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抗菌肽MET在毕赤酵母中的表达及其与抗生素的体外联合抑菌作用抗菌肽MET在毕赤酵母中的表达及其与抗生素的体外联合抑菌作用概述：抗菌肽（Antimicrobial Peptide，AMP）是由真核生物和原核生物产生的一类广谱抗菌活性肽。
抗菌肽MET是一种新型的AMP，对多种细菌、真菌和寄生虫展示了显著的抑菌活性。
近年来，越来越多的研究关注抗菌肽MET在微生物学领域的应用。
本文旨在探讨抗菌肽MET在毕赤酵母中的表达及其与抗生素的体外联合抑菌作用。
一、抗菌肽MET的特性抗菌肽MET是一类具有亲水性的小分子多肽，通常由20个左右的氨基酸残基组成。
其具有多种特性，如低分子量、对广谱微生物具有高度抗菌活性、快速杀菌等。
此外，抗菌肽MET在生物体内短暂存在，并且对抗生物耐药性展示出较低的概率。
二、抗菌肽MET在毕赤酵母中的表达毕赤酵母（Saccharomyces cerevisiae）是一种常见的真菌，在生命科学和食品工业中具有重要的应用价值。
研究表明，抗菌肽MET能够在毕赤酵母中实现表达，且其表达量与MET基因的启动子的选择和表达强度密切相关。
通过适当的基因工程技术，可在毕赤酵母中构建MET基因表达系统，从而实现高效表达抗菌肽MET。
三、抗菌肽MET与抗生素的体外联合抑菌作用近年来，多重耐药微生物的出现使得传统抗生素治疗失去了效果。
因此，探索新型抗菌药物和联合治疗策略变得尤为重要。
抗菌肽MET与抗生素的联合使用已成为一种备受关注的策略。
实验证明，抗菌肽MET与常用抗生素如青霉素、庆大霉素等能够呈现协同抑菌作用，使得微生物对抗生素的耐药性得到抑制。
此外，抗菌肽MET还能增加细菌膜对抗生素的渗透性，提高抗生素内部靶位的浓度，并通过干扰细菌的生物膜、破坏细菌的DNA和RNA合成等机制增强抗生素的抗菌效果。
四、抗菌肽MET的应用前景抗菌肽MET作为一种新型抗菌药物，具有广泛的应用前景。
其作为微生物学领域的抗菌剂，不仅能够杀灭常见的细菌和真菌，还能有效对抗抗生物耐药菌株。
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毕赤酵母多拷贝表达载体试剂盒用于在含多拷贝基因的毕赤酵母菌中表达并分离重组蛋白综述：基本特征：作为真核生物，毕赤酵母具有高等真核表达系统的许多优点：如蛋白加工、折叠、翻译后修饰等。
不仅如此，操作时与E.coli及酿酒酵母同样简单。
它比杆状病毒或哺乳动物组织培养等其它真核表达系统更快捷、简单、廉价，且表达水平更高。
同为酵母，毕赤酵母具有与酿酒酵母相似的分子及遗传操作优点，且它的外源蛋白表达水平是后者的十倍以至百倍。
这些使得毕赤酵母成为非常有用的蛋白表达系统。
与酿酒酵母相似技术：许多技术可以通用：互补转化基因置换基因破坏另外，在酿酒酵母中应用的术语也可用于毕赤酵母。
例如：HIS4基因都编码组氨酸脱氢酶；两者中基因产物有交叉互补；酿酒酵母中的一些野生型基因与毕赤酵母中的突变基因相互补，如HIS4、LEU2、ARG4、TR11、URA3等基因在毕赤酵母中都有各自相互补的突变基因。
毕赤酵母是甲醇营养型酵母：毕赤酵母是甲醇营养型酵母，可利用甲醇作为其唯一碳源。
甲醇代谢的第一步是：醇氧化酶利用氧分子将甲醇氧化为甲醛，还有过氧化氢。
为避免过氧化氢的毒性，甲醛代谢主要在一个特殊的细胞器－过氧化物酶体－里进行，使得有毒的副产物远离细胞其余组分。
利用毕赤酵母表达植物甜蛋白(brazzein)的初步研究
赵红玲;陈劲春
【期刊名称】《北京化工大学学报（自然科学版）》
【年(卷),期】2005(032)002
【摘要】实验将含有Brazzein基因的pPIC9K穿梭质粒通过电导入巴斯德比赤酵母(Pichia pastori)GS115中,并从22个阳性克隆中筛选出His+Muts高拷贝转化子2个,经诱导表达,产物进行Tricine-SDS-PAGE电泳鉴定,目标蛋白的相对分子量与理论值一致,又经小试(5～10L罐)蛋白产量可达385mg/L.利用大孔树脂D152初步分离,得到有微甜味的产物.进一步纯化后获得了1D-NMR图谱.
