ELISA技术可用于测定抗原,也可用于测定抗体

临床检验技术中级《专业知识》试题及答案解析四[单选题]1.显微镜直接检测真菌，有助于真菌诊断的（江南博哥）结构是()。

A.细胞核的形态B.菌丝和孢子的形态结构C.核仁的数目D.鞭毛的数量E.胞浆颗粒的有无参考答案：B参考解析：单细胞真菌只有孢子，多细胞真菌有菌丝和孢子，菌丝和孢子有助于对真菌的诊断。

[单选题]2.非密螺旋体抗原试验检查梅毒所用的抗原是()。

A.病变组织B.疏螺旋体抗原C.牛心肌脂质D.致敏红细胞E.密螺旋体抗原参考答案：C参考解析：非密螺旋体抗原试验是用正常牛心肌的心脂质作为抗原，测定患者血清中的反应素（抗脂质抗体）。

最常用的有VDRL试验和RPR试验。

[单选题]3.可用于厌氧培养的标本是()。

A.痰B.粪便C.膀胱穿刺留尿D.导尿E.清洁中段尿参考答案：C参考解析：痰、粪便、中段尿以及导尿这些与外界相通或不易无氧环境采集的标本均不适合做厌氧培养，膀胱穿刺留尿可用于厌氧培养。

[单选题]4.假定血糖在常规实验室20天测定的质控结果的均数为5.6mmol/L，标准差为0.5mmol/L。

第l个月在控数据的平均数为5.4mmol/L，标准差为0.2mmol/L；累积数据计算的平均数为5.5mmol/L，标准差为0.3mmol/L。

第2个月的室内质控图，应采用的均值和标准差为()。

A.5.6mmol/L和0.50mmol/LB.5.5mmol/L和0.30mmol/LC.5.4mmol/L和0.20mmol/LD.5.5mmol/L和0.40mmol/LE.5.6mmol/L和0.30mmol/L参考答案：B参考解析：室内质控：①首先确定仪器状态良好，在“旧”批号质控品使用结束前，将新批号质控品与“旧”批号质控品同时进行测定约一个月，获得至少20个测次（一天一次一瓶），计算新质控品的均值和标准差（剔除超过均值土3S的离群值，重新计算余下数据的均数和标准差），作为新质控品室内质控图的暂定靶值和标准差（本题中均数为5.6mmol/L，标准差为0.5mmol/L）。

ELISA技术可用于测定抗原，也可用于测定抗体。

在这种测定方法中有三个必要的试剂：（1）固相化的抗原或抗体，即"免疫吸附剂"（immunosorbent）；（2）酶标记的抗原或抗体，称为"结合物"（conjugate）；（3）酶反应的底物。

根据试剂的来源和样本的情况以及检测的具体条件，可设计出各种不同类型的检测方法。

以下主要介绍几种公司常用的检测抗原的类型：1、间接竞争法测抗原样本中的待测药物和固相化的抗原共同竞争一定量的抗体，加入酶标记抗抗体（酶标二抗）后能与固相化的抗原抗体复合物特异性结合，经底物显色后检测，样本中药物含量愈高，竞争结合的抗体量愈多，从而结合在固相上的酶标记抗抗体（酶标二抗）量愈少，最后的显色也愈浅。

本公司及国内产品多用此法。

具体操作步骤如下：1）抗原固相化：将特异性抗原与固相载体联结，形成固相抗原，洗涤除去未结合的抗原及杂质。

2）加入标准品/样本，再加入抗体，保温反应。

样本中药物与固相抗原同时竞争与特异性抗体结合，形成固相抗原抗体复合物。

洗涤除去游离物质及吸附在固相载体上结合不紧密的物质。

3）加酶标抗抗体，固相免疫复合物中的抗体与酶标抗体抗体结合，从而间接地标记上酶。

洗涤后，固相载体上的酶量与样本中受检药物的量负相关。

4）加底物显色，固相上的酶催化底物成为有色产物。

通过仪器检测分析，测知样本中抗原的量。

2、直接竞争法测抗原（1）直接竞争酶标抗原法测抗原样本中的待测药物和一定量的酶标抗原竞争与固相抗体结合，经底物显色后检测，样本中药物含量愈高，结合在固相上的酶标抗原量愈少，最后的显色也愈浅。

（2）直接竞争酶标抗体法测抗原样本中的待测药物和固相抗原竞争结合一定量的酶标记抗体，经底物显色后检测，样本中药物含量愈高，结合在固相上的酶标抗体愈少，最后显色也愈浅。

直接竞争法具体操作步骤如下：1）抗原（或抗体）的固相化：将特异性抗原（或抗体）与固相载体联结，形成固相抗原（或抗体），洗涤除去未结合的抗原（或抗体）及杂质。

酶联免疫吸附法在乳制品检测中的应用摘要:简单介绍了酶联免疚吸附法（ELISA）,并且就其在乳制品检测中的应用进行了较详细的评述,主要包ELISA用于乳制品中的免疫球蛋白、乳铁蛋白、微生物及其他成分的测定。

