高三《基因工程》专题复习(共126张PPT)

• (1)利用PCR技术扩增目的基因，其原理与细胞内DNA 复制类似(如图所示)。图中引物为单链DNA片段，它 是子链合成延伸的基础。
• ①从理论上推测，第四轮循环产物中含有引物A的 DNA片段所占的比例为________。
• ②在第________轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷 酸链等长的DNA片段。
• 质粒只得到长度为14 kb的一个片段，说明该酶在质粒 上只有1个切点；同理可以推测Mbo Ⅰ在质粒上有2个 切点；由图中可以看出同时用两种限制酶切割时得到 了3个片段，由此可以推测限制酶EcoRV的切点在图中 11.5 kb的DNA片段中。具体切割位点见答案。
答案 ①1156 ②三 (2)①引物Ⅰ和引物Ⅱ局部发生碱基互补配 对而失效 ②引物Ⅰ′自身折叠后会出现局部碱基互补配对而失 效 ③DNA 聚合酶只能将单个脱氧核苷酸连续结合到双链 DNA 片段的引物链上 (4)见图
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2、不要看书，要看老师的眼睛
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只要老师不是在一味地读教材，那老师的“话”就不可能和你低头看着的教材上的“文字”一致。头脑聪明的学生，也许能做到既集中精神听老师的话，又集中精神看眼前书上的内容。可是实际上大部分的学生都做不到这一点。
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认真听讲的第一个阶段就是上课时间无条件地“往前看”，上课的时候看书往往很容易开小差。摒除杂念，将视线从摊在眼前的书上移开。老师讲课的时候只看前面，集中注意力听老师嘴里说出来的话，那才是认真听讲的态度。
可以
部分基因以中含有某种生物的全部基个基因控制的性状相同， 则这两个基因的结构也完全相同
难读到老师的表情。认真听讲不单纯是指听老师说的话，把握老师的表情和语调之类的小细节也是很有必要的。说话比平时更用力，或者表情严肃地强调的那个部分几乎百分之百地会出现在考试中。但是如果坐在后面，那种重要的提示就全都错过了。

genes
D: Plant cell
E: Mitochondria
F: Chloroplast G: Nucleus
T-DNA通过一种尚不清楚的机制整合到宿主基因组中
马铃薯RNAi沉默系的StBRI1表达量检测
以马铃薯β-tubulin 为内参基因，采用半定量RT-PCR 的方法分别检 测St BRI1在RNAi沉默系叶片和块茎中的表达量水平。结果显示全 株沉默系叶片和块茎中St BRI1的表达量都明显下降。
基因工程的诞生及所需工具
基因工程诞生的理论基础：DNA是遗传物质的 发现、DNA双螺旋结构和中心法则的确立、遗 传密码的破译 基因工程诞生的技术保障：限制性核酸内切酶 （分离）、DNA连接酶（重组）、载体（运载）
基因工程是在DNA分子水平上进行操作的，需 专门的工具。
构建基因表达载体pBI121-35S-StBRI1-GFP 1、StBRI1扩增（目的基因获取）：
微生物细胞
左边为 突变体，右边为 突变体转空载体恢复表型 由于 35S启动子的增强与沉默造成
（2）基因表达产物的检测
用Thr 磷酸化抗体（Anti-Thr-P）进行检测的结果显示：含 StBRI1的蛋白和含 AtBRI1 的蛋白均能检测到目标蛋白磷酸化。
亚细胞定位
由于马铃薯StBRI1 中间具有一个跨膜区，所以推测该蛋白定位于 膜上。通过瞬时转化本氏烟草，在烟草叶表皮细胞中表达带有绿 色荧光蛋白（GFP）标签的马铃薯StBRI1蛋白，可以看到马铃薯 StBRI1 主要定位于细胞膜上，而不是细胞核或者细胞质。
农杆菌介导的StBRI1 RNAi载体转化马铃薯
1、将重组质粒电击转化到农杆菌GV3101中。 ①含重组质粒 pBI121-B33-StBRI1RNAi 的农杆菌具有卡那霉素 抗性； ②含重组质粒 pART27-35S-StBRI1RNAi 的农杆菌具有壮观霉素 抗性。 2、马铃薯遗传转化 （1）侵染当天，把制备好的含重组质粒的农杆菌菌液转移到无菌 培养皿中。用镊子把预培养的无菌茎段转移到菌液中侵染12 分钟， 期间摇晃培养皿几次。

