肝炎的分子诊断与临床应用ppt演示课件

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肝炎基本知识 ppt课件

亚急性：坏死面积小于二分之一，肝小叶周边可见肝细胞再生，形成再生结节，胆小管增生，淤胆明显。慢性：在慢性肝炎或肝硬化基础上出现大块坏死。
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病理解剖
（4）肝炎肝硬化

活动性肝硬化：肝硬化伴明显炎症，假小叶边界不
清静止性肝硬化：肝硬化结节内炎症轻，假小叶边界清楚。（5）淤胆型肝炎：毛细胆管内胆栓形成，肝细胞内胆色素淤积，出现小点状色素颗粒。

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病原学乙肝

PreS1与抗PreS1：
PreS1 早期消失提示病毒清除， PreS1 持续阳性提示慢性化，抗-PreS1被识为是保护性抗体。

PreS2与抗PreS2
PreS2病毒复制的指标，抗PreS2为保护性抗体。
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病原学乙肝
4、HBV分子生物学标记：

HBV － DNA ：定量测定可判断病毒复制程度、传染性大小、抗病毒疗效。 HBV－DNAP:病毒复制程度、传染性高低的指标。

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病理解剖
（6）慢性无症状携带者：

非活动性携带者：肝组织正常。活动性携带者：轻微病变，部分为慢性肝炎或肝硬化改变。
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病理生理
一、黄疸
二、肝性脑病
三、出血四、急性肾功能不全（肝肾综合征）
五、肝肺综合征
六、腹水
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临床表现
类型及潜伏期
甲型肝炎---2-6周，平均4周

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病原学丁肝
（四）丁型肝炎病毒

单股环状闭合负链RNA

分子诊断的临床应用课件

分子诊断的临床应用
结果 95例患者的尿沉渣形态学检查，35例患者的尿沉
尿液中BK病毒核酸定量检测14例尿液中检测到BKV DNA，病毒载量为4×103～2×109/ml，平均为5.6×105/ml。发生病毒尿的中位时间为移植术后14个月。
分子诊断的临床应用
尿液中BK病毒核酸定量检测分子诊断的临床应用42
分子诊断的临床应用
decoy细胞分子诊断的临床应用36
巴氏染色的decoy细胞
未经染色的decoy 细胞
分子诊断的临床应用
巴氏染色的decoy细胞未经染色的decoy 细胞分子诊断的
BK病毒感染的检测
BK病毒的检测血、尿中BK病毒核酸定量检测尿液中decoy细胞检查尿沉渣涂片原位杂交组织病理学检查（判断肾脏间质性肾病）
分子诊断的种高危型HPV。分子诊断的临
细胞学检查结果为意义不明确的非典型细胞时，HPV基因的检测能预测受检者患宫颈癌的风险。细胞学检查+HPV基因的检测是宫颈癌前病变和宫颈癌筛查的最佳方法，成为预防宫颈癌的关键。
分子诊断的临床应用
细胞学检查结果为意义不明确的非典型细胞时，HPV基因的检测能
分子诊断的临床应用
DNA重组技术(DNA recombination)
分子诊断不仅能早期对疾病作出确切的诊断，也能确定个体对疾病的易感性，判别致病基因携带者并对疾病的分期、分型、疗效监测和预后作出判断。分子诊断已成为实验诊断学的一个重要组成部分，成为一门新的学科。Molecular diagnosis Molecular diagnostics
在美国，10岁以上的正常人群中60%～80%有BK病毒感染史。感染的病毒多潜伏于肾小管上皮细胞和尿道上皮细胞中。BK病毒重新激活大部分是由于免疫机制缺陷或大量使用免疫抑制剂后。

