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温度、pH、激活剂与抑制剂对酶促作用的影响【目的】通过本实验，观察影响酶促作用的一些因素。
【原理】唾液淀粉酶可催化淀粉逐步水解，生成分子大小不同的糊精及最后水解成麦芽糖。
淀粉及糊精遇碘各呈不同的颜色反应。
直链淀粉(即可溶性淀粉)遇碘呈蓝色，糊精按分子的大小遇碘可呈蓝色、紫色，睛褐色和红色。
最小的糊精和麦芽糖遇碘不显色。
根据颜色反应，可以了解淀粉被水解的程度。
由于在不同温度、不同酸碱度下，唾液淀粉酶的活性高低不同，所以淀粉被水解的程度也不一样。
另外，有些物质可作为激活剂，能提高酶活性，有些物质可作为抑制剂，能降低酶活性，也能影响淀粉被水解的程度。
因此、通过与碘产生的颜色反应判断淀粉被水解的程度，了解温度、pH，激活剂和抑制剂对酶促作用的影响。
【试剂】1、1％淀粉溶液配制取可溶性淀粉1克，加5毫升蒸馏水，调成糊状，再加蒸馏水80毫升，加热，使其溶解，最后用蒸馏水稀释至100毫升。
2、稀释唾液制备将痰咳尽，用水漱口，再含蒸馏水30毫升，作咀嚼运动，2分钟后吐入烧杯中，再用滤纸过滤后待用。
3、不同PH缓冲液（1）PH6.8缓冲液用0.2M磷酸二氢钠溶液772毫升，0.1M柠檬酸溶液485亳升，混合即得。
（2）pH5.0缓冲液取0.2M磷酸氢二钠溶液515毫升，0.1M柠檬酸溶液485毫升，混合即成。
（3）pH8.0缓冲液取0.2M磷酸氢二钠溶液972毫升，0.1M柠檬酸溶液28毫升，混合即成。
4、0.9％NaCl溶液。
5、0.1％CuSO4溶液。
6、0.1％Na2SO4溶液。
【器材】10×100毫米试管、恒温水浴、沸水浴、水浴、蜡笔。
【操作】一、温度对酶促作用的影响1、取试管三支，用蜡笔编号，每管各加入pH6.8缓冲液20滴，1％淀粉10滴。
2、将第一管放入37℃恒温水浴，将第二管放入沸水浴，将第三管放入冰浴。
3、放置5分钟后，分别向各管加入稀唾液5滴，再放回原处。
4、10分钟后，分别向各管滴加碘液1滴，观察三管中颜色的区别，说明温度对酶促作用的影响。
激活剂和抑制剂对酶活性影响实验报告
影响酶作用的因素：影响酶促反应的因素常有酶的浓度、底物浓度、pH值、温度、抑制剂、激活剂等。
其变化规律有以下特点：
1、酶浓度对酶促反应的影响：在底物足够，其它条件固定的条件下，反应系统中不含有抑制酶活性的物质及其它不利于酶发挥作用的因素时，酶促反应的速度与酶浓度成正比。
2、底物浓度对酶促反应的影响：在底物浓度较低时，反应速度随底物浓度增加而加快，反应速度与底物浓度近乎成正比，在底物浓度较高时，底物浓度增加，反应速度也随之加快，但不显著，当底物浓度很大且达到一定限度时，反应速度就达到一个最大值，此时即使再增加底物浓度，反应也几乎不再改变。
3、酶的活性受激活剂或抑制剂的影响。
氯离子为唾液淀粉酶的激活剂，铜离子为其抑制剂，激活剂使酶的活性升高，抑制剂使酶活性降低。
注意事项：
激活剂和抑制剂对于酶活性的影响，常常分不清激活剂，因为加入蒸馏水、NaCl、Na2SO4这3支试管的颜色一致，都是黄色。
出现这种现象的原因是酶活性太高了，需要稀释唾液，唾液稀释至加入蒸馏水的试管呈浅红色即可。
这样一来，这3支试管的颜色分别是浅红、黄、浅红，就可以断定Cl-是激活剂。
偶尔也有分不清抑制剂的就是加入蒸馏水、CuSO4、
Na2SO4这三支试管的颜色一致，都是蓝色。
因为酶活性太低，需要提高酶活性，只要重新制备唾液淀粉酶就行（但是新酶的活性不可太高，否则又分不清激活剂）。
最后3支试管的颜色应该是浅红、蓝、浅红，可以断定Cu2+是抑制剂。
