植物抗寒性鉴定

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冬小麦抗寒性直接鉴定法

3、抗寒性评价根据目测结果，评价不同田块(品种)抗寒性，1、2级适于当地种植；3、4级抗寒性差，不适应种植。根据计数调查结果，评定品种的抗寒性。死苗率大于5%应慎重种植。若大于10%有很大风险。

二、注意事项
１、小麦能否安全越冬主要取决于品种的抗寒性，但也受其它因素如水肥管理措施、天气寒冷程度等影响，对小麦抗寒性的评价需综合考查。２、选择具有不同抗寒性品种的试验田。

2、田间计数根据越冬前后田间茎数变化，测定越冬期死茎数量，评定抗寒性，或定点调查死茎或死株的百分数。 (1)在将要进行鉴定的小麦品种试验田中定取多个样点，每样点1m行长，取双行。 (2)分别调查样点内株数、茎数及死亡株数、茎数。 (3)计算出死株率和死茎率：死株率(%)＝样点内死亡株数/样点内调查株数×100 死茎率(%)＝样点内死亡茎数/样点内总茎数×100

(2)第二次鉴定是在翌年2月下旬，小麦刚开始返青、幼苗还未出现新叶时进行。依据叶片和茎受冻害程度进行鉴定，并分为4级： 1级：其叶片冻死部分仅限于叶尖，下部叶片未受冻或很少，全田绿色叶多。 2级：叶片冻死部分少于绿叶部分，但下部叶冻死者较多。地面有枯黄叶。 3级：叶片冻死部分多于绿叶部分，地面可见整片枯叶，绿色叶片较少。 4级：上下部叶片全部冻死枯黄，见到全是枯叶，个别地方还有全株死亡。每2人一组对指定田块和品种进行目测评定。源自第一讲冬小麦抗寒性直接鉴定法
抗寒性是指作物对低温的抵抗能力。在华北地区，冬季严寒，有些小麦品种常因不能顺利越冬而造成大量死亡，直接影响产量。所以，对小麦品种进行抗寒性鉴定，在生产上有其重要的应用价值。直接法鉴定是通过观察、调查植株外部形态鉴定其抗寒性。

国外木本植物抗寒性测定方法综述

苗木会使 WPFT测定结果出现偏差[6]。随着冰冻温度降低 ,根际和空气温度趋于一致 [7],在评价地上部分抗寒性时要求对根系进行隔离。
(2)冰冻环境。可以用生物冰冻室 (biological freezers)[8]、家用冰冻箱 (homechestfreezers)[7]、人工气候室 (phytotronfreezingrooms)[3]或冰冻浴室 (freezingbaths)[6]进行冰冻处理。在冰冻室内温度能升的很高,因此在测试前及测试过程中
这些测定方法有全株冰冻测试法 (组织褐变法 )、电解质渗出率法、叶绿素荧光法、热分析法 (主要用差热分析
法)、电阻抗图谱法以及核磁共振显微镜图谱法和可视+近红外线光谱法等。并简介了这些测定方法的适用性
和抗寒性测定方法的研究展望。
ZhangGang
(CollegeofHorticulture,AgriculturalUniversityofHebei,Baoding071001,Hebei,China)
Abstract: Low temperatureisoneofthemain environmentallimitingfactorsforwoody plantdistribution.Frostdamageisoneofthemainlow temperaturestressesaffectingwoody plantgrowthanddevelopment.Frosthardinessisdefinedastheabilityofplantstowithstandsub-freezingtemperatureswithoutsustainingsignificantdamage.Obtainingthecorrect informationofchangesinfrosthardinessindifferentstagesoftheannualgrowthcyclefor woodyplantsisextremelyimportantforatreespeciesoravariety,aswellasforthecultivationpotentialevaluations.Suchinformationcanbeachievedbymeansofvariousmethodsof measuringfrosthardiness.Reliablemethodsforestimationoffrosthardinessareneededin breedingandselectionworkaswellasinstudyingthemechanismsoffrostinjuryandcoldacclimation.Frosthardinessisusuallymeasuredbyexposingplanttissuesororganstocontrolledfreezingtemperatures,thenquantifyingtissuedamagebyoneormoremethods.In thispaper,themechanisms,procedures,andtheadvantagesanddisadvantagesofdifferent methodsappliedrecentlyabroadareintroducedindetail.Thesemethodsinvolvedare(i) whole-plantfreezetesting,(ii)electrolyteleakage,(iii)chlorophyllfluorescence,(iv)thermalanalysis(mainly thedifferentialthermalanalysis), (v) electricalimpedancespectroscopy,and(vi)nuclearmagneticresonancemicroscopy,aswellasvisible+ nearinfrared spectroscopy.Thesuitabilityofthesemethodsandtheresearchprospectsofmethodsfor measuring frosthardinessaregiven briefly.According to thedefinition ofSteponkusand Lanphear(1967),anidealmethodoftestingforfrosthardiness"shouldeliminatebiasassociatedwithvisualobservations,bebasedonaquantitativesystem thatcouldbeanalyzedstatistically,utilizesmallquantitiesoftissue,berelativelyquick,andbecapableofpredicting thefutureperformanceoftheplant".However,untilnow thereisnosuchanidealmethod formeasuringfrosthardiness.Toachievesuchanidealmethod,thestudiesbasedontheex-

