利用变性高效液相色谱方法进行HCM家系MYH7基因突变筛查研究

高效变性液相色谱技术在产前诊断检测母源DNA污染中的应用高利洁;龙艳明;张荣;李爽;张凤环;何国平【期刊名称】《中华医学遗传学杂志》【年(卷),期】2014(031)001【摘要】目的建立一种质控性较高的高效变性液相色谱(denaturing high performance liquid chromatography,DHPLC)技术,检测短串联重复序列(short tandem repeats,STR)位点,用于排除母源污染,提高产前诊断的准确性.方法选取20个处于孕期的患有遗传病的家系,分别提取父母外周血和胎儿羊水DNA,扩增16个STR位点,根据STR数据库报道16个STR位点的等位基因分布范围设定DHPLC 分析片段的大小,进行DHPLC分析.同时,将母体DNA与胎儿羊水DNA以1∶1、1∶4、1∶9、1∶19、1∶99的比例混合,应用DHPLC对vWA STR位点进行检测,确定该技术的检测灵敏度.结果应用DHPLC 分析16个STR位点,母亲与胎儿等位基因不同的STR位点均在10个以上,排除母源污染的检测率达66.7％,检测灵敏度为1％～10％.结论 DHPLC技术可准确快速地排除羊水的母源污染且具有较高的灵敏度,质控性较好,达到了欧洲要求的检测技术标准,为产前诊断提供可靠的检测质控技术.%Objective To establish a high-quality method for detecting short tandem repeats(STR)using denaturing high performance liquid chromatography (DHPLC) in order to exclude maternal contamination and improve the accuracy of prenatal diagnosis.Methods Two families were recruited.DNA was extracted from blood samples from the parents as well as amniotic fluid.Sixteen STR sites were amplified and analyzed based onthe range of allele length reported by a STR database.Ma-ernal DNA was mixed with DNA derived from amniotic fluid samples with the ratio 1 ∶ 1,1 ∶ 4,1 ∶ 9,1 ∶ 19 and 1 ∶ 99.vWA STR site was detected with DHPLC to confirm the sensitivity of detection.Results Sixteen STR sites were analyzed by DHPLC,for which at least 10 were found to be different between the mothers and fetuses.The detection rate,with maternal contamination excluded,was 66.7％.And the sensitivity of detection was 1-10％.Conclusion Maternal contamination of amniotic fluid can be rapidly excluded with accuracy with DHPLC,which features a high sensitivity and good quality control,and can meet the European standards and provide a reliable quality control platform for prenatal diagnosis.【总页数】4页(P21-24)【作者】高利洁;龙艳明;张荣;李爽;张凤环;何国平【作者单位】516001 广东省惠州市第二妇幼保健院;516001 广东省惠州市第二妇幼保健院;516001 广东省惠州市第二妇幼保健院;北京德博全基因检测技术研究所;北京德博全基因检测技术研究所;安徽医科大学附属省立医院生殖医学中心【正文语种】中文【相关文献】1.变性高效液相色谱及其在法医DNA分析中的应用2.变性高效液相色谱技术在快速检测食品微生物中的应用研究3.聚合酶链式反应-变性高效液相色谱技术在唐氏综合征筛查中的应用4.变性高效液相色谱技术在遗传病诊断中的应用5.变性高效液相色谱技术在快速检测食品微生物中的应用研究因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

