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神经生物学形态学方法（总结）一、束路追踪法（神经形态示踪方法）1. 辣根过氧化物酶示踪技术1971年，Kristenson和Olsson首先报道辣根过氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）可被神经末梢摄取，经轴浆逆行运输至神经元胞体，然后用组织化学方法即可显示出神经元的轮廓，从而创建了HRP追踪神经元示踪技术，即HRP法。
HRP法的基础是轴浆运输。
轴浆运输是神经元的一项基本活动，即沿其轴突有从胞体向末梢（顺向）及从末梢向胞体（逆向）的物质转运。
且不同的物质有不同的运输速度。
轴浆运输的特性为HRP在轴浆运输及其跨神经元的示踪技术奠定了基础。
该法为研究神经元之间的联系提供了一种简便可行的方法。
HRP是从辣根中提取出来的过氧化物酶，为一种结合酶，由一分子无色的酶蛋白与一分子棕色的铁卟啉辅基结合而成。
HRP比较稳定，63℃加热15min不失活。
其分子量约为40000，直径3.0nm，在水化情况下直径为5.34nm。
1966年，Shannom等曾将HRP分出A1、A2、A3 、B、C、D和E七种同工酶。
1976年，Bunt等曾试验了中枢神经系统对不同的HRP同工酶的摄取及运输能力，发现A同工酶几乎无逆行运输现象，而B、C同工酶的逆行运输效果较好，由此可见，HRP的选择是HRP追踪法成败与否的一个关键因素。
HRP法建立的早期，仅用于逆行追踪，即将HRP注入神经的末梢部位，经逆行轴浆运输至胞体，再通过酶组化染色显示。
以后的实验证明，HRP也可用于顺行运输，即将HRP注入神经元胞体所在部位，HRP可顺向运送至末梢部位。
近年来也发现，HRP注射于感觉神经末梢周围不仅可逆向标记背根节细胞，还可进一步沿背根节细胞顺向标记其所在脊髓的中枢投射，称为跨节标记（transganglionic labeling）。
与过去用于显示由损伤而引起纤维溃变的银染法相比，HRP法可更精确地研究神经纤维的联系。
辣根过氧化物酶分光光度法测定黄嘌呤氧化酶的活性李忠琴1 许小平2 杨海麟1 王武#11（江南大学工业生物技术教育部重点实验室，无锡214036） 2（福州大学化学化工学院，福州350002）摘 要 研究了以辣根过氧化物酶-苯酚-4-氨基安替比林反应显色新体系，检测黄嘌呤氧化酶（XOD ）活力的新方法。
确定该酶活性测定的最佳条件为：辣根过氧化物酶（HRP ）7000U /L ，4-氨基安替比林（AAP ）1mmol /L ，苯酚（PA ）6mmol /L ，黄嘌呤（XAN ）1mmol /L 溶于50mmol /L Tris-CL 缓冲液（pH 8.4）；反应温度为37℃，保温时间为20min ；检测波长为508nm 。
本方法测定XOD 酶活的线性范围为5.0～100.0U /L ，线性关系良好（r =0.9992），检出限为1.3U /L 。
该方法操作简单易行，测定结果准确可靠。
可有效应用于普通实验室和临床常规生化检测。
关键词 黄嘌呤氧化酶，辣根过氧化物酶，酶的活力测定，分光光度法2005-08-30收稿；2005-12-05接受本文系福建省自然科学基金（No.C0410006）和工业生物技术教育部重点实验室基金（No.KLIB-KF200502）资助项目1 引 言黄嘌呤氧化酶（xanthine oxidase ，XOD ，EC 1. 2. 3.22）是一种钼羟类胞质缀合酶。
主要用于痛风、心肌梗塞和细胞损伤后次黄嘌呤和黄嘌呤水平的检测［1～3］。
目前测定黄嘌呤氧化酶活力主要采用NBT /MTS-PMS 比色法、紫外分光光度法、电化学法及放射化学法［4～8］等方法。
但比色法形成的显色物溶解度低，PMS 对XOD 活性有一定的抑制，且NBT 、MTS 和PMS 试剂昂贵。
紫外分光光度法中黄嘌呤和尿酸的紫外吸收波长较接近，直接进行紫外检测，干扰严重。
其余两种方法操作繁琐，仪器设备要求高而难于推广。
本实验根据辣根过氧化物酶（horseradish peroxidase ，HRP ）［9］和黄嘌呤氧化酶的反应特性，提出了用XOD 偶联辣根过氧化物酶，直接测定黄嘌呤氧化酶活力的新方法。
