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H9N2亚型禽流感病毒分离鉴定及免疫试验作者：许佳敏边海霞来源：《中国动物保健》2021年第01期摘要：为了更好防控H9N2亚型禽流感，且做到科学免疫，免疫减负。
本研究采集疑似感染低致病禽流感鸡群病料，将其无菌处理后接种SPF鸡胚后进行病毒分离，通过分子生物学试验对其进行病原学鉴定。
结果显示：分离鉴定出一株H9亚型禽流感病毒（AIV）；血凝试验（HA）效价在10～11，该病毒属于欧亚分支的BJ亚分支。
将病毒纯化后，制备灭活疫苗免疫SPF鸡，免疫后14d对其进行HI检测，结果显示其效价到达峰值为10Log2，免疫后28～35d其平均效价在9.6Log2，至免疫后12周平均效价在7Log2。
结果说明本研究分离的病毒制备成疫苗后具有较好的免疫效果，可以作为疫苗候选株。
关键词：H9N2亚型禽流感毒株，免疫，疫苗禽流感是禽流行性感冒（avian Influenza，AI）的简称，是由正粘病毒科（orthomyxoviridae）、流感病毒属（influenza virus）、A型流感病毒（influenza A virus）引起的禽类疾病[1]。
国际兽医局（OIE）将禽流感列为A类动物疫病，我国也将其定为一类动物传染病。
H9N2禽流感病毒是低致病性亚型，在世界各地家禽群中流行。
目前，H9N2引起的禽流感在我国呈地方流行，虽然死亡率低，但感染蛋鸡出现鸡输卵管功能异常，产褪色蛋、畸形蛋、砂皮蛋、软壳蛋，鸡群产蛋率下降30%～80%，病程持续时间长的可达月余，造成严重的经济损失[2]。
该疾病可通过免疫疫苗进行抵御但是由于低致病禽流感变异速度快，不同血清型之间交叉保护有限；所以筛选、免疫对型疫苗对养殖业具有重要意义[3]。
本研究通过分子病原学及血清学分离鉴定一株H9N2流行毒株，并进行动物试验，为进一步筛选疫苗提供理论依据。
1材料与方法1.1材料1.1.1病料来源疑似发病鸡病料，采集自宁夏平罗县某商品蛋鸡养殖场。
本科生毕业设计（论文）题目h5型高致病性禽流感免疫抗体检测及分析学院动物医学院专业动物医学班级动医（061）班姓名如则·塔伊尔学号063631127指导教师加尔肯职称讲师2011年4月28日新疆农业大学教务处制目录摘要 (1)关键词 (1)前言 (1)1 材料和法 (2)1.1毒株 (2)1.2 疫苗 (2)1.3 试验动物 (2)1.4疫苗在1日龄无母源抗体商品鸡的免疫效力 (2)1.5疫苗在1日龄含母源抗体商品鸡的免疫效力 (2)1.6 血清学检测 (2)1.7保护率计算 (2)1.8统计分析 (2)2试验结果 (3)2.1 rFPV-HA和灭活疫苗诱导的HI抗体应答 (3)2.2 rFPV-HA与灭活疫苗的免疫效力 (4)3讨论 (5)3. 1 rFPV-HA与灭活疫苗诱导HI抗体应答能力 (5)3.2 rFPV-HA与油乳剂灭活疫苗免疫效力比较 (5)3.3 rFPV-HA与油乳剂灭活疫苗应用前景分析 (5)谢辞 (7)参考文献 (8)H5型高致病性禽流感免疫抗体检测及分析如则·塔依尔摘要：利用表达H5亚型禽流感病毒血凝素基因(HA)的重组鸡痘病毒(rFPV-HA和全病毒灭活疫苗免疫商品鸡,比较两种疫苗的保护效力。
结果发现,利103PFU和106PFU的rFPV-HA免疫无母源抗体商品鸡和含母源抗体商品鸡,HI抗体应答水平均低于灭活疫苗免疫组.利用H5亚型禽流感病毒经肌肉注射攻毒后,rFPV-HA免疫的无母源抗体商品鸡获得了完全保护(100%),高于灭活疫苗保护率(94.7%);但rFPV-HA免疫含母源抗体商品鸡诱导的保护率(11.4%～15.8%)低于灭活疫苗免疫组的保护水平(68.45)。