【总页数】4页(P14-16,20)
【作者】赵红玲;陈劲春
【作者单位】北京化工大学生命科学与技术学院,北京,100029;北京化工大学生命科学与技术学院,北京,100029
【正文语种】中文
【中图分类】Q786
【相关文献】
1.植物甜蛋白des-pGlul-brazzein在大肠杆菌中表达条件的优化 [J], 李春丽;陈其新;何国庆
2.乳糖诱导植物甜蛋白des-pGlu1-Brazzein在大肠杆菌中的表达 [J], 李春丽;陈其新;何国庆
3.植物甜蛋白des-pGlu1-Brazzein基因在乙醇氧化酶缺陷型甲醇酵母中的表达及
其活性分析 [J], 徐婷婷;陈锐博;暴元元;赵卫东;郑振宇;李春丽
4.人β-防御素-3与植物甜蛋白Brazzein嵌合基因的合成及其在大肠杆菌中的表达[J], 何国庆;李春丽;阮晖;陈其新;陈正华
5.甜蛋白Brazzein在毕赤酵母中的表达及应用 [J], 孟珊珊;谭明;肖冬光;宋诙
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毕赤酵母发酵过程胞内活性氧的定量分析肖安风;孙亮先;倪辉;蔡慧农【期刊名称】《泉州师范学院学报》【年(卷),期】2009(27)4【摘要】利用流式细胞术对毕赤酵母发酵过程中胞内活性氧(ROS)的变化进行定量检测和分析,建立发酵过程单位细胞胞内ROS的相对含量以及单位体积细胞胞内ROS相对含量的计算方法,分析ROS积累对毕赤酵母细胞活力的影响.研究结果表明:在甲醇流加阶段,单位细胞的DCF(2',7'-二氯荧光黄)染色平均荧光强度随着时间的增加而增加,即单位细胞胞内ROS的含量在甲醇流加阶段一直增加,细胞内产生持续的氧化压力,导致部分细胞死亡;单位体积酵母细胞的胞内ROS含量在甲醇流加阶段保持在一个相对稳定的范围.【总页数】4页(P87-90)【作者】肖安风;孙亮先;倪辉;蔡慧农【作者单位】集美大学,生物工程学院,福建,厦门,361021;厦门市食品生物工程技术研究中心,福建,厦门,361021;泉州师范学院,模式生物研究中心,福建,泉州,362000;集美大学,生物工程学院,福建,厦门,361021;厦门市食品生物工程技术研究中心,福建,厦门,361021;集美大学,生物工程学院,福建,厦门,361021;厦门市食品生物工程技术研究中心,福建,厦门,361021【正文语种】中文【中图分类】Q2-33【相关文献】1.13C辅助的超高效液相色谱-三重四极杆质谱联用方法精确分析毕赤酵母胞内代谢物浓度 [J], 郭孟磊;刘晓云;黄明志;李敏超;储炬;庄英萍;张嗣良2.重组人细胞色素P4502C9在毕赤酵母中的胞内表达 [J], 吴云华;孙鹏宇3.流式细胞术检测毕赤酵母发酵过程中胞内活性氧水平 [J], 肖安风;周祥山;周利;张元兴4.一种通过过表达毕赤酵母翻译相关因子提高重组蛋白胞内表达的策略 [J], 林雯炀;廖锡豪;陈南柱;黄大富;陈亮;钟炳旭;梁书利;林影5.发酵单胞菌和毕赤酵母菌在葡萄糖和木糖混合物中联合培养生产乙醇 [J], 袁天杰（译）因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
毕赤酵母表达系统研究进展作者：齐连权， 陈薇， 来大志， 于长明， 王海涛作者单位：军事医学科学院微生物学流行病学研究所,北京,100071刊名：中国生物工程杂志英文刊名：JOURNAL OF CHINESE BIOTECHNOLOGY年，卷(期)：2002,22(6)被引用次数：11次1.Trinh L;Noronha S B;Fannon M Recovery of mouse endostatin producedby Pichia pastoris using expanded bed adsorption[外文期刊] 2000(04)2.查看详情3.Barr KA;Hopkins S A;Sreekrishna K Protocol for efficient secretion of HSA developed from Pichia pastoris 19924.Cereghino J L;Cregg J M Heterologous protein expression in the methylotrophic yeast Pichiapastoris[外文期刊] 2000(1)5.Kjeldsen T;Pettersson A F;Hach M Secretory expression and characterization of insulin in Pichia pastoris[外文期刊] 1999(29)6.Bewley M C;Tam B M;Grewal J X ray crystallography and massspectroscopy reveal that the N lobe of human transferrin expressed in Pichia