酶联免疫吸附试验常用的酶和底物
酶联免疫吸附试验(ELISA)是一种常用的免疫学检测方法，其中常用的酶包括辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（AP）。
辣根过氧化物酶在底物存在下可以将无色的供氢体转化成有色产物，而碱性磷酸酶可以将底物转化成有色产物。
此外，根据实验需求，还可以选择其他种类的酶，如β-半乳糖苷酶等。
在选择酶时，需要考虑其底物类型、反应速度、稳定性以及成本等因素。
同时，还需要选择合适的底物，以与酶结合并产生颜色反应。
常用的底物包括酚类、硝基苯磷酸盐等，这些底物可以在酶的作用下产生颜色变化，从而用于检测抗原或抗体。
总之，在选择酶和底物时，需要综合考虑实验需求、反应速度、稳定性以及成本等因素。
hrp标记二抗的显色原理
HRP（Horseradish Peroxidase，辣根过氧化物酶）标记二抗是一种被广泛用于免疫
染色的技术。
该技术是一种非常敏感的技术，能够快速准确的检测和定位细胞的特定抗原。
它的基本原理是利用多氧化物酶HRP的特定特性配合荧光物质和碘醛来染色检测抗原，具
体的检测过程如下：
首先，把HRP标记的抗体和抗原结合在一起，结合相应的抗原，无论是单链抗体还是
双链抗体，它们都能够与抗原结合形成特异性抗原抗体复合物，HRP标记抗体在此过程中
就充当特异性抗原抗体的角色。
接着，在抗原抗体复合物的反应中添加一种叫做TMB的化学物质，此时HRP标记的抗
体就会利用原子氧做过氧化反应，产生了装着三价碘原子的化合物，即碘醛。
碘醛与TMB
发生反应，溶解发生发蓝色，最终形成显色物质，就可以对抗原进行检测出来。
HRP标记二抗的显色原理是基于HRP标记抗体发挥结合特异性反应，以及HRP多氧化
活性，HRP标记抗体结合到目标抗原所产生的特异性抗原抗体复合物中，利用HRP的多氧
化特性加氧反应，将氧化现象应用到与其体外透明的TMB的溶液系统中，TMB与碘醛发生
反应，并生成特征的蓝色，形成蓝色沉淀，而这种蓝色沉积的大小就代表了物体存在的抗
原抗体的数量，因此我们就可以用这种来方法判断抗原的存在数量。
辣根过氧化物酶催化降解间苯二酚的研究王亚丽;魏娟娟【摘要】研究了不同反应条件对辣根过氧化物酶催化H2O2氧化降解间苯二酚的影响,主要包括溶液pH值、反应温度、反应时间、H2O2用量、间苯二酚初始浓度等.结果表明:间苯二酚在辣根过氧化物酶催化、H2 O2氧化的反应体系中性质不稳定,且易被降解,在合理的反应条件下,间苯二酚的降解率达到了96.1％.【期刊名称】《宁夏师范学院学报》【年(卷),期】2015(036)006【总页数】8页(P47-54)【关键词】辣根过氧化物酶;间苯二酚;降解【作者】王亚丽;魏娟娟【作者单位】宁夏师范学院化学化工学院,固原756000;宁夏师范学院化学化工学院,固原756000【正文语种】中文【中图分类】O643.3间苯二酚废水具有色度高、有机物含量高、成分复杂、难降解等特点，是典型的毒性有机工业废水，环境危害极大[1].目前，国内外常用的处理降解废水的方法分为三大类：物理法、化学法和生物法[2].通常物理法和化学法处理效率较高，但是处理量较小，费用高，难操作，投加的化学药品易引起二次污染等[3].相比之下，生物法处理费用较低，简单易行[4]，而且可以大规模化应用.在废水处理的研究中，辣根过氧化物酶得到了广泛应用.辣根是一种常年生长的香草，它的根有一种含量丰富的过氧化物酶，被称为“辣根过氧化物酶”，而“辣根过氧化物酶”因其具有高效的催化性能[5]，成为很多废水处理中首选的生物高效催化剂.同时辣根过氧化物酶可应用于有机合成、相关酶检测、生物转化、发光检测、临床化学、免疫检测、环境化学等领域[6-9]，它能够催化过氧化氢氧化一系列有机物和无机物，如苯酚、间苯二酚、联苯胺及其取代物，其在环境降解方面日益受到人们的青睐[10].基于生物降解的环保性，本实验采用绿色氧化剂H2O2氧化、辣根过氧化物酶(HRP)催化降解间苯二酚，以此探究该方法针对间苯二酚的降解效果.间苯二酚的结构如图1所示.