基因工程复习
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1、用酚—氯仿抽提DNA 时，通常要在氯仿或酚—氯仿中加少许异戊醇，这是因为异戊醇可以 防止气泡 ；分离DNA 时要使用金属离子螯合剂，如EDTA 和柠檬酸钠等，其目的是 抑制了DNase 。
2、按照质粒拷贝数的多少，质粒可以分为 严谨型质粒 。和 松弛型质粒 。
3、λ 噬菌体在感染大肠杆菌以后，可以进入 Lytic growth 也可以进入 Lysogenic state 。如果其基因组 DNA 通过专一性重组整合到宿主染色体中，则其进入 融源状态 。；它也可以选择进入
融菌状态 ，大量复制并组装子代噬菌体颗粒。
4、ddNTP 与普通的 dNTP 的不同之处在于 ddNTP 2’和3’双脱氧 ，它们可以在 DNA 聚合酶的作用下，通过其 5’ 掺入到正在增长的 DNA 链中，导致链延伸反应终止。
5、Klenow DNA 聚合酶是 DNA聚合酶Ⅰ 经蛋白酶裂解而从全酶中除去 5’—3’外切酶 活性的多肽大片断，而其他活性保持不变。
1、酚是蛋白变性剂，用酚抽提细胞DNA 时，具有两方面的作用，分别为 变性剂 和 抑制了DNase 。
2、Plasmid 能进行自我复制，大多数为 双 链 闭合环状 DNA 分子。
3、寄主控制的限制与修饰现象由两种酶活性配合完成的，一种叫 内切酶 ，另一种叫 修饰酶 。
4、反转录酶来自 AMV 或 Mu－MLV ，即依赖于 RNA 的 DNA 聚合酶，它有 聚合酶
活性，但无 外切酶 活性。
5、末端转移酶来源于 小牛胸腺 ，是存在于前淋巴细胞及分化早期的类淋巴样细胞内的一种不寻常的 DNA 聚合酶，在 二价阳离子 存在下，末端转移酶催化 dNTP 加于 DNA 分子的 3' 羟基端。
得分 三、选择题(每小题1.5分，共15分)
1、迄今为止所发现的限制性内切核酸酶可以作用于（ C ）。
A、既可以作用于双链 DNA，又可以作用于单链 DNA； B、只能作用于单链 DNA；
C、只能作用于双链 DNA； D、只能作用于 RNA。
2、下列哪一种酶作用时需要引物( B )。
A、末端转移酶； B、反转录酶； C、DNA 连接酶； D、限制酶。 3、DNA 被某种酶切割后，电泳得到的电泳带有些扩散，下列原因中，哪一项不太可能( D )。
A、蛋白质（如 BSA）同 DNA 结合；B、有外切核酸酶污染；
C、酶失活； D、酶切条件不适合。
4、以下各项中不是 PCR 反应所必须的是（ D ）。
A、模板和引物； B、dNTP； C、Taq 酶和buffer； D、甘油。
5、关于 PCR 技术的叙述，下列哪项是错误的？（ B ）
A、以 DNA 复制为基础而建立起来的技术；
B、利用 PCR 技术可完全无误地扩增基因；
C、反应体系需模板、一对引物、4 种 dNTP 、耐热 DNA 聚合酶和缓冲溶液；
D、以变性-退火-延伸为一周期。
6、以下不是表达载体所必须的条件是（ C ）。
A、必须具备很强的启动子； B、必须具备很强的终止子；
C、启动子需要受控制； D、所产生的 mRNA 必须具有翻译的起始信号。
7、以下不属于核酸探针的是（ D ）。
A、RNA 探针； B、基因组探针； C、cDNA 探针； D、抗体。
8、关于穿梭质粒载体，下面哪一种说法最正确（ B ）。
A、在不同的宿主细胞中使用不同的复制起点；B、在不同的宿主中具有不同的复制机制；
C、在不同的宿主细胞中使用不同的复制酶； D、在不同的宿主中具有不同的复制速率。
9、从细胞或组织中分离 DNA 时常用蔗糖的作用是( C )。
A、抑制核酸酶的活性； B、加速蛋白质的变性；
C、保护 DNA，防止断裂； D、有利于细胞破碎。
10、氯霉素的工作原理为（ D ）。
A、可以抑制细胞壁肽聚糖的合成； B、可以与核糖体 30S 亚基结合并抑制蛋白质合成；
C、可以抑制核糖体的转位； D、可以与核糖50S 亚基结合并抑制蛋白质合成。
得分 三、选择题(每小题1.5分，共15分)
1、限制性内切核酸酶可以特异性地识别（ C ）。
A、特定的三联密码； B、双链 DNA 的特定碱基对；
C、双链 DNA 的特定碱基序列； D、单链 DNA 的特定碱基序列。 2、在切口平移方法标记 DNA 探针时只能使用（ B ）。
A、Klenow 酶；B、DNA 聚合酶 Ⅰ；C、DNA聚合酶 Ⅱ； D、DNA聚合酶 Ⅲ。
3、在下列进行 DNA 部分酶切的条件中，控制哪一项最好（ C ）。
A、反应体积； B、酶反应温度； C、反应时间； D、酶量。
4、PCR 扩增有时会出现弥散的条带，以下原因阐述不正确的是（ B ）。
A、退火温度过低； B、退火温度过高；
C、dNTP 浓度过高； D、循环次数过多。
5、以下不属于 PCR 的应用的为（ D ）。