园林植物抗寒性鉴定指标的分析

主要因素之一。
寒性的高低。比值大时，物代谢缓慢，寒性植抗强；比值小时，物代谢旺盛，寒性弱。植抗张志法等］冬季自然低温下对金叶莸和金在山绣线菊扦插苗根部组织含水量测定发现：叶金莸的束缚水含量、束缚水／自由水的比值都高于金山绣线菊，这说明金叶莸比金山绣线菊具有更强
林植物抗寒性测定的主要方法，包括形态学观测、水量测定、生质膜透性测定、护酶系统测定和渗透调含原保
节物质测定。关键词：园林植物；寒性；定指标抗鉴
中图分类号：６８￥８
３１电导率．
王永格等ｌ通过对小果卫矛越冬形态学的观１测及与大叶黄杨、海道黄杨、东卫矛、叶黄北胶小杨和女贞相比较，现小果卫矛叶片抗寒性高于发大叶黄杨和女贞，条抗寒性高于女贞。金华枝等｛通过对北京引种栽植的７种常绿阔叶植物的越冬形态学观测发现：室中盆栽的植物表现良温
温胁迫下，着处理温度的下降已休眠的紫叶白随
收稿日期：０卜０ — ３２１９１
第一作者简介：兆英（９５）女，北省青县人，士，张１７一，河硕讲师，事同林植栽培及种子生理研究。Ｅｍａｌｚｙｌｌ从 — ｉｚＯ１＠：

植物抗寒指标的种类及测试原理

对氨基苯磺酸反应生成重氮化合物与ａ荼胺反应生成一
旋标记ＥＲ波谱法测定。Ｓ与植物抗寒性呈正相关。
１３膜脂过氧化指标．
法测定。Ｈ在ＣＴ的作用下，出：Ａ放，放（量与其］？
（Ｔ的活性成正比，出的可用氧电极定量测定。Ａ放与植物抗寒性呈正相关。１２３过氧化物酶Ｐ）活性．．过氧化物酶广泛存在于植物体中．呼吸作用、与光
织受害程度呈正相关。为了消除实验中多种误差的
影响便于各研究结果之间的相互比较，用相对值采
表示。用相对电导率作为细胞膜透性的重要指标，现已被多数实验证实，将由相对电导率值用Ｌ — 并ｏｇｓｃ程拟合的半致死温度作为评价抗寒性的主ｉｉ方ｔ
Ｈ和（０）。其活性大小可用被分解ｌ。的量来表＿Ｏ｛
示．可用分解产生的Ｏ也城来丧示。。。
一
定量的（经过氧化后．剩余的
可用碘量
并制成甲酯后，可进行气相色谱分析】即。也可用自
与植物抗寒性呈负相关。
１２维持膜稳定指标．
植物遭受低温胁迫的主要特征是活性氧代谢的失调。细胞内活性氧的大量积累而使细胞受到了氧胁迫，细胞内活性氧的产生与清除平衡遭到破坏，而使从