乙型病毒性肝炎检测项目及临床应用PPT课件

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乙肝病毒的结构
乙肝表面抗原（澳抗）（HbsAg）
由乙肝病毒的核心抗原(HBcAg)和E抗原（HBeAg）组成环状并且有缺口的 DNA双链，和依附在上面的DNA聚合酶
4
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乙肝的传播途径
1.输血传 2.性接触
播
传播
3.垂直传播
4.密切生活传播
5、抗病毒治疗乙肝，加查前S1抗原可作为治疗前的患者筛查(适应症 )和治疗后的疗效判断，尤其对抗HBe(+)的慢性乙肝患者抗病毒药物治疗的排查可起到重要作用。
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乙肝两对半的32种组合及临床意义
序号 1 2
3 9 种常4 见5 模6 式
7
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9
HbsAg HbsAb HbeAg HbeAb HBcAb
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HBeAg
HBeAg一般通称e抗原，它来源于乙型肝炎病毒的核心，是核心抗原的亚成分，或是核心抗原裂解后的产物。其在血清中的出现时间稍后于HBsAg，一般血清HBeAg阳性者，HBsAg亦为阳性。
HBeAg与病毒Dane颗粒、HBV DNA具有伴随关系，是HBV复制活跃的血清学指标，血清HBeAg 阳性说明传染性强。急性乙肝病人血清HBeAg持续阳性3个月以上，则有疾病慢性化倾向。
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三、乙肝的临床诊断
既往有乙型肝炎病史或HBsAg阳性超过6个月，现 HBsAg和（或）HBV DNA仍为阳性者，可诊断为慢性 HBV感染。根据HBV感染者的血清学、病毒学、生物化学试验及其他临床和辅助检查结果，可将慢性HBV感染分为：

肝炎教学演示课件

定不便。
心理压力
长期患病和治疗过程中的不适症状会给患者带来心理压力，影响情绪
和生活质量。
社会和经济负担
肝炎治疗费用较高，长期患病会给家庭和社会带来一定的经济负担。
06
预防与治疗策略
预防措施
01
02
03
04
疫苗接种
接种肝炎疫苗是预防肝炎的有效方法，针对不同类型肝炎有
不同疫苗可供选择。
控制传染源
免疫系统异常攻击肝脏细胞，引发自身免疫性肝炎。
发病原因及危险因素
不洁饮食或水源
食用被病毒污染的食物或水，易感染病毒性肝炎。
长期饮酒
增加患酒精性肝炎的风险。
发病原因及危险因素
接触毒物或化学物质
如长期接触农药、重金属等有毒物质，易引发肝炎。
遗传因素
某些基因变异可增加患某些类型肝炎的风险。
临床表现与诊断方法
非酒精性脂肪性肝炎
• 脂肪堆积：肝脏内脂肪堆积过多，导致肝细胞脂肪变性和炎症反应。
• 症状表现：轻度患者可能无症状，重度患者可能出现乏力、右上腹不适、睡眠障碍等。
• 并发症：可能发展为肝纤维化、肝硬化，甚至肝癌。
• 治疗与预防：改善生活方式是治疗的关键，包括控制饮食、增加运动、减轻体重等。同时，需要控制血糖、血脂等代谢指标，必要时可使用保肝药物。预防非酒精性脂肪性肝炎的措施包括保持健康的生活方式，避免肥胖和代谢综合征的发生。
分类
根据病程长短可分为急性肝炎和慢性肝炎；根据病因可分为病毒性肝炎、酒精性肝炎、药物性肝炎、自身免疫性肝炎等。
发病原因及危险因素
病毒感染
如甲型、乙型、丙型、丁型和戊型肝炎病毒。
酒精摄入
长期大量饮酒可导致酒精性肝炎。

急性肝炎诊断与治疗PPT

饮食调整
避免饮酒：酒精会加重肝脏负担，不利于
肝炎恢复
增加蛋白质摄入：如鸡蛋、牛奶、瘦肉等，有助于肝脏修
复
增加维生素摄入：如新鲜蔬菜、水果等，有助于提高免
疫力
避免油腻食物：避免辛辣食物：保持饮食清淡：
如油炸食品、如辣椒、花椒避免重口味食
肥肉等，会增等，会刺激肝物，减轻肝脏
复查项目：包括肝功能、血常规、B 超等
注意事项：复查前避免饮酒、熬夜等不良生活习惯
复查结果：根据复查结果调整治疗方案和用药剂量
不滥用药物
避免使用对肝脏有害的药物
遵循医嘱，合理用药
避免自行购买和使用药物
定期检查肝功能，及时调整药物剂量
不饮酒
酒精对肝脏有损害作用，会加重肝炎病情酒精会降低肝脏的解毒能力，影响药物疗效酒精会刺激胃黏膜，加重消化道症状酒精会降低免疫力，增加感染风险
了解患者近期是否有接触肝炎病毒或肝炎患者的情况
体格检查
观察皮肤和眼睛：黄疸、皮肤瘙痒、巩膜黄染等检查肝脏：触诊肝脏大小、硬度、压痛等检查脾脏：触诊脾脏大小、硬度、压痛等检查血液：血常规、肝功能、肾功能等指标
实验室检查
肝功能检查：包括 A LT 、 A S T 、 G GT 、 ALP等指标
抗炎药物：如糖皮质激素、非甾体抗炎药等
免疫调节药物：如胸腺素、免疫球蛋白等
抗纤维化药物：如秋水仙碱、吡非尼酮等
饮食调整
避免油腻食物：减少脂肪摄入，减轻肝脏负担
增加蛋白质摄入：补充蛋白质，有助于肝
脏修复
多吃蔬菜水果：补充维生素和矿物质，增强
免疫力
避免饮酒：酒精对肝脏有损害，应避免饮

