第七章 核酸提取与鉴定

核酸的提取与鉴定实验报告一、实验目的1、掌握从生物样本中提取核酸（DNA 或 RNA）的基本原理和方法。

2、学习使用各种试剂和仪器进行核酸提取的操作步骤。

3、了解核酸鉴定的常用方法及其原理。

4、培养实验操作技能和科学研究的严谨态度。

二、实验原理核酸包括脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA），是生物体遗传信息的携带者。

核酸提取的基本原理是利用细胞裂解液将细胞破碎，使核酸释放出来，然后通过一系列的物理和化学方法将核酸与其他细胞成分分离，最后得到纯度较高的核酸样品。

DNA 提取常用的方法有酚氯仿抽提法、盐析法等。

酚氯仿抽提法是利用酚和氯仿的混合液去除蛋白质，然后通过乙醇沉淀得到 DNA。

盐析法是利用高浓度的盐使蛋白质变性沉淀，从而分离出 DNA。

RNA 提取常用的方法有异硫氰酸胍法、Trizol 法等。

Trizol 法是基于异硫氰酸胍和酚的作用，能够有效地裂解细胞并抑制 RNA 酶的活性，从而提取出完整的 RNA。

核酸鉴定的方法主要有紫外分光光度法、琼脂糖凝胶电泳法等。

紫外分光光度法通过测定核酸在 260nm 和 280nm 处的吸光度值（A260 和 A280）来评估核酸的纯度和浓度。

A260/A280 的比值在 18 20 之间表示 DNA 纯度较高，在 19 21 之间表示 RNA 纯度较高。

琼脂糖凝胶电泳法则是根据核酸分子在电场中的迁移率不同来分离和鉴定核酸，DNA 分子在琼脂糖凝胶中迁移距离与分子量大小成反比，RNA 通常会呈现出 28S、18S 和 5S 三条带。

三、实验材料与仪器1、实验材料新鲜的动物组织（如肝脏、肌肉等）或培养的细胞。

大肠杆菌菌液。

2、实验试剂细胞裂解液（含蛋白酶 K）。

酚氯仿混合液（酚：氯仿＝ 1:1）。

无水乙醇、75%乙醇。

3M 醋酸钠（pH 52）。

Trizol 试剂。

异丙醇。

RNA 酶抑制剂。

琼脂糖。

50×TAE 电泳缓冲液。

核酸染料（如 EB 或 GelRed）。

实验七动物组织中核酸的提取和鉴定【原理】动物组织细胞中的核糖核酸(RNA)与脱氧核糖孩酸(DNA)大部分与蛋白质结合形成核蛋白。

核蛋白可被三氯醋酸沉淀，再用95％乙醇加热可以除去附着在沉淀上的脂类杂质，然后用10％NaCl溶液提取出核酸的钠盐，加入醇可使核酸钠沉淀析出。

先用水由动物肝中提出核蛋白，再籍酚将核酸与蛋白质之间的结合键断裂，并用乙醚抽提去蛋白质及其它杂质，最后用乙醇将核酸沉淀。

核酸(RNA、DNA)可被硫酸水解产生磷酸。

有机碱（嘌岭、嘧啶）和戊糖（核糖、脱氧核糖）。

此三类化合物可用下列方法鉴定之。

1、磷酸：能与钼酸试剂作用生成磷钼酸，后者在还原剂的作用下。

还原成兰色的钼兰。

常用的还原剂有氨基苯磺酸、氯化亚锡，维生素C等。

H3PO4＋12H2MoO4→H3PO4·12MoO3 + 12H2OH3PO4·12MoO3H3PO4·6MoO3·3Mo2O52、嘌呤碱：能与苦味酸作用形成针状结晶3、戊糖：(1)核糖：经与强酸(盐酸与硫酸)共热生成糠醛，后者可与3;5二羟甲基苯缩合成绿色化合物。

(2)脱氧核糖：在强酸中加热，可生成ω—羟基γ—酮基戊醛，后者再与二苯胺作用生成一蓝色化合物。

上述二反应如下【操作】(一)核酸提取l、用酚提取法：（1）取小白鼠一只，断头处死，剖腹取肝，置于研钵中，加入玻璃少许，研磨至糊状后，加入蒸馏水3ml，继续研磨约三分钟。