pastorisis folded correctly but is glycosylated on serine 32 [外文期刊] 1999(08)7.Kalidas C;Joshi L;Batt C Characterization of glycosylated variantsof beta lactoglobulin expressed in Pichia pastoris[外文期刊] 2001(03)8.Briand L;Perez V;Huet J C Optimization of the production ofa honeybee odorant binding protein by Pichia pastoris[外文期刊] 1999(03)9.Rydberg E H;Sidhu G;Vo H C Cloning mutagenesis and structural analysis of human pancreatic alpha amylase expressed in Pichia pastoris[外文期刊] 1999(03)10.Guo R T;Chou L J;Chen Y C Expression in Pichia pastoris andcharacterization by circular dichroism and NMR of rhodostomin[外文期刊] 2001(04)11.Zani M;Brillard Bourdet M;Lazure C Purification and characterization of active recombinant rat kallikrein rK9[外文期刊] 2001(02)12.ChirulovaV;Cregg J M;Meagher M M Recombinant protein production in an alcohol oxidase defective strain of Pichia pastoris in fed batch fermentations[外文期刊] 199713.Hasslacher M;Schall M;Hayn M High level intracellular expression of hydroxynitrile lyase from the tropical rubber tree Hevea brasiliensis in microbial hosts[外文期刊] 1997(1)14.Takahashi K;Takai T;Yasuhara T Effects of site directed mutagenesis in the cysteine residues and the N glycosylation motif in recombinant Der f 1on secretion and protease activity[外文期刊]2001(04)15.Boado R J;Ji A;Pardridge W M Cloning and expression in Pichia pastoris of a genetically engineered single chain antibody against the rat transferrin receptor[外文期刊] 2000(06)16.Werten M W;van den Bosch T J;Wind R D High yield secretion of recombinant gelatins by Pichia pastoris 199917.Callewaert N;Laroy W;Cadirgi H Use of HDEL tagged Trichoderma reesei mannosyl oligosaccharide 1 2 alpha D mannosidase for N glycan engineering in Pichia pastoris[外文期刊] 2001(23)18.Hilario E;Lataro R C;Alegria M C High level production of functional muscle alpha tropomyosin in Pichia pastoris[外文期刊] 2001(04)19.Choi B K;Jimenez Flores R Expression and purification of glycosylated bovine betacasein(L70S/P71S) in Pichia pastoris[外文期刊] 2001(04)20.Borgheresi R A;Palma M S;Ducancel F Expression and processing of recombinant sarafotoxins precursor in Pichia pastoris[外文期刊] 2001(08)21.Cregg J M;Cereghino J L;Shi J Recombinant proteinexpression in Pichia pastoris[外文期刊] 2000(01)1.