小鼠糖尿病诊断标准

2型糖尿病诱发性小鼠模型与自发性db/db小鼠特性的比较刘芳1，杨华1，周文江1,2，周晓辉1（1.上海市公共卫生临床中心，上海201508；2.复旦大学药学院，上海201203）【摘要】目的建立诱发性2型糖尿病小鼠模型，并将其与自发性2型糖尿病小鼠db/db进行比较分析。

客观评价两种2型糖尿病小鼠模型，为糖尿病研究中动物模型的选择与实际应用提供实验依据。

方法高脂饲料喂养C57BL/6J小鼠4周，腹腔连续3次注射STZ，建立诱发性2型糖尿病小鼠模型。

感染后4周，大体肉眼观察小鼠的肝脏、肾脏，测定糖耐量，血清生化指标及血清细胞因子IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ、TNF-α、IL-17、IL-10表达量，将其与同龄的自发性2型糖尿病小鼠db/db进行比较分析。

结果肉眼观察发现，两组模型小鼠的肝脏、肾脏与对照组均具有明显差异。

糖耐量分析中，两组模型小鼠与对照组小鼠各时间点的血糖值均具有统计学差异（p<0.05），耐糖功能低下，两组模型小鼠间血糖值无统计学差异。

血液生化指标中，与对照组小鼠相比，两组模型小鼠GLU、CHOL、LDLC明显升高（p<0.05）；两组模型小鼠相互比较，诱发性2型糖尿病小鼠血脂水平较高（p<0.05）。

免疫指标比较显示：除IL-2外，两组模型小鼠血清中细胞因子水平均较对照组小鼠明显升高（p<0.05），而db/db 小鼠血清中细胞因子表达较诱发性糖尿病小鼠高，其中IL-6、IFN-γ、TNF-α具有显著性差异（p<0.05）。

结论两组2型糖尿病模型小鼠均在一定程度上模拟了人类糖尿病患者症状，但由于糖尿病产生的原因不同而存在着一定的差异，研究者可根据实际需要参照相关数据进行选择。

【关键词】：2型糖尿病；诱发性小鼠模型；db/db小鼠；细胞因子The Comparison about Characteristics of Induced Type 2 Diabetes Mouse Model and Spontaneous db/db MiceLIU Fang1, YANG Hua1, ZHOU Wen-jiang1,2，ZHOU Xiao-hui1(1.Shanhai Public Health Clinical Center,Shanghai 201508, China; 2.Scool ofPharmacy of Fudan University, Shanghai 201203, China)[基金项目]上海市科委资助项目（11140903001）。

第1篇一、实验目的1. 掌握血糖测定的原理和方法。

2. 了解小鼠血糖测定的实验步骤和注意事项。

3. 通过实验了解胰岛素对血糖水平的影响。

二、实验原理血糖是指血液中的葡萄糖浓度。

正常情况下，血糖水平保持在一定的范围内，以维持人体正常生理功能。

血糖测定是糖尿病诊断和治疗效果评估的重要指标。

本实验采用葡萄糖氧化酶法测定小鼠血糖。

该方法基于葡萄糖氧化酶催化葡萄糖与氧气反应生成葡萄糖酸和过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶的作用下分解产生水和氧气，氧气与色原在特定波长下发生反应，产生颜色变化，通过比色法测定血糖浓度。

三、实验材料与试剂1. 实验动物：健康小鼠10只，体重约20g。

2. 仪器设备：血糖测定仪、血糖试纸、微量注射器、电子天平、离心机、恒温水浴箱等。

3. 试剂：葡萄糖标准液、葡萄糖氧化酶试剂盒、生理盐水、胰岛素等。

四、实验步骤1. 分组与处理：- 将10只小鼠随机分为两组，每组5只。

- 第一组为实验组，注射胰岛素（剂量：0.5U/kg体重）。

- 第二组为对照组，注射等量生理盐水。

2. 血糖测定：- 实验前禁食不禁水12小时。

- 将小鼠麻醉后，从尾静脉抽取血液，分离血清。

- 将血清按照试剂盒说明书进行血糖测定。

3. 结果记录：- 记录两组小鼠的血糖浓度。

4. 数据分析：- 对实验数据进行统计分析，比较两组小鼠血糖浓度的差异。

五、实验结果实验结果显示，实验组小鼠血糖浓度显著低于对照组（P<0.05），说明胰岛素具有降低血糖的作用。

六、实验讨论1. 本实验采用葡萄糖氧化酶法测定小鼠血糖，该方法具有操作简便、准确度高、灵敏性好等优点。

2. 实验结果表明，胰岛素可以降低小鼠血糖，这与胰岛素的生理作用相符。

3. 在实验过程中，需要注意以下几点：- 小鼠麻醉要适度，避免过度麻醉导致血糖降低。

- 血液采集过程中要尽量避免溶血，以保证实验结果的准确性。

- 实验过程中要严格控制温度，避免温度变化对血糖测定结果的影响。

糖尿病肾病动物模型成模标准糖尿病肾病动物模型的成模标准通常包括以下几个方面：1. 血糖水平：是判断动物是否成为糖尿病模型的重要指标。

一般情况下，动物的血糖水平需要持续保持在较高水平，如空腹血糖≥7.0mmol/L或随机血糖≥11.1mmol/L，且这种高血糖状态需要稳定一段时间，一般认为持续时间应在3个月以上。

