价1．血虚证是中医的基础病证，主要表现为营血亏损。
要阐明血虚证的本质和病理生理，以及中药治疗血虚证的机理，动物实验研究是不可缺少的途径。
而要进行实验研究，首先必须有一个标准化的血虚证动物模型，这是中医药现代化研究的重要环节。
许多科研工作者在这方面做了探索和努力“然而至今尚无统一的造模规范程序和公认指标。
实验动物选择不同、实验方法不统一，甚至缺乏客观指标，严重影响对血虚证本质的探讨和对治疗血虚证药物的药效评价[1]。
2.中医药动物造模是中医基础医学研究和中医药研发的重要手段，是发展辨证论治实验研究的基础工作。
为探讨中医血虚证动物造模的发展方向，通过关键词“血虚证+实验”．检索了1989年～2011年CNKI系统和VIP系统收集的文献共计50余篇，通过对20余年文献回顾，总结了血虚证动物模型造模方法，并对经验与教训进行了评析。
目前所常用的几种方法如下：2.160Co／射线造模法该造模方式是用放射线照射小鼠全身，造成白细胞量下降和骨髓损伤，造模血虚证效果明显。
动物品种包括雌／雄昆明种、C57BL，6J、C57BLL、BALb／e小鼠，主要为雌性小鼠；体重在l4～25g之间，集中在l8～22g。
造模方法：Coy射线全身照射，多为一次性照射，照射距离为4 m，照射时间集中在161～250S，照射率在127～131Gy，min，照射剂量大多在2.5～7.0Gy之间。
2.2化学药物造模常用的化学药物有乙酰苯肼（APH）溶血造模法，乙酰苯肼与其他方法复合造模法，环磷酰胺化学损伤造模法。
血虚证两种造模方法的比较及中药疗效评价卢文丽方肇勤2007-01-17一、实验目的1. 比较血虚证两种不同造模方法的优劣。
2. 评价中药复方的疗效。
二、实验材料1．实验动物：昆明种小鼠，雄性，40只。
2．药物或试剂乙酰苯肼（APH，为白色粉末状固体，用时配制成2％溶液）、环磷酰胺粉针剂：200mg×10支×1盒（用时配成10mg/ml溶液）、无水乙醇500ml×1瓶、0.9%氯化钠溶液500ml×1瓶或250ml×1瓶。
3．仪器或设备电子天平1台，100ml柱形小烧杯2个，50ml/100ml量筒各1个，10ml刻度吸管2个，洗耳球1个，玻璃棒2根，60ml小口试剂瓶2个，标签纸1张，酒精棉球，1ml一次性注射器数支，小鼠灌胃针2支。
以上为动物造模及药物配制用材料，余具体见各实验指导。
三、实验步骤1．动物分组随机分为正常组A、环磷酰胺模型组B、乙酰苯肼模型组C、乙酰苯肼治疗组D等4组，每组10只。
分笼饲养于内铺垫料的塑料笼内，每笼等量。
2．2％乙酰苯肼溶液的配制（1）电子天平取乙酰苯肼粉末1g，并将其小心倒入100ml小烧杯内；（2）玻璃滴定管吸取10ml无水乙醇，注入烧杯内，玻璃棒搅拌；（3）待粉末几乎溶解完全后，50ml量筒量取30ml生理盐水倒入烧杯内，搅拌。
若仍有粉末未溶解，置于37℃水浴箱内一段时间即可。
（4）将完全溶解后的溶液倒入50ml量筒内，添加生理盐水定容至50ml。
将溶液倒入50ml小口试剂瓶内，贴好标签，常温下保存。
3．药物及剂量采用四物汤治疗：当归10g，川芎10g，白芍10g，熟地黄10g。
给药剂量按照成人体重（60kg）的10倍计算。
药物煎煮浓度为0.4g/ml，约灌胃0.5ml/只。
4. 造模及给药方法组别造模灌胃给药A 腹腔注射同C组造模药物等量的生理盐水，第1、2日各1次。
皮下注射同B组造模药物等量的生理盐水，第1、4日各1次。
江西中医药大学学报2020年12月第32卷第6期3谭子剑3罗小泉3龚美富1**（1.江西中医药广州 510006；3.江西中医药大学 南昌 330004）辨证是中医的优势。
