虫草素、虫草酸、腺苷提取及含量测定实验方案

摘要(4.6mm×目的：建立用HPLC法测定冬虫夏草及含片中腺苷的含量。

方法：C18250mm,5um)色谱柱，0.05mol·L-1磷酸二氢钾+甲醇（90+10）为流动相，流速为1.0ml·min-1,检测波长260nm，柱温为35℃。

结果：腺苷含量在0.005～0.2ug(r=0.9998)围呈良好的线性关系。

平均回收率为99.49%，RSD=1.47%。

结论：方法准确可靠、、结果稳定、重现性好，分析速度快，可有效控制制剂的质量。

关键字：HPLC；冬虫夏草菌粉；含片；腺苷；DADAbstractObjective: to determine the content of adenosine Cordyceps powder andtablets by HPLC method.Methods: kromasil--C18(4.6mm×250mm,5um)column,using methanol two hydrogen0.5mol•L-1phosphoric acid(90:10)as mobile phase,the flow rate was 1.0ml•min-1,the detection wavelength was 260nm,the column temperature was 35℃.Results:adenosine in0.005 ~ 0.2ug(r=09998)showed a good linear relationship in the range of.The average recovery was 101.16%,RSD=1.47%.Conclusion: the method is Conclusion: the method is accurate and reliable, strong specificity, results stability, good reproducibility, which can effectively control the quality of the preparation.Keywords:Cordyceps sinensis powder;tablet;adenosine;HPLC目录摘要IAbstractII1. 前言31.1 仪器与试药32. 实验条件32.1 供试品提取溶剂的选择32.2 检测波长的选择42.3 流动相的选择43. 试验方法与结果43.1 分析溶液43.1.1 对照品溶液制备43.1.2 供试品溶液制备43.2 色谱条件53.3 分析方法学考察53.3.1 系统适应性试验53.3.2 标准曲线绘制及线型围考察63.3.3 精密度试验63.3.4 重复性试验63.3.5 稳定性试验63.3.6 加样回收率试验63.3.7 样品测定74. 讨论74.174.284.38参考文献：9致101. 前言冬虫夏草，仅仅是我国190多种虫草中的一种，也是中药传统的滋补药材。

冬虫夏草虫草素的提取及提取量的测定刘栓栓;孙庆元;宫宏琨【摘要】研究了冬虫夏草虫草素的提取和测定方法,确定了提取冬虫夏草菌株qsun-1菌丝体与甲醇料液比、虫草素的溶剂、超声波细胞破碎的功率和时间.依据单因素和正交试验提出了提取虫草素的最佳工艺:在菌丝体与甲醇料液比(g/mL)为1∶100、超声波功率为300 W条件下,超声波细胞破碎提取30 min,虫草素提取量可达9.275 mg/g.这些因素对提取虫草素的影响重要性排序为料液比＞溶剂＞超声波功率＞提取时间.717强碱性阴离子交换树脂纯化虫草素提取液,虫草素得率高达80％以上,纯度可达到14.200 mg/L.【期刊名称】《大连工业大学学报》【年(卷),期】2013(032)005【总页数】5页(P320-324)【关键词】虫草素;超声波提取;紫外分光光度法【作者】刘栓栓;孙庆元;宫宏琨【作者单位】大连工业大学生物工程学院,辽宁大连 116034;大连工业大学生物工程学院,辽宁大连 116034;大连工业大学生物工程学院,辽宁大连 116034【正文语种】中文【中图分类】TS218;Q939.930 引言冬虫夏草为麦角菌科真菌冬虫夏草菌(Cordyceps sinensis(Berk.)Sacc.)寄生在蝙蝠蛾科昆虫蝙蝠蛾(Hepialus armoricanus Oberthur)越冬幼虫上的子座及幼虫尸体的复合体。

虫草素(cordycepin)是冬虫夏草菌中的活性成分。

虫草素的结构与腺苷非常相似,所以又称为3′-脱氧腺苷,也是第一个从真菌中分离出来的核苷类抗菌素[1-2],具有抗肿瘤[3]、抗菌抗病毒[4]、免疫调节、清除自由基[5]等多种药理作用。

最早由Cunningham[6]等于1951年在Cordycepsmilitaris Link原浆液中分离获得,该物质被证实为我国中药冬虫夏草的有效成分,是虫草特有的功能成分。

目前从蛹虫草中提取和纯化虫草素比较常见。

高效液相色谱法同时检测虫草制品中腺苷和虫草素含量的研究作者：黄丽俊李利东宓晓黎来源：《农学学报》2015年第05期摘要：对已有方法和规范中样品前处理方法和色谱条件进行了优化和对比研究，建立检测虫草制品中腺苷和虫草素含量的反相高效液相色谱方法。

样品经水超声提取40min，离心过滤后进行分析。

采用C18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm），以水-甲醇（85：15，V/V）为流动相，流速为1.0mL/min，检测波长为260nm。