第章肝炎病毒ppt课件

DNA多聚酶
HBxAg（与肝癌发生有关）
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3. HBV的复制
－DNA模板
HBV-DNA
DNA多聚酶
延长＋DNA
完整环状dsDNA
－DNA为模板
3.5/3.4kb mRNA 2.1/2.4kb mRNA
逆转录
mRNA
－DNA
+DNA
0.8kb
子代dsDNA
内衣壳Pr 外衣壳Pr 酶Pr Dane颗粒
② 免疫复合物性的免疫损伤（III型超敏反应）可溶性HBsAg、HBeAg入血，产生Ab，形成IC并沉积，
激活补体，------引起肝外损伤（肾炎、关节炎）；或IC阻塞cap，引起急性肝坏死
③ 自身免疫反应的免疫损伤：（II、IV型超敏反应）
肝特异性脂蛋白抗原(LSP)暴.露---自身免疫反应
.
13
❖ 毛蚶每日能过滤40升水，将甲肝病毒在体内浓缩29倍并存活3个月之久。 ❖ 上海市居民食毛蚶者甲型肝炎罹患率达14％～16％，吃蚶人群甲型肝炎罹
患率相对危险性为23～25倍，特异危险度为11．5～15．2。 ❖ 毛蚶主要产地是江苏省启东县，当地水源受甲肝病毒污染十分严重。 ❖ 甲型肝炎暴发流行前，上海市居民血清甲肝抗体检测结果表明，20～39岁
全球每年死于乙型肝炎病毒感染引起疾病的人数为75万，我国为28万人。
我国每年报告乙型肝炎新发病例约数约50万，约占全国甲、乙类传染病报告发病总人数的1/4。
据调查，目前全国有现患慢性病毒性肝炎患者约2000万人，
每年死于与乙型肝炎相关的肝病约28万人，其中50%为原
发性肝细胞癌。
.
26
一、生物学性状
粒
❖ 抵抗力：强

急性肝炎的诊断与治疗PPT课件

❖ 急性乙型肝炎：具有以下动态指标中之一项者即可诊断。
①HBsAg滴度由高到低，消失后抗-HBs阳转。
②急性期血清抗-HBc-IgM呈高滴度，而抗HBcIgG（-）或低滴度。
10％大三阳小三阳
HBsAg： -
-
+
+Biblioteka ++
抗-HBs： +
-
-
-
-
-
抗-HBc： -
-
-
+
+
-
HBeAg： -
庚型
经血液传播
其中乙型、丙型及丁型肝炎可发展为慢性肝炎，肝
硬化，与原发性肝癌有密切关系；一般认为甲、戊
型肝炎不转化为慢性肝炎
病毒性肝炎
肝炎类型
通过哪种途径感染
甲型
通过污染的食物或饮水经口感
乙型
经血液、体液传播和母婴传播
丙型
经血液、体液传播和母婴传播
丁型
经血液、体液传播（和HBV同时感染）
戊型
通过污染的食物或经饮水经口感染
❖ 丙型肝炎：可作血清抗体(抗-HCV)、血清丙型肝炎病毒RNA(HCV-RNA)等，免疫组化法检测肝组织HCV抗原为较特异的方法。
❖ 丁型肝炎：与HBV同时或重叠感染。 ①血清中抗-HDV-IgM阳性，或抗-HDV阳性，或
HDVAg阳性。 ②血清中HDV RNA阳性。 ③肝组织内HDVAg阳性。
预后
❖ 急性丙肝：未经抗病毒治疗的急性丙肝患者，大约80% 以上转变为慢性丙肝，部分患者将逐步发展为肝硬化和肝癌。急性丙肝自然痊愈者小于20%，远低于急性乙肝感染
❖ 戊型肝炎：绝大多数预后较好。老年戊型肝炎淤胆症状较常见，病情较重，少数发展成重型肝炎。部分患者有病情迁延的现象，但不进展为慢性肝炎，无演化为肝癌的危险。HBsAg阳性携带者及孕妇妊娠晚期合并戊肝病毒感染时，易发展为重型肝炎，死亡率高达20%

