临床上鉴定病原菌的流程

重庆医学２０１０年１１月第３９卷第２２期　

・论　著・　

焦磷酸测序法鉴定临床常见病原菌　

公衍文　，任绪义　，胡成进　

（１．济南军区总医院实验诊断科，济南２５００３１；２．杭州迪安医学检验中心　３１００３０）　３００９　

摘　要：目的　建立高效的焦磷酸测序鉴定临床常见病原茵的方法。方法　在细茵１６Ｓ　ｒＲＮＡ的Ｖ１及Ｖ３可变区两端保守　

序列设计ＰＣＲ扩增通用引物及焦磷酸测序引物，ＰＣＲ扩增后焦磷酸测序测定Ｖ１及Ｖ３可变区序列，测序结果与数据库比对判断　

细菌种属。结果　在４　ｈ内完成９６株细菌的鉴定，所有菌株鉴定结果与常规鉴定结果一致。结论　焦磷酸测序技术可以用于临　

床分离菌株的鉴定，且具有费用相对低廉、高通量、鉴定能力强等优点。　

关键词：细菌；１６Ｓ　ｒＲＮＡ；焦磷酸测序　

ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７１—８３４８．２０１０．２２．００４　中图分类号：Ｒ４４６．５；Ｒ３７８　文献标识码：Ａ　文章编号：１６７１－８３４８（２０１０）２２—３００９—０２　

Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｃｏｍｍｏｎ　ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ　ｂｙ　ｐｙｒ０ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ　ＧＯＮＧ　Ｙａｎ—ｗｅｎ　，ＲＥＮ　ＸＭ—　。，ＨＵＣｈｅｎｇ－ｊ　

（１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ，Ｇｅｎｅｒａｌ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆ　Ｊｉｎａｎ　Ｍｉｌｉｔａｒｙ　Ｒｅｇｉｏｎ，Ｊｉｎａｎ　２５００３１，Ｃｈｉｎａ；　

２．Ｈａｎｇｚｈｏｕ　Ｄｉ　ａｎ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ　Ｃｅｎｔｅｒ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ　３１００３０，Ｃｈｉｎａ）　

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ａ　ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｃｏｍｍｏｎ　ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ　ｂａｃｔｅｒｉａ　ｂｙ　ｐｙｒｏｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｄｅｓｉｇｎｉｎｇ　ｔｈｅ　ｕｎｉｖｅｒｓａｌ　ｐｒｉｍｅｒｓ　ｆｏｒ　ＰＣＲ　ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｂｏｔｈ　ｅｎｄｓ　ｏｆ　ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｖ１　ａｎｄ　Ｖ３　ｖａｒｉａｂｌｅ　ｒｅ—　

细菌检验的一般程序

细菌检验的一般程序如下：

1. 标本采集：根据患者症状以及规章制度正确采集标本，及时将采集到的标本送至检验科行接种处理，在运送标本中保持相应温度与氧气，防止标本干燥。

2. 镜检：检验人员运用显微镜直接观察标本，辨别相关致病菌形态与数目，以及初步判断标本。

3. 分离培养：采集标本中不可避免会吸附细菌，若在镜检环节发现标本上吸附的细菌，就需对标本实施分离纯化并将其接种于显色培养基、血平板培养基、营养琼脂培养基等适宜培养基上，再将空气与温度调整至适合细菌生长数值，获得便于进一步鉴定细菌。

4. 细菌鉴定：通过细菌形态、菌落特点、酶类检测、血清学试验、生化反应等方式鉴定分析分离获得的标本，明确致病原因。

5. 报告：要求在24h内出具镜检报告，在24h内或次日出具初步鉴定与直接药敏结果；通常最后鉴定与细菌药敏结果不超过3d，除血培养外，任何一项送检标本需均在24h内预报。

中国脊柱脊髓杂志２０１０年第２０卷第１０期　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ｉｎｅ　ａｎｄ　Ｓｐｉｎｄ　ｃｏｒｄ，２０１０，Ｖｏ１．２０，Ｎｏ．１０　８０１　