变性高效液相色谱检测 PKD2基因突变张殿勇;孙田美;张树忠;汤兵;戴兵;张维莉;梅长林【期刊名称】《中华医学遗传学杂志》【年(卷),期】2004(021)003【摘要】目的利用变性高效液相色谱分析技术 (denaturing high-performance liquid chromatography, DHPLC),检测2型常染色体显性遗传性多囊肾病致病基因(polycystic kidney disease gene 2, PKD2 )突变.方法收集临床确诊的汉族常染色体显性遗传性多囊肾病(autos omal dominant polycystic kidney disease, ADPKD)94个家系,提取外周血白细胞DNA, 用聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)扩增目的基因的全编码区,DHPLC对PCR 产物进行突变筛选,出现异常峰型的DNA片段进行核苷酸序列测定,明确突变位点和类型.结果以50名健康志愿者为正常对照,从94例患者家系中成功检测出8种突变,包括2种无义突变、3种移码突变、3种错义突变.无义突变分别位于第5和13外显子(1249C→T,2407C→T),编码氨基酸分别在417 和 803位形成终止密码子.移码突变分别位于第2、12和13外显子(636-637 ins T,2348-2 351 del AGAA ,2401 del A).错义突变分别位于第1、4和5外显子(568G→A,964C→T,11 68G →A),其编码氨基酸发生改变(190Ala→Thr,322Arg→Trp,390Gly→Ser).结论所检测出的8种突变,为ADPKD患者的基因诊断、产前诊断和囊肿前诊断积累了资料.【总页数】4页(P211-214)【作者】张殿勇;孙田美;张树忠;汤兵;戴兵;张维莉;梅长林【作者单位】200003,上海,第二军医大学长征医院肾内科,中国人民解放军肾脏病中心;200003,上海,第二军医大学长征医院肾内科,中国人民解放军肾脏病中心;200003,上海,第二军医大学长征医院肾内科,中国人民解放军肾脏病中心;200003,上海,第二军医大学长征医院肾内科,中国人民解放军肾脏病中心;200003,上海,第二军医大学长征医院肾内科,中国人民解放军肾脏病中心;200003,上海,第二军医大学长征医院肾内科,中国人民解放军肾脏病中心;200003,上海,第二军医大学长征医院肾内科,中国人民解放军肾脏病中心【正文语种】中文【中图分类】R3【相关文献】1.变性高效液相色谱法检测鲍曼不动杆菌喹诺酮耐药基因突变2.用变性高效液相色谱检测和脱氧核糖核酸测序方法对三个肥厚型心肌病家系β肌球蛋白重链基因突变的分析结果3.变性高效液相色谱检测法在基因突变分析中的应用4.变性高效液相色谱法检测多种途径获取的非小细胞肺癌组织表皮生长因子受体基因突变5.染色体显性遗传性多囊肾病PKD2基因突变的检测因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

聚合酶链式反应-变性高效液相色谱技术在唐氏综合征筛查中的应用张丹妍;马明福;张丹媚;朱一剑;吕静;赵乐天;万凌;侯志伟;李练兵【期刊名称】《癌变·畸变·突变》【年(卷),期】2012(024)001【摘要】目的:探讨聚合酶链式反应-变性高效液相色谱技术(polymerase chain reaction-denaturing high performance liquid chromatography,PCR-DHPLC)在唐氏综合征筛查中的应用.方法:针对21号染色体上的基因座D21S1409、D21S1422、D21S1435和GATA163G03设计引物,PCR扩增唐氏综合征患儿样本和正常样本,DHPLC仪检测；同步进行外周血染色体核型分析,并以核型分析为金标准,评价PCR-DHPLC技术的准确性.结果:柱温50℃时,唐氏综合征患儿样本DHPLC检测结果呈现特异唐氏综合征峰.结论:PCR-DHPLC方法具有较高的敏感性和特异性,可用于唐氏综合征的高通量快速筛查.%OBJECTIVE: To evaluate the use of polymerase chain reaction-denaturing high performance liquid chromatography technology (PCR-DHPLC) in Down syndrome screening. METHODS: Primers of D21S1409, D21S1422, D21S1435 and GATA163G03 loci on chromosome 21 were designed. The samples of the children with Down's syndrome or the normal ones were amplified using PCR method. The PCR amplification products were identified by denaturing high performance liquid chromatography technology. At the same time the same samples were analyzed with karyotyping, to evaluate the accuracy of PCR-DHPLC. RESULTS: The column temperature was 50 ℃ , the Downsyndrome samples showed specific DHPLC peak of Down syndrome. CONCLUSION: The PCR-DHPLC method edmonstrated high sensitivity and specificity. It could be used in high-throughput rapid screening for Down's syndrome.【总页数】4页(P71-74)【作者】张丹妍;马明福;张丹媚;朱一剑;吕静;赵乐天;万凌;侯志伟;李练兵【作者单位】重庆市人口和计划生育科学技术研究院,出生缺陷与生殖健康重庆市市级重点实验室,重庆市正鼎司法鉴定所,重庆400020;重庆市人口和计划生育科学技术研究院,出生缺陷与生殖健康重庆市市级重点实验室,重庆市正鼎司法鉴定所,重庆400020;重庆房地产职业学院,重庆401331;重庆市人口和计划生育科学技术研究院,出生缺陷与生殖健康重庆市市级重点实验室,重庆市正鼎司法鉴定所,重庆400020;重庆市人口和计划生育科学技术研究院,出生缺陷与生殖健康重庆市市级重点实验室,重庆市正鼎司法鉴定所,重庆400020;重庆市人口和计划生育科学技术研究院,出生缺陷与生殖健康重庆市市级重点实验室,重庆市正鼎司法鉴定所,重庆400020;重庆市人口和计划生育科学技术研究院,出生缺陷与生殖健康重庆市市级重点实验室,重庆市正鼎司法鉴定所,重庆400020;重庆市人口和计划生育科学技术研究院,出生缺陷与生殖健康重庆市市级重点实验室,重庆市正鼎司法鉴定所,重庆400020;重庆市人口和计划生育科学技术研究院,出生缺陷与生殖健康重庆市市级重点实验室,重庆市正鼎司法鉴定所,重庆400020【正文语种】中文【中图分类】R172【相关文献】1.无创基因检测和血清学筛查在唐氏综合征筛查中的应用分析 [J], 盛娟2.无创产前基因检测和血清学筛查在唐氏综合征筛查中的应用分析 [J], 周静3.无创产前基因检测和血清学筛查在唐氏综合征筛查中的应用分析 [J], 周静4.中孕期血清学筛查联合无创产前检测在唐氏综合征产前筛查与诊断中的应用 [J], 张彦春;刘凯波;张雯;徐宏燕5.早孕PAPP-A联合唐氏综合征三联筛查方案在胎儿唐氏综合征和开放性神经管缺陷筛查中的应用 [J], 李冰;蔡娜;吉颖莉;张媛因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