本方法检测限为0.2μg/mL，定量限为1.0μg/m L。

以所建立的方法对虫草制品进行分析，样品加标回收率在94%～103%，相对标准偏差均小于3%。

该检测方法简便、准确，并能同时测定腺苷和虫草素。

关键词：虫草制品；高效液相色谱；腺苷；虫草素中图分类号：O657.7+2文献标志码：A论文编号：2014-02890引言蛹虫草为子囊菌亚门麦角菌目麦角菌科虫草属的模式种，又名北冬虫夏草，可人工批量培育，与冬虫夏草是同属，2009年被批准为新资源食品。

由于虫草具有抑菌、抗病毒、抗肿瘤等多种药理作用而引发人们的关注，并深度开发，目前市场上有以虫草为原料的各类药品、保健食品及食品，其剂型有含片、胶囊、口服液、固体饮料、酒等。

中国药典2010版冬虫夏草项下腺苷含量测定采用HPLC法，CFDA用HPLC测定蛹虫草菌粉中虫草素含量，《保健食品检验与评价技术规范》2003版（简称《规范》）中的要求以虫草为主要原料的保健食品中腺苷的测定用HPLC方法，用药典或《规范》中的方法测定虫草类制品中腺苷含量时结果偏低，上述方法均单一检测虫草中腺苷或虫草素。

农业部标准NY/T 2116-2012可同时检测虫草中腺苷和虫草素，但提取时间过长。

近年来国内采用高效液相色谱法测定蛹虫草中腺苷和虫草素含量的报道较多，腺苷和虫草素等核苷类成分是虫草的主要功效成分，因此对这2种成分的检测尤为重要。

本研究目的是尽量简化样品前处理步骤，避免使用有毒有机溶剂，优化HPLC方法，建立同时测定虫草制品中腺苷和虫草素的HPLC方法。

华西药学杂志W C J ·P S　2006,21(5):485～486基金项目:江苏省教育厅自然科学基金资助项目(03KJD150050)作者简介:夏敏(1963-),女,副教授,从事化学教学和仪器分析的工作。

HP LC 测定虫草培养基中腺苷和虫草素的含量夏　敏1,温　鲁2,徐继明1(1.淮阴师范学院化学系,江苏淮安223300;2.淮阴师范学院生物系,江苏淮安223300)摘要:目的　测定虫草培养基中腺苷和虫草素的含量。

方法　采用HP LC 法,色谱柱为W aters Nova -Pak C 18柱(300mm ×319mm,4μm );流动相为水-甲醇-醋酸(185ζ14ζ1);流速110m l ·m in -1,检测波长260n m 。

结果　腺苷的线性范围为215～5010μg ·m l-1(r =0.9999),回收率为104.5%,RSD =1.32%;虫草素的线性范围为6.5～130.0μg ·m l -1(r =0.9999),回收率为106.1%,RSD =1146%。

结论　该方法灵敏、快速、准确,适用于虫草培养基中腺苷和虫草素的检测。

关键词:培养基;腺苷;虫草素;高效液相色谱法;虫草中图分类号:R92712　　文献标识码:A 　文章编号:1006-0103(2006)05-0485-02D eterm i n a ti on of adenosi n e and cordycep i n i n culture m ed i u m of C o rdyceps m ilita ris by HPLCX I A M in 1,W EN Lu 2,XU J i -m ing1(1.D epart m ent of Che m istry,Huaiyin Teachers College,Huai ’an 223300,China;2.D epart m ent of B iology,Huaiyin Teachers Col 2lege,Huai ’an 223300,China )Abstract:O BJECT I VE T o establish an HP LC method f or deter m ining the contents of adenosine and cordycep in in Cordyceps m ilita 2ris .M ETHOD S The colu mn wasW aters Nova -Pak C 18(3.9mm ×300mm,4μm ),and mobile phase was water -methanol -acetic acid (185ζ14ζ1)with fl ow rate of 1.0m l ·m in -1and detecti on wavelength of 260n m.RESUL TS The linear range was215-5010μg ·m l-1(r =0.9999)for adenosine and 6.5-130.0μg ·m l -1(r =0.9999)for cordyecep in,res pectively .The averagerecovery of adenosine was 104.5%with RSD of 11316%;and that of cordycep in was 106.1%with RSD of 1.46%.CO NCL US I O N This method is rap id and accurate .It used t o deter m ine the adenosine and cordycep in in culture mediu m with satisfact ory results .Key words:Culture mediu m;Adenosine;Cordycep in;HP LC;Cordyceps m ilitaris CLC nu m ber:R92712D ocu m en t code:AArti cle I D :1006-0103(2006)05-0485-02 虫草是具有显著医疗保健功效的药用真菌,由于天然虫草价格昂贵,因此,特对虫草的人工培育进行了探索。

HPLC测定祁连产冬虫夏草中虫草素和虫草酸的含量汪陈才（2008 B,青海师范大学，化学系）摘要为建立一种有效的利用高效液相色谱法（HPLC）测定冬虫夏草中虫草素和虫草酸含量的方法，用甲醇超声提取虫草素、水超声提取虫草酸，再利用高效液相色谱、示差折光检测器和紫外检测器分别测定冬虫夏草中虫草素和虫草酸含量。

