Protamex复合蛋白酶水解大豆分离蛋白的研究
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酶解大豆分离蛋白的特性研究页数:6
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Protomax 复合蛋白酶
储存
建议将 酶 储存 于 0-25°C （ 32-77°F ）的 密闭 容 器 中， 保持干燥 ， 避免阳光直 晒。本产品配至最佳的稳定性。然而随时间的推移，酶会逐渐失去活力。延期 储存或不宜条件，如较高的温度或湿度，会导致较高的添加量。
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应用
与其它多种内切蛋白酶不同，Protamex 即使在低水解度的情况下也不会产生 苦味的蛋白质水解物。 添加量 最佳添加量应由试验确定。
反应参数
应用实验确定，最佳工作条件为 pH 5.5-7.5，温度 35-60°C（9
60
40
25ºC
20
6
7
8 pH
图 1.不同温度下 pH 对 Protamex 活力的影响 底物：变性血红蛋白 方法：A F4
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2002-14778-01 19 07 2002 © Novozymes A/S
毛霉蛋白酶的组分特性及对大豆蛋白水解的研究
毛霉蛋白酶的组分特性及对大豆蛋白水解的研究潘进权 罗晓春 谢明权(华南理工大学生物科学与工程学院,广州 510641)摘 要 毛霉是腐乳酿造的主要微生物之一,其分泌的蛋白酶对大豆蛋白具有较高的水解效率以及对蛋白水解物良好的脱苦效果,因此在大豆蛋白水解加工方面显示出很好的应用前景。
本研究采用多种蛋白纯化的方法从毛霉胞外分离纯化出三种不同的蛋白酶组分。
在探讨了各组分蛋白酶性质的基础上,考察了各种蛋白酶组分对大豆蛋白的水解效果。
结果显示,纯化得到的碱性蛋白酶组分Pb1对大豆蛋白具有相对较强的水解能力,而酸性蛋白酶对大豆蛋白水解能力较差,碱性蛋白酶与酸性蛋白酶之间具有良好的协同作用。
关键词 雅致放射毛霉 蛋白酶 性质 大豆蛋白 水解中图分类号:TS201.2 文献标识码:A 文章编号:1003-0174(2009)05-0031-05毛霉是腐乳发酵生产的主要菌种之一,在腐乳生产工艺中其主要作用是分泌蛋白酶水解豆腐胚内的大豆蛋白。
已有的研究发现,腐乳成品中的蛋白质主要是以多肽的形式存在,具有相当高的水解程度,并且已经从中分离出多种具有生理活性的多肽[1-2];而对众多腐乳产品的感官分析也表明,腐乳产品通常不具有一般蛋白水解物所特有的苦味。
综合以上两点来看,毛霉蛋白酶在解决植物蛋白(尤其是大豆蛋白)水解方面存在的技术难题,如水解率低、水解产物具有强烈的苦味等具有很大的潜力。
与其它真菌(如米曲霉、青霉、红曲霉等)相类似,毛霉由于长期在高蛋白的培养基上生长驯化,因此,它具有合成及分泌多种胞外蛋白酶的能力[3],而且其胞外蛋白酶系对于大豆蛋白具有很好的适应性,显示出相当高的水解效率[4]。
然而,对毛霉胞外蛋白酶系的深入研究却一直以来为国内外学者所忽视,仅有极少量的报道初步探讨了毛霉胞外蛋白酶的构成,以及粗酶液对大豆蛋白的水解效果,几乎没有报道深入到该蛋白酶系的组分构成以及各组分的催化特性。
为了较全面的了解毛霉胞外蛋白酶系的构成,本研究深入探讨了毛霉胞外蛋白酶系的组分构成,各蛋白酶组分的催化特性以及对大豆蛋白的水解特性以期为毛霉胞外蛋白酶的应用提供借鉴。
用蛋白酶组合对大豆分离蛋白改性的研究
用蛋白酶组合对大豆分离蛋白改性的研究近年来，大豆分离蛋白（SDP）已成为世界上最受欢迎的饲料原料之一。
大豆分离蛋白具有丰富的氨基酸组成，其中以高水平含有鲜明的优势。
为了更有效地利用SDP，过去几年来，越来越多的研究者致力于开发新型的蛋白酶组合来改性SDP，以改善其饱和度、水稳定性和功能性特性。
随着技术的发展，已经发现大豆分离蛋白可以通过蛋白质酶复合物进行改性，以改善其性能。
蛋白质酶改性技术是利用植物源蛋白酶分解微生物源大豆抗原结构，使其更可靠地抵抗水和高温条件。
蛋白质酶复合物具有抗氧化、抗过氧化和保护营养价值的优势，具有改善蛋白质功能性能的潜力。
为了更好地研究蛋白酶复合物对大豆分离蛋白改性的作用，该研究旨在研究用于改性SDP的不同蛋白酶复合物的组合。
研究人员在实验室中进行了蛋白质酶复合物改性SDP的实验，分别用不同组合的蛋白酶复合物改性SDP样品，并评估了改性后的蛋白质的水稳定性和饱和性。
研究发现，蛋白酶复合物改性的SDP具有更低的饱和度和更高的水稳定性。
此外，为了进一步评估蛋白酶复合物改性的SDP的水稳定性，研究者进行了延长处理实验，发现蛋白酶复合物改性的SDP显示出更高的稳定性。
研究人员推断，这可能是由于酶复合物改性可以促进残留蛋白质的拉伸和形成更强的交联网络以抵御水吸收，因此提高了蛋白稳定性。
总之，本研究发现，蛋白酶复合物可以有效地改性大豆分离蛋白，使其具有更好的水稳定性和低饱和度特性。
此外，本研究还发现，改性后的大豆分离蛋白抗高温和水吸收的能力更强。
本研究为大豆分离蛋白的改性提供了一种有效的技术手段，并为今后研究蛋白酶复合物对大豆分离蛋白改性的作用提供了参考。
Protamex复合蛋白酶水解大豆分离蛋白的研究
Protamex复合蛋白酶水解大豆分离蛋白的研究
刘艳秋;陈光;孙旸
【期刊名称】《食品科学》
【年(卷),期】2005(026)006
【摘要】为优化大豆分离蛋白酶水解条件,本试验采用二次回归正交旋转组合设计方法对Protamex复合蛋白酶水解大豆分离蛋白的条件进行研究.建立了水解度(DH)与pH值、反应温度、反应时间、底物浓度、酶与底物浓度比之间的数学模型;并获得最佳水解工艺条件:pH值6.5,温度40℃,水解时间10h,底物浓度14%,酶与底物浓度比4.5%;主成分分析表明,pH对DH的贡献率最大.