新疆3个HCM家系MYH7基因突变DHPLC检测和DNA测序结果分析杨忠伟;冯秀丽;王伟;王忠【摘要】Objective To study familial hypertrophic cardiomyopathy (HCM's) main pathogenic gene beta myosin heavy chain beta - myosin heavy chain gene and MYH7 mutation. Methods Denaturing high performance liquid chromatography with DHPLC detection and DNA sequencing method were used to deted 3 HCM family members of the MYH7 gene exon 8 , 14 and the downstream nearby sequence. Results One family was foundThr441Met mutation at exon 14 of MYH7 gene, in addition there was a point mutation at exon 8. Two other families were also found to have different point mutations. Conclusions The application of denaturing high performance liquid chromatography and direct DNA sequencing technology can realize to familial hypertrophic cardiomyopathy mutation screening of MYH7 gene, facilitates the early diagnosis, risk prediction.%目的研究家族性肥厚型心肌病(HCM)的主要致病基因β肌球蛋白重链,MYH7突变情况.方法用变性高效液相色谱DHPLC检测和DNA测序方法对3个HCM家系成员的MYH7基因8、14外显子及附近上下游序列进行检测分析.结果 3个家系其中1个家系发现MYH7基因14外显子中存在Thr441Met突变,该突变在中国人中是首次发现,此外外显子8也存在1个点突变.另外两个家系也发现有不同位点的突变.结论运用变性高效液相色谱技术和DNA直接测序技术能实现对家族性肥厚型心肌病MYH7基因突变的筛查,有利于早期诊断、患病风险预测.【期刊名称】《基础医学与临床》【年(卷),期】2012(032)012【总页数】5页(P1437-1441)【关键词】家族性肥厚型心肌病;β肌球蛋白重链;基因突变【作者】杨忠伟;冯秀丽;王伟;王忠【作者单位】新疆石河子大学医学院教学实习基地奎屯农七师医院,新疆石河子832000;新疆石河子大学医学院教学实习基地奎屯农七师医院,新疆石河子832000;新疆石河子大学医学院研究生办,新疆石河子832000;新疆石河子大学医学院第一附属医院,新疆石河子832000【正文语种】中文【中图分类】R542.2肥厚型心肌病(hypertrophic cardiomyopathy，HCM，OMIM160760)是一种常染色体显性遗传性疾病，约60%～70%的患者有家族史，其编码肌节蛋白的基因突变是这一疾病的分子基础，已证明有10余种基因涉及400多种突变与本病相关［1］。