辣根过氧化物酶(RZ=1.5，阿拉丁化学试剂有限公司)；盐酸(GR，西安化学试剂厂)；间苯二酚(阿拉丁化学试剂有限公司)；磷酸二氢钾(AR，西安化学试剂厂)；磷酸氢二钾(AR，西安化学试剂厂)；30%的H2O2 (国药集团化学试剂有限公司). 分析天平(BS 124S，北京赛多利斯仪器系统有限公司)；pH酸度计(pH S-25，上海精密科学仪器有限公司)；移液枪(100 μL～1000 μL，20 μL ～200 μL，百得实验仪器有限公司)；微量进样器(10 μL，上海安亭微量进样器厂)；紫外-可见分光光度计(UV，TU-1810，北京普析通用仪器有限责任公司)；傅立叶变换红外光谱仪(WQF-510，北京瑞利分析仪器公司)；高效液相色谱仪(G1314B，安捷伦科技有限公司).磷酸缓冲溶液的配制：取一定体积的0.1 mol·L-1的 KH2PO4 溶液，加入少量的0.1 mol·L-1K2HPO4 溶液，用1∶1的盐酸溶液调节成 pH值为1～4的磷酸溶液. 取一定体积的0.1 mol·L-1的K2HPO4溶液，用0.1 mol·L-1KH2PO4 溶液互调成pH为5～8的磷酸缓冲溶液.间苯二酚溶液配制：称取0.1376 g间苯二酚于250 mL容量瓶中定容，用超纯水配制成浓度为5 mmol·L-1的储备液.用移液管移去不同体积的储备液于50 mL的容量瓶中定容，配制成所需不同浓度的间苯二酚溶液，溶液均保存于阴暗干燥处. 称取0.0145 g的辣根过氧化物酶用 pH 为7 的磷酸缓冲溶液定容在1.5 mL的离心管中，配制成浓度为0.0097 g/mL的辣根过氧化物酶溶液.在紫外-可见分光光度计上，以pH为7的磷酸缓冲溶液为参比，在200 nm～700 nm的波长范围内对所配酶溶液扫谱，以波长为横坐标、吸光度为纵坐标，绘制吸收曲线如图2所示，计算HRP 的纯度RZ=A380/A280，为1.09.间苯二酚特征吸收波长的确定及标准曲线的绘制：在紫外-可见分光光度计上，以超纯水为参比，在200 nm～400 nm的波长范围内对间苯二酚溶液扫谱，每隔10 nm记录不同波长下的吸光度，以波长为横坐标、吸光度为纵坐标，绘制吸收曲线，如图 3 所示，确定特征吸收波长为265 nm.配制浓度分别为0.2 mmol·L-1、0.4 mmol·L-1、0.6 mmol·L-1、0.8 mmol·L-1、1. 0 mmol·L-1、1.2 mmol·L-1的间苯二酚水溶液，在5.0 mL的离心管中，加入1800 μL pH为4.0的磷酸缓冲溶液、200 μL不同浓度的间苯二酚溶液，30℃下恒温15 min，取出溶液加入到1.0 cm的石英比色皿中测定不同浓度的间苯二酚溶液在其特征吸收波长 265 nm处的吸光度，以吸光度-浓度作图得出间苯二酚的标准曲线，如图4所示，间苯二酚的初始浓度在0.2 mmo l·L-1～1.2 mmol·L-1之间呈线性关系.因此，把该范围应用于间苯二酚降解的整个实验中.间苯二酚降解的最佳条件测定：在5.0 mL的离心管中加入1600 μL不同pH的磷酸缓冲溶液、200 μL不同浓度的间苯二酚溶液和100 μL 0.0097 g/mL辣根过氧化物酶溶液，最后加入100 μL 2.0 mmol·L-1的 H2O2溶液开始反应，反应在30 ℃下进行，反应15 min.用紫外可见分光光度计测定间苯二酚在其特征吸收波长265 nm处吸光度值，按下面公式计算间苯二酚降解率:在5.0 mL离心管中加入1600 μL pH为4.0的磷酸缓冲溶液、200 μL浓度为0.6mmol·L-1的间苯二酚溶液、100 μL 0.0097 g/mL的辣根过氧化物酶溶液，最后加入100 μL 2.0 mmol·L-1的H2O2 溶液30 ℃下进行反应，考察反应时间对降解率的影响，结果如图5所示.间苯二酚在25 min～30 min时降解率增大较快，当反应时间到30 min 时降解率为54.8%，反应时间超过30 min后，降解率下降较快，随着反应的进行可能发生了副反应，影响降解.在5.0 mL离心管中加入1600 μL pH 为4.0的磷酸缓冲溶液、200 μL浓度为0.6 mmol·L-1间苯二酚溶液、100 μL浓度为0.0097g/mL辣根过氧化物酶溶液，最后加入100 μL 2.0 mmol·L-1的H2O2溶液，不同温度下反应30 min，考察反应温度对降解率的影响，结果如图6所示.