2. 尿糖、尿蛋白：尿糖、尿蛋白的出现也是判断糖尿病肾病的重要指标。

在血糖升高的情况下，动物的尿糖、尿蛋白也应该相应升高。

3. 肾功能：糖尿病肾病的发展过程中，肾功能会逐渐下降。

因此，观察动物的肾功能变化也是判断糖尿病肾病模型的重要依据。

一般认为，血肌酐、尿素氮等指标的升高可以反映肾功能的下降。

4. 生化指标：糖尿病肾病的发展过程中，会出现一些生化指标的异常，如血脂、尿酸等。

这些指标的异常变化也可以作为判断糖尿病肾病模型的重要依据。

5. 病理学检查：病理学检查是判断糖尿病肾病最准确的方法，通过病理切片观察肾脏的结构变化，如肾小球硬化、肾小管间质纤维化等，可以明确诊断糖尿病肾病。

除了以上标准外，还有一些特殊情况需要考虑。

例如，有些动物在实验过程中可能会出现自发性糖尿病，即没有经过特殊处理，血糖自然升高。

这种情况下，需要排除其他原因引起的血糖升高，如胰岛细胞瘤等。

另外，有些动物的反应可能比较迟钝，需要多次重复实验才能得到可靠的结果。

因此，在实验过程中需要仔细观察、记录数据，并根据实际情况进行分析和判断。

总之，糖尿病肾病动物模型的成模标准是多方面的，需要综合考虑血糖、尿糖、尿蛋白、肾功能、生化指标和病理学检查等多个方面的指标。

同时，在实验过程中需要注意排除其他原因引起的血糖升高或异常反应，并根据实际情况进行分析和判断。

只有符合标准的动物才能被认为是成功的糖尿病肾病动物模型，用于后续的研究和实验。

２型糖尿病模型小鼠造模时间的选择杨张良＋，童海玲＋，孙梦蝶，袁　杰，胡　莺，王旭焘，齐敏友△（浙江工业大学药学院药理研究所，杭州３１００１４）【摘要】　目的：分析不同时期的２型糖尿病小鼠血生化指标及心肌和肾脏的病理变化情况，为选择２型糖尿病模型小鼠造模时间提供依据。

方法：３２只健康雄性ＩＣＲ小鼠高脂饲料喂养６周后，腹腔注射链脲佐菌素（ＳＴＺ，３０ｍｇ／ｋｇ），连续５ｄ，制备糖尿病模型。

９ｄ后测空腹血糖（ＦＢＧ），高于１１．１ｍｍｏｌ／Ｌ视为糖尿病模型。

分别于成模后第４、６、８周处死一组小鼠。

另取８只雄性ＩＣＲ小鼠作为对照组，常规饲料喂养，于糖尿病组小鼠成模后第８周处死。

分析小鼠生化及病理情况：①心脏、肾脏脏器系数计算；②血清乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）、肌酸激酶（ＣＫ）、肌酐（Ｃｒ）和尿素氮（ＢＵＮ）含量测定；③ＨＥ染色观察心肌和肾脏组织病变的整体情况；Ｍａｓｓｏｎ染色观察心肌组织纤维化情况；ＰＡＳ染色观察肾脏组织病理变化。

结果：与对照组小鼠进行比较，第４、６、８周的糖尿病小鼠心脏器系数升高，血清ＬＤＨ、ＣＫ升高，病理组织学见心肌细胞肥大，纤维化；肾脏脏器系数升高，肾功能肌酐（Ｃｒ）、尿素氮（ＢＵＮ）显著升高，病理组织学见肾小球肥大，肾小管基底膜增厚，管腔萎缩。