中国皖南地区家族性肥厚型心肌病MYH7基因筛查结果及临床特征王爱玲;杨春;余元勋;徐岩;冯俊;史学功【期刊名称】《中国优生与遗传杂志》【年(卷),期】2008(16)6【摘要】目的研究皖南地区汉族人群家族性肥厚型心肌病(HCM)的致病基因β肌球蛋白重链(MYH7)突变,并分析基因型与表型的关系。

方法对4个HCM家系先证者的MYH7基因,经PCR扩增其外显子片段,用双脱氧末端终止法测序做突变初筛,对阳性结果患者进行家系调查,分析其临床表型。

结果在MYH7基因18外显子中发现其中一家系中患者发现Arg663His突变,另一家系患者发现nt2013c缺失、nt2025C插入,此为一国内罕见移码突变。

结论MYH7基因可能是皖南地区HCM 较常见致病相关基因之一,其某些突变可在同一家系内遗传并致病,所致HCM临床症状较轻,症状出现较晚、进展较慢。

同一突变携带者的临床表型存在异质性提示多因素参与了HCM的发生和发展。

【总页数】3页(P25-26)【关键词】心肌病,肥厚型,家族性;肌球蛋白重链基因突变;基因型;表型【作者】王爱玲;杨春;余元勋;徐岩;冯俊;史学功【作者单位】安徽医科大学第一附属医院心内科;安徽省优生优育遗传医学中心【正文语种】中文【中图分类】R542.2【相关文献】1.家族性肥厚型心肌病MYH7基因突变的筛查与分析 [J], 冯秀丽;范新萍;杨忠伟;杨福辉2.十个汉族家族性肥厚型心肌病MYH7、MYBPC3和TNNT2基因筛查结果及相应的临床特征 [J], 刘文玲;谢文丽;胡大一;朱天刚;李运田;孙艺红;李翠兰;李蕾;李田昌;边红;仝其广;杨松娜;范瑞云;崔炜3.汉族家族性肥厚型心肌病MYH7基因突变及相应临床特征 [J], 杨春;王爱玲;余元勋;徐岩;冯俊;史学功4.安徽地区汉族人家族性与散发性肥厚型心肌病MYH7基因18及20号外显子突变分析 [J], 冯俊;王爱玲;程自平;徐岩;余元勋;杨春;史学功5.云南省一家族性肥厚型心肌病家系的基因筛查及临床特征分析 [J], 庞明杰;丁筱雪;张艳;苏文华;张宏因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

一种基于变性高效液相色谱技术筛选单核苷酸多态性并估算基因频率的方法杜红丽;方梅霞;聂庆华;雷明明;Adam Ishag NEAMA;张细权【期刊名称】《华南农业大学学报》【年(卷),期】2005(026)003【摘要】选取生产性能具有明显差异的4个鸡品种(莱航鸡、隐性白洛克鸡、丝羽乌骨鸡和杏花鸡)为材料,利用变性高效液相色谱(DHPLC)技术检测鸡生长激素基因部分序列(518 bp)的多态性,快速筛查到5个可能与生产性能相关的单核苷酸多态性(SNPs). 根据DHPLC杂合谱型与测序基因型一一对应的关系,介绍了当所检测目的DNA片段中含有多个SNPs时基因频率估算的简单方法,比较估算的和PCR-RFLP统计的基因频率,发现差异不显著,证明该估算方法有一定的可行性.【总页数】5页(P84-88)【作者】杜红丽;方梅霞;聂庆华;雷明明;Adam Ishag NEAMA;张细权【作者单位】华南农业大学,动物科学学院,广东广州,510642;华南农业大学,动物科学学院,广东广州,510642;华南农业大学,动物科学学院,广东广州,510642;华南农业大学,动物科学学院,广东广州,510642;华南农业大学,动物科学学院,广东广州,510642;华南农业大学,动物科学学院,广东广州,510642【正文语种】中文【中图分类】S831.2【相关文献】1.一种基于计算机的单核苷酸多态性位点检测方法 [J], 马磊;贾奇男;张俊;易青青;贺建峰;张琪2.一种基于改进负荷矩的台区电压快速估算方法 [J], 胡斌; 王绪利; 叶斌; 马静; 叶彬3.基于电场强度的一种超短波干扰压制区估算方法 [J], 刘家昊;章小梅4.基于公式法的一种快速估算对星参数的方法 [J], 李宏彦;杨征;程相波;安卫娜;朱英军5.基于分组数据基尼系数的一种估算方法 [J], 张爱国因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