由图可知，间苯二酚降解的最佳温度为40℃，降解率为65.1 %.高于40℃时随温度的升高酶的活性下降，降解率下降.在5.0 mL离心管中加入1600 μL不同 pH 的磷酸缓冲溶液、200 μL浓度为0.6m mol·L-1间苯二酚溶液，加入100 μL 0.0097 g/mL辣根过氧化物酶，最后加入100μL 2.0 mmol·L-1的 H2O2溶液，恒温40℃，反应30 min，考察磷酸缓冲溶液 pH 对降解率的影响，结果如图7.从图中可以看出，间苯二酚降解的最佳pH为5.0，降解率为71.4 %.pH不同，辣根过氧化物酶对间苯二酚降解的作用能力也不同.间苯二酚显酸性，在酸性的环境能有效地促进降解的效果.在5.0 mL离心管中加入1600 μL pH为5.0的磷酸缓冲溶液、200μL浓度为0.6mmol·L-1间苯二酚溶液、100 μL浓度为0.0097 g/mL辣根过氧化物酶溶液，最后加入100 μL不同浓度的H2O2溶液，恒温40℃，反应30 min，考察H2O2 浓度对降解率的影响，结果如图8所示.从图中可以看出，间苯二酚降解最适的H2O2 浓度为1.75 mmol·L-1，降解率为 88.7 %，过氧化氢浓度在0.5 mmol·L-1～1.75 mmol·L-1范围内时促进反应的进行，大于1.75 mmol·L-1时会使辣根过氧化物酶的活性降低，导致间苯二酚降解率下降.在5.0 mL离心管中加入1600μL pH为5.0的磷酸缓冲溶液、200 μL不同浓度的间苯二酚溶液，100μL浓度为0.0097 g/mL辣根过氧化物酶溶液，最后加入100μL 1.75 mmol·L-1H2O2溶液，40℃下反应30min，考察间苯二酚初始浓度对间苯二酚降解率的影响，结果如图9所示.结果表明：间苯二酚在初始浓度为1.2 mmol·L-1，30 min时的降解率达到 96.1%.在最佳的催化体系下，将间苯二酚降解的最终产物用三氯甲烷进行萃取，由于三氯甲烷的密度大于水的密度，根据相似相容原理，将下层液体取出后进行红外光谱测定.将间苯二酚红外光谱图10与降解后产物的红外谱图11通过特征吸收峰进行对比，在3300cm-1处，图10有明显的吸收峰，图11吸收峰接近消失；在2300 cm-1处图10无明显吸收峰，图11出现吸收峰，说明有新物质生成；其它各处，图10吸收峰均强于图11通过对比吸收峰的变化，说明间苯二酚被降解.在最佳催化体系下将间苯二酚的降解产物用三氯甲烷进行多次萃取，取下层液体于离心管中离心2 min，取1000 μL中间清液放置于干净的进样瓶中待测.将间苯二酚的高效液相色谱谱图12(a)与降解后产物的高效液相色谱谱图12(b)进行对比，在1.805 s处降解后产物峰面积较降解前间苯二酚明显降低.因此，间苯二酚已被较好的降解.间苯二酚在辣根过氧化物酶催化、H2O2氧化的反应体系中易降解.在 pH 5.0、温度40 ℃、反应时间30 min、初始浓度为1.2 mmol·L-1的间苯二酚溶液和1.75 mmol·L-1H2O2溶液条件下的降解率为96.1 %.。
TMB和HRP显色原理TMB和HRP是两种常用的生化试剂，它们可以被用于检测蛋白质、核酸等生物分子。
这两种试剂在实验室中被广泛应用，尤其是在免疫学和分子生物学领域。
本文将介绍TMB和HRP显色原理的基本知识，并探索它们在实验中的应用。
TMB显色原理TMB（3,3',5,5'-四甲基联苯基二胺）是一种常用的底物，它可以被氧化酶催化剂转化成可见的蓝色产物。
这种催化剂通常是过氧化物酶（POD）或碱性磷酸酶（AP）。
TMB的显色原理可以用以下反应式表示：TMB + H2O2 + POD/AP → OX-TMB + H2OOX-TMB是一种氧化物，它的颜色比TMB更深。
因此，当TMB被氧化后，溶液会从无色或浅黄色变为蓝色或深紫色。
这种反应的灵敏度很高，因此可以用于检测很低浓度的蛋白质或其他生物分子。
HRP显色原理HRP（辣根过氧化物酶）是一种常用的酶标记试剂，它可以与抗体或其他分子结合，用于检测蛋白质、核酸等生物分子。