通过对样品进行预处理，色谱条件和方法指标的验证，建立了定量检测虫草中虫草素和虫草酸的一种有效方法，二者精密度( RSD) ≤1.77% 。

虫草素、虫草酸检出限为50 ng/mL 和1.5 μg/mL。

测得样品中虫草素和虫草酸的平均组分含量为0.258mg·g-1和79.7mg·g-1二者回收率在93.7%～98.4%之间。

该方法具有快速、准确、简便的特点。

关键字: 高效液相色谱虫草虫草素虫草酸Abstract:A high performance liquid chromatographic (HPLC) with diode- array detector (DAD) and refractive index detector ( RID) method for the determination of cordycepin and cordycep acid in cordyceps sinensis was studied. Both of it were extracted by Methanol and water with Ultrasonic wave. Then by using high performance liquid chromatography, refractive index detector and a UV detector were measured in Cordyceps and cordycepic acid content. Based on the sample pretreatment, chromatographic conditions and method validation, establishes the quantitative detection of cordycepin and cordycepic acid is an effective method. Their precision (RSD) were lower than 1.77%. The samples of cordycepin and cordycep acid content averages are 0.258 mg•g1and 79.7mg•g-1. Their recovery were between 91.9% and 93.7%. The method is rapid, accurate and simple features.Key words HPLC; Cordyceps sinensis; Cordycepin; Cordycep acid冬虫夏草(Cordyceps Sinensis)与人参、鹿茸齐名，为中国三宝之一。

一种虫草类药材中虫草酸的检测方法虫草酸是一种重要的生物活性成分，具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等多种药理作用。

因此，准确、快速地测定虫草酸含量对虫草类药材的质量控制具有重要意义。

本文将介绍一种用于虫草类药材中虫草酸含量测定的方法。

一、样品准备首先，需要将虫草样品粉碎成细粉，以增加提取效率。

然后，取适量的细粉样品，加入适量的乙醇进行浸泡提取。

提取条件包括浸泡时间、浸泡温度和乙醇浓度等，需根据实际情况进行优化。

二、虫草酸的定量分析1.高效液相色谱法将提取得到的虫草样品溶液进行滤过，然后取适量的滤液注入高效液相色谱仪中进行分析。

色谱条件一般为：流动相为甲醇-水，梯度洗脱；检测波长为254nm；色谱柱温度为25℃；流速为1mL/min等。

通过测定峰面积，结合外标法，可以计算出虫草样品中虫草酸的含量。

需要注意的是，色谱条件和外标的选择要根据实际情况进行优化。

2.红外光谱法将提取得到的虫草样品溶液干燥，然后制备成样品片。

利用红外光谱仪对虫草样品进行扫描测试，记录虫草酸的吸收峰。

通过比对样品的光谱图与标准库中虫草酸的光谱图，可以确定虫草样品中虫草酸的含量。

红外光谱法具有快速、简便的特点，适用于虫草样品中虫草酸含量的初步检测。

三、质量控制1.确保仪器的稳定性和准确性，定期进行校准和维护。

2.样品制备过程中要避免样品受到杂质的污染，确保测定结果的准确性。

3.重复测定样品以确保结果的可靠性，同时建立质控图表，及时发现异常数据。

四、结论虫草酸是虫草类药材中的重要成分，对其含量进行准确测定具有重要意义。

本文介绍了一种适用于虫草类药材中虫草酸含量测定的方法，包括高效液相色谱法和红外光谱法。

通过合理的样品制备和测定条件，可以获得准确、可靠的结果，为虫草类药材的质量控制提供科学依据。

希望这些内容对您有所帮助。

谢谢阅读！。

上海农业学报　2005,21(4):53～56　Acta Agriculturae Shanghai文章编号:100023924(2005)04253204北冬虫夏草发酵液中虫草素和腺苷含量的HPLC分析张红霞1,吴　畏23,陈　伟2,高新华2,唐乐珊2(1沈阳农业大学生物技术学院,沈阳110161;　2上海市农业科学院植物保护研究所,上海201106)摘　要:试用高效液相色谱法同时检测了5株北冬虫夏草菌株发酵液中虫草素和腺苷的含量,并系统地研究了各种发酵条件对虫草素和腺苷含量的影响。

结果表明,虫草素和腺苷在所设色谱条件下得到了很好的分离,二组分的线性关系良好,回收率满意,其中虫草素峰保留时间为11.443min,腺苷峰保留时间为9.054min;虫草素的回收率为103.22%,RS D=4.4%,腺苷的回收率为98.42%,RS D=3.2%;虫草素和腺苷的线性范围分别为0.49～98μgΠm L,0.46～92μgΠm L。