A、随机扩增多态性 DNA（RAPD）； B、扩增片段长度多态性（AFLP）；
C、RACE； D、S1 酶作图。
6、pUC18 与 pUC19 的区别在于（ B ）。
A、二者的选择标记不同； B、二者的多克隆位点方向相反；
C、pUC18 无 lacZ 基因； D、pUC19 无 lacZ 基因。
7、有关 DNA 序列自动化测定的不正确叙述是（ D ）。
A、用荧光代替了同位素标记； B、激光扫描分析代替人工读序 基；
C、本原理与手工测序相同； D、不再需要引物。
8、下列哪一项不是质粒载体必备的基本特征( D )。
A、可以独立复制； B、有选择标记；
C、有多克隆位点； D、含 lacZ。
9、在分离 DNA 过程造成 DNA 分子断裂的因素很多，下列说法中哪一项是不正确的（ C ）。
A、核酸酶的降解； B、化学降解； C、保存液中未加一滴氯仿； D、物理剪切。
10、氨苄青霉素的工作原理为（ A ）。
A、可以抑制细胞壁肽聚糖的合成；B、可以与核糖体 30S 亚基结合并抑制蛋白质合成；
C、可以抑制核糖体的转位； D、可以与核糖50S 亚基结合并抑制蛋白质合成。
1、酚是蛋白变性剂，用酚抽提细胞DNA 时，具有两方面的作用，分别为 变性剂 和 抑制了DNase 。
2、Plasmid 能进行自我复制，大多数为 双 链 闭合环状 DNA 分子。
3、寄主控制的限制与修饰现象由两种酶活性配合完成的，一种叫 内切酶 ，另一种叫 修饰酶 。 4、反转录酶来自 AMV 或 Mu－MLV ，即依赖于 RNA 的 DNA 聚合酶，它有 聚合酶
活性，但无 外切酶 活性。
5、末端转移酶来源于 小牛胸腺 ，是存在于前淋巴细胞及分化早期的类淋巴样细胞内的一种不寻常的 DNA 聚合酶，在 二价阳离子
存在下，末端转移酶催化 dNTP 加于 DNA 分子的 3' 羟基端。
得分 三、选择题(每小题1.5分，共15分)
1、迄今为止所发现的限制性内切核酸酶可以作用于（ C ）。
A、既可以作用于双链 DNA，又可以作用于单链 DNA； B、只能作用于单链 DNA；
C、只能作用于双链 DNA； D、只能作用于 RNA。
2、下列哪一种酶作用时需要引物( B )。
A、末端转移酶； B、反转录酶； C、DNA 连接酶； D、限制酶。
3、DNA 被某种酶切割后，电泳得到的电泳带有些扩散，下列原因中，哪一项不太可能( D )。
A、蛋白质（如 BSA）同 DNA 结合；B、有外切核酸酶污染；
C、酶失活； D、酶切条件不适合。
4、以下各项中不是 PCR 反应所必须的是（ D ）。
A、模板和引物； B、dNTP； C、Taq 酶和buffer； D、甘油。
5、关于 PCR 技术的叙述，下列哪项是错误的？（ B ）
A、以 DNA 复制为基础而建立起来的技术；
B、利用 PCR 技术可完全无误地扩增基因；
C、反应体系需模板、一对引物、4 种 dNTP 、耐热 DNA 聚合酶和缓冲溶液；
D、以变性-退火-延伸为一周期。
6、以下不是表达载体所必须的条件是（ C ）。
A、必须具备很强的启动子； B、必须具备很强的终止子；
C、启动子需要受控制； D、所产生的 mRNA 必须具有翻译的起始信号。
7、以下不属于核酸探针的是（ D ）。
A、RNA 探针； B、基因组探针； C、cDNA 探针； D、抗体。
8、关于穿梭质粒载体，下面哪一种说法最正确（ B ）。
A、在不同的宿主细胞中使用不同的复制起点；B、在不同的宿主中具有不同的复制机制；
C、在不同的宿主细胞中使用不同的复制酶； D、在不同的宿主中具有不同的复制速率。
9、从细胞或组织中分离 DNA 时常用蔗糖的作用是( C )。
A、抑制核酸酶的活性； B、加速蛋白质的变性；
C、保护 DNA，防止断裂； D、有利于细胞破碎。
10、氯霉素的工作原理为（ D ）。
A、可以抑制细胞壁肽聚糖的合成； B、可以与核糖体 30S 亚基结合并抑制蛋白质合成；
C、可以抑制核糖体的转位； D、可以与核糖50S 亚基结合并抑制蛋白质合成。
1、 星活性：高浓度的酶、高浓度的甘油、低离子强度、极端pH值等，会使一些核酸内切酶的识别和切割序列发生低特异性，即Star activity现象。
2、 插入型载体：只具有一个可供外源DNA插入的克隆位点。
3、 反转录PCR：在逆转录酶的作用下、以mRNA为模板合成互补的cDNA，再以cDNA为模板进行PCR反应。
4、 感受态：受体细胞经过一些特殊方法（如：CaCl2，RuCl等化学试剂法）的处理后，细胞膜的通透性发生变化，成为能容许多有外源DNA的载体分子通过的感受态细胞。
5、 考斯质粒：考斯质粒是一类人工构建的含有l-DNA cos序列和质粒复制子的特殊类型的载体
6、 Klenow片段：用枯草杆菌蛋白酶处理大肠杆菌DNA聚合酶 I可以切掉N端的5’3’外切酶活性部分，就成为Klenow fragment。