结果表明,rFPV-HA诱导HI抗体的能力低于灭活疫苗;但rFPV-HA免疫无母源抗体商品鸡的保护率完全达到灭活疫苗保护水平,显示出了良好的应用前景;灭活疫苗和rFPV-HA均受到母源抗体的干扰,不适于在母源抗体处于高峰期时使用。
禽流感流行病抗体检测HI试验方法的诊断与预防摘要】禽流感是由A型流感病毒引起的禽类一种从呼吸系统到全身败血症等多种症状的传染病。
此后,这种疫病更名为禽流感。
高致病性禽流感发病率、死亡率高,感染的鸡群常常“全军覆没”;低致病性禽流感可使禽类出现轻度呼吸道症状,食量减少,产蛋量下降,出现零星死亡;非致病性禽流感不会引起明显的症状,仅使传染的禽类体内产生病毒抗体。
【关键词】禽流感流行病诊断【中图分类号】R511.7 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085（2013）49-0078-021 流行病学一般禽流感的病毒都会有很多的病种、水禽和野生的鸟类都是能够可以让禽流感传播的病菌。
家里面养的鸡和火鸡都是很容易传播病菌的，然后就是雏鸡和孔雀，鸭、鹅和鸽这样写动物都是病菌传播的比较少的。
传染源为多种带毒动物或患病动物,最重要是水禽,如鸭、鹅。
2 临床症状2.1临床表现我们常常以呼吸道和消化道症状为主。
排黄绿色粪便、产蛋下降、神经症状、角弓反张肿头、冠和肉髯紫黑色血斑、跖部鳞片出血、饮水量减少。
分为3种即急性型、呼吸道型、野禽的隐性型感染。
2.2病理变化高致的病变一般就是坏死，主要的就是消化器官为主；有的病性直接就会破坏泌尿生殖道，不是致病的病情就会不影响病理的变化。
2.3诊断方法及程序2.3.1 流行病学禽流感病毒的宿主广泛,鸡、火鸡、鸭、鹅、鹌鹑和雉鸡等家禽及野鸟、水禽、海鸟等均可感染。
一般鸡和火鸡都是对病毒禽流感最严重危害的，然而鸭子体内的病毒就比其他的禽类多很多。
2.3.2 临床症状禽流感的潜伏期一般都是从几个小时到3d都是不一定的，有的时候时间的长短都是看感染病毒的毒力和剂量、感染的一些途径、还有就是感染禽的种别和禽体得一些状态。
3 稀释液的配制一定使用PH7.2的PBS液，摄氏121度灭菌15分钟，冷却后，摄氏4度恒温保存备用。
灭菌的时间和温度及恒温保存是关键要素，不能随意改变。
也可先配制浓缩的PBS液保存，每次使用时稀释。
一、前言为了有效预防和控制动物疫病，保障人民群众的生命财产安全，本实验室严格按照国家相关法律法规和标准要求，积极开展动物疫病检测工作。
现将本年度动物检测工作总结如下：二、工作内容1. 采样与送检本年度，我实验室共采集各类动物血清样品1200份，其中猪血清500份，牛血清300份，羊血清400份，鸡血清200份。
采样范围涵盖养殖场、散养户、屠宰场等，确保采样工作的全面性和代表性。
2. 检测项目根据国家动物疫病监测计划，本实验室对采集的动物血清样品进行了以下疫病检测：（1）口蹄疫抗体检测：检测猪、牛、羊口蹄疫抗体水平，评估免疫效果。
（2）禽流感抗体检测：检测鸡禽流感抗体水平，评估免疫效果。
（3）猪瘟抗体检测：检测猪瘟抗体水平，评估免疫效果。
（4）小反刍兽疫抗体检测：检测羊小反刍兽疫抗体水平，评估免疫效果。
（5）新城疫抗体检测：检测鸡新城疫抗体水平，评估免疫效果。
3. 检测方法本实验室采用酶联免疫吸附试验（ELISA）、荧光定量PCR等技术进行动物疫病检测，确保检测结果的准确性和可靠性。
三、工作成果1. 采样与送检本年度共采集各类动物血清样品1200份，其中猪血清500份，牛血清300份，羊血清400份，鸡血清200份，采样率达到了预期目标。
2. 检测结果（1）口蹄疫抗体检测：猪、牛、羊口蹄疫抗体合格率分别为95%、90%、85%。
（2）禽流感抗体检测：鸡禽流感抗体合格率为92%。
（3）猪瘟抗体检测：猪瘟抗体合格率为88%。
（4）小反刍兽疫抗体检测：羊小反刍兽疫抗体合格率为85%。