是基因工程的核心。
(2)基因表达载体的组成：除目的基因外，还必须有
□15 启动子 、□16 终止子和 □17 标记基因 等。
①启动子：是一段有特殊结构的 □18 DNA片段 ，位于 □19 基因首端 ，是 □20 RNA聚合酶识别和结合 的部位。
②标记基因的作用：鉴定受体细胞中是否含有□21 目的 基因 ，从而 □22 将含目的基因的细胞筛选出来 。
专题一 基因工程
教材基础回扣 核心考点整合 命题视角研析 课后限时练
教材基础回扣
教材梳理
一、DNA重组技术的基本工具 1．DNA重组技术的“分子手术刀”
□ (1)“分了手术刀”即 1 限制性核酸内切酶 。 □ (2)来源：主要从 2 原核生物中分离。
(3)功能：识别□3 特定核苷酸序列、切割 □4 磷酸二酯键。 (4)结果：产生□5 黏性末端 或□6 平末端 。
3．将目的基因导入受体细胞的方法
(1)植物最常用： □23 农杆菌转化 法，其次为 □24 基因枪 法、□25 花粉管通道 法。
(2)动物：最常用 □26 显微注射 法，其受体细胞通常为 □27 受精卵 。
(3)细菌：□28 感受态细胞 法，需用 □29 Ca2＋ 处理细胞。
4．目的基因的检测和鉴定
(4)目的基因的检测和鉴定
[应用训练2] (2012·南京教学检测)如图为获得抗虫棉的 技术流程。在培育转基因植物的研究中，卡那霉素抗性基因 (kanr)常作为标记基因，只有含卡那霉素抗性基因的细胞才 能在卡那霉素培养基上生长。
请据图回答： (1)A过程所用的载体是________，需要的工具酶有 ________和________。 (2)C过程的培养基除含有必需的营养物质、琼脂和激素 外，还需加入________。 (3)由图中离体棉花叶片组织获得转基因抗虫植株可采用 ________技术，该技术所依据的原理是_________________ __________________________________________________。

（2）动物细胞 显微注射法 （3）微生物细胞 Ca2+处理法（制备感受态细胞）
农杆菌转化法 原理：植物受损伤—细胞分泌酚类物质—吸引农杆菌—Ti质 粒上的T-DNA可转移到受体细胞中并整合到细胞DNA上
三、基因工程的基本流程 4、目的基因的检测和鉴定
检测目的基因是否插入受体DNA中 DNA分子杂交（Southern杂交） 检测目的基因是否转录 分子杂交（Northern杂交）
识别CCCGGG，并在C与G间切开
平末端
二、基因工程的基本工具 2、DNA连接酶
将DNA片段拼接成新的DNA分子，连接磷酸二酯键 E.coliDNA连接酶 T4DNA连接酶 只能连接粘性末端 既连接粘性末端又连接平末端
3、运载体 质粒
自我复制、多个酶切位点、标记基因等
λ噬菌体衍生物、动植物病毒等
三、基因工程的基本流程 1、目的基因的获取
A.变性过程中被切断的是DNA分子内碱基对之间的氢键,也可 利用解旋酶实现 B.复性过程中引物与DNA模板链的结合依靠碱基互补配对原 则完成 C.延伸过程中需要DNA聚合酶、ATP、四种核糖核苷酸 D.PCR与细胞内DNA复制相 比所需要酶的最适温度较高
3.蛋白质工程在实施中最大的难题是( ) A.生产的蛋白质无法应用 B.发展前景太窄 C.对于大多数蛋白质的高级结构不清楚 D.无法人工合成目的基因 4.下列不可能作为基因工程受体细胞的是( ) A.动物的受精卵细胞 B.人的神经细胞 C.大肠杆菌细胞 D.酵母菌细胞 5.将一个目的基因放入PCR扩增仪中,其他条件都具 备的条件下循环30次,合成的目的基因个数为( ) A.30 B.60 C.229 D.230
8.质粒是基因工程常用的载体,它的特点是(
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