5株待测菌株发酵液中的菌丝干重第5天都达到了最大值,其中Cordycepsmilitaris G5124菌株的虫草素含量第9天达最大值,腺苷含量第1天达最大值。

试验结果还表明,不同菌株发酵液中的虫草素和腺苷含量具有明显差异,这可能与菌株本身的遗传特性有关。

其中itaris G(04)5f菌株的虫草素含量最高,可用作发酵生产虫草素的高功能菌株,进一步试验表明,当起始pH值为9时该菌株的虫草素含量达到最高。

关键词:北冬虫夏草;发酵液;虫草素;腺苷;HP LC分析中图分类号:S432.4+4 文献标识码:A北冬虫夏草(Cordyceps militaris)为冬虫夏草同属的真菌,而且它是已报道的350余种虫草菌中惟一能大量形成虫草素的种。

其主要化学成分和药理作用与冬虫夏草基本相似[1,2],是冬虫夏草最理想的代用品。

虫草素和腺苷是北冬虫夏草的主要活性成分[3]。

据报道[4,5],北冬虫夏草发酵液对哮喘及支气管疾病、抗肿瘤、免疫调节、增强肾衰竭病人的肾功能等方面都有很好的治疗效果,且抗疲劳作用显著。

虫草素的检测提纯方法及药用价值提纯方法：1、虫草素的提取方法：以蛹虫草为材料采用超声波水提法、超声波醇提法、水热回流法和醇热回流法4 种提取方法选择虫草素*提取方法,用正交试验方法考察水热回流法中提取温度、提取次数、提取时间、料液比4个因素对虫草素提取效率的影响,确定水热回流法是提取虫草素的*提取方法，其*工艺条件为：用10倍量的水于80℃热回流提取3次每次90 min。

2、虫草素的分离纯化方法：车振明等[26]经过对蛹虫草子实体及培养基的粉碎、石油醚脱脂、80℃～85℃水浴12 h、调节等电点沉淀、732-NH4离子交换树脂的分离、浓缩、4℃下低温结晶，得到一定纯度的虫草素晶体。

陈顺志等[27]以蛹虫草人工培养后的发酵物为原料，采用超临界技术萃取核苷类有效成分，并以乙醇等作为夹带剂减压分离获得核苷多组份及单体。

Cunnigham等[4]将虫草菌培养液经过滤后用活性炭吸附，再经过洗脱液洗脱和浓缩，得到虫草素晶体。

虫草素的检测方法：1、薄层层析法（TLC）雷帮星等将待虫草素待测样品与标准品点于已活化的薄层板上（1lO℃活化0．5 h ），待溶剂挥干后，在展开剂（氧仿:乙酸乙酯:异丙醇:水=8:2:6:0．3）中展开。

挥干展层剂，将其置紫外线分析仪上，254nm显色,计算标准品和样品中各点的相对迁移率Rf。

2、液相色谱法（HPLC）张嘉等以HPLC测定虫草素含量，其色谱条件：Symmetry C18（5 um,4．6×150 mm）色谱柱，流动相：磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液（ph=6．8，加1％四氢呋喃），流速1．8 ml／min，检测波长：260 nm，进样量10 ul，灵敏度1．000AUFS，室温。

药用价值：1、免疫调节作用近年来，研究人员发现虫草素具有免疫调节作用。

它能够极大地提高了人外周血液单核细胞IL-10的分泌和IL-10mRNA的表达，同时，虫草素对诱导产生IL-2的植物血球凝集素和外周血液单核细胞扩增都有抑制作用，抗IL-10中性抗体也不能完全阻止虫草素对IL-2产生的抑制作用。

高效液相色谱法同时测定虫草素和腺苷尚红霞;梁晨;易娟【期刊名称】《分析科学学报》【年(卷),期】2011(27)6【摘要】本文用微波法提取蛹虫草培养基和子实体中的虫草素及腺苷,并利用高效液相色谱法同时测定虫草素和腺苷。

选择Inertsil ODS-SP柱(150×4.6mm,5μm)为色谱柱,乙腈-水为流动相,流速1.0mL/min,柱温35℃,二极管阵列检测器(DAD)检测,检测波长260nm,进样量10μL。

在2～10μg/mL浓度范围内,虫草素和腺苷线性关系良好,其相关系数分别为0.9998和0.9992。

虫草素和腺苷的回收率分别是63.30%～67.11%和63.97%～70.39%,相对标准偏差分别是0.56%～1.97%和0.94%～1.97%,检出限分别是0.19μg/mL和0.02μg/mL。

【总页数】3页(P776-778)【关键词】高效液相色谱;微波提取;虫草素;腺苷【作者】尚红霞;梁晨;易娟【作者单位】广东工业大学轻工化工学院【正文语种】中文【中图分类】O657.72【相关文献】1.高效液相色谱法测定保健食品中虫草素、尿苷和腺苷含量 [J], 丁献荣;提高兰;杨琳;汪庆旗;蒋涛2.高效液相色谱法同时测定蛹虫草子实体中腺苷和虫草素含量 [J], 袁蜜;乐昕;徐鲁荣;支月娥;周培3.反相高效液相色谱法测定蛹虫草中腺苷和虫草素的含量 [J], 刘小芳;薛长湖;常耀光4.高效液相色谱法(HPLC)测定云南省巧家县野生虫草中虫草素和腺苷含量的试验[J], 蒋发飞5.高效液相色谱法测定虫草中虫草素和腺苷含量的研究 [J], 施新琴;顾寅钰;张亚平;刘志斐;李化秀因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