生物化学实验预习报告实验二酶活力测定方法的研究（1）―淀粉酶活性的研究一、研究背景酶即由活细胞产生的一类有催化活性的生物大分子，大多数由蛋白质组成（少数为RNA），它是细胞赖以生存的基础，细胞新陈代谢包括的所有化学反应几乎都是在酶的催化下进行的。
酶的催化具有高效性、专一性、可调节性以及需要温和的条件。
酶的催化活性受外界条件的影响，如温度、pH、离子强度、激活剂、抑制剂等均会使酶活性发生改变。
另外，酶在工业生产及生活中应用广泛，如酱油、食醋以及酿酒工业都需要酶的参与，洗衣粉加入酶增强去污能力等。
酶活性的测定具有较强的实际意义，例如某些酶活性的变化可以引起特定的疾病，测定这些酶的活性可以作为疾病诊断的一个依据。
淀粉酶是水解淀粉糖昔键的一类酶的总称，按照其水解淀粉的方式，可以分为a-淀粉酶与B-淀粉酶等。
休眠的种子中只有B-淀粉酶存在，而a-淀粉酶在种子萌发过程中才形成。
测定淀粉酶的活性具有重要的意义，淀粉酶普遍存在于植物体内，特别是萌发后的禾谷类种子淀粉酶活性最强，其活性高低可以衡量种子萌发速率，也可以作为水稻抗逆性的生化指标（如干旱、盐、重金属胁迫）。
本实验中我们通过学习经典的淀粉酶活力测定方法，分析具体的实验细节，从而获取酶活力测定的相关理念。
二、研究目标1.掌握酶活力测定的一般思路与方法；2.进一步熟练使用分光光度法测定物质浓度；3.测定a-淀粉酶与0-淀粉酶的活性；4.体会并掌握实验细节的设计与分析方法。
三、研究策略两种淀粉酶的特性有所不同，a-淀粉酶不耐酸，在pH3.6以下迅速钝化；0-淀粉酶不耐热，在70c15min钝化。
根据它们的这种特性，在测定活力时钝化其中之一，就可测出另一种淀粉酶的活力。
本实验采用加热的方法钝化0-淀粉酶，测出a-淀粉酶的活力（原因分析见思考题6）。
在非钝化条件下测定淀粉酶总活力（a-淀粉酶活力+0-淀粉酶活力），再减去a-淀粉酶的活力，就可求出0-淀粉酶的活力。
一、实验目的1. 了解酶活性测定的基本原理和方法。
2. 探究温度、pH值、底物浓度、酶浓度以及抑制剂和激活剂对酶活性的影响。
二、实验原理酶是一种生物催化剂，具有高效、专一和可调节的特性。
酶活性是指酶催化反应的能力，通常用酶活力单位（U）表示。
在一定条件下，酶活力与反应速率成正比，即反应速率越快，酶活力越高。
本实验采用比色法测定酶活性。
在酶催化反应中，底物被转化为产物，同时产生一定量的有色物质。
通过测定有色物质的吸光度，可以计算出酶活力。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 酶：淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶等。
- 底物：淀粉、蛋白质、脂肪等。
- 抑制剂：碘化钠、氟化钠、氯化钠等。
- 激活剂：硫酸铵、氯化钙等。
- pH缓冲液：磷酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液等。
2. 实验仪器：- 紫外-可见分光光度计- 恒温水浴锅- 移液器- 试管- 试管架- 秒表四、实验方法1. 酶活力测定：- 将酶和底物混合，置于恒温水浴锅中。
- 在一定时间内，每隔一段时间取出一定体积的反应液，用紫外-可见分光光度计测定吸光度。
- 根据吸光度计算酶活力。
2. 温度对酶活性的影响：- 将酶和底物混合，分别置于不同温度的水浴锅中。
- 在一定时间内，每隔一段时间取出一定体积的反应液，用紫外-可见分光光度计测定吸光度。
- 分析不同温度下酶活性的变化。
3. pH值对酶活性的影响：- 将酶和底物混合，分别置于不同pH值的缓冲液中。
- 在一定时间内，每隔一段时间取出一定体积的反应液，用紫外-可见分光光度计测定吸光度。
- 分析不同pH值下酶活性的变化。
4. 底物浓度对酶活性的影响：- 将酶和不同浓度的底物混合，置于恒温水浴锅中。