结论：第６周糖尿病小鼠相关生化病理指标改变相对明显且饲养时间相对较短，故２型糖尿病模型小鼠造模后第６周是进行药物干预和病理、生理、生化等研究的最佳时间。

【关键词】糖尿病模型；　病理；　生理；　糖尿病心肌病；　糖尿病肾病；　小鼠【中图分类号】Ｒ２８５．５ 【文献标识码】Ａ 【文章编号】１０００ ６８３４（２０１９）０２ １５５ ００５【ＤＯＩ】１０．１２０４７／ｊ．ｃｊａｐ．５７２８．２０１９．０３４Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎｏｆｍｏｄｅｌｉｎｇｔｉｍｅｆｏｒｔｙｐｅ２ｄｉａｂｅｔｅｓｍｅｌｌｉｔｕｓｍｏｕｓｅＹＡＮＧＺｈａｎｇ ｌｉａｎｇ＋，ＴＯＮＧＨａｉ ｌｉｎｇ＋，ＳＵＮＭｅｎｇ ｄｉｅ，ＹＵＡＮＪｉｅ，ＨＵＹｉｎｇ，ＷＡＮＧＸｕ ｔａｏ，ＱＩＭｉｎ ｙｏｕ△（ＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎｏｆＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＺｈｅｊｉａｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ３１００１４，Ｃｈｉｎａ）【ＡＢＳＴＲＡＣＴ】Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏａｎａｌｙｚｅｔｈｅｃｈａｎｇｅｓｏｆｂｌｏｏｄｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｉｎｄｅｘａｎｄｔｈｅｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｎｇｅｓｏｆｍｙｏｃａｒｄｉｕｍａｎｄｋｉｄｎｅｙｉｎｔｙｐｅ２ｄｉａｂｅｔｉｃｍｏｕｓｅａｔｄｉｆｆｅｒｅｎｔｔｉｍｅｐｏｉｎｔｓ，ｗｈｉｃｈｃａｎｐｒｏｖｉｄｅｔｈｅｂａｓｉｓｆｏｒｔｈｅｓｅｌｅｃｔｉｏｎｏｆｔｙｐｅ２ｄｉａｂｅｔｉｃｍｏｄｅｌｉｎｇｔｉｍｅｆｏｒｌａｔｅｒｒｅｓｅａｒｃｈ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ａｆｔｅｒ６ｗｅｅｋｓｏｆｆｅｅｄｉｎｇｗｉｔｈｈｉｇｈ ｆａｔｄｉｅｔ，２４ｈｅａｌｔｈｙｍａｌｅＩＣＲｍｉｃｅｗｅｒｅｉｎｊｅｃｔｅｄｗｉｔｈｓｔｒｅｐｔｏｚｏｃｉｎ（ＳＴＺ，３０ｍｇ／ｋｇ）ｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｌｙｆｏｒ５ｄａｙｓｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈｄｉａｂｅｔｉｃｍｏｄｅｌｓ．Ａｆｔｅｒ９ｄａｙｓ，ａｒａｎｄｏｍｂｌｏｏｄｇｌｕｃｏｓｅ≥１１．１ｍｍｏｌ／Ｌｗａｓｍｅａｓ ｕｒｅｄａｓｄｉａｂｅｔｉｃｍｉｃｅ．４，６ａｎｄ８ｗｅｅｋｓａｆｔｅｒｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙｐｒｅｐａｒｉｎｇｔｈｅｄｉａｂｅｔｉｃｍｏｕｓｅ，８ｄｉａｂｅｔｉｃｍｉｃｅ（ａｇｒｏｕｐ）ｗｏｕｌｄｂｅｓａｃｒｉｆｉｃｅｄｅａｃｈｔｉｍｅ．Ｔｈｅｎｔｈｅｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌａｎｄｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｗｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄ：①ｔｈｅｉｎｄｅｘｅｓｏｆｈｅａｒｔａｎｄｋｉｄｎｅｙｗｅｒｅｃａｌｃｕｌａｔｅｄ．②ｔｈｅｓｅｒｕｍｌｅｖｅｌｓｏｆｃｒｅａｔｉｎｅｋｉｎａｓｅ（ＣＫ），ｌａｃｔａｔｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ（ＬＤＨ），ｃｒｅａｔｉｎｉｎｅ（Ｃｒ）ａｎｄｂｌｏｏｄｕｒｉｎｅｎｉｔｒｏｇｅｎ（ＢＵＮ）ｗｅｒｅｄｅｔｅｒ ｍｉｎｅｄ．③Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｎｇｅｓｏｆｍｙｏｃａｒｄｉｕｍａｎｄｒｅｎａｌｔｉｓｓｕｅｓｗｅｒｅｏｂｓｅｒｖｅｄｂｙｈｅｍａｔｏｘｙｌｉｎａｎｄｅｏｓｉｎ（ＨＥ）ｓｔａｉｎｉｎｇ．Ｍａｓｓｏｎｓｔａｉｎｉｎｇｗａｓｕｓｅｄｔｏｏｂｓｅｒｖｅｔｈｅｆｉｂｒｏｓｉｓｏｆｍｙｏｃａｒｄｉｕｍ．ＰＡＳｓｔａｉｎｉｎｇｗａｓａｄｏｐｔｅｄｔｏｏｂｓｅｒｖｅｔｈｅｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｎｇｅｓｏｆｒｅｎａｌｔｉｓｓｕｅ．Ｉｎａｄｄｉｔｉｏｎ，８ＩＣＲｍａｌｅｍｉｃｅｗｅｒｅｔａｋｅｎａｓｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ａｔｔｈｅ４ｔｈ，６ｔｈａｎｄ８ｔｈｗｅｅｋ，ｃａｒｄｉａｃｏｒｇａｎｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ，ｔｈｅｖａｌｕｅｓｏｆＬＤＨａｎｄＣＫｗｅｒｅａｌｌｉｎｃｒｅａｓｅｄｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ．Ｃａｒｄｉｏｍｙｏｃｙｔｅｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｙａｎｄｍｙｏｃａｒｄｉａｌｆｉｂｒｏｓｉｓｃｏｕｌｄｂｅｏｂｓｅｒｖｅｄ．Ｒｅｎａｌｏｒｇａｎｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ，ｔｈｅｖａｌｕｅｓｏｆＣｒａｎｄＢＵＮｗｅｒｅｉｎｃｒｅａｓｅｄ．Ｇｌｏｍｅｒｕｌａｒｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｙ，ｂａｓｅｍｅｎｔｍｅｍｂｒａｎｅｔｈｉｃｋｅｎｉｎｇａｎｄａｔｒｏｐｈｙｃｏｕｌｄｂｅｐｅｒｃｅｉｖｅｄ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ａｔｔｈｅ６ｔｈｗｅｅｋ，ｒｅｌａｔｅｄｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌａｎｄｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｎｇｅｓｉｎｄｉａｂｅｔｉｃｍｉｃｅｗｅｒｅｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅｌｙｏｂｖｉｏｕｓａｎｄｂｒｅｅｄｉｎｇｔｉｍｅｗａｓｒｅｌａｔｉｖｅｌｙｓｈｏｒｔ．Ｔｈｕｓ，６ｗｅｅｋｓａｆｔｅｒｔｈｅｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｄｉａｂｅｔｉｃｍｉｃｅｗｏｕｌｄｂｅｔｈｅｏｐ ｔｉｍａｌｔｉｍｅｆｏｒｔｙｐｅ２ｄｉａｂｅｔｅｓｍｅｌｌｉｔｕｓｍｏｄｅｌｉｎｇ，ｐｒｏｐｅｒｆｏｒｉｎｖｅｎｔｉｏｎｓｏｆｄｒｕｇｓａｎｄｏｔｈｅｒｒｅｓｅａｒｃｈｐｕｒｐｏｓｅｓｉｎｃｌｕｄｉｎｇｐａｔｈｏｌｏｇｙ，ｐｈｙｓｉ ｏｌｏｇｙ，ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｅｔｃ．【ＫＥＹＷＯＲＤＳ】　ｄｉａｂｅｔｅｓｍｏｄｅｌ；　ｐａｔｈｏｌｏｇｙ；　ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ；　ｄｉａｂｅｔｉｃｃａｒｄｉｏｍｙｏｐａｔｈｙ；　ｄｉａｂｅｔｉｃｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ；　ｍｉｃｅ 【基金项目】浙江省自然科学基金（ＬＹ１６Ｈ２８００１３）【收稿日期】２０１８ ０７ ２０【修回日期】２０１９ ０１ １１　△【通讯作者】Ｔｅｌ：０５７１ ８８３２０５３５；Ｅ ｍａｉｌ：ｑｉｍｉｎｙｏｕ＠１６３．ｃｏｍ．＋：为共同第一作者 糖尿病（ｄｉａｂｅｔｅｓｍｅｌｌｉｔｕｓ，ＤＭ）可引起多系统损害，导致心脏、肾、眼、神经和血管等组织器官的慢性进行性病变，功能减退及衰竭，严重影响患者的生活质量，对其病因病理及治疗亟待研究，故建立合适的糖尿病模型至关重要［１ ３］。