现代药物与临床 Drugs & Clinic 第26卷第4期2011年7月• 313 •HPLC法测定北冬虫夏草和常见食用菌中腺苷和虫草素陆巍杰1，唐永范1，高瑞栋21. 上海国宝企业发展中心，上海 2012032. 上海国宝生物工程研究所，上海 201203摘 要：目的 建立一种HPLC法快速测定北冬虫夏草和几种常见食用菌中腺苷和虫草素的方法。

方法Welch Material XB-C18色谱柱（250 mm×4.6 mm， 5 μm），以水–甲醇（85︰15）为流动相，体积流量1.0 mL/min，检测波长258 nm，柱温40 ℃。

结果腺苷在0.023 2～0.464 0 μg、虫草素在0.030 0～0.600 0 μg与峰面积线性关系良好，平均加样回收率分别为98.97%、99.15%，RSD分别为1.41%、1.01%。

结论腺苷普遍存在于各种食用菌子实体中，而虫草素是虫草属真菌子实体中的特有活性成分。

本法简便快速，为全面评估北冬虫夏草中核苷类成分的质量，推进人工培育北冬虫夏草替代野生冬虫夏草提供检测方法。

关键词：北冬虫夏草；冬虫夏草；腺苷；虫草素；高效液相色谱中图分类号：R286.02 文献标志码：A 文章编号：1674 - 5515(2011)04 - 0313 - 03Determination of adenosine and cordycepin in Cordyceps militaris and common edible fungi by HPLCLU Wei-jie1, TANG Yong-fan1, GAO Rui-dong21. Shanghai Guobao Enterprise Development Center, Shanghai 201203, China2. Shanghai Guobao Bioengineering Institute, Shanghai 201203, ChinaAbstract: Objective To develop a rapid method by using HPLC to quantitatively determine adenosine and cordycepin in Cordyceps militaris products and common edible fungi. Methods The working conditions: column was Welch Material XB-C18 column (250 mm×4.6 mm, 5 μm), mobile phase was composed of water-methanol (85︰15) with flow rate of 1.0 mL/min and 258 nm detection wavelength, and temperature was 40 ℃. Results The linearity range of adenosine and cordycepin were 0.023 2—0.464 0 and 0.030—0.600 μg. The average recovery of adenosine and cordycepin were 98.97% and 99.15% with the RSD of 1.41% and 1.01%, respectively. Conclusion Adenosine appears widely in common edible fungi, and cordycepin is characteristic in fruitbodies of Cordyceps (Fr.) Link. The HPLC method is simple and fast., and could lay a method on the comprehensive evaluation of the nucleoside components in C. militaris, and promot the cultured C. militaris to replace the natural C. sinensis resources.Key words: Cordyceps militaris (L.) Link.; Cordyceps sinensis (Berk.) Sacc.; adenosine; cordycepin; HPLC北冬虫夏草Cordyceps militaris (L.) Link又名北虫草、蛹虫草，在生物学分类上与冬虫夏草同为虫草属，其功效与野生冬虫夏草相近，对氢化可的松诱导的老龄小鼠肾损伤具有肾保护作用[1]。

Determination of Cordycepin and Adenosine by Ultra High PerformanceLiquid Chromatography-mass SpectrometryWANG Guan-yu（Fushun Food Inspection and Testing Center ，Fushun 113000，China ）Abstract ：To expand detection range ，in order to meet the needs of the less cordycepin and adenosine testing ，the UPLC-MS /MS method was established for the determination of cordycepin and,adenosine in Cordyceps militaris products.The determination limit and recovery rate of cordycepin,adenosine and cordycepin in cordyceps militaris were verified simultaneously.The results showed that their linear ranges of 0.01μg ·L -1~5μg ·L -1were above 0.9995，The limit of detection lower was 0.05µg ·L -1.It has the characteristics and high sensitivity.Key words ：Cordyceps ；UPLC-MS/MS ；cordycepin ；adenosine超高效液相色谱-质谱联用法测定虫草素和腺苷王冠宇（抚顺市食品检验检测中心，辽宁抚顺113008）【摘要】为扩大检测范围，满足痕量虫草素和腺苷含量的检测，建立超高效液相色谱-质谱联用法测定蛹虫草制品中虫草素和腺苷的含量，同时对其进行测定低限及回收率的验证，结果表明其线性范围0.01µg·L -1~5µg·L -1的相关系数均能达到0.9995以上，虫草素和腺苷的测定低限均为0.05µg·L -1，并具有特异性显著，灵敏度较高等特点。