- 在一定时间内，每隔一段时间取出一定体积的反应液，用紫外-可见分光光度计测定吸光度。
- 分析不同底物浓度下酶活性的变化。
5. 酶浓度对酶活性的影响：- 将不同浓度的酶与底物混合，置于恒温水浴锅中。
- 在一定时间内，每隔一段时间取出一定体积的反应液，用紫外-可见分光光度计测定吸光度。
探究温度和ph对酶活性的影响实验原理酶是一类生物催化剂，能够促进生物体内各种化学反应的进行。
酶活性受温度和pH值的影响较大，下面将详细介绍温度和pH对酶活性的影响以及相关的实验原理。
一、温度对酶活性的影响：温度是酶活性的主要调节因素之一，不同的酶对温度的适应范围有所不同。
总体来说，酶活性随温度的升高而增加，直到达到最适温度，之后随温度的继续升高而降低。
这是因为温度的升高会增加酶分子的热运动，使酶与底物之间的碰撞频率增加，反应速率加快。
但是当温度继续升高时，高温会破坏酶分子的结构，使其三维构型发生变化，导致酶活性降低甚至完全失活。
1. 最适温度：每种酶都有一个最适温度，在这个温度下酶的活性最高。
超过最适温度后，酶活性会明显下降。
最适温度的差异可以理解为，不同酶所适应的环境温度较为不同。
2. 温度对酶催化速率的影响：根据酶的速率理论，酶的催化速率与温度呈正相关关系。
根据阿伦尼乌斯方程，酶催化速率与温度关系的表达式为：R = k * [E] * [S]其中，R为反应速率，k为酶的速率常数，[E]为酶的浓度，[S]为底物的浓度。
可见，反应速率与酶浓度和底物浓度成正比。
通过实验可以发现，在一定范围内，温度升高会使酶分子的活动性增加，从而增加酶的浓度。
此外，随着温度的升高，底物分子也会增加热运动，提高碰撞的频率，增加有效碰撞的几率。
因此，温度升高会促进底物分子与酶分子之间的反应速率。
3. 酶催化速率与温度的关系曲线：实验中常通过测定不同温度下酶活性的变化，绘制出酶活性与温度的关系曲线。
这个曲线呈现典型的单峰曲线，如下图所示：图1 酶活性与温度关系曲线从图中可以看出，在低温下，酶活性较低，反应速率较慢；温度逐渐升高，酶活性不断增加，达到最适温度时达到最大值；超过最适温度后，酶活性开始下降并最终失活。
根据这个曲线可以确定酶的最适温度和温度范围。
二、pH对酶活性的影响：除了温度，pH也是酶活性的重要调节因素。
酶对pH值的适应范围是有限的，超过一定的pH范围后，酶的活性会显著下降。
温度、pH、激活剂、抑制剂对酶活性的影响（间接碘量法）（effects of temperature pH activitor and inhibitor to activity of enzyme）一、目的1.了解温度、pH、激活剂、抑制剂对酶活性的影响2.学习酶活性的判定二、原理酶活性大小可以用反应速度来表示，即在单位时间内，酶所催化底物的消耗量或产物的生成量来衡量。
酶活性大，反应速度就快。
反之则慢。
酶促反应速度受多种因素的影响。
如温度、pH、激活剂、抑制剂等。
本实验是观察在不同温度，pH，以及缺乏激活剂或有抑制剂的条件下唾液淀粉酶的活性大小。
借以验证各种因素对酶活性的影响。
唾液中含有唾液淀粉酶，此酶可以使淀粉逐步水解，最后生成麦芽糖。
麦芽糖具有还原性。
根据淀粉被唾液淀粉酶水解后产物的生成量（即还原性麦芽糖的多少）判定酶活性的大小。
用碘的反滴定法测定还原物的量，还原物多，酶活性大。
具体反应如下：1、试剂成分（S、H、S试剂）：CuSO4、Na2CO3、NaHCO3、KI、KIO3、酒石酸钾钠、草酸钾。