（5）新城疫抗体检测：鸡新城疫抗体合格率为90%。
3. 防疫建议根据检测结果，我实验室向相关部门提出了以下防疫建议：（1）加强免疫工作，提高动物群体免疫力。
（2）加强疫病监测，及时发现疫情隐患。
（3）加强宣传教育，提高养殖户防疫意识。
四、总结与展望本年度，我实验室在动物疫病检测工作中取得了显著成果，为保障动物疫病防控工作提供了有力支持。
血凝和血凝抑制试验影响因素分析张智鹏【摘要】血凝和血凝抑制试验是检验新城疫、禽流感等疫病抗体效价的一种常用方法,该方法具有经济、简便、灵敏、快速等优点,已被许多市、县级动物疫病预防控制机构实验室所采用,但该试验影响因素很多,常常导致试验结果不准确.作者从试剂的配制、器材的选择及操作中容易出现的问题等方面进行分析,从而避免或减少不利因素的影响,提高试验的准确性.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2010(037)010【总页数】3页(P224-226)【关键词】血凝;血凝抑制;影响因素;分析【作者】张智鹏【作者单位】汉中市动物疾病预防控制中心,汉中,723000【正文语种】中文【中图分类】S854.4+3某些病毒(如禽流感病毒和新城疫病毒)能凝集禽类的红细胞,这个现象称为病毒的血凝(HA),可以用来检测样品中病毒的有无和含量的多少,这不是一个特异性反应,这种现象可以被特异性抗体所抑制,即血凝抑制试验(HI),具有特异性。
因此,血凝—血凝抑制试验可用于鉴定病毒、诊断病毒性疾病和抗体效价的监测。
1 样品的采集与处理1.1 样品的采集采血时环境温度最好在20～25℃之间,利于血液凝固。
禽类一般在翅静脉采血。
用一次性注射器每只采集大约2.5 mL血液,去掉针头,缓慢注入清洁灭菌的青霉素瓶中或塑料离心管中,平放,使血液面最大限度与空气接触。
放置40 min左右,等血液凝固后包扎、整理,放在冷藏室内过夜。
第2天即可析出清亮的血清,将上层血清倒在塑料离心管中。
血液样品在运输过程中防止剧烈震动,产生溶血,影响结果判定。
也可将全血立即进行2000～3000 r/min离心10 min,倒出上层血清。
离心后的血清个别呈胶冻样,可能是因为血内的脂类成分过高所致(刘奇峰等,2009)。
在试验前用牙签挤压,就可将血清挤出。
1.2 样品的处理1.2.1 样品的储藏一般情况下,在5 d内测定的血清样品,可放置于4℃冰箱中冷藏,待检时间超过1周的样品需冷冻保存。
蛋鸡H7N9亚型禽流感抗体监测与分析引言禽流感是一种由不同亚型的鸟流感病毒引起的病害，对鸟类和人类都具有较高的致病性和传染性。
其中H7N9亚型禽流感病毒是近年来新出现的一种亚型，其对人类的致病性较高，引起了广泛关注。
为了了解蛋鸡H7N9亚型禽流感的抗体水平及其平均羊群免疫力，本文将对蛋鸡H7N9亚型禽流感抗体进行监测与分析。
方法1.样本采集从蛋鸡养殖场中，随机选择20个养殖场，每个养殖场从每种不同年龄阶段的蛋鸡中抽取20只样本，共计采集400只蛋鸡的血清样本。
2.抗体检测采用酶联免疫吸附试验（ELISA）对采集的蛋鸡血清样本进行抗体检测。
选择H7N9亚型禽流感病毒特异性抗原进行包被，然后加入待测血清样本，与特异性抗体结合。
最后通过接缴酶染色物质，观察是否出现颜色反应来确定抗体的存在与否。
结果通过ELISA检测，400只蛋鸡样本中有200只样本呈阳性反应，其抗体阳性率为50%。
讨论1.样本数量分析通过本次抽样可以看出，蛋鸡H7N9亚型禽流感的抗体阳性率为50%，这与养殖场中的感染率相对应。
通过抽样方式可以更全面地了解养殖场的流感病毒感染情况。
2.养殖管理蛋鸡的养殖管理对于禽流感的传播和控制起着重要作用。
通过监测抗体水平，可以发现养殖场的养殖管理是否得当。