山东蚕业2009年第2期高效液相色谱法测定虫草中虫草素和腺苷含量的研究*施新琴 顾寅钰 张亚平 刘志斐 李化秀(山东省蚕业研究所)虫草历来为传统名贵中药,其中最著名的有冬虫夏草C.sinensis(Ber kely)Sacc和蛹虫草Cordyceps m ilitaris(L.exFr.)L i n k2种,虫草中所特有的虫草素、虫草腺苷和虫草多糖等活性物质一直是专家学者争相研究的热点。

虫草素因其能干扰细胞RNA和DNA的合成,抑制不正常细胞(癌细胞)的分裂并能作为区别细胞中不同的RNA聚合酶的工具,具有抗肿瘤、抗病毒等方面的作用,由此引起医学界的高度重视。

虫草腺苷则在抗病毒,抗菌,预防治疗脑血栓、脑溢血,抑制血小板积聚,防止血栓形成,消除面斑和抗衰防皱等方面效果较佳。

虫草中虫草素和虫草腺苷含量均偏低,提纯其活性成分可以更好的开发利用虫草,因此快速、准确的检测虫草素和虫草腺苷含量至关重要。

陈千良、孙诗清、汪宇和张莉等人分别作了相关的研究,但普遍存在分离效果不佳、可靠性不够理想以及目标峰保留时间太长等缺点,故在应用普及方面受到了较大限制。

为此,我们在借鉴夏敏等方法的基础上进一步优化色谱条件,建立了新的反相高效液相色谱法测定虫草素和虫草腺苷,并用该方法测定了北虫草的虫草素和虫草腺苷的含量,取得了较为理想的效果。

1 材料与方法1.1 材料及主要试剂和仪器材料:本研究室培育的蚕虫草样品,经80 烘干,粉碎,过80目筛后,-20 冷冻保存待测。

试剂:虫草素标样(SI GMA),虫草腺苷(常州大康);四氢呋喃(色谱纯),甲醇(色谱纯); KH2PO4,K2H P O4、乙醇均为分析纯,试验用水为自制双蒸水。

仪器:高效液相色谱仪(大连依利特), WATERS NOVPAK-C18色谱柱(5 m 40c m);超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司生产);格兰仕微波炉;0.2 m滤膜,25 L 微量进样器。

1.2 方法1.2.1 虫草素和虫草腺苷的提取:准确称取虫草样品0.1g,加入双蒸水1mL,涡流1m i n,微波中高火提取1m i n,静置得虫草素、虫草腺8*资助项目:山东省农业科学院青年基金项目(编号2007YQN023)2009年第2期山东蚕业苷提取液,过0.2 m 滤膜得待测液。

十八．虫草素和腺苷的测定(高效液相色谱测定方法)本方法适合食品中虫草素和腺苷的含量的测定本方法检测限：食品中虫草素和腺苷为6.0mg/kg。

（一）方法提要试样中的虫草素和腺苷经提取后在ODS色谱柱上分离，根据保留时间定性，用二极管阵列检测器来测定虫草素和腺苷的含量。

（二）仪器1. 高效液相色谱仪带二极管阵列检测器。

2. 超声清洗仪。

3. 天平（精确到0.001g和0.0001g）。

4. 微孔滤膜（PVDF 0.45 μm）。

（三）试剂1. 色谱用水（Millipore纯水器制备）。

2. 甲醇（色谱纯）。

3. 提取液：蒸馏水+甲醇=50+50(V+V）。

4. 虫草素和腺苷对照品，Sigma公司(纯度≥99%)。

5. 虫草素标准溶液和腺苷混合标准溶液（25.0µg/mL）：精确称取25mg虫草素和25mg腺苷,用提取液定容至100.00mL，即得虫草素和腺苷标准储备溶液。

稀释10倍后得虫草素标准溶液和腺苷混合标准溶液。

（四）测定步骤1. 样品处理：①固体样品：称取0.2g(精确到0.1mg)于50mL容量瓶中，加入40 mL提取液，超声30min，取出，冷却后用提取液定容到50 mL，摇匀经0.45µm滤膜过滤，清液待分析。

②液体样品：取均匀试样10mL(精确到0.1 mL)置于50 ml容量瓶中，加入甲醇10 mL，混匀，超声30min，取出，冷却后用提取液定容到50 mL摇匀经0.45µm滤膜过滤，清液待分析。

2. 标准工作曲线制作。

精密吸取虫草素和腺苷混合标准溶液（25.0µg/mL）1.0 mL，10.0 mL分别置于100mL容量瓶中，用提取液定容到100mL，摇匀，得到0.25µg/mL，2.50µg/mL虫草素和腺苷混合标准溶液。

分别取10μL0.25µg/mL，2.50µg/mL，25.0µg/mL 标准工作系列溶液进样分析，以测得的虫草素和腺苷的峰面积，分别对虫草素和腺苷的浓度绘制标准曲线。

在线固相萃取—HPLC测定4种虫草类药材中虫草素和2′—脱氧腺苷该文建立一种同时测定4种虫草类药材（冬虫夏草、蛹虫草、虫草菌丝体和蝉花）中虫草素（3′-脱氧腺苷）和2′-脱氧腺苷含量的在线固相萃取-高效液相色谱分析方法。