2、判定酶活性大小的化学反应过程：Na2CO3＋2H2O —→2NaOH ＋ H2CO3CuSO4＋2NaOH —→Cu(OH)2↓＋ Na2SO45KI ＋KIO3 ＋ 3H2SO4—→3I2＋3K2SO4 ＋3H2O酶淀粉———→麦芽糖麦芽糖＋Cu++—→麦芽糖氧化产物＋Cu+ Cu+＋ I2—→Cu++ ＋ 2I-COO- 草酸钾COO-Cu++＋|—————→| >CuCOO- 防止逆反应COO-剩余I2 ＋ Na2S2O3—→2I- ＋ Na2S4O6（与淀粉呈兰色) （与淀粉无色)3、判定酶活性大小的标志酶活性大→麦芽糖多→Cu+ 生成量多→I2消耗量多→剩余I2少→Na2S2O3消耗量少酶活性越大，Na2S2O3消耗量越少。
空白实验无酶活性，因此Na2S2O3消耗量最多。
与空白实验进行对比，差值越大，说明此条件下酶活性越大。
一、实验目的1. 了解酶的催化作用及其特性。
2. 掌握酶的专一性、温度、pH值、激活剂和抑制剂对酶活力的影响。
3. 学会使用实验方法检测酶的活性。
二、实验原理酶是一种具有催化功能的蛋白质，它能够加速生物体内的化学反应。
酶的催化作用具有以下特性：1. 专一性：酶对底物具有高度选择性，只催化特定的反应。
2. 温度依赖性：酶的活性随温度变化而变化，在一定温度范围内酶活性较高。
3. pH值依赖性：酶的活性受pH值影响，最适pH值下酶活性最高。
4. 激活剂和抑制剂：激活剂能够提高酶的活性，抑制剂则降低酶的活性。
本实验通过观察酶的专一性、温度、pH值、激活剂和抑制剂对酶活力的影响，进一步了解酶的特性。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 唾液淀粉酶- 淀粉溶液- 蔗糖溶液- 碘液- 班氏试剂- 恒温水浴- 试管- 试管架- 滴管2. 实验仪器：- 电子天平- 烧杯- 移液器- 比色计四、实验方法1. 酶的专一性实验- 将淀粉溶液和蔗糖溶液分别加入试管中，分别加入唾液淀粉酶，观察淀粉溶液变蓝的时间。
- 加入碘液，观察蔗糖溶液是否变蓝。
2. 温度对酶活力的影响实验- 将淀粉溶液和唾液淀粉酶分别加入试管中，分别放入不同温度的水浴中，观察酶活性随温度变化的情况。
3. pH值对酶活力的影响实验- 将淀粉溶液和唾液淀粉酶分别加入试管中，分别加入不同pH值的缓冲液，观察酶活性随pH值变化的情况。
4. 激活剂和抑制剂对酶活力的影响实验- 在淀粉溶液中加入激活剂和抑制剂，观察酶活性随激活剂和抑制剂加入量的变化。
五、实验结果与分析1. 酶的专一性实验- 淀粉溶液加入唾液淀粉酶后，变蓝时间明显缩短，说明唾液淀粉酶对淀粉具有催化作用。
- 蔗糖溶液加入唾液淀粉酶后，未观察到变蓝现象，说明唾液淀粉酶对蔗糖无催化作用。
2. 温度对酶活力的影响实验- 随着温度的升高，酶活性逐渐增强，在40℃时酶活性达到最高。
- 温度超过40℃后，酶活性开始下降，说明高温抑制了酶的活性。
实验二温度、pH、激活剂和抑制剂对酶活性的影响温度、p H 对酶活性的影响一、实验目的了解温度对酶活性的影响。
了解酶活性的最适pH 及掌握种检测最适pH 的方法。
二、实验原理（请同学们自已补充）三、实验步骤1、温度对酶活性的影响取 3 支试管，编号后按下表加入试剂试管编号试剂1230.2%淀粉溶液（d） 1.5 1.5 1.5稀释唾液/ml11无煮沸过的稀释唾液/ml无无1摇匀后，将1、3号两试管放入37摄氏度恒温水浴中，2号试管放入冰水中。
10min 后取出，将 2 号试管内的液体分为两半，用碘化钾-碘溶液来检验1、2、3 号试管内淀粉被唾液淀粉酶水解的程度。
将 2 号试管剩下的一半溶液放入37摄氏度水浴中继续保温10min 后，再用碘液检验，结果如何？记录并解释结果。
注意事项：唾液制备时，先用蒸馏水漱口，以清除食物残渣，再含一小口蒸馏水，0.5~1min 后，使其流入量筒，并稀释到50ml。
2、pH对酶活性的影响取 4 个标有号码的20ml 试管。