临床诊断骨与关节结核患者病原菌　

的培养鉴定及耐药分析　

金格勒　，魏继虎。，李君莲　，綦迎成　，王　泉　，马瑞瑛　，盛伟斌　，买尔旦　

（１新疆医科大学第一附属医院骨科中心８３００５４乌鲁木齐市；２新疆维吾尔自治区胸科医院检验科　８３００４９乌鲁木齐市）　

【摘要】目的：分析临床诊断骨与关节结核患者病原菌的种类及耐药情况，为骨与关节结核的诊断和治疗提供　参考。方法：收集２００８年１２月～２００９年９月在新疆医科大学第一附属医院临床诊断骨与关节结核而接受手术　治疗患者的病灶标本６９例，采用ＢＡＣＴＥＣ　ＭＧＩＴ　９６０系统进行分枝杆菌培养、菌种鉴定和药物敏感试验，分析　分枝杆菌培养阳性率、菌种分布及耐药情况。结果：在培养４周内２４例（３４．７８％）分枝杆菌培养阳性，延长至８　周时共有４０例（５７．９７％）培养阳性，两者比较有统计学差异（Ｐ＜０．０５）；其中结核分枝杆菌２４例，牛分枝杆菌ｌ０　例，非结核分枝杆菌６例。药物敏感试验４０例，耐药菌株１５例，总耐药率３７．５％，其中结核分枝杆菌耐药５例，　牛分枝杆菌４例，非结核分枝杆菌６例。结论：临床诊断骨与关节结核患者的病原菌以结核分枝杆菌为主，而　

牛分枝杆菌及非结核分枝杆菌占相当比例，并有较高的耐药率。适当延长培养时间可提高培养阳性率。非结核　分枝杆菌均为耐药菌株，应引起高度重视。　【关键词】骨关节结核；结核分枝杆菌；培养；耐药　

ｄｏｉ：１０．３９６９￣．ｉｓｓｎ．１００４－４０６Ｘ．２０１０．１０．０４　中图分类号：Ｒ５２９．２，Ｒ３７８．９１　文献标识码：Ａ　文章编号：１００４－４０６Ｘ（２０１０）一１０—０８０１—０５　

Ｃｕｌｔｕｒｉｎｇ，ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｄｒｕｇ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ｏｆ　ｐａｔｈｏｇｅｎ　ｆｒｏｍ　ｏｓｔｅｏａｒｔｉｃｕｌａｒ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、ｖｉｔｈ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｄｉａｇｎｏｓｉｓ／ＪＩＮ　Ｇｅｌｅ，ＷＥＩ　Ｊｉｈｕ，ＬＩ　Ｊｕｎｌｉａｎ，ｅｔ　ａｌ／／Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｓｐｉｎｅ　ａｎｄ　Ｓｐｉｎａｌ　Ｃｏｒｄ，２０１０，２０　（１Ｏ）：８０１－８０５　【Ａｂｓｔｒａｃｔ】　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ　ａｎａｌｙｚｅ　ｔｈｅ　ｃｕｒｒｅｎｔ　ｓｉｔｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｕｌｔｕｒｉｎｇ，ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｄｒｕｇ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ｏｆ　

项目9：常见病原菌的病原学检查

【目的要求】

掌握常见病原菌的检查方法和结果观察。

【实验内容】

一、 常见化脓性球菌的检查

（一）化脓性球菌的病原生物学检测程序

在临床上，一般化脓性感染的诊断并不困难，有时为了确定病原菌种，选择用药，特别是疑似败血症患者须与其它发热性疾病进行鉴别诊断时，方进行必要的微生物学检查。

本实验通过脓汁病原菌检查这一系统实验过程，初步掌握化脓性球菌的检查程序和鉴定方法。

脓汁中病原球菌的检查程序

脓 汁

↓

肉眼观察

直接涂片 分离培养（血琼脂平板）

↓

革兰氏染色 菌落观察 革兰氏染色

大小 溶血现象 - +

肾

形

成

对

排

列

【材料】

①脓汁(取自可疑化脓性球菌感染病人)或血液(取自可疑为败血症病人) 不溶血 草绿色溶血环 透明溶血环 矛头状成对排列 球形链状排列 球形葡萄状排列

菊糖发酵试验 胆汁溶菌试验 甘露醇发酵试验 血浆凝固酶试验 ②血琼脂平板