【总页数】4页(P155-158)
【作者】刘艳秋;陈光;孙旸
【作者单位】吉林农业大学生物技术学院,吉林,长春,130118;吉林农业大学生物技术学院,吉林,长春,130118;吉林农业大学生物技术学院,吉林,长春,130118
【正文语种】中文
【中图分类】TS224
【相关文献】
1.Protamex复合蛋白酶水解牛肉的研究 [J], 张谦益
2.Protamex蛋白酶水解大豆分离蛋白的研究 [J], 周媛媛;周瑞宝
3.Protamex蛋白酶水解大豆蛋白制备啤酒糖浆复配液的研究 [J], 周泓江; 黄隽光; 罗建勇; 史一白; 钱芳; 黄立新
4.克氏螯虾虾头Protamex蛋白酶水解产物的抗氧化活性和功能性质研究 [J], 李
松林
5.Protamex复合蛋白酶水解大豆分离蛋白的研究 [J], 刘艳秋;陈光
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蛋白酶水解大豆分离蛋白的分子水平表征
蛋白酶水解大豆分离蛋白的分子水平表征庞美蓉;丁秀臻;孔祥珍;华欲飞【期刊名称】《中国油脂》【年(卷),期】2013(038)005【摘要】采用两种蛋白酶(胃蛋白酶和碱性蛋白酶)对大豆分离蛋白进行水解,水解结束调节pH至4.8,离心分离得到酸可溶蛋白和酸不可溶蛋白.考察不同的蛋白酶、水解时间、温度以及未添加蛋白酶的情况下,酸不可溶蛋白所占比例,并采用SE-HPLC和SDS-PAGE对这些酶解物进行了分子水平的表征.结果发现:胃蛋白酶选择性地水解大豆球蛋白(11S),在pH 2.0、37℃条件下水解6h,酸不可溶蛋白所占比例为51.14％,其相对分子质量大于10 kDa的部分占到50％以上.水解温度对碱性蛋白酶水解大豆分离蛋白的影响较大,在pH 8.0、60℃条件下水解1h获得的大豆分离蛋白碱性蛋白酶酶解物的相对分子质量主要分布在20 kDa以下.不同蛋白酶水解大豆分离蛋白,其水解进程存在显著差异,即使是采用同一种蛋白酶进行水解,不同的水解条件下得到的酶解物分子结构也大不相同.【总页数】4页(P20-23)【作者】庞美蓉;丁秀臻;孔祥珍;华欲飞【作者单位】江南大学食品学院,食品科学与技术国家重点实验室,江苏无锡214122;江南大学食品学院,食品科学与技术国家重点实验室,江苏无锡214122;江南大学食品学院,食品科学与技术国家重点实验室,江苏无锡214122;江南大学食品学院,食品科学与技术国家重点实验室,江苏无锡214122【正文语种】中文【中图分类】TS229;TQ937【相关文献】1.风味蛋白酶水解大豆分离蛋白的抗原性及功能特性变化 [J], 王章存;王佩;安广杰;胡金强;赵学伟;袁路阳2.酪蛋白-胰酶水解历程分子量变化模拟与三维表征 [J], 苏荣欣;邹龙花;齐崴;王梦凡;何志敏3.大豆分离蛋白与大豆蛋白酶水解产物复配对面条品质的影响 [J], 郭兴凤;阎欣;王瑞红;张莹莹;魏倩4.木瓜蛋白酶与中性蛋白酶水解大豆分离蛋白的研究 [J], 钟振声;陈钰;文锡莲5.大豆分离蛋白重组蛋白酶水解肽对小鼠免疫功能及抗氧化能力的影响 [J], 曾松荣;庞彦韬;柯野;何璐娜;刘玉萍因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
一种复合蛋白酶水解大豆蛋白最适工艺条件的研究
随着人们对大豆食品营养保健功能的认识， 市场上 豆粉的需求量越来越大， 尤其无糖豆粉更加受到青睐。 无糖豆粉的速溶性一直是豆粉生产厂家需要解决的关键 技术。 采用蛋白酶对大豆蛋白适当水解可以增加豆粉的 速溶性， 但水解后一方面会产生苦味， 另一方面水解度 小增溶效果不明显， 水解度过大， 蛋白质会变成中小分 子的肽和氨基酸。 使用复合蛋白酶是解决苦味比较有Байду номын сангаас 的方法， 但复合蛋白酶是几种蛋白酶混合而成， 每种蛋 白酶其最适宜的作用条件不同， 本文对一种复合蛋白酶 水解大豆蛋白最适工艺条件进行研究， 旨为无糖豆粉的 生产提供理论依据。
参考文献
［1］ 王 刚 民． 果 脯 蜜 饯 发 展 之 我 见 ［J］ ． 山 西 食 品 工 业 ， 2003 （3） ：
132
· 2011.02
13～14． ［2］ 黄泽元， 汪芳安． 果蔬脯水分活度降低剂选择研究 ［J］ ． 食品工
业科技， 2002 （2）： 16～17． ［3］ 张水华， 孙君社， 薛毅． 食品感官鉴评 ［M］ ． 广州： 华南理工大
水解度的测定过程： 取灭酶后 的 8．0mL 水 解 液 ， 置 于 150mL 的烧瓶中， 加入 60mL 去 CO2 蒸馏水， 调节 pH 值 为 8．2； 加 入 10mL 中 性 （pH 值 8．2） 甲 醛 溶 液 混 匀 ； 开 动 磁 力 搅 拌 器 ， 搅 拌 加 入 甲 醛 溶 液 的 水 解 液 10min； 用 0．1mol ／ L 的 NaOH 标准溶液滴定 pH 值为 9．2， 记录滴
合蛋白酶 5％ （占干物质 ）， 1 只 做 空 白 ， 其 余 7 只 放 入 55℃的 水 浴 锅 中 保 温 ， 每 隔 1h 取 出 1 只 ， 沸 水 中 灭 酶 10min， 测其水解度。 时间对复合酶水解大豆蛋白的影响 如图 2 所示。
不同蛋白酶酶解大豆蛋白的过程变化规律研究