病以病理学为核心，证以评价与研究的发展方向，为中医方-证-病的深入研究奠定3, HUA Shi-pei3, TAN Zi-jian3, LUO Xiao-quan3, GONG Mei-fu13. Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine, Nanchang 330004, China.Abstract: Animal model is the experimental basis of medical experimental hypothesis and clinical hypothesis. Differentiation of disease is the specialty of Western medicine, while dialectics is the advantage of Traditional Chinese Medicine. The core of disease is pathology, the core of syndrome is pathogenesis, and the establishment of model based on dialectical treatment is a sign to distinguish the animal model of Traditional Chinese Medicine from that of Western medicine. In this paper, the existing problems of the animal model of blood stasis syndrome in Traditional Chinese Medicine are summarized and analyzed, and the establishment, evaluation and research direction of the animal model of blood stasis syndrome are discussed, which lays a solid foundation for the in-depth study of TCM prescription syndrome disease.Key words: Blood Stasis Syndrome；Animal Model；Evaluate证候研究是中医基础理论研究的重要领域，是临床治疗和科学研究的基础和前提。
血虚证实验动物造模及其证候的检验与评估高维琴2006711047摘要：查阅近10年来有关中医血虚实验研究方面的医学资料，对现行各种血虚实验方法和观察指标进行了文献回顾与总结，并对其目前存在问题及未来发展作一讨论。
从而为今后实验动物证的研究提出新的思路。
关键词：血虚证；动物模型；检测指标血虚证[1]是中医的基础病证，主要表现为营血亏损。
要阐明血虚证的本质和病理生理，以及中药治疗血虚证的机理，动物实验研究是不可缺少的途径。
而要进行实验研究，首先必须有一个标准化的血虚证动物模型，这是中医药现代化研究的重要环节。
许多科研工作者在这方面做了探索和努力，然而至今尚无统一的造模规范程序和公认指标。
近年来，随着对血虚证研究的不断深入，对血虚证动物模型的研究也有新的进展。
尽管动物模型在当前还不能准确反映人体血虚证的全部实质，但作为替代实验对象，已在血虚证发病机制探讨及中药治疗研究等方面发挥了重要作用。
现对目前所已有多种血虚证动物模型制作方法，其特点及检测指标作一总述。
1中医对血虚证的认识中医理论认为，血虚多因失血过多，血液生化之源不足，或因瘀血阻滞，新血不生等原因引起。
临床表现为面色苍白或萎黄、皮肤毛发枯黄、唇舌及指甲无华、头晕、心悸失眠、手脚发麻、脉细弱无力等。
祖国医学所指血虚内涵丰富，从病因、临床特点与现代医学的贫血有密切的关系[2]。
现代医学中贫血包括低增生性（再生障碍性贫血、骨髓病性贫血）、红细胞大量破坏或丢失（溶血性贫血和失血性贫血）、成熟异常（缺铁性贫血、巨幼细胞性贫血、中海贫血和铁幼粒贫血等）。
且经研究发现[3,49]，血虚证的症状在贫血患者中有较高的出现率。
因此可以借鉴现代医学对贫血的研究方法来帮助建立中医血虚证的动物模型、检测指标。
2血虚证动物模型血虚证动物模型一般用大鼠、小鼠、家兔等制备。
2.1失血性血虚证动物模型2.1.1一般制备方法小鼠，体重20～22g，尾部放血0.5ml／只，失血后24h左右即可；大鼠，体重180～200g，尾部放血1.5～2ml／只，隔日1次，连续5次；家兔放血占全血量30%，狗按40ml/kg放血，可反复几次，即可造成失血性贫血血虚动物模型[4]。