用吸管按下表添加0.2mol/L 磷酸氢二钠溶液和0.1mol/L 柠檬酸溶液以制备pH=5.0~8.0 的 4 种缓冲液试管编号试剂12345.16.07.79.70.2mol/L 磷酸氢二钠/ml55224.8 3.9 2.20.20.1mol/L 柠檬酸/ml5588pH5 5.8 6.88从 4 个试管中各取缓3ml，分别注入 4 支带有号码的试管中，每个试管中添加0.5%淀粉溶液2ml 和稀释唾液2ml。
向各试管中加入稀释唾液的时间间隔分别为1min。
将各试管内容物混匀，并依次置于37 摄氏度恒温水浴中保温。
第 4 管加入唾液2min 后，每隔1min 由第 2 管取出一滴混合液，置于白瓷板上，加 1 滴碘化钾-碘溶液，检验淀粉的水解程度。
待混合液变为棕黄色时，向所有试管中依次添加1或2滴碘化钾-碘溶液。
添加碘化钾-碘溶液的时间间隔从第 1 管起，均为1min。
实验二温度、pH、激活剂和抑制剂对酶活性的影响
温度、p H对酶活性的影响
一、实验目的
了解温度对酶活性的影响。
了解酶活性的最适pH及掌握一种检测最适pH的方法。
二、实验原理（请同学们自已补充）
三、实验步骤
1、温度对酶活性的影响
取3支试管，编号后按下表加入试剂
试管编号
试剂
1 2 3
0.2%淀粉溶液（d） 1.5 1.5 1.5
稀释唾液/ml 1 1 无
煮沸过的稀释唾液/ml 无无 1
摇匀后，将1、3号两试管放入37摄氏度恒温水浴中，2号试管放入冰水中。
10min后取出，将2号试管内的液体分为两半，用碘化钾-碘溶液来检验1、2、3
号试管内淀粉被唾液淀粉酶水解的程度。
将2号试管剩下的一半溶液放入37摄氏度水浴中继续保温10min后，再用碘液检验，结果如何？记录并解释结果。
注意事项：
唾液制备时，先用蒸馏水漱口，以清除食物残渣，再含一小口蒸馏水，0.5~1min后，使其流入量筒，并稀释到50ml。
2、pH对酶活性的影响
取4个标有号码的20ml试管。
用吸管按下表添加0.2mol/L磷酸氢二钠溶液和0.1mol/L柠檬酸溶液以制备pH=5.0~8.0的4种缓冲液。
试剂
试管编号
1 2 3 4
0.2mol/L磷酸氢二钠/ml 5.1
5
6.0
5
7.7
2
9.7
2
0.1mol/L柠檬酸/ml 4.8
5
3.9
5
2.2
8
0.2
8
pH 5 5.8 6.8 8 从4个试管中各取缓冲液3ml，分别注入到4支带有号码的试管中，随后于每个试管中添加0.5%淀粉溶液2ml和稀释唾液2ml。
向各试管中加入稀释唾液的时间间隔分别为1min。
将各试管内容物混匀，并依次置于37摄氏度恒温水浴中保温。
第4管加入唾液2min后，每隔1min由第2管取出一滴混合液，置于白瓷板上，加1滴碘化钾-碘溶液，检验淀粉的水解程度。
待混合液变为棕黄色时，向所有试管中依次添加1或2滴碘化钾-碘溶液。
添加碘化钾-碘溶液的时间间隔从第1管起，均为1min。
观察各试管内容物呈现的颜色，分析pH对唾液淀粉酶活性的影响。
注意事项：
1）从第三管中取混合液，是因为它的pH接近唾液淀粉酶的最适pH。
2）间隔1min，是为了有足够的时间去加稀释唾液和足够时间观察颜色，保证各试管反应时间相同。
四、实验结果
1、温度
管号1 2 3
2、pH
1 2 3 4
原因分析：
激活剂和抑制剂对酶活性的影响
一、实验目的
了解激活剂和抑制剂对酶活性的影响。
二、实验原理
三、实验步骤
取4支试管按下表加入试剂，观察现象并记录。
试管编号
试剂
1 2 3 4 0.1%淀粉溶液/ml 1.5 1.5 1.5 1.5 1%CuSO4溶液/ml 0.5 无无无1%NaCl溶液/ml 无0.5 无无1%Na2SO4溶液/ml 无无0.5 无蒸馏水/ml 无无无0.5 稀释唾液/ml 0.5 0.5 0.5 0.5
37摄氏度恒温水浴5min
碘化钾-碘溶液/滴 2 2 2 2
四、实验结果
1 2 3 4
原因分析：。