分子诊断技术的临床应用ppt课件

二、PCR概述
PCR技术能在一个试管内将所要研究的目的基因或某一DNA片段于数小时内扩增至十万乃至百万倍，使肉眼能直接观察和判断；可从一根毛发、一滴血、甚至一个细胞中扩增出足量的DNA供分析研究和检测鉴定。
PCR 发展简史
1983 Mullis于12月16日成功发明了PCR 1985 关于PCR 的文章首次由 Mullis及其同事等人在
测优生优育项目诊断：人巨细胞病毒（HCMV）、单纯疱
疹病毒（HSV）、弓形虫（TOX）、风疹病毒（RUB）其它病原体检测：结核杆菌、肺炎支原体、EB病毒、
伤寒杆菌、幽门螺旋杆菌等
常规结核病实验室诊断方法及不足
1. 痰涂片作抗酸染色：阳性率低、费时 2. 细胞培养“金标准”：周期太长(4-8W) 3. 血清学诊断：
的平衡点。
总结
分子诊断学的快速发展，得益与分子诊断技术的日新月异。1990年启动的人类基因组计划的完成经历了十三年的时间，而2007启动的1000人基因组计划的完成却只用了3年，人类了解自然密码的速度正在跨上快速列车。检验医学以提供精密准确的数据服务于临床，而分子诊断技术正逐渐成为临床实验室的常规应用技术，这将为检验医学的发展提供巨大的机遇与挑战。
PCR技术
PCR核心技术是从水栖高温菌中
分离到能耐高温的Taq酶，使扩增反
应不需要每一个循环加一次DNA聚合
酶，从而实现了自动化，使应用领
域迅速扩大，PCR技术成为了分子生
物学中的一项突破性技术。
PCR概述——2000至2013年发表论文篇
30%
32%
PCR＋遗传分析
PCR＋临床诊断
PCR＋肿瘤研究
二肿瘤相关基因表达的检测： 1、包括癌基因、抗癌基因 2、肿瘤转移基因 3、转移抑制基因

(推荐下载)肝炎分析PPT演示课件

. 12
二、致病性与免疫性
1、传染源和传播途径

传染源多为甲肝患者、处在甲型肝炎潜伏末期和黄疽出现前数日的患者，尤其是无症状的亚临床感染者，是最危险的传染源传播途径：粪－口途径传播媒介：通过污染的水源、食物、海产品（毛蚶、泥蚶、醉蟹、牡蛎、蛤蜊）、食具等传播
. 13

毛蚶
牡蛎
. 14
二、致病性与免疫性
2、HAV的致病机制
粪－口途径传播
口咽部或唾液腺中早期增殖肝脏为最终靶器官（病毒直接损伤或免疫病理作用）
.
肠道与局部淋巴结中大量增殖
通过胆汁随粪便排出体外
入血并形成病毒血症
15
二、致病性与免疫性
2、HAV的致病机制
NK细胞的杀伤作用
肝细胞溶解
特异性细胞免疫 IFN-γ分泌增加，促进肝细胞表达HLA HLA介导的CTL对肝细胞的细胞毒作用增强。
. 2
概述
甲HAV─小RNA病毒科肝病毒属：消化道传播乙HBV─ 嗜肝DNA病毒科正嗜肝DNA病毒属,血液传播丙HCV─ 黄病毒科丙型肝炎病毒属，血液传播丁HDV─ 缺陷病毒，复制需要HBV的辅助，血液传播戊HEV ─ 杯状病毒科，消化道传播己HFV ─ 病毒分离与基因克隆未成功，血液传播庚HGV ─ 主要经血液传播 TTV ─ Transfusion transmitted virus 另外，巨细胞病毒、EB病毒、黄热病毒等也可引起肝炎，但不列入肝炎病毒范畴。
肝炎病毒
（Hepatitis viru病毒（hepatitis viruses，HV）是指以侵害肝脏为主引起病毒性肝炎的一组病原体。目前已知的有甲、乙、丙、丁、戊、已、庚及 TTV型肝炎，中国不仅是一个人口大国，而且也是病毒性肝炎的高发区。在我国以甲、乙、丙、戊4个型别的流行情况严重。仅乙肝病毒携带者已达1.3 亿之多。