（2）于该研钵中再加酚液5ml，研磨约十分钟后，倒入—-圆底离心管中，离心5分钟（约2000转/分钟）。

（3）用毛细管将上液吸出，置于一圆底离心管中，加乙醚2ml，用拇指将管口按住，用力振摇1—2分钟(提出酚)，离心5分钟后，用毛细滴管吸取全部下层液于一圆底离心管中。

（4）于该管中加入95％乙醇2ml，用玻棒搅拌约2分钟，离心3分钟，取出．去上清液，沉淀部分即为核酸。

2、用三氯醋酸提取法（1）杀兔；取肝，称重，按每克肝脏4ml比例加入1％三氯醋酸，制成肝匀浆。

第1篇一、实验目的和要求1. 学习并掌握肝组织中DNA的提取原理和方法。

2. 熟悉DNA分离纯化的原理和技术。

3. 掌握DNA定量技术，评估提取DNA的浓度和纯度。

4. 通过实验验证DNA提取和鉴定方法的可行性。

二、实验基本原理肝组织中的DNA主要以核蛋白的形式存在，通过特定的化学和物理方法可以将其从细胞中分离出来。

实验中，我们采用氯化钠溶液和SDS等试剂来溶解和分离核蛋白，随后利用氯仿和异戊醇将蛋白质沉淀，最终通过冷乙醇沉淀DNA。

DNA的纯度可以通过紫外分光光度法进行检测，通过测定260nm和280nm处的吸光度比值（A260/A280）来评估DNA的纯度。

三、实验材料与试剂1. 新鲜肝组织样本2. 0.14mol/L氯化钠溶液3. 柠檬酸钠4. SDS5. 氯仿6. 异戊醇7. 冷乙醇8. 100%乙醇9. 无水乙醇10. 硫酸11. 紫外分光光度计12. 1.5mL离心管13. 离心机14. 移液器15. 研钵16. 玻璃棒四、实验器材与仪器1. 研钵2. 玻璃棒3. 移液器4. 离心机5. 紫外分光光度计6. 电子天平7. 恒温水浴锅五、操作方法和实验步骤1. 肝组织匀浆制备：将新鲜肝组织样本剪碎，用研钵和玻璃棒研磨成匀浆。