本类模型多为急性失血性血虚证，其制作思路不甚符合中医的生理病机，不能够充分反应中医的血虚证特点，不是中医血虚证的较好造模选择。
目前，多采用放血的同时结合其他方法制备慢性失血性血虚证动物模型。
2.1.2放血加适当限食方法欧敏等[5]每次由兔耳中央动脉、静脉及耳缘静脉放血，放血量为全身血容量的10％，隔日1次，共7次。
自造模之日起，家兔改为半量喂养。
桂蜀华[6]等采用每日小鼠尾部放血25滴，同时配合喂养低营养精面粉。
通过对血红蛋白的动态监测，证实第3周小鼠血红蛋白显著降低，停止放血后，继续喂精面粉7d，血红蛋白维持在原有水平不再回升。
2.1.3综合放血法梁毅等[7]采用慢性放血配合饥饿、疲劳法，制作出复合血虚证小鼠模型。
具体方法：放血。
由眼眶后静脉丛放血6～8滴（约0.5m1），隔日1次。
直至模型成功。
控制饮食。
自造模之日起改变其正常饮食量，控制在每日50g／kg体重，自由饮水。
劳倦。
小鼠每天在温水池中强迫游泳2次，每次游泳时间不定，以即将下沉为限，持续15～20d。
一般在造模第15天起显现血虚证症状体征。
失血法方法简单，指标明确，不需特殊设备，可有效降低外周血中全血细胞数量，但放血量难以精确控制，模型间差别较大。
着眼于直接造成外周血中的细胞数量减少，对机体造血系统功能的影响不大。
2.2化学损伤性血虚证动物模型2.2.1溶血性血虚证乙酰苯肼（APH）是一种强氧化剂，对红细胞（RBC）有缓慢的进行性氧化损伤作用，突出表现在干扰RBC内葡萄糖-6磷酸脱氢酶（G-6-PD），使RBC 易于崩解而出现溶血性贫血。
制备方法：选用Wistar大鼠，皮下注射2％APH生理盐水溶液，剂量为10ml ／kg体重。
实验分一次性给药和实验第1、4、7天3次给药两种，后者第2、3次给药剂量减半。
补血中药可防治和逆转由APH所致血虚证[8]。
小鼠皮下注射2%乙酰苯肼0.3ml/只，共2次；或在1、4、7天皮下注射乙酰苯肼0.2g/kg、0.1g/kg、0.1g/kg，第9天造成模型；或于第3天皮下注射乙酰苯肼0.2g/kg，第7天造成模型。
大鼠于第1、4天皮下注射乙酰苯肼0.16g/kg、0.08g/kg，8天造成模型，或两次剂量均为0.2g/kg，10天造成模型[4]。
溶血性血虚操作较失血性血虚更为方便，但由于红细胞变形及碎片的干扰，镜检计数较困难，以红细胞压积法代替镜检计数较为准确。
着眼于直接造成外周血中的细胞数量减少，对机体造血系统功能的影响不大。
2.2.2骨髓抑制性血虚证环磷酰胺（CTX）是常用的抗肿瘤药物和免疫抑制剂，是细胞毒制剂，其作用机制是抑制骨髓功能，使造血细胞生成减少。
小鼠以CTX100mg／kg体重腹腔注射1次，4天后外周血白细胞数明显下降。
大鼠以CTX灌胃，首次60mg／kg体重，1周后改用20mg/kg体重，3～4天1次，共2次；用30mg／kg体重，3～4天1次，共2次；大鼠以CTX静脉注射，第一周10mg ／kg体重，给药2次，第二周15mg／kg体重，给药1次，均可形成白细胞减少模型[9]。
此种造模方法简单易行，用量及时间可灵活掌握。
但其对红细胞作用不如对白细胞明显，且持续时间较短，如果受试药物显效较慢，模型动物血象即自然恢复，甚至出现反跳现象[10]。
丝裂霉素应用法:丝裂霉素是抗生素类广谱抗肿瘤，可抑制DNA复制，不良反应为骨髓抑制，以白细胞和血小板下降明显。
马里兰应用法:又名百消安，属磺酸酯类，在体内解离后起烷化作用，小剂量即可明显抑制粒细胞生成，剂量提高可抑制全血象。
顺铂致大鼠贫血模型:顺铂是常用的金属铂的络合物，为广谱抗肿瘤药，它能与DNA结合形成交叉键，防止其复制，高剂量时亦能阻止RNA 和蛋白质的合成，可骨髓抑制[4]。
2.2.3复合血虚证模型目前，化学损伤模型还采用APH与CTX联合使用的复合血虚证模型。
采用分次给药法:环磷酰胺总剂量为160mg/kg与乙酰苯肼总剂量为60mg/kg。
分别于第一天，第四天皮下注射乙酰苯肼20mg/kg、40mg/kg，第四天起，每日腹腔注射环磷酰胺40mg/kg，连续4日。
模型小鼠在注射后第4天即出体温显著降低，游泳时间缩短、血象异常的表现。