张伍魁.范清林.宋礼华.ZHANG Wu-kui.FAN Qing-lin.SONG Li-hua毕赤酵母表达系统在外源基因表达中的研究进展及应用[期刊论文]-中国生物工程杂志2006,26(1)2.隋少飞.陈松林巴氏毕赤酵母表达系统的特点及其研究进展[期刊论文]-生物技术通报2004(3)3.龙晶.杜立新.LONG Jing.DU Li-xin巴斯德毕赤酵母表达外源蛋白的研究进展[期刊论文]-微生物学杂志2007,27(6)4.黄石.邹民吉.徐东刚毕赤酵母分泌表达系统的研究进展[期刊论文]-医学研究通讯2004,33(7)5.杨梅.温真.林丽玉.杨彩云.Yang Mei.Wen Zhen.Lin Liyu.Yang Caiyun毕赤酵母蛋白表达系统研究进展[期刊论文]-生物技术通报2011(4)6.樊建勇.王刚.刘玉峰毕赤酵母表达系统[期刊论文]-国外医学(预防、诊断、治疗用生物制品分册)2003,26(5)7.韩雪清.刘湘涛.尹双辉毕赤酵母表达系统[期刊论文]-微生物学杂志2003,23(4)8.彭彦孟.连继勤毕赤酵母表达系统[期刊论文]-国际检验医学杂志2007,28(7)9.欧阳立明.张惠展.张嗣良.刘志敏.OUYANG Li-Ming.ZHANG Hui-Zhan.ZHANG Si-Liang.LIU Zhi-Min巴斯德毕赤酵母的基因表达系统研究进展[期刊论文]-生物化学与生物物理进展2000,27(2)10.娄瑞娟.罗利龙.张霞.张瑞刚.宋水山.LOU Rui-juan.LUO Li-long.ZHANG Xia.ZHANG Rui-gang.SONG Shui-shan巴斯德毕赤酵母表达系统的研究进展和前景展望[期刊论文]-生物学杂志2010,27(5)1.张旦旦.窦文芳.许正宏.史劲松基于蛋白酶活性控制的重组人β干扰素毕赤酵母表达体系优化[期刊论文]-中国医药工业杂志 2012(9)2.张淑琼.高娟.曾思遥.蒋再学.陈瑞爱.罗满林犬IFN-α优化基因的真核表达及抗病毒活性的研究[期刊论文]-中国畜牧兽医 2012(8)3.窦文芳.张旦旦.许泓瑜.金坚.许正宏.史劲松.陆震鸣提高重组表达体系相对活性促进外源蛋白表达：人干扰素毕赤酵母表达体系研究[期刊论文]-食品与发酵工业 2011(11)4.曾松荣.王艳萍.杨明重组毕赤酵母发酵牛肉风味肽的中试研究[期刊论文]-中国生物工程杂志 2008(10)5.朱骞.张汇东.葛菲菲.缪勤.曹瑞兵.陈溥言.徐汉坤犬白细胞介素2在毕赤酵母中的诱导表达及生物活性的测定[期刊论文]-农业生物技术学报 2007(4)6.蔡梅红.张素芳.曹瑞兵.郭伟玲.陈溥言重组酵母鸡γ干扰素的抗病毒活性测定及临床初步应用[期刊论文]-微生物学报 2006(1)7.曹瑞兵.周国栋.周海霞.包晶晶.陈溥言猪β干扰素在毕赤酵母中的分泌表达及其对伪狂犬病毒的抑制作用[期刊论文]-微生物学报 2006(3)8.龙元.刘钟滨基因工程植酸酶表达的优化途径和方法[期刊论文]-同济大学学报（医学版） 2006(z1)9.季刚鼠抗人CD2基因工程抗体嵌合Fab的构建和表达[学位论文]博士 200610.肖生科.王磊.陈毓荃提高外源基因在巴斯德毕赤酵母中表达量的研究进展[期刊论文]-生物技术通报 2004(2)11.赵玉美洲商陆抗病毒蛋白Ⅰ和Ⅱ基因功能的研究及叶片中抗病毒蛋白的分离[学位论文]博士 200412.王强应用建立的DNAshuffling配套技术平台改良tPA分子性质的研究[学位论文]博士 200413.曹瑞兵重组猪α、β和γ干扰素的研制及其抗病毒作用[学位论文]博士 2004本文链接：/Periodical_swgcjz200206010.aspx。
抗菌肽FAPs在毕赤酵母中的重组表达研究冯兴军;李静;宋雪莹;许文杉;邢丽维;柳迪【期刊名称】《东北农业大学学报》【年(卷),期】2013(044)009【摘要】将4种抗菌肽Fowlicidin-2、Cecropin B、Cecropin A(1-8)-Melittin(1-18)和Thanatin串联,并在每种抗菌肽N-末端加上Kex2蛋白酶裂解位点,根据毕赤酵母密码子偏爱性,化学合成四种抗菌肽(Fusion Antimicrobial Peptides,FAPs)编码基因,连接到pPICZαC载体中,构建分泌型重组表达载体并转化毕赤酵母.经甲醇诱导后,Tricine-SDS-PAGE分析获得与目蛋白大小一致特异表达蛋白条带,每升发酵液上清含量达到32 mg.初步鉴定FAPs对大肠杆菌(E.coli) ATCC25922、金黄色葡萄球菌(S.aureus) ATCC25923、鼠伤寒沙门氏菌(S.syphimurium C77-31和绿脓杆菌(P.aeruginosa)ATCC27853均有抑菌活性,且对S.aureus ATCC25923活性最强,最小抑菌浓度MIC为8.0 μg·mL-1.