2. DNA提取：- 将肝匀浆加入0.14mol/L氯化钠溶液和柠檬酸钠，混匀后加入SDS，室温下放置10分钟。

- 加入氯仿和异戊醇，剧烈振荡，室温下放置10分钟。

- 12,000g离心10分钟，小心吸取上层水相。

- 向水相中加入2倍体积的无水乙醇，混匀后室温下放置10分钟。

- 12,000g离心10分钟，弃去上清液，用100%乙醇洗涤DNA沉淀。

- 12,000g离心5分钟，弃去上清液，空气干燥DNA沉淀。

- 将DNA沉淀溶解于适量TE缓冲液中。

3. DNA定量：- 使用紫外分光光度计测定DNA溶液在260nm和280nm处的吸光度。

- 计算A260/A280比值，评估DNA纯度。

第1篇一、前言生物化学作为一门研究生物体内化学反应及其调控规律的学科，在生命科学领域具有极其重要的地位。

为了让学生更好地理解和掌握生物化学的理论知识，提高学生的实验技能和科学素养，我们开展了生物化学课内实践教学活动。

本文将对本次实践教学进行总结和分析。

二、实践内容1. 蛋白质鉴定实验（1）实验目的：掌握蛋白质的鉴定方法，了解蛋白质在生物体内的作用。

（2）实验原理：蛋白质具有特定的氨基酸序列，通过特定的化学反应，可以产生具有特定颜色的化合物，从而实现对蛋白质的鉴定。

（3）实验步骤：①制备蛋白质样品；②加入双缩脲试剂，观察颜色变化；③加入Folin-酚试剂，观察颜色变化；④计算蛋白质含量。

2. 酶活性测定实验（1）实验目的：掌握酶活性测定的方法，了解酶在生物体内的作用。

（2）实验原理：酶活性是指酶催化特定反应的能力，通过测定酶催化反应的速度，可以评估酶的活性。

（3）实验步骤：①制备酶反应体系；②测定酶催化反应的速度；③计算酶活性。

3. 核酸提取实验（1）实验目的：掌握核酸提取的方法，了解核酸在生物体内的作用。

（2）实验原理：核酸是生物体内的重要遗传物质，通过特定的方法可以将核酸从细胞中提取出来。

（3）实验步骤：①破碎细胞；②提取核酸；③检测核酸。

4. 脂质分离实验（1）实验目的：掌握脂质分离的方法，了解脂质在生物体内的作用。

（2）实验原理：脂质具有不同的极性，可以通过特定的方法将其分离。

（3）实验步骤：①制备脂质样品；②加入氯仿，观察分层现象；③分离脂质。

三、实践总结1. 通过本次实践教学，我们掌握了蛋白质、酶、核酸和脂质的鉴定、提取和分离方法，提高了我们的实验技能。

2. 在实验过程中，我们学会了如何设计实验方案、操作实验仪器和记录实验数据，为今后的科研工作打下了基础。

3. 通过实验，我们深入了解了生物体内化学反应及其调控规律，增强了我们对生物化学理论知识的理解。

四、实践反思1. 实验过程中，我们发现部分同学对实验原理掌握不牢固，导致实验结果不准确。

核酸的提取与鉴定实验报告
实验报告：核酸的提取与鉴定
I. 实验目的：
通过实验学习核酸提取和鉴定的步骤，掌握核酸提取实验技能，初步了解PCR技术及其在分子生物学中的应用。

II. 实验原理：
DNA分子在水性条件下具有极强的极性，由此，在化学性质上只要是极性且亲水性的溶剂都能迅速膨胀和破裂DNA分子的双链
结构，并溶解其中的碱基、核苷酸、脱氧糖等。

利用这一原理，
我们可以用溶液来提取含有核酸的样品，然后通过紫外吸光度计
检测该提取物中核酸的含量。

此外，PCR技术是一种被广泛运用
于DNA扩增的技术，其主要原理是通过DNA聚合酶扩增DNA
的特定片段。

III. 实验步骤及结果：
1. 核酸提取：将实验样品加入细胞破解液并混匀，离心后取上
清液，加入等体积的异丙醇，轻轻振荡混合并离心15分钟，然后
弃上清液，加入70%无水乙醇并离心，倒掉液体后用氧气吹干。

最终的核酸提取物的溶解液浑浊且无法肉眼辨认样品。

2. 核酸鉴定：将已经提取的样品分别用紫外吸光度计测量其光密度，结果表明与对照的D.W相比，样品中的核酸具有极高的光密度值，证明核酸提取步骤成功，核酸鉴定实验成功。

IV. 结论：
通过本次实验，我们成功地提取了样品中的核酸，并对提取后的核酸进行了鉴定，证明提取物中含有大量的核酸，表明核酸提取和鉴定实验成功，也为分子生物学的研究提供了基础。

一、实验目的1. 学习核酸提取的基本原理和操作方法；2. 掌握动物组织细胞中核酸的提取和鉴定方法；3. 熟悉实验操作技巧，提高实验操作能力。

二、实验原理核酸是一类生物大分子，包括脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA），它们在生物体的遗传、代谢和调控等过程中发挥着重要作用。

本实验通过提取动物组织细胞中的核酸，对其进行鉴定，以了解核酸的基本性质和功能。

三、实验材料1. 实验动物：小鼠；2. 实验试剂：盐酸胍、氯化钠、柠檬酸钠、乙醇、异丙醇、二苯胺、3，5-二羟甲苯等；3. 实验仪器：离心机、匀浆器、电炉、水浴锅、显微镜等。