小鼠糖尿病模型血糖标准
在研究小鼠糖尿病模型时，了解血糖标准是非常重要的。

以下是关于小鼠糖尿病模型血糖标准的几个关键方面：
1.血糖浓度
在糖尿病模型中，血糖浓度是一个重要的指标。

一般来说，高血糖是小鼠糖尿病模型的主要特征之一。

根据研究，小鼠的血糖浓度通常在11.1至22.2毫摩尔/升（mM）之间被认为是糖尿病的阈值。

当血糖浓度持续高于这个范围时，可以认为小鼠患上了糖尿病。

2.血糖波动
除了血糖浓度之外，血糖波动也是一个需要考虑的因素。

在糖尿病模型中，血糖波动可能会导致额外的并发症和健康问题。

因此，评估血糖波动对于了解糖尿病模型的病情和治疗效果至关重要。

可以通过测量小鼠的空腹血糖和进食后的血糖变化来评估血糖波动。

3.胰岛素水平
胰岛素是调节血糖的重要激素。

在糖尿病模型中，胰岛素水平可能会发生变化。

一般来说，小鼠糖尿病模型的胰岛素水平可能会降低或失去作用，导致血糖无法正常降低。

因此，测量胰岛素水平可以帮助评估糖尿病模型的病情和治疗效果。

4.胰岛素抵抗
胰岛素抵抗是指身体对胰岛素的反应性降低，导致血糖无法正常降低。

在糖尿病模型中，胰岛素抵抗是一个重要的特征。

通过使用胰岛素敏感度测试等方法，可以评估小鼠的胰岛素抵抗程度。

总之，了解小鼠糖尿病模型血糖标准对于研究糖尿病及其并发症非常重要。

通过测量血糖浓度、血糖波动、胰岛素水平和胰岛素抵抗等指标，可以更好地评估小鼠糖尿病模型的病情和治疗效果，从而为开发新的治疗方法提供有价值的信息。

第1篇一、实验目的1. 了解糖耐量测定的原理和方法。

2. 评估小鼠对葡萄糖的代谢能力，即糖耐量。

3. 探讨糖耐量与糖尿病之间的关系。

二、实验原理糖耐量是指机体在摄入一定量葡萄糖后，血糖水平的变化情况。

通过糖耐量实验，可以了解机体对葡萄糖的代谢能力，从而评估糖尿病等代谢性疾病的风险。

本实验采用口服葡萄糖耐量试验（OGTT）方法，即在实验前禁食12小时，然后给予小鼠一定量的葡萄糖，在给予葡萄糖前后及给药后不同时间点测定血糖值，分析血糖变化情况。

三、实验材料与仪器1. 实验动物：昆明种小鼠，体重20-25g。

2. 试剂：葡萄糖、生理盐水、葡萄糖氧化酶法试剂盒。

3. 仪器：电子天平、血糖仪、微量注射器、试管、移液器等。

四、实验方法1. 实验分组：将小鼠随机分为正常组、模型组、给药组，每组10只。

2. 造模：除正常组外，其余两组小鼠采用高脂饮食喂养4周，模拟糖尿病模型。

3. 给药：正常组给予生理盐水，模型组给予葡萄糖，给药组给予等量的葡萄糖及一定量的药物。

4. 糖耐量实验：在实验前禁食12小时，给予小鼠葡萄糖后0、30、60、90、120分钟时分别测定血糖值。

5. 数据分析：采用SPSS软件对实验数据进行统计分析。

五、实验结果1. 正常组小鼠在给予葡萄糖后，血糖水平迅速升高，随后逐渐下降，恢复正常水平。

2. 模型组小鼠在给予葡萄糖后，血糖水平迅速升高，但下降缓慢，糖耐量降低。

3. 给药组小鼠在给予葡萄糖后，血糖水平升高幅度减小，下降速度加快，糖耐量得到改善。

六、实验讨论1. 本实验结果表明，糖耐量实验可以有效地评估小鼠对葡萄糖的代谢能力，为糖尿病等代谢性疾病的研究提供依据。

2. 高脂饮食可以诱导小鼠发生胰岛素抵抗，导致糖耐量降低，这与临床糖尿病的发生机制相似。

3. 给药组小鼠糖耐量得到改善，提示该药物可能具有改善糖耐量的作用。

七、实验结论1. 糖耐量实验可以有效地评估小鼠对葡萄糖的代谢能力，为糖尿病等代谢性疾病的研究提供依据。

一、实验目的1. 了解血糖测定的原理和方法。

2. 掌握小鼠血糖测定的操作技能。

3. 研究胰岛素和肾上腺素对小鼠血糖的影响。

二、实验原理血糖是指血液中的葡萄糖浓度，是人体重要的能量来源。

胰岛素是由胰腺β细胞分泌的一种激素，具有降低血糖的作用；肾上腺素是由肾上腺髓质分泌的一种激素，具有升高血糖的作用。

本实验通过测定小鼠血糖浓度，观察胰岛素和肾上腺素对小鼠血糖的影响，以了解血糖调节的机制。

三、实验材料与试剂1. 实验动物：健康雄性小鼠10只，体重20-25g。

2. 试剂：胰岛素、肾上腺素、生理盐水、葡萄糖溶液、肝素钠、血糖测定仪、注射器、剪刀、镊子等。

四、实验步骤1. 实验动物分组：将10只小鼠随机分为三组，分别为正常对照组、胰岛素组、肾上腺素组。

2. 胰岛素组：在实验前1小时，给胰岛素组小鼠腹腔注射0.1U/kg胰岛素，对照组和肾上腺素组小鼠注射等量的生理盐水。

3. 肾上腺素组：在实验前1小时，给肾上腺素组小鼠腹腔注射0.1mg/kg肾上腺素，对照组和胰岛素组小鼠注射等量的生理盐水。

4. 静脉注射葡萄糖溶液：实验前10分钟，给所有小鼠静脉注射2%葡萄糖溶液0.1ml/10g体重。

5. 血糖测定：实验开始后，用肝素钠抗凝，采集小鼠耳缘静脉血，用血糖测定仪测定血糖浓度。

6. 数据处理：将实验数据用Excel进行统计分析，比较各组小鼠血糖浓度的差异。

五、实验结果1. 正常对照组小鼠血糖浓度为（4.5±0.5）mmol/L。

2. 胰岛素组小鼠血糖浓度为（2.1±0.3）mmol/L，与对照组相比，血糖浓度明显降低（P<0.05）。

3. 肾上腺素组小鼠血糖浓度为（6.2±0.6）mmol/L，与对照组相比，血糖浓度明显升高（P<0.05）。

六、实验结论1. 胰岛素可以降低小鼠血糖浓度，证实了胰岛素的降血糖作用。

2. 肾上腺素可以升高小鼠血糖浓度，证实了肾上腺素的升血糖作用。

小鼠nafld模型诊断标准
小鼠NAFLD模型诊断标准主要包括以下几个方面：
1. 临床症状：小鼠出现食欲不振、体重下降、腹部胀痛等临床症状。

2. 生物化学指标：血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、谷氨酰胺转肽酶（GGT）、甘油三酯（TG）、胆固醇等指标升高。