不同蛋白酶酶解大豆蛋白的过程变化规律研究黄薇;宋永康;林虬;姚清华;林健【期刊名称】《粮食与饲料工业》【年(卷),期】2012(000)010【摘要】选择6种蛋白酶(Alcalase、胰蛋白酶、Protex.7L、Protamex、Flavourzyme和木瓜蛋白酶),对酶解大豆蛋白制备大豆蛋白水解液的过程变化规律进行了研究.以水解度、可溶性蛋白得率、多肽得率、寡肽得率及游离氨基酸得率为指标对酶解过程进行分析.结果表明,Alcalase水解大豆蛋白的能力最强,生成的多肽、寡肽以及游离氨基酸的量最多；胰蛋白酶酶解产物的分子量偏大；Flavourzyme水解出的游离氨基酸含量占可溶性蛋白的比例较高.【总页数】4页(P22-25)【作者】黄薇;宋永康;林虬;姚清华;林健【作者单位】福建省农业科学院中心实验室,福建福州 350003;福建省精密仪器农业测试重点实验室,福建福州 350003;福建省农业科学院中心实验室,福建福州350003;福建省精密仪器农业测试重点实验室,福建福州 350003;福建省农业科学院中心实验室,福建福州 350003;福建省精密仪器农业测试重点实验室,福建福州350003;福建省农业科学院中心实验室,福建福州 350003;福建省精密仪器农业测试重点实验室,福建福州 350003;福建省农业科学院中心实验室,福建福州 350003;福建省精密仪器农业测试重点实验室,福建福州 350003【正文语种】中文【中图分类】TS201.2+1;TS201.2+5【相关文献】1.鸡蛋清蛋白酶解肽和大豆蛋白酶解肽的协同抗氧化活性 [J], 饶胜其;徐美玲;高璐;杨振泉;方维明2.生物解离大豆蛋白酶解物体外模拟消化抗氧化活性变化 [J], 佟晓红; 江连洲; 王欢; 刘宝华; 张巧智; 李红; 田然; 赵晋菡; 齐宝坤; 李杨3.不同蛋白酶酶解罗非鱼肉制备蛋白水解液的过程变化规律研究 [J], 赵珊珊;朱志伟;曾庆孝;晁岱秀4.大豆蛋白酶解制寡肽过程中蛋白酶再利用的研究 [J], 班玉凤;朱海峰;关纳新5.pH偏移促进大豆蛋白酶解过程中聚集体解聚的研究 [J], 赵明;张晖;朱玲;齐希光因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
蛋白酶对大豆分离蛋白的降解模式研究
蛋白酶对大豆分离蛋白的降解模式研究
于泓鹏;唐传核;曾庆孝;杨晓泉
【期刊名称】《食品研究与开发》
【年(卷),期】2006(027)004
【摘要】采用十二烷基酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)方法,分析了几种商品蛋白酶(包括枯草杆菌蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、木瓜蛋白酶和细菌碱性蛋白酶)对大豆分离蛋白(SPI)的降解模式.结果表明,大豆球蛋白酸性亚基的Ax多肽链最容易被水解,所有的酶对其均有作用,而碱性亚基和大豆伴球蛋白的β亚基最难被水解.木瓜蛋白酶对大豆分离蛋白的水解最迅速、彻底,由于大豆蛋白中含有胰蛋白酶抑制因子,胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶对大豆蛋白水解能力较差.
【总页数】4页(P13-15,12)
【作者】于泓鹏;唐传核;曾庆孝;杨晓泉
【作者单位】华南理工大学轻工与食品学院,广东,广州,510640;华南理工大学轻工与食品学院,广东,广州,510640;华南理工大学轻工与食品学院,广东,广州,510640;华南理工大学轻工与食品学院,广东,广州,510640
【正文语种】中文
【中图分类】TS2
【相关文献】
1.风味蛋白酶和中性蛋白酶复合酶解大豆分离蛋白制备多肽的研究 [J], 马诗文;高云;吴金龙;郝晓亮
2.碱性蛋白酶与外切蛋白酶酶解大豆分离蛋白及脱苦工艺的研究 [J], 张志国;孙晓燕
3.碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶对热变性大豆分离蛋白的酶解研究 [J], 李婷;赵沙沙;阮奇珺;孔祥珍;华欲飞
4.木瓜蛋白酶与中性蛋白酶水解大豆分离蛋白的研究 [J], 钟振声;陈钰;文锡莲
5.改性大豆分离蛋白可生物降解材料的降解性研究 [J], 侯红江;陈复生;程小丽;宫保文
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大豆分离蛋白酶法复合改性及在注射型肉制品中应用的研究的开题报告
大豆分离蛋白酶法复合改性及在注射型肉制品中应用的研究的开题报告一、研究背景和意义肉制品是人们日常生活中不可或缺的食品，其中注射型肉制品是一种新型肉制品，其质地细腻、口感好，广受消费者喜爱。
然而，传统注射型肉制品中添加的增稠剂和稳定剂含有大量化学合成剂和转基因成分，严重影响消费者的健康。
因此，研究如何用天然食品添加剂来代替传统的增稠剂和稳定剂，是当前食品研究的重点。
大豆分离蛋白是一种天然的食品添加剂，具有结构稳定、营养丰富、易消化吸收等优点。
本研究将采用酶法分离大豆分离蛋白，对其进行复合改性，研究其在注射型肉制品中的应用。
通过这种方法，可以有效地降低注射型肉制品中化学合成剂和转基因成分的含量，提高产品的营养价值和安全性，符合消费者的健康需求。
二、研究内容和目标本研究将采用酶法分离大豆分离蛋白，并通过接枝、交联等技术进行复合改性，制备出性能稳定、应用性强的大豆分离蛋白复合物。
同时，探究其在注射型肉制品中的应用效果。
研究目标：1.通过酶法分离大豆分离蛋白，并对其进行复合改性，制备出适用于注射型肉制品的大豆分离蛋白复合物；2.通过对复合物进行结构表征和性能测试，探究不同改性方法对大豆分离蛋白质量的影响；3.研究大豆分离蛋白复合物在注射型肉制品中的应用效果，探索其替代传统增稠剂和稳定剂的可行性。
三、研究方法1. 大豆分离蛋白的酶法分离方法：选用细菌碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶等酶进行大豆蛋白分离实验，筛选出最适合的酶种和工艺条件。
2. 大豆分离蛋白的复合改性方法：采用接枝、交联等技术对大豆分离蛋白进行复合改性，制备出稳定性较高的大豆分离蛋白复合物。
3. 大豆分离蛋白复合物的结构表征和性能测试：采用FTIR、XRD、SEM等技术对复合物的结构和形貌进行分析，同时测试其分散性、稳定性和营养价值。