【总页数】5页(P68-72)【作者】冯兴军;李静;宋雪莹;许文杉;邢丽维;柳迪【作者单位】东北农业大学动物科学技术学院,哈尔滨150030;东北农业大学动物科学技术学院,哈尔滨150030;东北农业大学动物科学技术学院,哈尔滨150030;东北农业大学动物科学技术学院,哈尔滨150030;东北农业大学动物科学技术学院,哈尔滨150030;东北农业大学动物科学技术学院,哈尔滨150030【正文语种】中文【中图分类】R96;Q953【相关文献】1.重组抗菌肽 Cecropin P1在毕赤酵母 X-33中的表达以及纯化后的生物活性分析[J], 唐丽云;郭春和;郑红玉;项林盛;刘德辉;黄毓茂;焦茂兴2.重组猪源抗菌肽Cecropin P1在毕赤酵母中的分泌表达与活性研究 [J], 陈婉娴;翟李鹏;叶江;张惠展3.毕赤酵母重组表达抗菌肽Fowlicidins的研究进展 [J], 许文杉;冯兴军4.一种新型抗菌肽Hydramacin-1在毕赤酵母中的重组表达、纯化及其抗菌活性[J], 孟德梅; 石林玥; 李文娟; 孙雪晴; 郭雅君; 贾雪霞; 樊振川5.重组毕赤酵母产青蛤Mytimacin抗菌肽的表达研究 [J], 赵震; 王莎莎; 吕星星; 陶妍; 谢晶; 钱韻芳因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
T4溶菌酶在毕赤酵母中的诱导表达及抑菌活性测定(英文)郝雯静;李刚强;徐妙云;魏昭荣;陈海敏;刘德虎;艾铁民【期刊名称】《中国药学：英文版》【年(卷),期】2007(16)1【摘要】目的利用毕赤酵母诱导表达T4溶菌酶蛋白并测定其抗菌活性。
方法T4溶菌酶(T4lysozyme)基因以N端融合的方式被准确插入到质粒pPIC9K的EcoRI-Not I位点内,得到分泌型重组表达载体 pPIC9K-T4L。
该载体首先经限制性内切酶Sal I酶切,进而采用电击方法将线性化的重组质粒DNA导入到毕赤酵母中。
经过梯度筛选得到多个单拷贝和多拷贝转化重组子。
随机挑取部分重组子PCR扩增阳性克隆,经菌体培养和甲醇诱导后获得了分泌表达,表达产物存在于培养上清液中。
结果表达蛋白经琼脂孔扩散抗菌实验显示抑菌圈明显;重组蛋白对金黄色葡萄球菌与肺炎链球菌均具有显著抑制作用;多拷贝与单拷贝重组表达子没有抗菌活性差异与蛋白表达量的差异;加热煮沸对于T4溶菌酶蛋白的抗菌活性无明显影响。
结论T4溶菌酶在毕赤酵母中得以成功诱导与表达;表达产物不受拷贝数影响并具热稳定性。
【总页数】5页(P33-37)【关键词】T4溶菌酶;毕赤酵母;电击转化;表达;抗菌活性【作者】郝雯静;李刚强;徐妙云;魏昭荣;陈海敏;刘德虎;艾铁民【作者单位】北京大学药学院;中国农业科学院生物技术研究所【正文语种】中文【中图分类】R927.3【相关文献】1.三疣梭子蟹C型溶菌酶在毕赤酵母中的表达及其抑菌活性 [J], 王强厚;陶妍;崔旭;颜倩倩;张亚莉2.鲤鱼c型溶菌酶在毕赤酵母中的重组表达及其抑菌活性 [J], 颜倩倩; 陶妍; 李雯; 谢晶; 钱韻芳3.克氏原螯虾i-型溶菌酶在巴斯德毕赤酵母中的高效胞外表达及其抑菌活性 [J], 水燕; 管政兵; 叶俊贤; 史永红; 刘国锋; 徐增洪4.人溶菌酶在毕赤酵母中的表达及体外抑菌活性研究 [J], 李学优; 曹丁; 肖宏艳; 黄秀敏; 甘祥武因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
复合抗菌肽在毕赤酵母中的表达及其活性研究杨桂茂;陶元勇;孙万里;张旭光【期刊名称】《国际检验医学杂志》【年(卷),期】2018(039)012【摘要】目的构建天蚕素A-死亡素复合基因工程抗菌肽基因CA(1-7)-T(4-19) ,并在毕赤酵母中表达.方法采用重叠区基因扩增法(SOE)人工合成复合肽基因,同载体pPICZαA 连接后转化毕赤酵母受体菌X-33 ,通过博莱霉素抗性筛选得到的阳性克隆用甲醇诱导表达,并对产物进行抗菌活性检测,建立抗菌谱.结果复合肽基因CA(1-7)-T(4-19)成功克隆到载体pPICZαA上,鉴定结果与预先设计的基因序列一致,在甲醇诱导下复合肽基因得到表达,并得到临床分离的76株革兰阴性和革兰阳性耐药致病菌的最小抑菌浓度,最小抑菌浓度可达到5 μg/mL.结论成功获得了具有抑菌活性的复合基因工程抗菌肽,且该复合肽对临床常见多重耐药菌株均有明显的抑杀作用.【总页数】5页(P1439-1442,1447)【作者】杨桂茂;陶元勇;孙万里;张旭光【作者单位】潍坊医学院附属医院检验科/临床检验诊断学省级重点实验室,山东潍坊261031;潍坊医学院附属医院检验科/临床检验诊断学省级重点实验室,山东潍坊261031;潍坊医学院附属医院检验科/临床检验诊断学省级重点实验室,山东潍坊261031;潍坊医学院附属医院检验科/临床检验诊断学省级重点实验室,山东潍坊261031【正文语种】中文【中图分类】R93;Q78【相关文献】1.