用当归补血汤能减轻骨髓细胞超微结构的损伤，显著增加血虚模型小鼠的红细胞、白细胞数，降低网织红细胞在外周血红细胞中过高的比例[10]。
袁久荣[11]等于造模第1天和第4天分别给予小鼠CTX60mg／kg体重，第4天和第7天分别给予APH0．1mg／kg体重制备血虚证模型，造模后第5天，小鼠出现懒动、竖毛、少食、体重下降、尾色苍白晦暗等现象。
造模后第11天模型小鼠外周血红细胞计数、血红蛋白量、白细胞数等均显著降低。
给予补血中药方剂的小鼠各项指标均显著高于模型小鼠。
此种造模方法与目前常用的血虚模型相比，从双重环节造成动物血虚，使模型动物的病理、生理变化不再局限于某一方面。
采用此方法造模，模型动物存活率较高，血虚状态的持续时间相对较长[12]。
2.3放射性损伤血虚证动物模型60Co射线等照射动物全身可使动物造血干细胞和祖细胞减少，骨髓造血机能受到抑制，从而使全血细胞下降，这种血虚类似临床上的再生障碍性贫血。
在以往的文献报导中[13]，常用的骨髓抑制性贫血小鼠模型的造模方法常用的主要剂量从7.5Gy～2Gy不等单纯的60co照射，高、中、低剂量组均能使全血细胞数和骨髓有核细胞数下降，高剂量组死亡率高，低剂量组自愈倾向明显，中剂量组虽避免了上两种缺陷，但粒系下降明显，红系和血小板下降不很理想[14]。
造模效果明显，但需特殊设备，且照射量的控制有一定难度，过小达不到损伤要求，偏大又会导致动物死亡，有时药物的作用难以观察。
2.3.1复合造模陈志伟[15]通过正常组、单纯照射组、单纯环磷酰胺注射组、照射加环磷酰胺注射组和照射加环磷酰胺加氯霉素注射组等复合造模比较骨髓造血情况，以期建立适用疗效观察的骨髓抑制性贫血小鼠模型。
结果根据死亡率和全血细胞数分析发现，复合造模照射加环磷酰胺组的效果最为突出。
方法：照射后给予环磷酰胺注射3d。
尤以2Gy+50mg环磷酰胺组效果最佳。
复合造模全血各系细胞数全面下降，模型稳定，复合造模的优势在于更符合骨髓抑制的临床表现：全血下降，骨髓有核细胞明显减少。
辐射和化疗造成骨髓抑制的机理不同：放射线直接损害干细胞和骨髓微环境，一定剂量后能造成骨髓抑制，对三系尤其对粒系造血影响明显。
细胞周期非特异性烷化剂环磷酰胺能通过烃化作用直接破坏DNA并阻止其复制，主要作用是抑制骨髓，引起细胞下降，对粒细胞和红系的影响非常明显，对血小板作用较轻。
复合造模的药效叠加造成第3天起全血下降，并且可持续一周以上，该法操作简便，复制周期短，成功率高的优点，是观察药物对骨髓抑制作用比较理想的动物模型[14,15]。
2.4免疫介导型血虚证动物模型2.4.1淋巴细胞输注介导动物模型建立机理：先使模型动物免疫功能严重受损，再输人一些特定的免疫活性细胞。
这些细胞在宿主体内生存，使宿主出现造血抑制，引起全血细胞减少。
可能是T 细胞通过细胞毒性及其释放的抑制性细胞因子，直接抑制造血或经凋亡导致骨髓衰竭。
一般方法为[16]：取DBA／2小鼠，断颈处死，95％乙醇浸泡消毒后，无菌条件下取出胸腺及颈、腋下、腹股沟淋巴结，加RPMI1640培养液，除去表面血污及黏附的结缔组织后，制成单细胞悬液，细胞计数，调节细胞浓度为1×106／ml，其胸腺细胞与淋巴结细胞比为1:2，并鉴定细胞活性应在95％以上。
Balb／c小鼠经X射线6.0Gy／3min亚致死剂量照射后1--4h内，立即经尾静脉输入上述细胞悬液，每只0．2ml。
但由于模型小鼠在短时间就全部死亡，推测由于射线剂量过大，故现常用5.5Gy的剂量处理小鼠。
实验表明[7,17]，采用免疫介导法复制的小鼠再障模型均在11～14天表现为皮毛枯搞、唇色眼睑苍白、拱背消瘦等中医血虚证临床特点，以及全血细胞减少、骨髓有核细胞下降等“髓不生血”的病理特点。
将正常亲代小鼠的淋巴细胞输注到杂交第一代小鼠体内也可以诱导AA，经过和未经过非致死剂量照射的子代小鼠会在2～3个星期内发生致命性的全血细胞减少。
但经过照射所建立的模型更加符合人类AA的发病特点[18,19]。
此类模型具有复制成功率高、稳定性好的特点。
并且还能和人类AA表现出相似的病理生理过程，使得研究者可以动态观察病情发展，更好地了解发病机制制作复杂，条件要求高。
2.4.2病毒感染介导动物模型建立持续的病毒感染可以使得机体免疫系统在清除病毒过程中发生异常而导致骨髓的衰竭。