乙肝丙肝实验室检测及临床意义PPT课件

丙型肝炎抗体测定（ Anti-HCV）
血浆/血清/全血 250403014 20元酶免
每天上午10：00前样本当天可出报告，10:00后样本第二天下午出报告
HBV 血清学检测
HBV DNA检测
HBeAg
HCV RNA检测
HBV DNA 分子检测 HBV DNA 定量检测
HBV 耐药突变株检测
③ PCR检测结果与其它检测项目不同，一般量值变化在一个数量级内均视为没有变化
乙型肝炎病毒(HBV)DNA检测意义
缩短“窗口期”，有利于感染的早期诊断
HBV感染后至血液中出现可检出的HBsAg或HBV特异抗体需要一定时间。
HBV DNA先于 HBsAg出现于外周
血循环中实时荧光定量PCR检
HBeAg
HCV RNA检测
表面抗原 (HBsAg) e 抗原(HBeAg) 表面抗体(抗-HBs) e抗体(抗-HBe)
HBV血清学检测——乙肝两对半
+ 定性（qualitative）判断阴阳性
+ 定量（quantitative）单位：ng/ml、IU/ml、IU/L、PEIU/ml
定性-乙肝“两对半”
HBV DNA高精度检全血、血清、血浆促凝管 4℃ 测
每周一、周四10:30 前样本，15:00出报告
每周四11:00前样本，当日16:30出报告
HCV RNA检测全血、血清、血浆促凝管 4h内送每周三10:00前样本
至实验室
，15:00出报告
HBV耐药基因检测全血、血清、血浆促凝管 4℃
－
－
接种疫苗获得免疫力
相关检验项目详情
检验科（84005）
检测

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P区耐药检测
抗药性监测治疗药物选择
C区启动子变异
确定病毒变异类型判断治疗效果确定治疗方案
S 区变异
确定隐觅性病毒变异判断疫苗效果判断肝炎预后
高灵敏度乙肝DNA检测
高精度病毒载量检测系统
（ COBAS AmpliPrep/Cobas TaqMan ）

定量PCR技术检测患者的血清HBVDNA含量，能更准确地反映病毒复制程度，对HBV相关疾病的诊断、治疗、判断预后意义重大。 QF-PCR是国内常用的定量检测血清HBVDNA水平的方法，COBAS 系统是美国食品药品监督管理局(FDA)批准用于血清HBVDNA定量检测的方法。它具有灵敏度高，线性范围广，实时监控，重复性好，可检测A、B、C、D、E、 F、G、前C区变异等多基因型DNA载量优点。
变异前，药物有效抑制病毒
变异后，药物对病毒束手无策
P区耐药位点检测
HBV病毒耐药性检测

长期使用抗病毒药物可引起HBV耐药，引起耐药的基因突变位点主要集中于P区
统更能准确反映血清HBV DNA含量。
COBAS® AmpliPrep/COBAS® TaqMan® HBV Test, v2.0 COBAS® AmpliPrep/COBAS® TaqMan® HBV Test, v2.0 检测灵敏度线性范围检测基因型检测样本量 Sample Type SFDA注册证 20 IU/mL 8 20 – 1.7 x 10 IU/mL A-H 650 mL 血清或EDTA抗凝血浆 Q3
基因型
C型
高高长高重高（高年龄组高）低低差差
HBV变异的基础