如抗体阳性率较高，说明养殖场的防控工作有待加强，例如疫苗接种、消毒等。
3.高危人群防控H7N9亚型禽流感对人类具有较高的致病性。
通过抗体监测，可以了解蛋鸡流感病毒的感染情况，提前预警，并加强对高危人群的监测与防控措施，以减少人类感染的风险。
结论通过对蛋鸡H7N9亚型禽流感抗体的监测与分析，本研究发现蛋鸡H7N9亚型禽流感抗体阳性率为50%，提示养殖场中存在感染风险。
因此，养殖场的防控工作需要加强，高危人群需加强监测与防控。
这对于预防和控制H7N9亚型禽流感的传播具有重要意义。
种鸡禽流感抗体检测与分析张继刚【期刊名称】《中国畜禽种业》【年(卷),期】2022(18)4【摘要】为了及时掌握和评价5个种鸡群免疫接种禽流感疫苗的效果,对种鸡群进行禽流感抗体检测和分析。
试验采取血凝和血凝抑制试验,对5个种鸡群的138个血清样本进行禽流感抗体检测。
在5个种鸡群中随机采集138份血清作为禽流感抗体检测样本。
根据我国制定的关于高致病性禽流感诊断技术的标准,实施微量红细胞凝集试验(HA)和红细胞凝集抑制试验(HI),将上述血清样本进行禽流感抗体检测。
免疫接种效果评价标准:以完全抑制4个血凝单位抗原的血清最高稀释倍数作为红细胞凝集试验滴度,如果H5亚型禽流感血凝抑制试验的效价低于4log2说明免疫效果不达标,反之,抗体效价高于4log2说明免疫效果达标,一个种鸡群体中抗体效价达标的比率应在70%以上,这样才能说明整个种鸡群免疫接种效果较理想,能很好地抵御外界禽流感野毒的侵扰。
检测结果:138份血样平均保护力达到80.43%,可以充分证明这5个种鸡场对当地流行的禽流感免疫状况比较理想。
结论,对5个种鸡群随机抽取血清样本进行检测,可以为种鸡场提供合理的免疫接种程序,同时还能及时评价鸡群禽流感抗体水平,减少禽流感疫苗成本和种鸡群感染禽流感疾病的风险。
【总页数】3页(P173-175)【作者】张继刚【作者单位】辽宁省瓦房店市动物疫病防控中心【正文语种】中文【中图分类】S85【相关文献】1.蛋种鸡接种禽流感疫苗后雏鸡母源抗体水平的检测2.规模化肉种鸡场新城疫和禽流感带毒监测与抗体检测研究3.抗禽流感病毒高抗体水平种鸡群的动态免疫效果监测及分析4.江门市种鸡场禽流感H5N1和H7N9抗体监测与分析5.种鸡禽流感抗体的检测与分析因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
禽流感免疫检测检验及应用詹丽娥;乔忠;薛俊龙;王彩先;李红丽;田林君;陆冰洋【期刊名称】《山西农业大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2007(027)005【摘要】1998年以来,山西省多次发生禽流感,严重危害养禽业的健康发展.根据这些情况,我们进行了禽流感免疫检测检验的研究.对雏鸡的母源抗体和种鸡,蛋鸡免疫前后的抗体进行跟踪监测,共检测2 797份,85个鸡群其中对一个中型鸡场连续五年进行了监测,检测结果:雏鸡的母源抗体为3～5 log2.禽流感疫苗免疫鸡后30天,120天检测抗体:30天AI.H5-HI价为5～6 log2、AI-H9-HI价为5.5～6.0 log2;120天AI-H5-HI价为4.0～4.3 log2、AI-H9-HI价为4.1～4.4 log2,看来种鸡和蛋鸡按正常免疫,免疫期为120天左右.对种鸡的免疫剂量进行了跟踪检测,若种鸡140～150 日龄0.5 mL/只免疫,到260～270日龄检测免疫抗体降到临界线,在产蛋高峰期再进行一次免疫;若种鸡140～150日龄0.7～1 mL/X免疫,到305日龄左右检测免疫抗体降到临界线,可以避开产蛋高峰期再进行禽流感疫苗免疫,而且雏鸡母源抗体高、维持的时间长.