重组猪源抗菌肽Cecropin P1在毕赤酵母中的分泌表达与活性研究 [J], 陈婉娴;翟李鹏;叶江;张惠展2.复合抗菌肽PL在毕赤酵母中的分泌表达及其活性研究 [J], 牛明福;李翔;曹瑞兵;周斌;陈德胜;陈溥言3.新型欧洲鳗鲡抗菌肽elecilin在毕赤酵母中的表达 [J], 张丽娟;吴唯维;李素一;陈华;柯翎;陈叙;林晨韬4.新疆家蚕抗菌肽在毕赤酵母中表达及活性研究 [J], 唐馨;王慧;热西力.克来木;毛新芳;刘忠渊5.人源抗菌肽LL-37表达载体的构建及其在毕赤酵母中的表达 [J], 陆建荣;王惠民;吴萍;黄松平;常秋月;凌勇武;倪晓蓉因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
毕赤酵母表达系统及其在基因工程抗体中的应用
王凌雪;张惟广
【期刊名称】《科技风》
【年(卷),期】2008(000)003
【摘要】毕赤酵母具有原核生物易于培养、繁殖快、便于基因工程操作和高密度发酵等特性,同时又具有真核生物中蛋白正确折叠所需的细胞内环境和糖链加工系统,还能将外源蛋白分泌到培养液中,利于纯化,因此,毕赤巴斯德酵母成为近年来发展最为迅速,应用也最为广泛的外源基因表达系统.本文主要介绍了毕赤酵母常见表达载体,提高表达量的对策,以及该表达系统在基因工程抗体方面的一些应用现状.【总页数】2页(P26-27)
【作者】王凌雪;张惟广
【作者单位】西南大学食品科学学院,重庆,100716;西南大学食品科学学院,重庆,100716
【正文语种】中文
【中图分类】Q94
【相关文献】
1.基因工程抗体中噬茵体抗体库技术的应用 [J], 张勇
2.基因工程抗体在微囊藻毒素检测分析中的应用研究 [J], 徐重新; 刘媛; 李建宏; 刘贤金
3.杆状病毒表达系统研究进展及在寄生虫基因工程疫苗中的应用前景 [J], 景志忠;王佩雅;才学鹏
4.昆虫表达系统及其在基因工程抗体中的应用 [J], 尹长城;刘晶;黄华梁
5.巴斯德毕赤酵母表达系统在动物传染病防制中应用的研究进展 [J], 孙静;孙惠玲;张培君
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人溶菌酶定点突变基因在毕赤酵母中的表达及活性分析陈熙;陈毓;齐小雨;张炜【期刊名称】《江苏农业学报》【年(卷),期】2014(000)006【摘要】利用PCR法将人溶菌酶( hLYZ)成熟肽与载体信号肽连接处的氨基酸残基进行定点突变,突变基因亚克隆至酵母分泌型表达载体pPICZ琢A,重组载体线性化后通过电击转化法转化巴斯德毕赤酵母X-33,利用含Zeo-cine抗生素的YPDS 平板筛选高拷贝转化子。
转化子酵母经甲醇诱导后取培养基离心上清液进行SDS-PAGE和活性检测。
结果显示,突变体hLYZ活力和表达量较野生型均有显著提高。
表明定向改变hLYZ信号肽残基性质可以提高其表达量和分泌效率。
【总页数】6页(P1396-1401)【作者】陈熙;陈毓;齐小雨;张炜【作者单位】南京农业大学生命科学学院，江苏南京 210095;南京农业大学生命科学学院，江苏南京 210095;南京农业大学生命科学学院，江苏南京 210095;南京农业大学生命科学学院，江苏南京 210095【正文语种】中文【中图分类】Q754【相关文献】1.人溶菌酶基因在毕赤酵母中的表达及其抗菌活性检测 [J], 夏清风;侯英敏;曹芳;金朝霞2.一种来源于酒曲地衣芽孢杆菌溶菌酶基因在毕赤酵母中的诱导表达及活性分析[J], 王凤寰;韩煦;孙博;赵飞函;温赛;杜鉴;廖永红3.牛乳溶菌酶在毕赤酵母中的分泌表达及活性分析 [J], 付世新;齐长学;罗春海;张丽;王瑶4.重组人溶菌酶在毕赤酵母中的诱导表达及活性研究 [J], 李浩杰; 杨雪珍; 蓝文康; 张伟崇; 王晔; 何兰花; 林树茂; 刘燊; 张辉华5.人溶菌酶在毕赤酵母中的表达及体外抑菌活性研究 [J], 李学优; 曹丁; 肖宏艳; 黄秀敏; 甘祥武因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
小菜蛾moricin在毕赤酵母中的表达及抑菌活性分析黄钦耿，梁玲，陈巧红，吴松刚，黄建忠*（福建师范大学生命科学学院，工业微生物教育部工程研究中心，福建福州 350108）摘 要：抗生素的过度使用给自然生态带来诸多不利影响，寻找合适的抗生素的替代物，从而减少抗生素的使用正成为当下的研究热点。
以来自于小菜蛾的特异性抗菌肽moricin为研究对象，研究其酵母异源表达水平和抑菌性能及生化特性，为进一步的开发利用提供理论支持。
根据已有的小菜蛾抗菌肽moricin特异性基因信息，采用聚合酶链式反应扩增其成熟肽基因mor-3，并克隆至pGAPZα A质粒中，构建组成型分泌表达载体pGAPZα A-mor3，线性化片段电转化导入毕赤酵母SMD1168菌株，高质量浓度Zeocin筛选获得高拷贝重组转化子。