3. 病理学诊断：通过肝组织病理学检查，观察到肝细胞脂肪变性、炎症细胞浸润、肝小叶结构紊乱等病理改变。

4. 代谢综合征：小鼠出现代谢综合征相关指标异常，如高血糖、高血压、高血脂等。

综合以上几个方面的诊断标准，可以对小鼠NAFLD模型进行确诊。

需要注意的是，不同的小鼠模型可能具有不同的病理生理特征，因此在实际应用中需要根据具体情况选择适合的诊断标准和治疗方法。

同时，小鼠模型的建立和实验操作需要遵循相关的伦理规范和法律法规。

第1篇一、实验背景糖尿病是一种常见的慢性代谢性疾病，其特征是血糖水平持续高于正常值。

为了研究糖尿病的发病机制、评估治疗效果以及开发新的治疗方法，动物模型实验在糖尿病研究中扮演着重要角色。

小鼠作为常见的实验动物，其血糖评定实验是研究糖尿病的基础。

二、实验目的1. 建立稳定的小鼠糖尿病模型。

2. 评估不同治疗方法对小鼠血糖的影响。

3. 探讨糖尿病的发病机制。

三、实验材料1. 实验动物：雄性C57BL/6小鼠，体重18-22g。

2. 试剂与仪器：链脲佐菌素（STZ）、胰岛素、葡萄糖、血糖测定仪、胰岛素注射器等。

四、实验方法1. 糖尿病模型的建立：- 将小鼠随机分为对照组、模型组、胰岛素治疗组、桑叶提取液治疗组。

- 模型组：用STZ溶液（50mg/kg体重）一次性腹腔注射，建立糖尿病模型。

- 对照组：给予等量生理盐水腹腔注射。

- 胰岛素治疗组：模型建立后，给予胰岛素（0.5U/kg体重）腹腔注射，每日一次，连续7天。

- 桑叶提取液治疗组：模型建立后，给予桑叶提取液（50mg/kg体重）灌胃，每日一次，连续7天。

2. 血糖测定：- 实验开始前及实验期间，分别测定各组小鼠的空腹血糖。

- 在实验结束时，对所有小鼠进行麻醉，断头处死，采集血液，测定血糖浓度。

3. 病理学检查：- 对小鼠的肝脏、肾脏、胰腺进行病理学检查。

五、实验结果1. 血糖测定结果：- 模型组小鼠血糖水平显著高于对照组（P<0.05）。

- 胰岛素治疗组及桑叶提取液治疗组小鼠血糖水平较模型组显著降低（P<0.05）。

2. 病理学检查结果：- 模型组小鼠肝脏、肾脏、胰腺存在不同程度的病理学改变，如脂肪变性、炎症等。

- 胰岛素治疗组及桑叶提取液治疗组小鼠病理学改变较模型组明显减轻。

六、实验结论1. STZ诱导的小鼠糖尿病模型建立成功。

2. 胰岛素和桑叶提取液对糖尿病小鼠具有降低血糖的作用。

3. 胰岛素和桑叶提取液可能通过改善胰岛功能、调节血糖稳态等途径减轻糖尿病小鼠的病理学改变。

t2dm小鼠造模成功标准
T2DM是指2型糖尿病，是一种慢性代谢性疾病。

造模成功的标准可以从多个角度来考虑：
1. 生理指标，造模成功的小鼠应该表现出类似人类2型糖尿病的生理特征，包括高血糖、胰岛素抵抗、胰岛素分泌不足等。

血糖水平、胰岛素水平以及葡萄糖耐量测试等生理指标可以用来评估模型的成功程度。

2. 病理学特征，2型糖尿病通常伴随着胰岛素抵抗和胰岛素分泌不足，造模成功的小鼠模型应该呈现出胰岛素抵抗、胰岛素分泌减少以及胰岛细胞变性等病理学特征。

3. 行为学特征，2型糖尿病也会导致一系列行为学改变，如多饮、多尿、体重下降等。

观察小鼠的饮水量、尿量以及体重变化可以帮助评估模型的成功程度。

4. 对糖尿病药物的反应，成功的T2DM小鼠模型应该对已知的糖尿病药物或治疗方法表现出相似的反应，如胰岛素注射、口服降糖药物等。

总的来说，造模成功的T2DM小鼠模型应该在生理、病理和行为学特征上都能够反映出2型糖尿病的特点，并且对治疗药物表现出一定的相似性。

这些因素综合起来可以用来评估T2DM小鼠模型的成功程度。

国际大鼠糖尿病诊断标准
国际上对于大鼠糖尿病的诊断通常使用的是血糖水平来进行评估。

大鼠糖尿病的诊断标准可能会有所不同，但常见的一种标准是依据空腹血糖浓度。

以下是一般性的大鼠糖尿病的诊断标准：
1.正常：空腹血糖水平在3.3至6.1毫摩尔/升（mmol/L）
范围内被认为是正常。

2.糖尿病前期（糖尿病前阶段）：空腹血糖水平在6.2至
6.9 mmol/L之间，表示可能存在糖尿病前期状态，有患糖尿病
的风险。

3.糖尿病：空腹血糖水平在7.0 mmol/L及以上则被诊断
为糖尿病。

需要注意的是，这只是一种通用的参考标准，具体的标准可能会因研究、实验室和医疗机构的不同而有所调整。

此外，在进行实验或研究时，还可能根据特定的实验设计和研究目的对糖尿病的定义和诊断标准进行进一步的调整。

在实际应用中，建议参考相关的实验室方法和研究文献以获取最新和具体的诊断标准。

什么是NOD小鼠？NOD小鼠详细介绍裸鼠和SCID小鼠无疑是最知名的两种先天性突变免疫缺陷小鼠。

但在人源化小鼠模型广泛使用的当下，常用的免疫缺陷小鼠如NSG、NOG、NRG和B-NDG®等都是以NOD小鼠为背景品系培育而成的。

为更好地了解这些人源化小鼠模型，就有必要先了解和掌握NOD小鼠的特性。

故本篇将给读者朋友们介绍一下NOD小鼠的主要生物学特性和其曲折的培育史。

生物学特性NOD是Non Obese Diabetes的首字母简写，中文意思为非肥胖糖尿病，NOD小鼠即为非肥胖糖尿病小鼠的简称。

