分析方法验证指南(中文)
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1、 目的 分析方法验证指南
本文件的目的是为分析方法验证的数据收集提供基本指南。该指南参考了 USP，EEC（BP/EP）
和 ICH 中的分析方法验证指南，能够满足公司的产品的分析方法验证工作。
2、 范围 本文件中提供的定义和程序是为了促使公司质量方针的基本原则符合所有关于方法验证的法
规要求。本指南适用于 API、原料、中间体的检测和放行的分析方法，并为新药物的应用收集支
持性的数据。本指南是为了规范验证为公司的产品提供一个通用和分析方法验证方案。现有的方
法中的小变化不需要全面验证，如：对柱子的固定相的生产厂家变化，样品准备的变化（搅拌和
超声，震摇和超声）。在实际分析中，方法验证需要提供更多的信息或细节，需要制定的特殊的方
案。这个指南不包括微生物分析方法的验证。
3、 参考文件
USP<1225>，法定方法的验证
ICH 指南 Q2A&Q2B，分析方法验证程序。
公司关于有效数字修约原则
4、 定义 降解物：降解物是由于一个物质经一段时间的化学变化（经过诸如光照、温度、pH、水分，经与 容器发生反应）产生，也叫降解产物或分解产物。 大剂量原料药：原料药在产品中的最大剂量大于 2g/天。 定量限（LOQ）：指试样中的被分析物能够被定量测定的最低值，其测定结果应具有一定的准确 度和精密度。 线性：在设计的测定范围内，检测结果与供试品中被分析物的浓度直接呈线性关系的程度。通常 相关系数（R）在回归线上有一定的斜率（m）。 小剂量原料药：原料药的在产品中的最大剂量小于或等于 2g/天。
测量精密度（ICH-重复性）：多次测定同一样品时的重现性（%RSD）。在 HPLC 或 GC 中也叫进
样精密度。 方法精密度：同一样品或标准品（若有时）准备多份供试品在测定含量时的重现性（%RSD）。 回收精密度：测定同一标准时对准确度和线性的评估。也叫水平精密度。 报告限度（RL）：低于某一数值的时候报告中就不体现。报告限度一般大于或等于定量限。 再现性（ICH-中间精密度）：在不同检测条件下对样品检测结果的重现性。（不同的实验室、分析 人员、仪器、试剂、分析时间、日期等）
5、 指南 A、 总则 因为在对产品的物理性质的评估时，分析方法会因测定的准确性和精密性而有所不同，故验证的 可接受标准也不同于一般的检测方法。一个可接受的标准可能需要根据方法的特性和检测的指标 .
. 来确定。验证项目的选择可参照该指南后面所附的表 8-推荐验证项目。 在验证之前，应当为验证的分析方法提供一个清楚并简明的格式。该方法应提供所有必要的细节
（参数、条件等）。可以用以下几种方式来描述这些在分析方法验证过程中将要用到的数据。 在验证过程中得到的任何意外的或计划外的结果，在此都应当调查并形成文件（包括合理评估的
取消某个无效数据）。任何超标的结果也应在验证报告中讨论并记录方法的局限性（若有）。 方法应按照 USP 中名称分类，参照表 1。这里需指出并不是所有的分析方法都适合这 1 到 4 类。
有特殊的方法时，每个数据（以下）都应反复考虑其适用性以满足分析方法的目的。
表 1：
分析项目 检验类别
I II III IV
定量，
面积%，wt% 定性
精密度 是 是 否 是 *
准确度 是 是a * * 否
检测限 否 * 是 * 否
定量限 否 是 否 * 否
报告限度 否 是 否 * 否
选择性 是 是 是 * 是
范围 是 是 * * 否
线性 是 是 否 * 否
中间精密度 是 是 是 是 是
耐用性 是 是 * * 否
*可能需要根据其自然特性作详细检测。
a可能需要对相关响应因子（RRF）根据以下方法作进一步的检测。
B、选择性：
1、要求： a)选择性的研究一般优先于其它验证项目。 b)收集被分析物的相关文件（色谱图、分析报告、参考文献等），包括杂质、降解物、溶液、相关 的或相近的相关物质。 c)应有对典型样品的分析。新方法应能对相关降解物和/或杂质具有明确性和选择性。若杂质或降 解物的标准不存在，通过对含有杂质或降解物的产品用不同的程序来检测的结果进行对比来研究 选择性，这个样品的成分应已得到鉴别确认。为了更适合，这应当包括快到有效期的或相关的强 降解条件下的样品：光照、加热、湿度、酸碱水解、氧化等。
2、可接受标准：为证明选择性，需要有重要成分的积极响应和对一些干扰物质的响应的控制。鉴
别试验对降解物和杂质的选择性不作要求。
c)精密度、回收率、线性和范围
1、要求
a)线性/回收率：准备两份样品（两份样品，分别在两天准备，每个浓度总共准备 4 份）+每天用新
的标准（如果需要）。典型的做法是，准备的样品做成五个不同的浓度。具体使用的浓度或多或少 .