散发性肥厚型心肌病MYH7基因突变位点筛查作者：刘荟婷王继纲纪方方高榆秀付伟伟赵鹏来源：《青岛大学学报（医学版）》2019年第03期[摘要]目的筛查肥厚型心肌病猝死者β-肌球蛋白重链（MYH7）基因的突变位点。

方法应用聚合酶链反应（PCR）技术，对18例散发性肥厚型心肌病（病例组）及20例非心肌病（对照组）死者的甲醛固定心肌包埋组织，进行MYH7基因部分外显子片段扩增，并进行克隆法测序分析。

利用Blast在线数据库进行突变位点物种间保守性分析。

结果病例组中1例MYH7基因第14号外显子发现Thr446Pro突变，1例第14号外显子发现Phe468Leu突变，突变均位于MYH7基因的球状头部;对照组未见异常突变。

物种间保守性分析显示，Thr446和Phe468两个氨基酸残基在不同物种间高度保守。

结论2例检出MYH7基因突变位点者的病理组织纤维化程度较重，提示该两个基因突变位点是导致肥厚型心肌病的恶性突变。

[关键词]心肌病，肥厚性;心室肌球蛋白;DNA突变分析;法医病理学[中图分类号]R542.2;R892[文献标志码]A[文章编号]2096-5532（2019）03-0330-05[ABSTRACT]ObjectiveTo investigate the mutation sites in the MYH7 gene in patients with sudden death due to hypertrophic cardiomyopathy. MethodsFormalin-fixed paraffin-embedded myocardial samples were collected from 18 patients with sporadic hypertrophic cardiomyopathy （case group） and 20 patients without hypertrophic cardiomyopathy （control group）. PCR was used for the amplification of some exon fragments of the MYH7 gene， and the cloning method was used for sequencing. Blast online database was used to perform an interspecies conservation analysis of mutation sites. ResultsAmong the patients in the case group， one was found to have Thr446Pro mutation in exon 14 of the MYH7 gene and one was found to have Phe468Leu mutation in exon 14 of the MYH7 gene， and both mutation sites were located in the globular head of the MYH7 gene. No abnormal mutation was found in the control group. The interspecies conservation analysis revealed that the two amino acid residues of Thr446 and Phe468 were highly conserved among different species. ConclusionTwo patients with MYH7 gene mutations have a high degree of fibrosis in pathological tissue， suggesting that the two mutation sites are malignant mutations causing hypertrophic cardiomyopathy.[KEY WORDS]cardiomyopathy， hypertrophic; ventricular myosins; DNA mutational analysis; forensic pathology肥厚型心肌病（HCM）是心肌病中常見的一种常染色体显性单基因遗传病，是指排除导致心肌异常因素（如瓣膜病、高血压）的原发性心肌病，以非对称性心肌肥厚、左心室腔变小的心室壁肥厚或心脏质量增加为特征 [1-2]。