常见的糖尿病主要分两种类型，其中I型糖尿病是一种因遗传易感导致患病个体胰腺中产生胰岛素的β细胞受自身免疫攻击破坏而致功能丧失，无法分泌胰岛素而形成的疾病。

NOD小鼠就是一款自发I型糖尿病模型，其培育成功不仅为研究自身免疫性糖尿病和胰岛细胞损伤提供了不可替代的模型工具，同时也促进了I型糖尿病早发现、预防和治疗的进展。

NOD/ShiLtJ小鼠，图片来自Jackson网站NOD小鼠的糖尿病表型包括：具有糖尿病特征性胰岛炎（胰岛被白细胞浸润所致），胰岛β细胞选择性破坏，雌性小鼠12周龄左右胰腺胰岛素含量显著下降（雄性则会晚几周发生），形成低胰岛素血症和高血糖血症。

值得注意的是，NOD小鼠在糖尿病发病率上存在性别差异，雌性小鼠发病早，发病率高，30周龄时的发病率为90-100％；而雄性NOD小鼠到30-40周龄时的发病率也只有40-60％。

NOD小鼠培育简图曲折的培育史NOD小鼠是少有的一个在美国之外培育成功的自发突变实验动物模型。

上个世纪70年代，位于日本大阪市的盐野义（Shionogi）制药公司着手开发和培育胰岛素依赖型糖尿病啮齿类动物模型的工作，并成立了项目团队。

此前，在公司位于Abrahi实验动物中心工作的大藤博史（Hiroshi Ohtori）博士正利用来自日本实验动物供应商Nihon CLEA株式会社的ICR（Jcl：ICR）小鼠开展自发白内障品系的培育工作。

一文掌握“小鼠葡萄糖代谢”相关试验要点肥胖是造成代谢紊乱如「胰岛素抵抗」的常见危险因素，对于肥胖的研究，最常见的动物模型就是 60% 高脂饮食诱导 C57BL/6J 小鼠肥胖，此模型与临床肥胖症的病理相似，稳定性好，10 周左右就可以看到明显的表型。

表型出现后，除了测量体重之外，更需要衡量的就是体内胰岛素抵抗水平和葡萄糖耐量，通俗来说就是机体对葡萄糖分解代谢的能力，这个时候我们可以外源性地给小鼠葡萄糖后来监测一定时间段内的血糖情况，也就是葡萄糖耐量检测，如果是通过口服给予葡萄糖，就是口服糖耐量试验（「oral glucose tolerance test」）简称为：「OGTT」；如果是通过腹腔注射来给予葡萄糖，就是经腹腔注射葡萄糖耐量检测（「intraperitoneal glucose tolerance test」）简称为「IPGTT」如果葡萄糖耐量降低，机体消耗葡萄糖的能力下降，在外源给予葡萄糖之后，血糖相对迅速上升而下降缓慢。

在临床上，这个实验也十分普遍，当然，临床中是通过口服葡萄糖来实现的，这个试验也是临床诊断糖尿病的金标准。

相反地，如果外源给予胰岛素，检测特定时间段内的血糖水平，就是胰岛素耐量实验（「insulin tolerance test, insulin-induced hypoglycemia test」）简称为「ITT」, 而外源性胰岛素的给予方式，是通过腹腔注射来实现的；如果出现了胰岛素不敏感，在注射胰岛素之后，血糖相对下降缓慢而上升较快。

总之，OGTT 和ITT 是两个评价代谢状态的经典实验，两者分别评估了葡萄糖耐量和胰岛素抵抗的情况，如果葡萄糖是经过腹腔给予的，那么就是 IPGTT 试验，本质上和 OGTT 是一样的。

理清了 OGTT 和 ITT 的基本概念之后，我们分别看看两者是具体怎么实现的首先我们来了解一下 OGTT 试验如何实施。

大体上来讲，小鼠的 OGTT 试验就是在小鼠空腹 12-16 小时后给予适量水平的葡萄糖后，选择6 个常规时间点监测血糖的过程。

测量小鼠血糖实验报告实验目的本实验旨在测量小鼠的血糖水平，并观察不同因素对血糖的影响，以深入了解小鼠的血糖调节机制，为糖尿病等相关疾病的研究提供参考依据。

实验材料与方法材料1. 小鼠（品种：C57BL/6）2. 血糖测量仪器（例如：Accu-Chek Aviva）3. 血糖试剂盒4. 采血针和注射器5. 药物或食物处理组（任选）6. 维持小鼠舒适的住宿条件方法1. 实验前准备：将小鼠随机分成多个组别（例如：对照组、实验组），并为每组标记编号。

保持小鼠在相对一致的环境条件下生活一段时间，以稳定其血糖水平。

2. 实验操作：- 空腹状态下测量基础血糖水平：将小鼠置于采血钵中，使用采血针从小鼠尾部获得足够的血液样品。

将血液滴于试剂盒中，并使用血糖测量仪器测量血糖水平。

- 给予处理：根据实验设计，对实验组进行处理，例如注射胰岛素或葡萄糖溶液等。

对照组不给予任何处理。

- 不同时间点的血糖测量：根据预设时间点（例如：5分钟、15分钟、30分钟、1小时等），分别获取小鼠血液样品进行血糖测量。

3. 数据处理与分析：将实验所得的血糖数据进行整理，计算平均值和标准差，并使用统计学方法进行数据分析，比较不同处理组之间的差异。

4. 结果与讨论：根据数据分析结果，讨论不同处理组的血糖水平差异，并寻找可能的原因和机制。

实验结果以下为实验室分析得到的部分实验结果：时间（分钟）对照组血糖水平（mmol/L）实验组血糖水平（mmol/L）- -0 6.4 6.25 7.1 7.515 7.4 6.930 6.8 6.560 6.5 5.9根据实验数据，可以看出实验组在不同时间点的血糖水平略低于对照组，但差异不明显。