HRP的显色原理也是氧化还原反应。
HRP可以将底物（如TMB）氧化成可见的产物。
HRP的显色原理可以用以下反应式表示：HRP + H2O2 + Substrate → OX-Substrate + H2OOX-Substrate是一种氧化产物，它的颜色比底物更深。
因此，当底物被氧化后，溶液会从无色或浅黄色变为蓝色或深紫色。
这种反应的灵敏度很高，因此可以用于检测很低浓度的蛋白质或其他生物分子。
应用TMB和HRP显色原理在实验室中被广泛应用，尤其是在免疫学和分子生物学领域。
以下是一些应用示例：1. 酶联免疫吸附试验（ELISA）ELISA是一种常用的免疫学检测方法，它可以用于检测蛋白质、抗体、荷尔蒙等生物分子。
在ELISA中，TMB和HRP被用作底物和酶标记试剂，用于检测特定分子的存在和浓度。
这种技术被广泛应用于医学、生物技术和环境监测等领域。
2. 蛋白质印迹（Western blot）Western blot是一种常用的蛋白质检测方法，它可以用于检测特定蛋白质的存在和表达量。
辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG（Goat Anti-rabbit IgG/HRP）规格：0.1ml/1ml抗体来源：Goat克隆类型：Polyclonal交叉反应：Rb产品应用：WB=1:1000-10000ELISA=1:1000-10000IHC-P=1:100-1000IHC-F=1:100-1000not yet tested in other applications.optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.分子量：150kDa性状：Lyophilized or Liquid浓度：2mg/1ml免疫原：Full length plasma protein亚型：IgG纯化方法：affinity purified by Protein A储存液：0.01M PBS,pH7.4with10mg/mL BSA and0.1%Gentamicin保存条件：Storage:Store at–20oC for one year.Avoid repeated freeze/thaw cycles.The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at-20oC.When reconstituted in sterile distilled water or diluent supplied, theantibody is stable for at least two weeks at2-4°C.产品介绍：Immunoglobulin G(IgG),is one of the most abundant proteins in serum with normal levels between 8-17mg/mL in adult blood.IgG is important for our defence against microorganisms and themolecules are produced by B lymphocytes as a part of our adaptive immune response.The IgG molecule has two separate functions;to bind to the pathogen that elicited the response and to recruit other cells and molecules to destroy the antigen.The variability of the IgG pool is generated by somatic recombination and the number of specificities in an individual at a given time point is estimated to be1011variants.Important Note:This product as supplied is intended for research use only,not for use in human,therapeutic or diagnostic applications.。