. 由产品本身和/或所使用的仪器决定。
+注意：在预定的范围内分析物应该加入到合适的赋形剂或空白溶液中，应该用可靠的有代表性的
分析试样（比如：大批量的API）。定量溶液的制备应该采用线性/回收率制备的同一批样品，以免
引入研究的可变性。
b)准确度—方法的精密度由分析的线性和回收率数据决定。 c)范围—具体的范围一般是由线性数据和所要使用的程序决定。这些值的范围在分析方法中能够 达到一定的线性、准确度和精密度。 d)回收率（由线性/精确度评估）—是由测定单个样品时的%rsd 的值得到，由每个浓度的四个点组 成的回收率决定的。
2、可接受的标准：所有数据都应符合表 2 的标准。
3、报告： a)每个浓度的单个和平均百分含量（原料药验证）或回收率（最终产品的验证）都应该计算和报 告。在 API 验证中，因为没有赋形剂，系数就用百分数表示。
检出量 回收率百分含量= ————————×100
加入量
表 2：一般方法可接受的标准D
范围（%） 样品的每
个浓度准
备的份数 精密度 线性 回收率精密度
(%RSD) 可接受的平均回收
率（与理论值对比） 相关系
数(R) 斜率(m)
含量API
5 50—150%A 每个浓度
4 份 ±1% ＞0.990
0.95-1.05 ≤1%
降解物含量
低剂量原料药
5
C 0.05—150% 每个浓度
4 份 ±10%（≥0.5%）
±25%（＜0.5%）B ＞0.950
0.875-1.125 ≤10%(≥0.5%）
≤25%(＜0.5%）
类别II降解物含量
高剂量原料药
5
C 0.03—150% 每个浓度
4 份 ±10%（≥1.0%）
±25%（＜1.0%）B ＞0.950
0.875-1.125 ≤10%(≥0.5%）
≤25%(＜0.5%）
A：根据不同的检测浓度需要实验证应包括低浓度的 50%和高浓度的 150%；
B：如果线性关系在整个范围内不能得到满足，活性组分和降解的线性关系可以分开；
C：下限代表主成分的％水平，而上限代表降解物的％水平；
D：应该在各个验证方案中先定义好紧缩或宽松的验收标准。
b)这些数据应当表示为检出量比加入量，进行线性回归分析，根据以上要求测得的样品的结果进
行绘制得到（每个浓度的四个点）。（y=mx+b，其中 y=检出量，m=斜率，x=加入量，b=截距） c)报告相关系数（R），斜率（m），和残差平方和。
d)报告每次加入量浓度所得的回收数据的 SD 和%RSD。
D、测量精密度
1、要求—为确定测量精密度，同一化验员多次对同一样品进行检测（每个至少检测 6 次）。典型
例子，对 100%的标准溶液分析进行类别 I 的验证。类别 II 验证要求对标准品的规格和指标进行 .
. 分析。
2、可接受的标准：数据的%RSD 应符合表 3 的标准。对类别 IV 的含量没有一个普遍接受的标准。
3、报告：报告检测的数据并计算平均值、标准偏差和%RSD。
表 3：测量和方法精密度的可接受标准（%RSD）
测量精密度 样品/标准品方法精密度
类别 1—原料药 ≤1% ≤1%
类别 I—制剂 ≤1% ≤2.5%
类别 I—防腐剂 ≤3% ≤3%
类别 II—原料药&大剂量制
剂 ≤3% ≤10%（等于或大于 0.5%）
≤25%（小于 0.5%）
类别 II—小剂量制剂 ≤3% ≤10%（等于或大于 1%）
≤25%（小于 1.0%）
类别 III ≤3% ≤5%
E、方法精密度：
1、要求—为确定方法的方法精密度，同一分析员将样品和标准溶液各准备
6 份。
2、可接受的标准—所有数据都应符合表 3 所给出的标准。对类别 IV 的含量没有一个普遍接受的
标准。
3、报告—每个样品的检测数据都应报告，包括平均值、标准偏差和%RSD。
F、中间精密度
1、要求 a)为测定方法的中间精密度，两个分析员分别对至少三批样品（若有）的含量测定两次。分析操 作应分别在两天进行，在操作条件基本不变的情况下，用不同的仪器、不同的设备、试剂、溶液、 标准溶液，样品溶液进行小的变动。 b)当分析物中的检测成分不存在时，可以加入相应标准使出现响应峰。
2、可接受的标准 所有数据必须符合表 4 提供的标准。
表 4：中间精密度可接受标准
类别 要求 标准（绝对差）
I 含量：原料药 ±1%
II 降解物含量：小剂量制剂 ±0.2%（≤2%）
±0.5%（＞2%）
II 降解物含量：API&大剂量制剂 ±0.1%（≤1%）
±1%（＞1%）
II 残留溶剂 浓度的±25%a（≤1%）
浓度的±10%a（＞1%）
a浓度是指最初检测时的数据。
注解：当一个分析物的检测结果低于报告限度时，结果仍然要报告以便与其它有检测结果对比（即
计算绝对差）。若一个分析物的检测结果为未检出，那在计算绝对差时应看作是 0。若两个分析物
的结果都是“未检出”或低于“报告限度”，那中间精密度可看做通过。