以YPD为培养基进行摇瓶发酵，重组蛋白获得高效表达，分子质量约为5 kD，与理论预测的基本一致；发酵60 h，上清液中重组蛋白表达量达248.98 mg/L，而且耐热性能良好，同时具备较强的耐强酸及强碱的能力，特别在强酸环境中活性保持稳定，体现了较好的机体内环境的适应性潜力；对部分革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌均具有抑菌作用，特别是对革兰氏阴性菌具备特异性较强的抑制作用，对大肠杆菌的最低抑菌浓度为6.25 μg/mL，而对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度仅为124.49 μg/mL。
独特的抑菌性能和理化特点，使其具备广阔的开发应用前景及良好的社会与环保效益。
关键词：抗菌肽；moricin；毕赤酵母；高效表达；抑菌活性；生化特性High-Level Expression and Antibacterial Properties of Antimicrobial Peptide Moricin in Pichia pastoris HUANG Qingeng, LIANG Ling, CHEN Qiaohong, WU Songgang, HUANG Jianzhong*(Engineering Research Center of Industrial Microbiology, Ministry of Education,College of Life Science, Fujian Normal University, Fuzhou 350108, China)Abstract: The excessive use of antibiotics has brought about many adverse effects to natural ecology. Finding suitable alternatives to antibiotics to reduce the use of antibiotics is becoming a research hotspot. The aim of this study was to highly express the antimicrobial peptide moricin derived from the diamondback moth Plutella xylostella in Pichia pastoris, and study its antibacterial properties and biochemical properties. The mature peptide gene mor-3 of moricin from Plutella xylostella (L.) was amplified by PCR, and then cloned into the pGAPZα A vector, and an expression plasmid of pGAPZα A-mor3 was constructed. The linearized plasmid pGAPZα A-mor3 was transformed into P. pastoris SMD1168 by electroporation, and the high copy recombinant transformants were screened out by using high concentration of Zeocin.The molecular mass of the recombinant protein expressed in P. pastoris SMD1168 was approximately 5 kD, corresponding to the theoretical molecular mass of this target peptide. Up to 248.98 mg/L recombinant protein in the supernatant after60 h fermentation was obtained. The recombinant protein in the supernatant showed obvious antibacterial activity againstseveral microorganisms detected by an improved agar diffusion method, including Escherichia coli and Staphylococcus aureus. The minimum inhibitory concentration (MIC) against E. coli CMCC44103 was 6.25 μg/mL, while