外周血MYH7、TNNI3基因突变与家族性肥厚型心肌病发病的关系陈培;闫继锋【期刊名称】《山东医药》【年(卷),期】2017(057)032【摘要】目的观察1个中国汉族肥厚型心肌病(HCM)家系的基因突变类型,并探讨其对临床表型的影响.方法选择1个中国汉族HCM家系,家系成员共13例,其中5例确诊为HCM.采用新一代高通量测序技术检测先证者外周血44个心肌病靶基因,结果显示其存在β肌球蛋白重链7(MYH7)基因18号外显子Arg663His突变及肌钙蛋白I3(TNNI3)基因7号外显子c.470C>T突变.采用双脱氧末端终止法测序检测该家系中其他成员上述两个基因的突变情况,分析不同MYH7、TNNI3基因突变的HCM患者的临床表现.结果先证者与其妹妹均存在MYH7基因18号外显子Arg663His及TNNI3基因7号外显子c.470C>T双突变,HCM发病年龄分别为2、1岁;心电图均示异常Q波,ST-T改变,左室高电压;超声心动图均示左房增大,室间隔中段以上最厚处分别为25、23 mm,SAM征阳性,左室流出道压差分别为80、68 mmHg.先证者的母亲、二舅及外公仅MYH7基因18号外显子Arg663His突变,HCM发病年龄分别为21、19、30岁;心电图均示ST-T改变,左室高电压;超声心动图均示室间隔增厚,最厚处分别为16、18、18 mm,SAM征阴性,无左室流出道梗阻.先证者表弟仅MYH7基因18号外显子Arg663His突变,临床无明显症状,心电图及超声心动图检查无异常.结论该汉族HCM家系TNNI3基因发生从头突变,MYH7基因突变由遗传而来;MYH7与TNNI3基因双突变者HCM发病时间早、临床症状严重、预后较差.%Objective To observe the gene mutation types ina Chinese Han hypertrophic cardiomyopathy (HCM) family and to explore its effect on clinical phenotype.Methods We selected 1 Chinese Han HCM family, including 13 family members, among whom 5 were diagnosed as HCM.New generation of high-throughput sequencing technology (NGS) was used to sequence the 44 genes of the target genomes associated with human cardiomyopathy of the proband.The results indicated that the proband carried β-myosin heavy chain (MYH7) gene Arg663His in exon 18 and troponin I (TNNI3) gene c.470C>T in exon 7.The mutations of the two genes in other members of the family were detected by the dideoxy chain-termination method, and the clinical manifestations of HCM patients with MYH7 and TNNI3 gene mutations were analyzed.Results The proband and his sister carried MYH7 gene exon 18 Arg663His mutation and TNNI3 gene exon 7 c.470C> T mutation, and the age of onset was respectively 2 and 1 years old.The ECG showed abnormal Q wave, ST-T changes, and left ventricular high voltage.Echocardiography showed left atrium enlargement, the thickest part of interventricular septum was 25 and 23 mm, SAM was positive, and the left ventricular outflow pressure were 80 and 68 mmHg, respectively.The proband''s mother, uncle and grandfather carriedArg663His mutation in MYH7 gene exon 18, and the age of onset was 21, 19, and 30 years old, respectively.The ECG showed ST-T changes and left ventricular high voltage.Echocardiography showed that the thickest part of interventricular septum were 16, 18, and 18 mm, respectively, SAM were negative, and no left ventricular outflow tract obstruction.The proband′s cousin only carried Arg663His mutation in MYH7 gene exon 18.There wereno obvious clinical symptoms, and no abnormalities in ECG and echocardiogram.Conclusions The TNNI3 gene in the HCM family underwent de novo mutation, and the MYH7 gene mutation was inherited.The patients with double mutations of MYH7 and TNNI3 gene presented a younger onset age, severe clinical phenotype and poor prognosis.【总页数】4页(P29-32)【作者】陈培;闫继锋【作者单位】郑州大学第五附属医院,郑州 450052;河南省胸科医院【正文语种】中文【中图分类】R542.2【相关文献】1.汉族家族性肥厚型心肌病MYH7基因突变及相应临床特征 [J], 杨春;王爱玲;余元勋;徐岩;冯俊;史学功2.安徽地区汉族人家族性与散发性肥厚型心肌病MYH7基因18及20号外显子突变分析 [J], 冯俊;王爱玲;程自平;徐岩;余元勋;杨春;史学功3.中国北方汉族家族性肥厚型心肌病人群MYH7基因Arg694Leu突变分析 [J], 曲辅政;孙经武;孙晓健;史孟松4.心血管病与基因突变 (1)家族性肥厚型心肌病和扩张型心肌病与基因突变 [J], 陈在嘉5.中国皖南地区家族性肥厚型心肌病MYH7基因筛查结果及临床特征 [J], 王爱玲;杨春;余元勋;徐岩;冯俊;史学功因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。