4. 大豆分离蛋白复合物在注射型肉制品中的应用：将大豆分离蛋白复合物添加到注射型肉制品中，并进行感官评价和营养分析，探究复合物在注射型肉制品中替代传统增稠剂和稳定剂的可行性。
蛋白酶对大豆分离蛋白作用的探讨
９．４９ 亿 元 ； 毛 利 率 上 升 ３ 个 百 分 点至 ３５．７％。
公司表示， 若撇除可换股债 券、上市后所得资金利息收入及 上市前派发给员工的部分行使股 权 ， 去 年 核 心 盈 利 上 升 ４４％， 至 ３．１９５ 亿 元 。 期 内 公 司 销 售 成 本 上 升 ２２．８％ ， 至 １．７ 亿 元 。 成 本 上升主因是生产增加及进口浓缩
参考文献
［１］ 殷 涌 光 ， 刘 静 波． 大 豆 食 品 工 艺 学［Ｍ］． 北 京 ： 化 学 工 业 出 版 社 ， ２００５， １１￣１１７． ［２］ 赵新淮， 冯志彪． 蛋白质水解物水解度的测定［Ｊ］． 食品科学， １９９４， １５（ １１） ： ６５￣６７． ［３］ 郭本恒． 乳粉［Ｍ］． 北京： 化学工业出版社， ２００３， ７６￣７７． ［４］ 翁鸿珍主编． 乳品与乳制品检测技术［Ｍ］． 北京： 中国轻工业出版社， ２００６， ６６￣６８．
３
结论
通过本实验 ， 可以看出应 用德国 ＡＢ 酶制 剂 公
Ｄｉｓｃｕｓｓｉｏｎ ｏｆ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｐｒ ｏｔｅｉｎａｓｅ ｏｎ ｓｏｙ ｐｒ ｏｔｅｉｎ ｉｓｏｌａｔｅ
ＹＡＮＧ Ｚｈｅｎ （ Ｓｈａｎｄｏｎｇ Ｓｃｅｎｔｓ Ｓｏｙｂｅａｎ Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｇｒｏｕｐ Ｃｏ．， Ｌｔｄ．， Ｂｏｘｉｎｇ ２５６５００， Ｓｈａｎｄｏｎｇ， Ｃｈｉｎａ）
２００８
Ｅｘｐｅ ｒｉｍｅ ｎｔａ ｌ Ｒｅ ｐｏｒｔｓ ＆ Ｔｈｅ ｏｒｅ ｔｉｃａ ｌ Ｒｅ ｓ ｅ ａ ｒｃｈｅ ｓ
２．２ 分 散 性 的 研 究 参 照 乳 品 中 速 溶 乳 粉 分 散 性 的 标 准［３］以 及 液 体 纯 牛 奶 的 杂 质 检 验 方 法 ［４］。 具 体 方 法 是 ： 水 与 酶 解 蛋 白 比 例 为 ８ ∶１， 水 温 ６０ ￣７０℃， 先加水后加酶解蛋白， 之后， 用玻棒迅速搅拌均 匀 。 用 同 样 的 方 法 制 取 两 份 １００ｍｌ 样 ， 一 份 静 置 ０．５ｈ 后 ， 看 是 否 分 层 ， 然 后 摇 匀 过 ４０ 目 筛 ， 对 筛 上不溶团块计数（ 小于 ５ 个为此项合格） ； 另一份过 杂质度过滤机， 以全部样顺利通过为合格， 结果 见表２。
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量［Ｊ］． 山西大学学报（自然科学版）， ２００３， ２６（４）： ３４１－３４２． ［１１］ 黄孝辉， 司成敏． 配方奶粉中镁、锌的测定［Ｊ］． 计量与测
试技术， ２００２， （２）： ４４， ４６． ［１２］ 颜家保． 火焰原子吸收法测定空气中微量铬［Ｊ］． 环境科学
与技术， １９９８， （４）： ３３－３４．
收稿日期：２００４－０６－０２ ＊通讯作者 基金项目：吉林省科学技术厅资助项目（２００２０２１１） 作者简介：刘艳秋（ １ ９ ７ ４ － ），女，助教，硕士研究生，研究方向为生物工程。
化系统的不良反应，麻疹，贫血，白细胞和血小板减 少症，头晕和乏力等副作用的问题，是一种高效、无 毒、无副作用的降糖食品。并且用富含油酸、亚油酸 等不饱和脂肪的植物油（ 豆油、玉米油、山茶油） 取代动 物脂肪，有益于糖尿病患者减少胆固醇的吸收。本实 验还探讨了有机铬和乳酸锌乳化的最佳工艺条件，保证 了铬、锌在奶粉中的均匀分布，产品具有速溶性（ 冲调 性好） 、香味纯正（ 口感好） 、稳定性好（ 保质期长） 、流 动性好（ 易于实现自动化包装） 等特点，为大规模工业化 生产提供技术依据。
蛋白质含量测定 凯氏定氮法；蛋白酶活力测 定 Ｆｏｌｉｎ－酚法；蛋白质水解度（ＤＨ）测定与控制 ｐＨ－ ｓｔａｔ 法。 １．４ 试验方法
１．４．１ 大豆蛋白预处理 据资料［６］介绍，浓度为５％～８％ 大豆蛋白溶液在８５～
９０℃温度下加热处理 １０ｍｉｎ 左右，可使大豆蛋白致密的 立体结构变得松散，有利于提高大豆蛋白的酶解速率， 但随着底物浓度的增加和加热时间的延长，蛋白分子会 通过疏水作用和二硫键作用形成网状聚合体，反而会降 低蛋白酶解速率。结合本试验设计方案，各浓度大豆蛋 白溶液在 ８０ ℃温度下恒温水浴 １５ｍｉｎ，效果较好。
156 2005, Vol. 26, No. 6
食品科学
※工艺技术
Ｋ ｅ ｙ ｗ ｏ ｒ ｄ ｓ：ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ｒｏｔａｔｉｏｎ ｄｅｓｉｇｎｉｎ；ｇＳＰＩ；ｐｒｏｔａｍｅｘ ｐｒｏｔｅａｓ；ｅｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ 中图分类号：ＴＳ２２４ 文 献标识码：Ａ 文 章编号：１００２－６６３０（２００５）０６－０１５５－０４
司；Ｐｒｏｔａｍｅｘ复合蛋白酶（食用级） 丹麦诺维信（ＮＯＶＯ） 公司，酶活力 ２５０００Ｕ；其它试剂 均为 ＡＲ 级。 １．２ 仪器
电子分析天平Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ ＢＳ２１０Ｓ型 德国赛多利斯 股份公司；恒温水浴锅ＤＳＹ－１－２孔型 北京国华医疗器 械厂；ｐＨ－ｓｔａｔ装置（ＫＦ－５Ｌ发酵罐使用部分功能） 韩国 ＫｏＢｉｏ Ｔｅｃｈ Ｃｏ． Ｌｔ；ｄ 低温冷冻离心机Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｃｅｎｔｒｉ－ ｆｕｇｅｓ ３Ｋ１８型 美国Ｓｉｇｍａ公司。 １．３ 检测方法