关健词：酶联免疫吸附法，乳制品，检测Abstract:The enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA)were introduced briefly,and application of ELISA in milk products analysis were also studied,including the determination of immunoglobulin,laotoferrin,microorganism,as well as the other components.Keywords:ELISA,milk products,determination1引言我国的食品安全问题已不再单纯的是一般的质量问题，食品自然甚至人为地污染日趋多样化和复杂化，紧抓食品安全控制成为了关系国计民生的大事，人民和政府的高度重视迫使食品科技不断增加新的检验项目，特别是随着生活质量的提高，人们对于乳制品的需求越来越大，乳制品的安全检测问题也就越发突出。

利用新的科技手段不断提高检验水平、质量和效率。

现今，食品安全检测正朝着快速、灵敏、简便的方向发展。

酶联免疫技术正是迎合了这一方向而被越来越多地应用于乳制品检验领域的。

2酶联免疫吸附法的概述酶联免疫吸附法(Enzyme-Linked Immunes or bent Assay,简称ELISA),又称酶标法,是在20世纪60年代在免疫荧光和组织化学基础上发展起来的一种新技术，1966年,Nakane和Avrameas首先用酶标记抗体在普通光学显微镜下定位抗原。

1971年,Engvall和Perlman以及Weeman和Schuurs仿照放射免疫测定法(RIA)的竞争性测定原理,使酶标抗原与待测标本中的未标记的抗原,竞争结合一定量的抗体,然后分离游离的和结合的标记抗原,测定酶活性,即可得到待测抗原量。

ELISA检测原理及方法ELISA是酶联接免疫吸附剂测定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。

它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。

此项技术自70年代初问世以来，发展十分迅速，目前已被广泛用于生物学和医学科学的许多领域。

一、原理ELISA是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。

检测的对象可以是抗原也可以是抗体。

由于抗原、抗体的反应在一种固相载体（聚苯乙烯微量滴定板）的孔中进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证试验结果的特异性与稳定性。

二、检测类型ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体，本检测方法有三个必要试剂：1）与固相载体结合的抗原或抗体，又称免疫吸附剂；2）酶标抗原或抗体，又称结合物；3）酶反应底物，又称显色剂在实际应用中，通过不同的设计，具体的检测方法可有多种：1）间接法；2）双抗体夹心法；3）竞争法；4）双位点一步法；5）捕获法测IgM抗体；6）应用亲和素和生物素的ELISA测量时，抗原(抗体)先结合在固相载体上，但仍保留其免疫活性，然后加一种抗体(抗原)与酶结合成的偶联物(标记物)，此偶联物仍保留其原免疫活性与酶活性，当偶联物与固相载体上的抗原(抗体)反应结合后，再加上酶的相应底物，即起催化水解或氧化还原反应而呈颜色。

其所生成的颜色深浅与欲测的抗原(抗体)含量成正比。

这种有色产物可用肉眼、光学显微镜、电子显微镜观察，也可以用分光光度计(酶标仪)加以测定。

其方法简单，方便迅速，特异性强。

三、操作步骤方法1用于检测未知抗体的间接法（要求抗原纯度高，提高实验特异性）：1)包被：用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10 μg/ml，100 μl/孔，4℃包被过夜过夜；2)洗涤：1*PBST洗涤，3-5次，拍甩干净；3)封闭：5%脱脂奶粉/猪血清封闭液，37℃，封闭2-3 H;4)洗涤：1*PBST洗涤，3-5次，拍甩干净；5)待检样品：酶稀液倍比稀释待检样品，100 μl/孔，37℃孵育1H（同时做空白、阴性及阳性孔对照）；6)洗涤：1*PBST洗涤，3-5次，拍甩干净；7)二抗：加入酶标二抗1/2000-1/4000，100μl/孔，37℃孵育30-45min;8)洗涤：1*PBST洗涤，3-5次，拍甩干净；9)显色：加显色液，100 μl/孔，8-10min；10)终止：2M硫酸终止，50 μl/孔；11)读数：酶标仪读取在OD450nm处的吸收值12)数据分析：阳性判定值≥2.1*阴性值。

ELISA的基本原理ELISA，又称酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay），是一种常用的生物化学和免疫检测技术，可以用于检测抗原特异抗体的结合。

ELISA技术是1960年代美国Kendall及其同事提出的，几十年来得到了广泛的应用，并发展成为多种不同形式的ELISA。

ELISA技术的基本原理是，将抗原和抗体结合在试管内，当抗体把抗原结合后，用特异的酶将抗原分解成其他物质，再用检测试剂将这些物质和抗体反应形成一定的特异性，最后酶标记试剂将酶结合，使得反应产物的吸光度随抗原的增加而增加。