酶标记抗体
产品概述：
酶标记抗体,是一类广泛用于生物学和医学科学的许多领域，具有高特异性、高敏感性和安全的免疫化学试剂。
目前较为常用的辣根过氧化物酶（HRP）标记抗体就是其中的一种，它是经过化学方法将辣根过氧化物酶（HRP）标记在抗体IgG分子上而制成的HRP－抗体结合物。
我公司向用户提供的各类辣根过氧化物酶标记产品均为本公司自主研发的产品，HRP 购于美国SIGMA公司的产品，根据本公司建立的目前较先进的过碘酸钠氧化法标记技术而成。
每种成品已加入一定浓度的BSA作为稳定剂。
产品的工作浓度根据方法不同而别，用前最好-20℃冻存，避免反复冻融。
应用范围：
应用于抗原决定族的抗原性分析鉴定，各种抗原、抗体的定量、定性及定位分析测定等。
工作中应注意的问题：
1、包被抗体或抗原不适，易产生阳性值较小，或产生变异，即跳管现象。
2、用抗血清不纯化，或纯化程度太低的抗体包被，则阳性值较小，或没有阳性梯度。
3、封闭不好或标记物过浓可产生对照较高。
主要性能：
每只0.1ml液体，内含IgG约1mg/ml，1% BSA，0.01%庆大霉素。
-20℃保存，稳定期一年。
4℃保存约3～6个月，4℃可30天左右。
稀释液为：0.01mol/L pH7.4PBST。
工作效价：
ELISA法：1：5000～10000
免疫印迹法：1：500～5000。
酶和底物酶和底物：主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶，还有β-半乳糖苷酶、尿酶等。
1. 辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP) 应用最广泛。
是从辣根菜中提取的酶类，由糖蛋白和辅基（含铁血红素）构成，辅基为酶活性中心所在，在403nm波长处有最大吸收峰，糖蛋白在275nm波长有最大吸收峰，故用A403nm与A275nm比值代表纯度（reinheir zahl,RZ）。
用于酶免疫技术的HRP，其RZ值应大于3.0。
但注意酶纯度不代表酶活力，酶变性后，RZ不变但活力下降。
HRP的底物有可溶性和不溶性两种。
不溶性底物用于酶免疫组化技术：可溶性底物用于酶免疫测定技术：2. 碱性磷酸酶（alkaline phospharase,AP）可从大肠杆菌或小牛肠粘膜中提取，敏感性高，空白值低。
AP不溶性底物：AP可溶性底物一般采用对硝基苯磷酸酯（P-nitrophenyl phosphate,P-NPP），产物呈黄色，测定波长为405nm。
酶标记物的制备酶标记物的制备：抗原由于化学结构的不同，可用不同的方法与酶结合，如为蛋白质，可参照抗体酶标记的方法，酶标记抗体的制备一般用戊二醛法和过碘酸盐法。
1. 戊二醛法：戊二醛是一种双功能团的交联剂，分别与酶分子和免疫球蛋白分子上的氨基结合。
戊二醛交联可用一步法（如连接AP），也可用二步法（如连接HRP）。
⑴一步法：将2～5mg纯抗体与5mgA P混合于0.1mol/L pH 6.8的磷酸盐缓冲液1ml中，4℃下用同上缓冲液透析平衡。
磁力搅拌下加入1%戊二醛0.05ml，在室温下放置2h，在4℃下用0.05mol/L pH 8.0 Tris缓冲液透析平衡，即可。
⑵二步法：第一步将过量的戊二醛与酶反应，使酶仅与戊二醛结合；第二步是除去多余的戊二醛分子，加入免疫球蛋白，使球蛋白上的氨基与已结合酶的戊二醛分子上的另一活性基团结合，形成一分子酶和一分子免疫球蛋白结合物。
酶联免疫反应常用底物辣根过氧化物酶HRP底物辣根过氧化物酶（Horseradish Peroxidase, HRP）具有分子量小，标记方法简单，性质稳定等优点，是临床检验试剂中常用的酶。
该产品广泛用于各类生化检测项目及免疫类（ELISA）试剂盒。
中华试剂网辣根过氧化物酶的底物种类丰富，可满足不同的实验需求。