结果分析与讨论通过对实验结果的分析与讨论，我们初步推测实验组中的处理并未对小鼠的血糖水平产生显著影响。

可能的原因包括使用的药物剂量不够，处理时间过短或对小鼠个体差异的影响等。

有待进一步实验的方向包括：1. 调整药物剂量：适当调整药物剂量，观察对小鼠血糖的影响。

二型糖尿病小鼠是什么？二型糖尿病小鼠详细介绍二型糖尿病小鼠原理（C57BL/KsJ）是Leptin受体点突变导致leptin信号通路障碍，从而导致小鼠出现肥胖、胰岛素抵抗、高血糖、脂肪肝等症状。

出生后6周即可出现明显的肥胖和空腹血糖增加，饮水量、尿量增加，8-12周时最明显，并可出现糖尿病肾病等并发症。

二型糖尿病小鼠通常以db/m小鼠作为实验的对照组。

长期供应二型糖尿病小鼠（BKS背景）和对应的db/m小鼠。

二型糖尿病小鼠品系：BKS.Cg-Dock7m +/+ Leprdb 背景：C57BLKS/J 对照：同群体杂合型小鼠或C57BLKS二型糖尿病小鼠（diabetes mouse）由C57BL/KsJ近亲交配株常染色体隐性遗传衍化而来，属Ⅱ型糖尿病模型。

动物在一个月时开始贪食及发胖，继而产生高血糖、高血胰岛素,胰高血糖素也升高。

小鼠一般在10个月内死亡。

（C57BL/6Jdb/db）发生严重的糖尿病症状，类似C57BL/KsJ ob/ob小鼠，即早发的高胰岛素血症，体重下降和早死。

二型糖尿病小鼠与ob/ob小鼠不同，可发生明显的肾病。

二型糖尿病小鼠（BKS背景）——肥胖、2型糖尿病、脂肪肝研究模型二型糖尿病小鼠（C57BL/KsJ）小鼠是Leptin受体点突变导致leptin信号通路障碍，从而导致小鼠出现肥胖、胰岛素抵抗、高血糖、脂肪肝等症状。

二型糖尿病小鼠出生后6周即可出现明显的肥胖和空腹血糖增加，饮水量、尿量增加，8-12周时最明显，并可出现糖尿病肾病等并发症。

二型糖尿病小鼠通常以db/m小鼠作为实验的对照组。

二型糖尿病小鼠遗传背景①起源：1966年发现db突变基因,它是由单隐性突变基因引起，自发于Jackson实验室的近交系小鼠(C57BL/Ks)。

②鼠毛色及毛色基因：黑色，aa、BB、CC、DD。

③小鼠组织相容性基因：H-2d, H-1(no a or c), H-3a。

二型糖尿病小鼠生理特点1. 平均产仔数4-6只，仔鼠存活率98%，包括二型糖尿病小鼠、db/m小鼠和m/m小鼠。

糖尿病的小鼠模型研究糖尿病是一种常见的慢性代谢性疾病，严重威胁人类健康。

为了深入研究糖尿病的发病机制以及开发新的治疗策略，科学家们利用动物模型开展研究。

其中，小鼠模型是最常用的糖尿病模型之一。

本文将详细介绍小鼠模型在糖尿病研究中的应用及其优势。

1. 小鼠模型的选择在选择小鼠模型时，科学家们通常考虑以下几个因素：疾病的类型、模型的复杂程度、实验要求、成本和伦理问题等。

针对糖尿病研究，常用的小鼠模型有高脂饮食诱导模型、化学诱导模型、遗传缺陷模型和转基因模型等。

2. 高脂饮食诱导模型高脂饮食诱导模型是最简单的糖尿病模型之一。

通过给小鼠长期饲喂高脂饮食，可以使其体重增加、血糖升高，最终发展为糖尿病。

这种模型具有操作简便、费用低廉的优势，但模型的可靠性和稳定性相对较差。

3. 化学诱导模型化学诱导模型是通过给小鼠注射特定化学物质来诱发糖尿病。

常用的化学诱导剂有链脲佐菌素（STZ）和胰岛素受体拮抗剂（例如STZ 和高脂饮食结合使用）等。

化学诱导模型具有可重复性好、模型特异性强的特点，但是副作用较大，如STZ会造成胃肠道反应和免疫系统激活等。

4. 遗传缺陷模型遗传缺陷模型是指使用遗传工程方法改变小鼠基因组，使其表达异常或突变基因而导致糖尿病。

例如，欧洲裂腹野鼠模型（db/db）是一种常用的糖尿病模型，它具有胰岛素受体突变导致胰岛素抵抗的特点。

遗传缺陷模型具有可重复性好、模型特异性强的优势，但制备过程较为繁琐且成本较高。

5. 转基因模型转基因模型是将人类糖尿病相关基因或突变基因导入小鼠基因组，使其表达异常或过度表达，从而模拟人类糖尿病的发生过程。

转基因模型的优势在于可以模拟人类疾病更真实地进行研究，但模型的制备和维护较为困难。

6. 小鼠模型的应用小鼠模型在糖尿病研究中被广泛应用。

利用小鼠模型可以深入研究糖尿病的发病机制，如胰岛功能障碍、胰岛素抵抗、胰岛素分泌异常等。

同时，小鼠模型还可以用于评估新药的疗效和毒副作用，为糖尿病的治疗策略研发提供重要依据。

dbdb小鼠的实验室应用dbdb小鼠是一种具有肥胖和糖尿病特征的动物模型，其在实验室中被广泛用于研究糖尿病和肥胖相关的病理生理机制，以及评估药物和治疗方法的效果。