供试品经ZORBAX SB-AQ（4.6 mm×12.5 mm，5 μm）色谱柱富集，水-甲醇（91∶9）洗脱；ZORBAX SB-AQ（4.6 mm×150 mm，5 μm）色谱柱分离，流动相为0.1%甲酸水溶液-甲醇（91∶9），检测波长260 nm，柱温40 ℃，流速1.0 mL·min-1，分别对4种虫草类药材中虫草素和2′-脱氧腺苷含量进行检测。

结果表明冬虫夏草、虫草菌丝体和蝉花样品中仅检测到2′-脱氧腺苷，蛹虫草样品中仅检测到虫草素，早期报道的在冬虫夏草中检测到的虫草素色谱峰可能是其同分异构体2′-脱氧腺苷色谱峰或以2′-脱氧腺苷为主的与虫草素的共洗脱色谱峰。

该方法重复性好，准确度高，分析时间短，可用于虫草类药材中虫草素和2′-脱氧腺苷的分析。

标签：固相萃取；高效液相；虫草素（3′-脱氧腺苷）；2′-脱氧腺苷[Abstract] An online SPE-HPLC method for simultaneous determination of cordycepin （3′-deoxyadenosine）and 2′-deoxyadenosine in Cordyceps genus （C. sinensis，C. militaris，Hirsutella sinensis and C. sobolifera）was developed. The samples were enriched on a ZORBAX SB-AQ （4.6 mm×12.5 mm，5 μm）column with isocratic elution by 9% methanol solution. The separation of analytes was performed on a ZORBAX SB-AQ （4.6 mm×150 mm，5 μm）column with gradient elution by 0.1% formic acid solution and methanol （91∶9）. The flow rate was 1.0 mL·min-1. Column temperature was 40 ℃and detection wavelength was 260 nm. This method has been applied for analysis of different Cordyceps genus. The 2′-deoxyadenosine was detected in C. sinensis，Hirsutella sinensis and C. sobolifera. The cordycepin was detected in C. militaris. In summary，the cordycepin chromatographic peak from C. sinensis in some past reports may be the 2′-deoxyadenosine chromatographic peak or the mixture peak of 2′-deoxyadenosine and cordycepin in which 2′-deoxyadenosine content was higher than cordycepin. The developed method is suitable for analysis of cordycepin and 2′-deoxyadenosine in Cordyceps genus.[Key words] SPE；HPLC；cordycepin （3′-deoxyadenosine）；2′-deoxyadenosine冬蟲夏草是麦角菌科真菌冬虫夏草菌Cordyceps sinensis（BerK.）Sacc.寄生在蝙蝠蛾科昆虫幼虫上的子座和幼虫尸体的复合体，具有补肺益肾，止血化痰的功效[1]。

HPLC法测定冬虫夏草胶囊中腺苷含量颜栋林【摘要】目的建立冬虫夏草胶囊中腺苷的含量测定方法.方法色谱柱采用Agilent TC-C18(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相:乙腈-0.01mol/L磷酸二氢钾溶液(8:92),流速为1.0 ml/min,检测波长为254 nm;柱温为30℃,外标法测定.结果腺苷浓度在0.402 4～60.36μg/ml(r=1)范围内与峰面积呈良好线性关系;平均回收率(n=6)为98.04%,RSD为0.63%.结论本法简便可靠,可用于冬虫夏草胶囊中腺苷的质量控制.【期刊名称】《药学实践杂志》【年(卷),期】2010(028)004【总页数】3页(P293-295)【关键词】冬虫夏草胶囊;腺苷;HPLC【作者】颜栋林【作者单位】南宁食品药品检验所,广西,南宁,530001【正文语种】中文【中图分类】R927.2冬虫夏草胶囊主要原料为冬虫夏草(菌丝体)。

具有补肺益肾，止血，化痰等作用，用于久咳虚喘，劳嗽咯血，阳痿遗精，腰膝酸痛[1]。

常服虫草，可以有许多意想不到的保健功效。

腺苷为冬虫夏草胶囊中的主要有效成分之一，保健食品检测方法中有腺苷的测定方法[2]，但针对性不强，由于不同品种配方不一，所用原料也不相同以及制作工艺的差异，受到杂质的干扰程度不同，按食品方法试验，冬虫夏草胶囊中主成分峰腺苷与杂质峰无法有效分离，为了有效控制产品的质量，本试验对保健食品中腺苷的含量测定方法进行改进，为冬虫夏草胶囊中腺苷的测定提供一个参考方法。

岛津LC-2010AHT高效液相色谱仪，紫外检测器，LCSolusion色谱工作站；腺苷对照品(879-200001含量测定用)，购自中国药品生物制品检定所；冬虫夏草胶囊(20090603、20090706、20090718，广东长兴科技保健品有限公司)；乙腈为HPLC级(美国Fisher公司)；水(娃哈哈饮用纯净水)；乙醇、磷酸二氢钾为分析纯。