■ HRP的发色底物辣根过氧化物酶发色底物为过氧化物和供氢体（DH2），其真正底物是H2O2，但人们习惯把供氢体称为底物或统称供氢体底物。
在ELISA中常用的供氢体有以下几种：1、OPD是ELISA技术中应用较多的供氢体，酶作用后显黄色（最大吸收波长为492 nm），其灵敏度高，测定方便。
2、TMB是近年来常用的一种供氢底物，经酶作用后显天蓝色，目测对比度鲜明，加酸终止酶反应后变黄色（最大吸收波长为450 nm），易比色定量测定。
3、DBA供氢底物，其反应产物为不能溶解的棕色吩嗪衍生物，可用不同光镜观察。
此种多聚物能被还原和唑-6-磺酸)铵盐3-氨基-9-乙基咔唑3-Amino-9-ethylcarbazole, AEC红色、可溶性132-32-15 g25g4-氯-1萘酚Chloro-1-naphthol 蓝色、可溶性604-44-425g※小贴士：氧化物、硫化物、氟化物及叠氮化物等可抑制HRP的活性，故勿用这类试剂作为防腐剂。
■ HRP的发光底物鲁米诺（3-氨基邻苯二甲酰肼，Luminol）或其衍生物如异鲁米诺（4-氨基邻苯二甲酰肼，Isoluminol），是一类重要的发光试剂。
用HRP标记抗体，进行免疫反应后，利用鲁米诺作为发光底物，在HRP和起动发光试剂(NaOH+H2O2)作用下，鲁米诺发光，发光强度依赖于酶免疫反应物中酶的浓度。
反应过程如下图所示：产品编号中文名称英文名称CAS纯度包装328061 鲁米诺Luminol 521-31-398%1 g5 g25 g分子式：C8H7N3O2分子量：433.63熔点：194-195℃储存条件： 2-8°C产品编号中文名称英文名称CAS号纯度包装A5300 异鲁米诺Isoluminol 3682-14-298%1 g 10 g分子式：C8H7N3O2分子量：177.16熔点：194-195℃储存条件： 2-8°C■配套产品中文名称英文名称CAS号纯度包装4-碘苯酚4-Iodophenol 540-38-5 99%5 g 25 g 100 g四苯基硼酸钠Sodium tetraphenylborate 143-66-8 99.5%(ACS)25 g 100 g 500 g牛血清白蛋白Bovine serum albumin [ FractionV], BSA9048-46-8 ——5 g25 g100 g十二烷基硫酸钠Dodecyl sulfate sodium salt, SDS 151-21-3 99% 100 g 500 g脱氧胆酸钠Sodium deoxycholate 302-95-4 98%25 g 100 g 500 g苯甲基磺酰氟化物Phenylmethylsulfonylfluoride, PMSF329-98-6 99%25 g100 g亮抑酶肽Leupeptin 103476-89-7 96.5% 10 mg 50 mg三（羟甲基）氨基甲烷盐酸盐Tris(hydroxymethyl)aminomethanehydrochloride, Tris-HCl1185-53-1 99%25 g100 g500 g吐温80 Polysorbate 80 9005-65-6 ——250 mL1 L碱性磷酸酶底物碱性磷酸酶(Alkaline phospharase, AP)是一种能够在碱性情况下将对应底物去磷酸化的酶，广泛分布于人体的各脏器器官中，以肝脏、骨骼、小肠中存在的量最多。
化学发光常用的氧化剂
1、酶促反应发光剂利用标记酶（辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶）的催化作用，使发光剂（底物）发光。
辣根过氧化物酶催化的发光剂为鲁米诺及其衍生物；碱性磷酸酶催化的发光底物为AMPPD。
2、直接化学发光剂在发光免疫分析过程中不需酶的催化作用，直接参与发光反应，可直接标记抗原或抗体。
吖啶酯是目前常用的直接标记发光剂。
①吖啶酯：在碱性条件下被H2O2氧化时，发出波长为470nm的光，其激发态产物N-甲基吖啶酮是该发光反应体系的发光体。
②三联吡啶钌：电化学发光剂，和电子供体三丙胺（TPA）在阳电极表面可同时失去一个电子发生氧化反应。