应用五因素五水平的二次回归旋转组合设计，可使 试验组合由 ３１２５次压缩到 ３６ 次，通过试验获得的参数， 借助分析软件对数据进行科学处理，建立数学模型，完 成试验方案的模拟运算、统计分析，可筛选出最优化 的生产条件，并通过调控生产条件可获得较高水解度的 综合方案。
１ 材料与方法
１．１ 材料 大豆分离蛋白（金龟２２００） 吉林不二蛋白有限公
※工艺技术
食品科学
2005, Vol. 26, No. 6 157
１．４．４．１ 各因素水平及变化间距 单因素试验确定了各因素的零水平应取数值，分别
为：ｐ Ｈ ＝ ７ ． ５，Ｔ ＝ ５ ０℃，ｔ ＝ ６ ｈ，［ Ｓ ］ ＝ １ ０ ％，［ Ｅ ／ Ｓ ］ ＝ ２ ． ５ ％。 其中，Ｚ０ｊ＝（Ｚ２ｊ＋Ｚ１ｊ）／２；△ ｊ＝（Ｚ２ｊ－Ｚ０ｊ）／ γ；γ ＝２ 则水解条件因素水平及变化间矩，见表 １ 。
１．４．２ 水解度的检测方法［７～１１］ 大豆蛋白水解度（ＤＨ）以水解断裂的肽键数目（ｈ）占总
肽键数目（ｈｔｏｔ）的百分数来确定，即 ＤＨ＝ｈ／ｈｔｏｔ × １００％。 依据 ｐＨ－ｓｔａｔ法，蛋白水解度可由水解过程中 ＮａＯＨ
的消耗量来计算。计算公式如下： ＤＨ％＝Ｂ × ＮＢ ×（１／ α）×（１／ＭＰ）×（１／Ｈｔｏｔ）× １００ 公 式 （１） 式中： Ｂ —水解过程中所消耗的 Ｎ ａ Ｏ Ｈ 溶液量 ＮＢ —溶液的当量浓度 α—为α － 氨基解离度，１／ α＝１＋１０＾（ ｐＫ － ｐＨ） ｐＫ 为大豆蛋白质α － 氨基的 ｐＫ 值 Ｍ Ｐ —底物蛋白质的总量 Ｈｔｏｔ—每克蛋白质中肽键的克当量数（取８．３８）
１．４．４ 水解条件优化试验设计 在 Ｐｒｏｔａｍｅｘ复合蛋白酶水解大豆分离蛋白时，其最
佳作用条件会随着 ｐＨ 值、水解温度（Ｔ）、水解时间（ｔ）、 底物浓度（［Ｓ］）、酶与底物浓度比（［Ｅ／Ｓ］）等因素的变化会 有所不同。首先通过单因素试验确定五因素的取值水平 范围，然后以水解度（ＤＨ）为指标，选用 ５ 因素（１／２实施） 回归正交旋转组合设计方案进行研究，以确定最佳水解 条件。
［４］ 于占洋， 侯哲． 微量元素与疾病诊断及治疗［Ｍ］． 北京： 人 民卫生出版社， ２００１． ２３６－２３７．
［５］ 尤玉如． 糖尿病食疗原则与降糖奶粉配方设计［Ｊ］． 食品与 机械， １９９８， （６）： ２７－２８．
［６］ 尤玉如， 穆喜森． 降糖奶粉配方及其功能特性的研究［Ｊ］． 中国乳品工业， １９９９， （１）： １０．
Ｈｙｄｒｏｌｙｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｏｙｂｅａｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｉｓｏｌａｔｅｄ ｂｙ Ｐｒｏｔａｍｅｘ Ｐｒｏｔｅａｓｅ
ＬＩＵ Ｙａｎ－ｑｉｕ，ＣＨＥＮ Ｇｕａｎｇ＊，ＳＵＮ Ｙａｎｇ （Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｊｉｌｉｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ １３０１１８， Ｃｈｉｎａ）
［７］ 王世宾， 贺玉衡． 降糖奶粉的研究开发［Ｊ］． 上海奶牛． ２０００． （３）． ［８］ 北京大学化学系胶体化学教研室． 胶体与界面化学实验
［Ｍ］． 北京大学出版社． ［９］ Ｊ Ｅ 坎特尔编［英］． 黄德玲， 译． 原子吸收光谱分析［Ｊ］． 北
京： 科学技术文献出版社， １９９０， （８）： １０８－１１８３． ［１０］ 郭子英， 郭永， 等． 火焰原子吸收法测定果类饮料中的锌含
参考文献：
［１］ 金问涛． 内科护理学［Ｍ］． 北京： 人民卫生出版社， １９９７． ２７２－２７３．
［２］ 金宗濂． 保健食品的功能评价与开发［Ｍ］． 北京： 中国轻 工业出版社， ２００１， ４０４， ４２０， ４１４－４１７．
［３］ 冯孝义， 张小荣， 等． 微量元素铬与健康［Ｊ］． 生物学通报， １９９５， （１２）．
１．４．３ 大豆蛋白的酶解操作 根据试验设计方案，称取大豆分离蛋白加入适量水
配制成为一定浓度的大豆蛋白溶液，经恒温水浴预处理 后，调节温度至反应温度搅拌 ２ ０ ｍ ｉ ｎ，调节 ｐＨ 值至反 应 ｐ Ｈ 值，加入一定比例蛋白酶，在反应温度下进行恒 温酶解，酶解过程中需要不断进行搅拌，同时通过滴 加 ４Ｎ 的 Ｎ ａ Ｏ Ｈ 溶液以保持反应体系 ｐＨ 值恒定，反应偏 差一般控制在± ０．１。达到反应预定时间后，调节 ｐＨ 至 大豆蛋白等电点（ｐＨ４．３），之后将大豆蛋白酶解液加热升 温至 ８５ ℃，保温 １ ０ ｍ ｉ ｎ 使酶活力丧失，然后通过低温 离心机在 １２０００ｒ／ｍｉｎ，１０℃下离心 １０ｍｉｎ，除去未水解 大豆蛋白和其它非溶性物质，倾倒出上清液置于 ４ ℃冷 藏保存。记录 ＮａＯＨ 溶液的滴加量，利用公式（１）ｐＨ－ｓｔａｔ 法计算水解度。
大豆肽是以大豆蛋白为底物经蛋白酶水解后获得的 蛋白质水解产物，它由不同分子量的多肽混合组成， 水解产物中还含有少量游离氨基酸、糖类、无机盐 等。大豆肽具有特殊的理化特性和生理机能，如良好 热稳定性、水溶性，易消化吸收，低抗原性及促进脂 肪代谢，降低胆固醇，抗氧化等作用。近年来，以 酶法水解大豆蛋白来提高其营养保健价值及加工功能特 性已成为研究热点［１，２］，不同研究者所选用的蛋白酶系不 同或采用不同分离方法，获得了功能特性更为广泛的大 豆肽［ ３～５ ］。
Table 1
水平 Ｚ２ｊ（上水平） Ｚ０ｊ（零水平） Ｚ１ｊ（下水平） △ｊ（间距）
表１ 水解条件因素水平及变化间矩 Five influencing factors of DH and spaces between