本文将介绍dbdb小鼠在实验室中的应用。

在实验室中，dbdb小鼠被用于研究糖尿病和肥胖的病理生理机制，以及药物和治疗方法的效果。

这些研究通常涉及对小鼠的饮食、体重、血糖、胰岛素水平等指标的监测和调控。

通过使用dbdb小鼠作为实验对象，科学家们可以更深入地了解糖尿病和肥胖的发病机制，为开发新的药物和治疗方法提供理论支持和实践指导。

dbdb小鼠作为实验对象的优势在于其具有肥胖和糖尿病的特征，可以很好地模拟人类糖尿病和肥胖患者的病理生理过程。

同时，dbdb小鼠的基因型和表现型相对稳定，可以保证实验结果的可比性和可重复性。

由于dbdb小鼠是成倍肥胖，可以在较短时间内观察到明显的实验效果，从而提高实验的效率。

使用dbdb小鼠进行实验的方法包括但不限于以下几种：给药实验、基因敲除或过表达、饮食干预等。

其中，给药实验是最常用的方法之一，通过给予药物或化合物，观察对小鼠体重、血糖、胰岛素水平等指标的影响，从而评估药物或化合物的疗效和安全性。

基因敲除或过表达方法则通过改变小鼠的基因型，研究基因对糖尿病和肥胖的影响。

饮食干预则通过控制小鼠的饮食成分和摄入量，研究饮食习惯对糖尿病和肥胖的影响。

通过使用dbdb小鼠进行的实验，科学家们发现了很多糖尿病和肥胖相关的病理生理机制和治疗靶点。

例如，研究发现dbdb小鼠的脂肪组织中存在炎症反应和细胞因子异常分泌，这些因素可能是导致肥胖和糖尿病的关键因素。

通过对dbdb小鼠进行药物或饮食干预实验，科学家们发现了一些可以有效控制血糖和改善肥胖症状的药物和治疗方法，为临床实践提供了重要的参考依据。

dbdb小鼠作为一种重要的动物模型在实验室中被广泛应用于研究糖尿病和肥胖相关的病理生理机制及药物和治疗方法的效果。

通过这些研究，科学家们可以更深入地了解糖尿病和肥胖的发病机制，为开发新的药物和治疗方法提供理论支持和实践指导。

ob小鼠基础参数OB小鼠基础参数OB小鼠是一种常用的实验动物模型，主要用于研究肥胖症及相关代谢疾病。

OB小鼠是指由于基因突变而导致体重显著增加的小鼠。

下面将介绍OB小鼠的基础参数。

1. 年龄：OB小鼠在实验室中常用的年龄范围为8-12周。

这个年龄段的小鼠已经成熟，体重稳定，适合进行各种实验。

2. 体重：OB小鼠的体重明显高于正常小鼠。

一般来说，OB小鼠的体重可以达到正常小鼠的两倍甚至更多。

这是由于OB小鼠的基因突变导致能量代谢紊乱，脂肪积累过多所致。

3. 食量：OB小鼠的食量明显增加。

由于脑中摄食中枢的异常，OB 小鼠往往没有饱腹感，导致持续进食，从而导致体重增加。

4. 脂肪含量：OB小鼠的脂肪含量显著增加。

这是由于基因突变导致脂肪合成和分解失衡，脂肪无法正常分解和代谢，从而导致脂肪积累。

5. 血糖水平：OB小鼠的血糖水平通常较高。

由于胰岛素抵抗和胰岛素分泌异常，OB小鼠的血糖无法得到有效控制，导致血糖升高。

6. 胆固醇水平：OB小鼠的胆固醇水平也常常升高。

胆固醇是脂质代谢的重要指标，OB小鼠的胆固醇水平升高与其脂肪代谢紊乱有关。

7. 运动能力：OB小鼠的运动能力较差。

由于体重过重和能量代谢紊乱，OB小鼠常常无法进行正常的运动，从而导致肌肉力量下降。

8. 血压：OB小鼠的血压水平通常较高。

由于肥胖和代谢紊乱，OB 小鼠的血管功能受损，导致血压升高。

9. 心脏功能：OB小鼠的心脏功能常常受损。

由于肥胖和代谢紊乱，OB小鼠的心脏承受较大负荷，容易出现心肌肥厚和心功能不全等问题。

10. 骨密度：OB小鼠的骨密度常常降低。

由于肥胖和代谢紊乱，OB 小鼠的骨质疏松风险增加，容易发生骨折。

OB小鼠是一种体重明显增加的实验动物模型，其基础参数包括年龄、体重、食量、脂肪含量、血糖水平、胆固醇水平、运动能力、血压、心脏功能和骨密度等。

研究这些参数可以帮助我们更好地理解肥胖症及其相关代谢疾病的发生机制，为疾病的预防和治疗提供理论基础。

糖耐量测定
在第8次免疫后即10。

3号，测定给药组和对照组小鼠的葡萄糖耐量情况。

每组取6只小鼠，每只小鼠的血糖值在本组平均血糖值附近.小鼠禁食不禁水16h 后，每只小鼠腹腔注射剂量为2g/Kg的葡萄糖溶液.葡萄糖溶液的浓度为400mg/mL，体重20g的小鼠注射剂量为0.1mL.注射葡萄糖后0min，15min，30min，60min，120min采用尾静脉取血的方式测定小鼠的血糖值。

并在注射完葡萄糖后15min时取血,测定血清胰岛素水平。

血清胰岛素水平检测
血清胰岛素水平的测定采用ELISA方法。

样本为糖耐量实验中腹腔注射葡萄糖15min时的各组小鼠血清。

具体的实验步骤按照试剂盒说明书进行，大致的操作流程如下：1、每孔加入50μL标准品，或者5倍稀释的血清。

2、每孔加入100μL 酶标二抗,保鲜膜缠绕后37℃孵育60min。

3、Wash solution满孔洗板4次。

4、每孔加入50μL底物A 和50μL底物B，轻轻混匀,37℃避光孵育15min。

5、每孔加入50μL终止液(2mol/L H2SO4）(颜色由蓝变黄)
6、15min内在450nm波长处测定OD值。

7、通过标准曲线计算样品insulin水平。