乙肝病毒:高变异性 1/105
24h 一万亿-十万亿拷贝*变异：一千万—一亿复制过程:DNA-RNA-DNA HBV逆转录酶:缺乏严格的校正机制变异:自然变异,免疫压力等等
乙肝病毒P区耐药
原本有效的药物对发生耐药变异后的病毒束手无策
什么是分子诊断
在临床上应用核酸（DNA/RNA) 和分子生物学技术, 在基因水平诊断和监控疾病情况和疗效，评估疾病的检测方法。
分子技术在乙肝诊断与治疗中应用
HBV 分子诊断的临床应用
高灵敏度 HBV DNA定量
HBV 感染监测药物疗效检测感染早期检测
HBV 基因分型
病情预后发展检测抗病毒药物效果预测
肝炎分子诊断项目开展介绍
目
录
1、了解肝炎分子诊断 2、分子诊断在HBV中的临床应用 3、分子诊断在HCV中的临床应用 4、ADICON已开展的肝炎分子诊断项目
我国乙肝病毒感染率概况
我国乙肝病毒感染率概况
《2006－2010年全国乙型病毒性肝炎防治规划》显示，中国是乙型肝炎病毒感染和发病人数最多的国家，全国有6.9亿人曾感染过乙肝病毒，其中1.2亿人长期携带乙肝病毒。目前全国慢性乙肝病人2000万人，每年死于与乙肝相关的肝病患者达28万例，发病率和死亡率都位居前三位。每年造成的直接经济损失约达3600亿元人民币。
高灵敏度乙肝DNA检测优势

由于本QF-PCR试剂盒的线性范围为1.0x 103 copies／mL～1.0x 108 copies／mL，对于低于1.0 x 103 copies／mL标本的检测结果不能给出具体拷贝值，有存在漏
检的可能。而COBAS 系统线性范围为20-1.7×108 IU/mL，因此， COBAS 系
继续治疗每6个月监测HBV DNA
部分病毒学应答 60 – 2,000 IU/mL
加其他药物治疗每3个月监测HBV DNA
不充分病毒学应答 >2,000 IU/mL
改用或加用更强药物每6个月监测HBV DNA
*Keefe, E. Clin Gastro Hepatology. 2007; (5):890-897.

HBV基因分型
根据HBV全基因核苷酸序列的差异，分为不同基因型:A.B.C.D.E.F.G.H共8个型
不同的基因型具有不同地域分布我国主要是B\C型为主，偶有A型北方－C型
HBV基因分型检测临床意义
特征
B型
感染性 HbeAg阳性率 HbeAg自然清除时间 HBV DNA载量致病性 HCC发生率干扰素治疗完全应答率抗病毒治疗效果肝癌手术治疗预后癌栓栓塞治疗效果低低短低轻低（低年龄组高）高高好好
目前在国内唯一满足治疗指南和专家共识的HBV DNA和 HCV RNA检测试剂
HBV DNA 监测的重要性口服核苷（酸）类似物疗效评估
开始治疗--- 基于 HBV DNA、 ALT水平和疾病发展阶段治疗第12周评估是否存在原发性无应答 (较基线下降<1 log) 治疗第24周评估完全病毒学应答 <60 IU/mL
® Cobas
高灵敏度乙肝：20 IU/mL
线性范围乙肝：20-1.7×108 IU/mL
准确判断治疗起点/终点
极佳的重复性，结果可靠正确指导抗病毒治疗
每批试剂均使用 WHO标准品校准
保证定量结果的准确性和可溯源性
每个样本使用同源性内标定量
避免结果不准确
采用AmpErase酶
减少交叉污染
HBsAg 清除及血清学转换
组织学改善
cccDNA 清除
HBV DNA 降低/消失
*Lok, A.S.F et.al. “Chronic Hepatitis B: Update 2009.” HEPATOLOGY, Vol 50, No. 3, 2009, pgs 8-9
治疗终点

2009年EASL指南提出的治疗终点：最理想的治疗终点：持续的HBsAg 消失，伴或不伴抗HBs 抗体出现。满意的治疗终点：在HBe Ag 阳性患者中，出现持续的HBeAg 血清转换次级的满意治疗终点：尽可能降低病毒DNA 水平（降至实时定量降至尽可能低的浓度，理想是低于实时定量 PCR方法（灵敏度10-15 IU/mL）的最低检出限1 1. EASL HBV Guidelines. J Hepatology. 2009;50:277-242
CHB疾病管理:治疗目标
HBeAg消失 HBeAg 血清学转换
ALT正常治疗终点