levels of each factor
ｐＨ
Ｔ（℃）
ｔ（ｈ）
［Ｓ］（％） ［Ｅ／Ｓ］（％）
但由于酶解过程中的影响因素较多，因素变化范 围较大，如采用一般的回归分析，由于各因素所取水 平不同，对应的各个预测值 Ｙ 的方差不同，影响了不 同预测值之间的直接比较。为了克服这一不足，本文 引入二次回归正交旋转组合设计方法，对中性内切蛋白 酶— Ｐｒｏｔａｍｅｘ复合蛋白酶水解大豆分离蛋白的条件进行 研究。
※工艺技术
食品科学
2005, Vol. 26, No. 6 155
Ｐｒｏｔａｍｅｘ 复合蛋白酶水解大豆分离蛋白的研究
刘艳秋，陈 光 ＊，孙 旸 （吉林农业大学生物技术学院，吉林 长春 １３０１１８）
摘 要：为优化大豆分离蛋白酶水解条件，本试验采用二次回归正交旋转组合设计方法对 Ｐｒｏｔａｍｅｘ复合蛋白酶水 解大豆分离蛋白的条件进行研究。建立了水解度（ Ｄ Ｈ ）与 ｐ Ｈ 值、反应温度、反应时间、底物浓度、酶与底物浓 度比之间的数学模型；并获得最佳水解工艺条件：ｐＨ 值 ６ ． ５，温度 ４０℃，水解时间 １０ｈ，底物浓度 １４％，酶与 底物浓度比 ４ ． ５ ％；主成分分析表明，ｐ Ｈ 对 Ｄ Ｈ 的贡献率最大。 关键词：回归旋转设计；大豆分离蛋白；Ｐ ｒ ｏ ｔ ａ ｍ ｅ ｘ 复合蛋白酶；水解
Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｉｎ ｔｈｉｓ ｔｈｅｓｉｓ， ｆｏｒ ｏｐｔｉｍｉｚｉｎｇ ｔｈｅ ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ ｏｆ ｓｏｙｂｅａｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｓｏｌａｔｅｄ （ＳＰＩ） ｂｙ Ｐｒｏｔａｍｅｘ ｐｒｏｔｅａｓｅ， ｓｅｃｏｎｄ－ ｏｒｄｅｒ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ｒｏｔａｔｉｏｎ ｄｅｓｉｇｎｉｎｇ ｈａｓ ｂｅｅｎ ｕｓｅｄ． Ｔｈｅ ｍａｔｈｅｍａｔｉｃｓ ｍａｔｒｉｘ ｗａｓ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｄｅｇｒｅｅ ｏｆ ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ （ＤＨ） ａｎｄ ｆｉｖｅ ｆａｃｔｏｒ（ｐＨ ｖａｌｕｅ， ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ ｔｉｍｅ， ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ， ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ， ｔｈｅ ｒａｔｉｏ ｏｆ ｅｎｚｙｍｅ ａｎｄ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ）． Ｔｈｅ ｈｉｇｈ ｙｉｅｌｄ ｓｃｈｅｍｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｄｅｓｉｇｎ ｗｅｒｅ ａｌｓｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ． Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ： ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ ｔｉｍｅ １０ｈ， ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ａｔ １４％， ｔｈｅ ｒａｔｉｏ ｏｆ ｅｎｚｙｍｅ ａｎｄ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ａｔ ４．５％， ｐＨ６．５ ａｎ℃ｄ． ４ Ｂ０ｙ ｍａｉｎ ｍｅｍｂｅｒ ａｎａｌｙｓｉｓ， ｐＨ ｖａｌｕｅ ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ ｔｏ ＤＨ ｍｏｓｔｌｙ．
试技术， ２００２， （２）： ４４， ４６． ［１２］ 颜家保． 火焰原子吸收法测定空气中微量铬［Ｊ］． 环境科学
与技术， １９９８， （４）： ３３－３４．
收稿日期：２００４－０６－０２ ＊通讯作者 基金项目：吉林省科学技术厅资助项目（２００２０２１１） 作者简介：刘艳秋（ １ ９ ７ ４ － ），女，助教，硕士研究生，研究方向为生物工程。
化系统的不良反应，麻疹，贫血，白细胞和血小板减 少症，头晕和乏力等副作用的问题，是一种高效、无 毒、无副作用的降糖食品。并且用富含油酸、亚油酸 等不饱和脂肪的植物油（ 豆油、玉米油、山茶油） 取代动 物脂肪，有益于糖尿病患者减少胆固醇的吸收。本实 验还探讨了有机铬和乳酸锌乳化的最佳工艺条件，保证 了铬、锌在奶粉中的均匀分布，产品具有速溶性（ 冲调 性好） 、香味纯正（ 口感好） 、稳定性好（ 保质期长） 、流 动性好（ 易于实现自动化包装） 等特点，为大规模工业化 生产提供技术依据。
蛋白质含量测定 凯氏定氮法；蛋白酶活力测 定 Ｆｏｌｉｎ－酚法；蛋白质水解度（ＤＨ）测定与控制 ｐＨ－ ｓｔａｔ 法。 １．４ 试验方法
１．４．１ 大豆蛋白预处理 据资料［６］介绍，浓度为５％～８％ 大豆蛋白溶液在８５～
９０℃温度下加热处理 １０ｍｉｎ 左右，可使大豆蛋白致密的 立体结构变得松散，有利于提高大豆蛋白的酶解速率， 但随着底物浓度的增加和加热时间的延长，蛋白分子会 通过疏水作用和二硫键作用形成网状聚合体，反而会降 低蛋白酶解速率。结合本试验设计方案，各浓度大豆蛋 白溶液在 ８０ ℃温度下恒温水浴 １５ｍｉｎ，效果较好。