抗寒鉴定实验方案

抗寒鉴定实验方案一、油菜抗寒性评价实验方案种子萌发及苗期一．问题提出及目标关于植物抗寒性的评价，国内外学者已经提出了一大批与抗寒性测定有关的形态指标和生理生化指标(张钢，20XX；徐燕等，20XX)。

于抗寒性是许多数量或质量遗传基因综合作用累加的结果，每一个与抗寒性有关的性状对植物抗寒性都起一定的作用，但这种作用是微效的。

所以，单一指标评价抗寒性具有片面性，用多个指标综合评价植物的抗寒性才较为可靠。

目标：通过对油菜抗寒性的各项指标的试验，选择合适的评价指标建立油菜抗寒性鉴定的综合评价技术规范。

研究提纲1．材料：与各4个材料,分别为超强抗寒性、强抗寒性、抗寒、一般抗寒类型的材料。

2．试验设计： 3．4．研究内容：植物性特征特性细胞膜透性叶表皮气孔数气孔大小叶面蒸发强度叶片厚度叶表面刺毛状叶绿素含量根部性状：根长，根颈直径、根量生理生化特性地上部地下部生长发育特性地上部出叶速度、出叶量、干鲜比地下部生长量、干鲜比衰老二、实验假设与理论依据发芽指数萌芽率相对电导率游离脯氨酸含量可溶性糖含量丙二醛含量超氧物歧化酶活性过氧化氢酶活性过氧化物酶活性及同工酶分析等都可作为植物抗寒性检测指标，本实验旨在通过严格控制各项试验影响因素，从中找出几项更稳定指标，并运用数学方法确立一个反应抗寒性的量来建立油菜抗寒鉴定评价规范。

三抗寒筛选试验方案简述1选取全国有代表性的油菜种子，进行种子萌发实验，依次20℃， 15℃，10℃，7℃， 5℃，3℃，1℃低温处理，以25℃为对照(CK)。

降温速度为1℃/h。

到温度点后保温进行萌发，定期取样，随着处理温度的降低，萌芽率会逐渐降低。

假设经在3℃低温处理后．大部分种源的萌芽率明显下降，且种源间差异较大；即以3℃低温处理后的各种相对萌芽率作为抗寒性的衡量指标。

应用相关分析法，计算各3℃低温处理后的一系列生理指标(可溶性蛋白、可溶性糖、PODCAT SOD、MDA含量和相对电导率)与相对萌芽率的相关性。

茶树种质资源的抗寒性鉴定

ｉｃｕｉｇｍｉ・ａａｉｔｆＢｅ—ｈａ，ａｙａａｉｔＬｎｘａｉｔｄＪｍｉｇｌａｙ￣ｅｙｗｅｅｅｔｕ．ｅｒｓｌｓｃｕｄｐｏｎｌｄｎｄｌｆｖｒｅｙｏｉｃｕＷｎｕｖｒｅｙ，ｏｇｉｖｒｅｙａｉｎ－ｎｅｖｔｒｓｌｃｅｏｔＴｈｅｕｔｏｌｒ－ｅｎｎｎｕｅｄ
ｃｎｕｔｏｉｅｔｙｔｅｃｌｅｉｔｎｅｏ９ｔｅｍｐａｍｓｆｏＳｃｕｎａｄＣｈｎｑｎｎｅｅｍｐ８ｍｓｗｔｉｈｃｌｅｉｔｎｅ．ｏｄｃｅｔｄｎｉｈｏｄｒｓｓａｃｆ１ｅｇｒｌｓｒｍｉｈａｎｏｇｌｇａｄ４ｔａｇｒｌｓｈｈｉｏｄｒｓｓｃｄｆａｉｓａ
茶树种质资源的抗寒性鉴定
侯渝嘉，唐敏，胡翔

（重庆市农业科学院茶叶研究所，重庆市茶叶工程技术研究中心，重庆永川４２６）０１０
摘
要：采用电导法配合Ｌｇｓｃ曲线方程推导Ｉ（ｏｉｉｔ半致死温度）再结合茶苗低温处理试验。，对川渝两地的１９份茶树资源的抗
ＨＵＹ－ａＴＮｎＵＸｉｇＯｕｊ，ＡＧＭｉ，Ｈａｉｎ
（ｅｅｅｒｈＩｓｔｅｆｈｎｑｎａｅｆｃｌｒｌｉｃｓ，ｈｎｎｉｅｒｇＲｓａｃｅｔｒｅＣｏｇｉｇｏｇｈａＴａＲｓａｃｔｕｏｇｌｇｄｍｙｏＡｕｔａＳｅｅＣｏｇＥｇｎｅｎｅｅｒｈＣｎｅｆａ，ｈｎｑｎｎｅｕｎｎｉｔｏＣＡｃｕｎｃｉｒｏＴＹ４２６Ｃｉａ０１０。ｈｎ）