ELISA技术的优点是：一，它具有超高的灵敏度，能够检测低抗原浓度的物质，允许极低的抗原检测量，轻松检测到极少量的抗原；二，它具有快速性，可以很快地完成检测，最多不超过两个小时，快速出结果；三，它的操作简单，可以在常温下完成，结果的可重复性很高；四，它的费用较低，对对抗原和抗体的要求不高，不一定需要纯化的抗原和抗体。

ELISA技术在许多领域都有广泛的应用，包括临床医学、分子生物学、药物研发以及食品工业等等。

它检测有抗原特异性的抗体，可以检测血清、尿液、体液、细胞和血清中的抗原，例如抗体、抗原、艾滋病病毒、抗病毒抗体、抗肿瘤抗原等等。

ELISA技术可以用来诊断许多疾病，如感染性疾病、肿瘤等，它在临床医学、分子生物学以及食品检测领域均有广泛的应用。

ELISA技术有一定的缺点，例如抗原和抗体的绑定效率可能不太高，这可能会影响结果的准确性，还有一些其他因素也可能影响结果的正确性，例如抗原和抗体的激发性以及抗体的抗体依赖性等等。

综上所述，ELISA技术是一种用于检测抗原特异抗体的结合的常用生物化学和免疫检测技术，它可以用于诊断许多疾病，也可以用于食品检验等等。

它的优点在于操作简单，速度快，灵敏度高，以及费用较低。

但是它也有一定的缺点，例如抗原和抗体结合效率低等，有时会影响结果的准确性。

酶免疫技术题库1-4-10问题：[单选,A2型题,A1A2型题]下述哪一种酶联免疫吸附实验方法最常用于抗原测定（）.A.间接法ELISAB.反向间接法ELISAC.竞争法ELISAD.双抗体夹心法ELISAE.捕获法ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体，双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法。

问题：[单选,A2型题,A1A2型题]ELISA不可应用于下列哪一方面检测（）.A.病原体的检测B.抗体的检测C.肿瘤标志物的检测D.基因的检测E.抗原的检测ELISA技术应用广泛，几乎所有的可溶性抗原抗体系统均可以检测，但不用于基因检测。

问题：[单选,A2型题,A1A2型题]关于斑点-ELISA说法哪一项不正确（）.A.以吸附蛋白能力很强的硝酸纤维膜为载体B.底物经酶反应后形成有色沉淀，使固相膜染色C.斑点-ELISA灵敏度高，测得效价常高于常规ELISAD.操作简便E.斑点-ELISA可同时获得对多种疾病的诊断结果斑点-ELISA的原理与常规ELISA相同，不同之处在于斑点-ELISA采用的固相载体为对蛋白质具有很强吸附力的硝酸纤维素膜，故检测灵敏度高，是普通ELISA的6～8倍。

如果膜上固定多种抗原，可同时检测多种抗体。

ʫ 问题：[单选,A2型题,A1A2型题]在双位点ELISA实验时，造成抗原测值低于实际含量的常见原因是（）.A.固相抗体过多B.反应时间不够C.标记抗体过多D.待测物过浓E.酶的活性过高钩状效应是指由于抗原抗体比例不合适而导致假阴性的现象，其中抗体过量叫做前带效应，抗原过量叫做后带效应。

抗原抗体特异性反应时，生成结合物的量与反应物的浓度有关。

无论在一定量的抗体中加入不同量的抗原或在一定量的抗原中加入不同量的抗体，均可发现只有在两者分子比例合适时才出现最强的抗原-抗体反应。

问题：[单选,A2型题,A1A2型题]如果标本中存在NaN3可能会导致（）.A.假阴性B.假阳性C.灵敏度增加D.特异性增加E.临界值下降NaN3破坏HRP的结构与活性。

酶联免疫吸附实验（ELISA）基本原理基本原理1971年Engvall和Perlmann发表了酶联免疫吸附剂测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELIS A）用于IgG定量测定的文章，使得1966年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法。

这一方法的基本原理是：①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。

②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。

在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。

用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。

加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅刊物定性或定量分析。

由于酶的催化频率很高，故可极大地地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度。

方法类型和操作步骤ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。

在这种测定方法中有3种必要的试剂：①固相的抗原或抗体，②酶标记的抗原或抗体，③酶作用的底物。

根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件，可设计出各种不同类型的检测方法。

（一）双抗体夹心法双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法，操作步骤如下：（1）将特异性抗体与固相载体连接，形成固相抗体：洗涤除去未结合的抗体及杂质。

（2）加受检标本：使之与固相抗体接触反应一段时间，让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合，形成固相抗原复合物。

洗涤除去其他未结合的物质。

（3）加酶标抗体：使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。

彻底洗涤未结合的酶标抗体。

此时固相载体上带有的酶量与标本中受检物质的量正相关。

（4）加底物：夹心式复合物中的酶催化底物成为有色产物。

根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量。