四、实验步骤1. 实验动物处死，取肝组织；2. 将肝组织剪碎，加入适量匀浆液，用匀浆器进行匀浆；3. 将匀浆液加入盐酸胍，使pH值降至6.0；4. 加入适量的氯化钠和柠檬酸钠，使溶液的离子强度达到0.14mol/L；5. 将溶液转移至离心管中，在4℃、5000g条件下离心10分钟；6. 取上清液，加入等体积的异丙醇，混匀；7. 将混合液转移至另一离心管中，在4℃、10000g条件下离心10分钟；8. 弃上清液，用70%乙醇洗涤沉淀，在4℃、10000g条件下离心5分钟；9. 弃上清液，将沉淀干燥；10. 将干燥的沉淀溶解于适量的水中，加入二苯胺试剂，观察颜色变化；11. 加入3，5-二羟甲苯试剂，观察颜色变化；12. 根据颜色变化，判断核酸的类型。

五、实验结果1. 在二苯胺试剂的作用下，溶液呈蓝色，表明提取的核酸中含有DNA；2. 在3，5-二羟甲苯试剂的作用下，溶液呈绿色，表明提取的核酸中含有RNA。

六、实验分析1. 实验结果表明，通过本实验方法可以成功提取动物组织细胞中的核酸，并进行鉴定；2. 实验过程中，注意控制实验条件，如pH值、离子强度等，以保证核酸的提取效果；3. 实验结果与理论相符，验证了核酸提取方法的可行性。

七、实验总结1. 本实验成功提取了动物组织细胞中的核酸，并对其进行了鉴定；2. 通过实验，掌握了核酸提取的基本原理和操作方法，提高了实验操作能力；3. 本实验为后续研究核酸的功能和应用奠定了基础。

核酸的分离与识别一、实验原理分离提纯核酸的主要过程，一般先要经过以下几个步骤：①细胞组织的破碎；②解聚核蛋白并使蛋白质变性；③除去蛋白质和多糖等杂质；④抽提和沉淀核酸等。

破碎细胞的方法有物理法（如超声波、匀浆和组织捣碎等）、化学和生化的方法（如去污剂、蛋白质变性剂和溶菌酶等）。

本实验采用组织捣碎的方法，捣碎之前加入柠檬酸钠抑制DNA降解酶的作用。

在细胞核内，核酸通常是与某些组织蛋白质结合成复合物——核糖核蛋白（RNP）和脱氧核糖核蛋白（DNP）形式存在的，利用在0.14mol/L盐溶液中RNP溶解而DNP溶解度最小的性质将两者分开。

另外，DNP能溶于水和高浓度盐溶液。

在核酸提纯的过程中，除去蛋白质是很关键的一步。

要除去蛋白质首先是使核蛋白解聚和蛋白质变性，常用的方法有：浓盐法（10%NaCI）、去污剂和有机溶剂法等。

本实验中，1.71mol/L的NaCl使蛋白质变性，而后用氯仿抽提除去蛋白质。

利用氯仿-异戊醇解聚分离蛋白质，从而分离DNA和蛋白质。

经上述分离纯化处理后的核酸盐溶液，再利用其不溶于有机溶剂的性质，使其在适当浓度的亲水有机溶剂（如乙醇）中成絮状沉淀析出。

二、仪器试剂(1)主要仪器电动组织捣碎机、大容量离心机、冰箱、具塞磨口玻璃锥形瓶、真空干燥器、烧杯等。

(2)主要试剂NaCI(0.1mol/L)、pH=7.0柠檬酸钠混合盐溶液(0.05mol/L)、NaCI溶液(1.71mol/L)、氯仿-异戊醇溶液(体积比为24:1)、95%乙醇、无水乙醇等。

三、实验步骤、现象与结果实验操作实验目的实验现象(1)猪脾细胞核的提取取猪肝40克，冰浴迅速剪成小块。

加80mL0.1mol/L NaCl和0.05mol/L、pH=7.0的柠檬酸钠混合液，在组织捣碎机内，用慢档捣碎3次，每次5s，间隔30s。

上述匀浆液以转速300/mim离心20min，收集沉淀(含细胞核)，弃去上清液。

冰浴猪肝或猪脾可以起到防止变质的作用，搅拌捣碎起到破坏细胞组织，使DNP释放出来。