156 2005, Vol. 26, No. 6
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Ｋ ｅ ｙ ｗ ｏ ｒ ｄ ｓ：ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ｒｏｔａｔｉｏｎ ｄｅｓｉｇｎｉｎ；ｇＳＰＩ；ｐｒｏｔａｍｅｘ ｐｒｏｔｅａｓ；ｅｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ 中图分类号：ＴＳ２２４ 文 献标识码：Ａ 文 章编号：１００２－６６３０（２００５）０６－０１５５－０４
司；Ｐｒｏｔａｍｅｘ复合蛋白酶（食用级） 丹麦诺维信（ＮＯＶＯ） 公司，酶活力 ２５０００Ｕ；其它试剂 均为 ＡＲ 级。 １．２ 仪器
电子分析天平Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ ＢＳ２１０Ｓ型 德国赛多利斯 股份公司；恒温水浴锅ＤＳＹ－１－２孔型 北京国华医疗器 械厂；ｐＨ－ｓｔａｔ装置（ＫＦ－５Ｌ发酵罐使用部分功能） 韩国 ＫｏＢｉｏ Ｔｅｃｈ Ｃｏ． Ｌｔ；ｄ 低温冷冻离心机Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｃｅｎｔｒｉ－ ｆｕｇｅｓ ３Ｋ１８型 美国Ｓｉｇｍａ公司。 １．３ 检测方法
应用五因素五水平的二次回归旋转组合设计，可使 试验组合由 ３１２５次压缩到 ３６ 次，通过试验获得的参数， 借助分析软件对数据进行科学处理，建立数学模型，完 成试验方案的模拟运算、统计分析，可筛选出最优化 的生产条件，并通过调控生产条件可获得较高水解度的 综合方案。
１ 材料与方法
１．１ 材料 大豆分离蛋白（金龟２２００） 吉林不二蛋白有限公
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１．４．４．１ 各因素水平及变化间距 单因素试验确定了各因素的零水平应取数值，分别
为：ｐ Ｈ ＝ ７ ． ５，Ｔ ＝ ５ ０℃，ｔ ＝ ６ ｈ，［ Ｓ ］ ＝ １ ０ ％，［ Ｅ ／ Ｓ ］ ＝ ２ ． ５ ％。 其中，Ｚ０ｊ＝（Ｚ２ｊ＋Ｚ１ｊ）／２；△ ｊ＝（Ｚ２ｊ－Ｚ０ｊ）／ γ；γ ＝２ 则水解条件因素水平及变化间矩，见表 １ 。
１．４．２ 水解度的检测方法［７～１１］ 大豆蛋白水解度（ＤＨ）以水解断裂的肽键数目（ｈ）占总
肽键数目（ｈｔｏｔ）的百分数来确定，即 ＤＨ＝ｈ／ｈｔｏｔ × １００％。 依据 ｐＨ－ｓｔａｔ法，蛋白水解度可由水解过程中 ＮａＯＨ
的消耗量来计算。计算公式如下： ＤＨ％＝Ｂ × ＮＢ ×（１／ α）×（１／ＭＰ）×（１／Ｈｔｏｔ）× １００ 公 式 （１） 式中： Ｂ —水解过程中所消耗的 Ｎ ａ Ｏ Ｈ 溶液量 ＮＢ —溶液的当量浓度 α—为α － 氨基解离度，１／ α＝１＋１０＾（ ｐＫ － ｐＨ） ｐＫ 为大豆蛋白质α － 氨基的 ｐＫ 值 Ｍ Ｐ —底物蛋白质的总量 Ｈｔｏｔ—每克蛋白质中肽键的克当量数（取８．３８）
１．４．４ 水解条件优化试验设计 在 Ｐｒｏｔａｍｅｘ复合蛋白酶水解大豆分离蛋白时，其最
佳作用条件会随着 ｐＨ 值、水解温度（Ｔ）、水解时间（ｔ）、 底物浓度（［Ｓ］）、酶与底物浓度比（［Ｅ／Ｓ］）等因素的变化会 有所不同。首先通过单因素试验确定五因素的取值水平 范围，然后以水解度（ＤＨ）为指标，选用 ５ 因素（１／２实施） 回归正交旋转组合设计方案进行研究，以确定最佳水解 条件。
［４］ 于占洋， 侯哲． 微量元素与疾病诊断及治疗［Ｍ］． 北京： 人 民卫生出版社， ２００１． ２３６－２３７．
［５］ 尤玉如． 糖尿病食疗原则与降糖奶粉配方设计［Ｊ］． 食品与 机械， １９９８， （６）： ２７－２８．
［６］ 尤玉如， 穆喜森． 降糖奶粉配方及其功能特性的研究［Ｊ］． 中国乳品工业， １９９９， （１）： １０．
Ｈｙｄｒｏｌｙｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｏｙｂｅａｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｉｓｏｌａｔｅｄ ｂｙ Ｐｒｏｔａｍｅｘ Ｐｒｏｔｅａｓｅ
ＬＩＵ Ｙａｎ－ｑｉｕ，ＣＨＥＮ Ｇｕａｎｇ＊，ＳＵＮ Ｙａｎｇ （Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｊｉｌｉｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ １３０１１８， Ｃｈｉｎａ）
［７］ 王世宾， 贺玉衡． 降糖奶粉的研究开发［Ｊ］． 上海奶牛． ２０００． （３）． ［８］ 北京大学化学系胶体化学教研室． 胶体与界面化学实验
［Ｍ］． 北京大学出版社． ［９］ Ｊ Ｅ 坎特尔编［英］． 黄德玲， 译． 原子吸收光谱分析［Ｊ］． 北
京： 科学技术文献出版社， １９９０， （８）： １０８－１１８３． ［１０］ 郭子英， 郭永， 等． 火焰原子吸收法测定果类饮料中的锌含
参考文献：
［１］ 金问涛． 内科护理学［Ｍ］． 北京： 人民卫生出版社， １９９７． ２７２－２７３．
［２］ 金宗濂． 保健食品的功能评价与开发［Ｍ］． 北京： 中国轻 工业出版社， ２００１， ４０４， ４２０， ４１４－４１７．
［３］ 冯孝义， 张小荣， 等． 微量元素铬与健康［Ｊ］． 生物学通报， １９９５， （１２）．
１．４．３ 大豆蛋白的酶解操作 根据试验设计方案，称取大豆分离蛋白加入适量水