一、实验目的1. 了解冬虫夏草的药用价值和活性成分；2. 掌握冬虫夏草的提取方法；3. 分析冬虫夏草中的主要活性成分。

二、实验原理冬虫夏草（Cordyceps sinensis）是一种珍贵的药用真菌，具有滋补强壮、补肾填精、抗疲劳、抗衰老等功效。

其主要活性成分包括虫草素、虫草多糖、虫草酸等。

本实验通过提取冬虫夏草中的活性成分，并对其进行分析，以期为冬虫夏草的开发和应用提供理论依据。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：冬虫夏草、甲醇、正己烷、无水乙醇、水、硫酸钠、活性炭、硅胶、薄层色谱板、紫外分光光度计等；2. 实验仪器：电子天平、旋转蒸发仪、恒温水浴锅、电热恒温干燥箱、紫外-可见分光光度计、薄层色谱仪等。

四、实验方法1. 冬虫夏草的预处理将冬虫夏草剪成小段，用甲醇浸泡24小时，然后置于60℃恒温干燥箱中干燥，备用。

2. 冬虫夏草的提取取干燥的冬虫夏草，加入甲醇，在超声条件下提取2小时。

提取液过滤，滤液浓缩至一定体积，加入适量的水，用正己烷萃取3次，弃去正己烷层。

水层中加入适量的活性炭，搅拌吸附30分钟，过滤，滤液浓缩至一定体积，加入适量的硫酸钠，搅拌静置，过滤，滤液浓缩至一定体积，加入适量的无水乙醇，搅拌静置，过滤，滤液浓缩至一定体积，得到冬虫夏草提取液。

3. 活性成分分析（1）虫草素含量测定取一定量的冬虫夏草提取液，加入适量的显色剂，在特定波长下测定吸光度，根据标准曲线计算虫草素含量。

（2）虫草多糖含量测定取一定量的冬虫夏草提取液，加入适量的显色剂，在特定波长下测定吸光度，根据标准曲线计算虫草多糖含量。

（3）虫草酸含量测定取一定量的冬虫夏草提取液，加入适量的显色剂，在特定波长下测定吸光度，根据标准曲线计算虫草酸含量。

五、实验结果与分析1. 虫草素含量根据实验结果，冬虫夏草提取液中的虫草素含量为0.5mg/g。

2. 虫草多糖含量根据实验结果，冬虫夏草提取液中的虫草多糖含量为1.2mg/g。

3. 虫草酸含量根据实验结果，冬虫夏草提取液中的虫草酸含量为0.3mg/g。

HPLC法测定虫草中腺苷的含量黄力君【摘要】目的：建立高效液相色谱（HPLC）法测定虫草中腺苷的含量。

方法：采用ZORBAX SB-C18（4.6mm×250mm，5μm）色谱柱，流动相：乙腈-水（10：90，V/V），检测波长：260nm，柱温：30℃，流速：1.0mL/min。

结果：腺苷的线性范围2.0~100μg/mL， r=0.99996，腺苷的加标平均回收率为98.2％，最低检出限为0.45μg/mL（S/N=3）。

结论：本方法简单，灵敏，重现性好，结果准确，适合虫草中腺苷的含量检测。

【期刊名称】《江西中医药》【年(卷),期】2016(047)009【总页数】2页(P75-76)【关键词】虫草;HPLC;腺苷;含量测定【作者】黄力君【作者单位】广州市中西医结合医院药剂科广州 510800【正文语种】中文【中图分类】R284.1虫草，又称冬虫夏草，是由麦角菌科的真菌（虫草菌）与蝙蝠蛾幼虫在特殊条件下形成的菌虫结合体，子座出幼虫的头部、单生、细长如棒球棍，长4～11cm ［1］。

虫草是我国著名的名贵中药材，虫草以干燥的子座和虫体入药，味甘、性温，入肺肾二经，具有抗菌［2］、抗炎、抗衰老、止咳喘和补益肺肾等功效，研究表明，虫草能治疗咳嗽、咯痰、遗精、黄疸、降血压、盗汗等疾病［3］。

迄今为止，分离分析出的活性物质有腺苷、虫草素、虫草酸、虫草多糖等多种成分。

腺苷，全称腺嘌呤核苷酸，是核酸的基本结构单位，参与人体代谢和生理调节的功能［4］。

为更好的控制虫草的质量，本文采用高效液相色谱法测定虫草中腺苷的含量。

1.1 仪器 Aglient 1260高效液相色谱仪（配有四元泵、自动进样器、紫外可见波长检测器）（安捷伦公司）；德国IKA Vortex 3涡旋混合器；Milli-Q超纯水系统（美国Millipore公司）；超声波清洗机（无锡市美极超声波清洗机设备有限公司）。

1.2 试剂和耗材腺苷标准品（中国药品生物制品检定，纯度＞98%）；虫草中药材（亳州中药材市场）；乙腈为色谱纯，水为超纯水，0.45μm微孔滤膜。