霍乱弧菌实验室检验技术共45页
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霍乱常⽤的实验室检查有:
(1)直接镜检:
①直接涂⽚染⾊:将标本涂⽚,固定后⽤1∶10稀释⽯炭酸复红染⾊和⾰兰⽒染⾊,镜检有⽆典型弧菌。
典型霍乱弧菌互相连接平⾏排列,有如“鱼群”。
②悬滴标本:将标本制成悬滴,镜检细菌动⼒,⽤暗视野显微镜。
霍乱弧菌运动活泼,呈⼩鱼穿梭状。
(2)分离培养:将吐泻物直接或先经碱性胨⽔增菌后,接种于庆⼤霉素琼脂等培养基,容易检出霍乱弧菌。
应⽤荧光抗体检测粪便中霍乱弧菌,可于1~2⼩时内获得结果。
(3)⾎清学检查:可作⾎清凝集试验。
在发病第1~3⽇及第10~15⽇各取1份⾎清,若第2份⾎清的抗体效价⽐第1份增⾼4倍或4倍以上,有诊断参考价值。
(4)制动试验——快速诊断:在急性病⼈的⽔样便中含有⼤量弧菌,如悬滴检查阳性,再滴加不含防腐剂的霍乱多价⾎清(使⽤浓度为1∶64),⼏分钟内细菌运动停⽌,凝集成块即为阳性。
若具备下列条件之⼀者,可确诊为霍乱:
①凡有腹泻、呕吐等症状,⼤便培养霍乱弧菌阳性者;
②霍乱流⾏期间,在疫区有典型霍乱症状,⼤便培养阴性,⽽⽆其他原因可查者;
③有吐泻症状,霍乱弧菌培养阴性,作⾎清凝集试验第2份⾎清抗体效价呈4倍以上增⾼者。
在⾮疫区,凡有典型泻吐症状,在病原学检查未确定时,或在霍乱流⾏期间,曾接触过霍乱患者,有腹泻症状⽽⽆其他原因可查者,均应⾼度怀疑为霍乱,在给予积极处理的同时,应作⼤便培养,隔⽇1次,连续3次阴性者,才可以否定诊断,并作出疫情更正报告。
霍乱弧菌的检测霍乱弧菌相关知识:稻叶型(A、C)古典型小川型(A、B、C少量)O1群霍乱弧菌:彦岛型(A、B、C)稻叶型(A、C)艾尔托型小川型(A、B、C少量)彦岛型(A、B、C)实验室准备:1.培养基:碱性蛋白胨水、TCBS、4号或庆大霉素琼脂、营养平板、半固体菌种保存管。
2.试剂:拉丝实验用试剂(0.5%去氧胆酸钠水溶液)、氧化酶试剂(1%盐酸对氨基二甲基苯胺或盐酸对氨基四甲基苯胺水溶液。
3.诊断血清:O1群霍乱诊断血清、稻叶型霍乱血清、小川型霍乱血清、O139群霍乱血清。
4.快诊试剂:O1群霍乱胶体金标记快诊卡、O139群霍乱胶体金标记快诊卡。
霍乱弧菌检验流程图:标本37度6-8小时TCBS、4号或庆大霉素琼脂小时胶体金快诊卡/制动等试验血清学凝集试验氧化酶实验拉丝实验O/129敏感试验初步报告、菌种保存一、采样(一)水样便采取1-2毫升,成形便采取指甲大小的粪量。
病人呕吐物、沾染粪便的衣物、尸体的肠腔和口腔内容物亦可做为检材;(二)外坏境样本可采取病人的污染衣物、剩饭菜、可疑食品、抹布、污水、坑塘水、井水、公厕粪便、苍蝇等;(三)按1:10比例置入碱性蛋白胨水增菌液中,迅速送往实验室。
二、增菌、培养(一)所有粪便标本都应经过增菌,尤其是恢复期病人、带菌者或用过抗菌药物的病人标本含菌量少,单靠直接分离不易检出。
需经碱胨水37度增菌6-8小时后分离(夏日可将运送时间计算在内);(二)标本含菌量少时,为提高检出率可实行2次增菌,取第一次碱胨水增菌后的培养物表层液0.1-0.2毫升,接种于8-10毫升的碱胨水中,37度培养6-8小时后再做分离。
(三)霍乱弧菌好氧,易形成菌膜,故在取出增菌管时动作要轻,接种环于菌膜下取一满环,划线接种于TCBS或4号琼脂平板37℃10~14h孵育培养。
三、快速诊断(一)、直接镜检:为争取最快速度作出诊断,采取病人“米泔水样”大便或呕吐物,悬滴法镜检(最好用暗视野),可见具有流星状动力的细菌。