配制成为一定浓度的大豆蛋白溶液，经恒温水浴预处理 后，调节温度至反应温度搅拌 ２ ０ ｍ ｉ ｎ，调节 ｐＨ 值至反 应 ｐ Ｈ 值，加入一定比例蛋白酶，在反应温度下进行恒 温酶解，酶解过程中需要不断进行搅拌，同时通过滴 加 ４Ｎ 的 Ｎ ａ Ｏ Ｈ 溶液以保持反应体系 ｐＨ 值恒定，反应偏 差一般控制在± ０．１。达到反应预定时间后，调节 ｐＨ 至 大豆蛋白等电点（ｐＨ４．３），之后将大豆蛋白酶解液加热升 温至 ８５ ℃，保温 １ ０ ｍ ｉ ｎ 使酶活力丧失，然后通过低温 离心机在 １２０００ｒ／ｍｉｎ，１０℃下离心 １０ｍｉｎ，除去未水解 大豆蛋白和其它非溶性物质，倾倒出上清液置于 ４ ℃冷 藏保存。记录 ＮａＯＨ 溶液的滴加量，利用公式（１）ｐＨ－ｓｔａｔ 法计算水解度。
大豆肽是以大豆蛋白为底物经蛋白酶水解后获得的 蛋白质水解产物，它由不同分子量的多肽混合组成， 水解产物中还含有少量游离氨基酸、糖类、无机盐 等。大豆肽具有特殊的理化特性和生理机能，如良好 热稳定性、水溶性，易消化吸收，低抗原性及促进脂 肪代谢，降低胆固醇，抗氧化等作用。近年来，以 酶法水解大豆蛋白来提高其营养保健价值及加工功能特 性已成为研究热点［１，２］，不同研究者所选用的蛋白酶系不 同或采用不同分离方法，获得了功能特性更为广泛的大 豆肽［ ３～５ ］。
Table 1
水平 Ｚ２ｊ（上水平） Ｚ０ｊ（零水平） Ｚ１ｊ（下水平） △ｊ（间距）
表１ 水解条件因素水平及变化间矩 Five influencing factors of DH and spaces between
levels of each factor
ｐＨ
Ｔ（℃）
ｔ（ｈ）
［Ｓ］（％） ［Ｅ／Ｓ］（％）
但由于酶解过程中的影响因素较多，因素变化范 围较大，如采用一般的回归分析，由于各因素所取水 平不同，对应的各个预测值 Ｙ 的方差不同，影响了不 同预测值之间的直接比较。为了克服这一不足，本文 引入二次回归正交旋转组合设计方法，对中性内切蛋白 酶— Ｐｒｏｔａｍｅｘ复合蛋白酶水解大豆分离蛋白的条件进行 研究。
※工艺技术
食品科学
2005, Vol. 26, No. 6 155
Ｐｒｏｔａｍｅｘ 复合蛋白酶水解大豆分离蛋白的研究
刘艳秋，陈 光 ＊，孙 旸 （吉林农业大学生物技术学院，吉林 长春 １３０１１８）
摘 要：为优化大豆分离蛋白酶水解条件，本试验采用二次回归正交旋转组合设计方法对 Ｐｒｏｔａｍｅｘ复合蛋白酶水 解大豆分离蛋白的条件进行研究。建立了水解度（ Ｄ Ｈ ）与 ｐ Ｈ 值、反应温度、反应时间、底物浓度、酶与底物浓 度比之间的数学模型；并获得最佳水解工艺条件：ｐＨ 值 ６ ． ５，温度 ４０℃，水解时间 １０ｈ，底物浓度 １４％，酶与 底物浓度比 ４ ． ５ ％；主成分分析表明，ｐ Ｈ 对 Ｄ Ｈ 的贡献率最大。 关键词：回归旋转设计；大豆分离蛋白；Ｐ ｒ ｏ ｔ ａ ｍ ｅ ｘ 复合蛋白酶；水解
Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｉｎ ｔｈｉｓ ｔｈｅｓｉｓ， ｆｏｒ ｏｐｔｉｍｉｚｉｎｇ ｔｈｅ ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ ｏｆ ｓｏｙｂｅａｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｓｏｌａｔｅｄ （ＳＰＩ） ｂｙ Ｐｒｏｔａｍｅｘ ｐｒｏｔｅａｓｅ， ｓｅｃｏｎｄ－ ｏｒｄｅｒ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ｒｏｔａｔｉｏｎ ｄｅｓｉｇｎｉｎｇ ｈａｓ ｂｅｅｎ ｕｓｅｄ． Ｔｈｅ ｍａｔｈｅｍａｔｉｃｓ ｍａｔｒｉｘ ｗａｓ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｄｅｇｒｅｅ ｏｆ ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ （ＤＨ） ａｎｄ ｆｉｖｅ ｆａｃｔｏｒ（ｐＨ ｖａｌｕｅ， ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ ｔｉｍｅ， ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ， ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ， ｔｈｅ ｒａｔｉｏ ｏｆ ｅｎｚｙｍｅ ａｎｄ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ）． Ｔｈｅ ｈｉｇｈ ｙｉｅｌｄ ｓｃｈｅｍｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｄｅｓｉｇｎ ｗｅｒｅ ａｌｓｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ． Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ： ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ ｔｉｍｅ １０ｈ， ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ａｔ １４％， ｔｈｅ ｒａｔｉｏ ｏｆ ｅｎｚｙｍｅ ａｎｄ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ａｔ ４．５％， ｐＨ６．５ ａｎ℃ｄ． ４ Ｂ０ｙ ｍａｉｎ ｍｅｍｂｅｒ ａｎａｌｙｓｉｓ， ｐＨ ｖａｌｕｅ ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ ｔｏ ＤＨ ｍｏｓｔｌｙ．