that against S. aureus ATCC25923 was only 124.49 μg/mL. It showed potent antibacterial activity against both Gram-positive and Gram-negative bacteria, especially Gram-negative bacteria. In addition, the recombinant protein also had good thermal stability, and strong resistance to acid and alkali. In particular, the antimicrobial activity was maintained in an acidic environment, and so it had good adaptability to the animal intestinal environment. Due to these unique antibacterial properties and biochemical characteristics it has a broad development and application prospect with good social and environmental benefits.收稿日期：2016-10-20基金项目：国家高技术研究发展计划（863计划）项目（2015AA021005）作者简介：黄钦耿（1984—），男，高级工程师，博士研究生，研究方向为微生物生化及食品微生物工程。
E-mail：quenyhuang@ *通信作者：黄建忠（1966—），男，教授，博士，研究方向为微生物工程及其工程化。
E-mail：hjz@Key words: antimicrobial peptides; moricin; Pichia pastoris; efficient expression; antimicrobial activity; biochemical characteristicsDOI:10.7506/spkx1002-6630-201716006中图分类号：Q812 文献标志码：A文章编号：1002-6630（2017）16-0036-07引文格式：黄钦耿, 梁玲, 陈巧红, 等. 小菜蛾moricin在毕赤酵母中的表达及抑菌活性分析[J]. 食品科学, 2017, 38(16): 36-42. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201716006. HUANG Qingeng, LIANG Ling, CHEN Qiaohong, et al. High-level expression and antibacterial properties of antimicrobial peptide moricin in Pichia pastoris[J]. Food Science, 2017, 38(16): 36-42. (in Chinese with English abstract) DOI:10.7506/ spkx1002-6630-201716006. 抗菌肽是一类广泛存在于生物体内的天然免疫的重要介质，是宿主防御系统的重要组成部分，在生物体遭受外界异物刺激或病原微生物感染时能够快速产生的具有多种生物学活性的小分子多肽[1-2]。
抗菌肽的来源非常广泛，而且种类繁多，功能多样，自1962年Kiss等[3] 首次从铃蟾皮肤分泌物中分离出铃蟾抗菌肽以来，短短几十年中，在植物、微生物、昆虫、两栖类以及哺乳动物等中已发现和鉴定抗菌肽一千多种，其中昆虫来源的抗菌肽已经超过两百种[4-8]。
抗菌肽对于细菌、真菌、原虫、病毒等具有非特异性的抑制作用，能抑杀癌变细胞，而且可作为免疫效应分子来启动、调节生物体的一系列免疫反应[2,4,9-10]。
另外，抗菌肽杀菌机制与传统抗生素不同，多数抗菌肽通过细胞膜电荷的区别进行选择性杀伤，所以其对正常哺乳动物细胞几乎无毒性，而且由于细胞膜具有的高度保守性，故耐药的产生尤其困难甚至几乎不可能，被认为是一类天然的肽类抗生素[11-13]。
也正是由于抗菌肽独特的抗菌机理、高效广谱的抑菌活性以及绿色安全的特性，使其成为最具开发前景的新型抗菌药物[14-15]。
随着对抗菌肽作用机理及结构与功能关系研究的不断深入，在抗生素广泛及过度使用且已引起一系列不利情况的今天，抗菌肽越来越显示出了其在药物开发、食品工业、植物抗病及饲料科学等领域的独特应用价值[8,16-18]，特别是在推行无抗养殖、保证食品健康的过程中，抗菌肽的应用研究更是备受青睐。
由于天然抗菌肽的表达量低、提取过程复杂，导致难以大量获得；而化学合成的成本高、价格昂贵，且对多数微生物宿主存在一定的毒性，这也导致抗菌肽的规模化生产应用一直受到制约。