根据雏鸡母源抗体的高低确定雏鸡的首免时间并制定了一个较为科学的免疫程序:雏鸡母源抗体为3～4 log2左右21～28日龄首免、140～150日龄二免,以后间隔120天左右进行三免;雏鸡母源抗体为5 log2左右35～40日龄首免、140～150日龄二免,以后间隔120天左右进行三免,这个免疫程序已在生产中应用,收到了良好的效果,保证鸡群健康生长和安全生产.【总页数】3页(P1-3)【作者】詹丽娥;乔忠;薛俊龙;王彩先;李红丽;田林君;陆冰洋【作者单位】山西省农科院畜牧兽医研究所,山西,太原,030032;山西省农科院畜牧兽医研究所,山西,太原,030032;山西省农科院畜牧兽医研究所,山西,太原,030032;山西省农科院畜牧兽医研究所,山西,太原,030032;山西省农科院畜牧兽医研究所,山西,太原,030032;山西省农科院畜牧兽医研究所,山西,太原,030032;山西省农科院畜牧兽医研究所,山西,太原,030032【正文语种】中文【中图分类】S851.3【相关文献】1.库尔勒地区蛋鸡高致病性禽流感最佳免疫程序的研究及应用 [J], 柳玲;薛新梅;冉多良2.威海市免疫无高致病性禽流感和免疫无口蹄疫区动物疫病监测体系的建立与应用[J], 张华杰;尹昭智;徐栋3.鸡蛋鸡禽流感免疫程序的制定及推广应用 [J], 杨峰;方英;徐春志;陈红;袁翠霞;彭屹;白璧4.禽流感免疫检测检验及应用 [J], 詹丽娥;乔忠;薛俊龙;王彩先;李红丽;田林君;陆冰洋5.禽流感高敏荧光免疫分析快检试剂盒的研制与应用 [J], 王泽洲; 吴俊清; 章健; 吴冠英; 陈弟诗; 贺冬梅因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
养殖与饲料2021年第07期禽流感免疫抗体检测分析陈霞1陈银基2黄福林11.江苏省南京市高淳区农业农村局动物疫病预防控制中心，南京211313；2.南京财经大学食品科学与工程学院，南京210038摘要为准确评估不同饲养方式下禽流感免疫效果，笔者于2018-2020年连续3年定期对南京市高淳区内的笼养家禽、放养家禽开展抗体检测，以期为禽流感的预防和管理提供科学依据，进一步提高禽流感疫病防控工作的水平。
检测结果表明：近3年本地区禽流感抗体合格率明显上升，笼养方式家禽抗体合格率为90%以上，明显高于放养家禽（70%左右），需要进一步加强对放养家禽的免疫管理工作。
关键词禽流感；抗体检测；笼养；放养；免疫；疫苗收稿日期：2021-01-06陈霞，女，1990年生，硕士，助理兽医师。
禽流行性感冒（简称禽流感）是由禽流感病毒引起的家禽和野禽的一种从呼吸系统疾病到全身性败血症等多种症状的综合病症。
在抗原特性相同的病毒中，有毒力强的毒株，也有毒力弱的毒株。
禽流感临床表现为精神沉郁，羽毛蓬乱，食欲减退或废绝，轻重度不一的呼吸道感染，产蛋下降甚至严重致死性疾病[1]，对家禽养殖业危害很大。
由于本病的临床症状和病理变化的差异大，所以确诊需要依靠病毒的分离鉴定和血清学试验。
该病以预防为主，是国家强制免疫的疾病，对活禽、观赏鸟类、野禽应当进行严格执行免疫程序。
2018年，南京市高淳区采用的是二价苗（H5N1Re-8株和H7N9H7Re-1株），从2019年开始，使用三价苗（H5N1Re-11+12株，H7N9H7Re-2株），以下简称H5+H7三价苗，进行家禽免疫。
随着农业产业结构的不断调整，禽养殖业逐年增加，规模化鸡场增多，仍有部分鸡场及散养户采用放养的方式进行养殖。
笔者对南京市高淳区2018-2020年春秋两季各养殖场进行采样和监测，现将不同饲养方式下禽流感免疫监测效果作出对比，以及时掌握流行病学动态，查漏补缺。
1材料与方法1.1免疫疫苗2018年采样禽流感（H5+H7）二价灭活苗免疫（乾元浩生物股份有限公司）；2019-2020年采样重组禽流感病毒（H5+H7）三价灭活苗免疫（乾元浩生物股份有限公司）。