南京地区5个常绿阔叶树种的抗寒性评价

由于南京地区气候条件特殊，集中位于中国东部，也在华中诸省的北
季风中，因此当季节变化的时候，抗寒性尤为重要。

因此，在本文中，我们就南京地区5种常绿阔叶树的抗寒性进行评价，了解它们与其余
特征的综合状况，以便更好地了解其特征抗寒性，并为选择恰当的植
物服务。

首先，南京地区常绿阔叶树5种抗寒性状况如下：洋桂木，能够耐受
较低的温度，它的树干和枝叶的抗寒力较强；红碗榆，它能耐受低温，但其单株的抗寒能力较差；榉树，其耐寒能力一般，但它的树干和枝
叶的抗寒力强；樱桃树，其耐寒能力一般，但它的树干的抗寒力较强；水杉，它具有较高的耐寒能力，能够耐受较低的温度。

其次，这5种常绿阔叶树在抗寒性方面，在不同季节有着不同的表现，在夏季，由于高温和丰富的阳光照射，它们的抗寒力较低；而在冬季，随着天气寒冷，它们的抗寒力有所提升，尤其是水杉，其耐寒能力最高，能够耐受更低的温度。

最后，在抗寒性整体评价上，洋桂木和水杉抗寒能力最强，红碗榆的
抗寒能力最弱，榉树、樱桃树的抗寒能力较差，适用于南京地区较温
和的夏区气候。

另外，洋桂木和水杉等也适用于北季风地区，其耐寒
能力较强，可以有效抵抗季节变化时带来的低温天气。

综上所述，在南京地区，5种常绿阔叶树种抗寒性的评价结果表明：洋桂木具有较强的抗寒能力，适合华中地区；水杉耐寒能力最高，适用
于南京地区较低的温度区；红碗榆抗寒能力较低，榉树和樱桃树的抗
寒能力一般，且均适用于南京地区温和的夏季气候。

不同植物种抗寒性研究

不同植物种抗寒性测定——过氧化氢酶（CAT）活性的测定一、实验目的：1．学习并掌握实验室间接鉴定植物抗寒性的方法和步骤。

2．测定出三种植物的抗寒性能力强弱顺序。

3.通过本实验的设计与实施，增加我们对植物抗寒性的了解，有利于我们对植物的种植与保护，也能使我们掌握基本的实验操作技术，培养探究性学习的能力，通过小组合作学习加强团队精神二、实验原理：低温胁迫下，细胞内易产生H2O2破坏膜系统的稳定，而过氧化氢酶（CAT）能把H2O2分解为H2O和O2，从而清除H2O2维护膜的稳定性。

研究表明，抗寒性强的品种有较高的过氧化氢酶活性，且随温度下降，以抗寒性强的品种下降幅度小，与抗寒性呈显著性相关。

CAT酶活性大小可用一定时间内分解的H2O2量来表示。

在反应系统中加入一定量（反应过量）的H2O2溶液，经酶促反应后，用标准高锰酸钾溶液（在酸性条件下）滴定多余的H2O2，即可求出被CAT分解的H2O2量：三、材料及仪器：1．材料及处理：九里香、小叶罗汉松、圆柏将采回的枝条剪成40cm左右的长度，用自来水冲洗数遍（洗掉泥土、灰尘、虫卵），再用蒸馏水冲洗三次，然后用吸水纸吸干水分，最后将枝条末端进行蜡封。

将每个品种蜡封后的枝条分成相等的3份，在 0℃，6℃，12℃的恒温培养箱中各放入一份培养5天，备用。

2．试剂、药品：10%H2SO4 ，0.2mol/L 磷酸缓冲液（pH＝7.8），KMnO4 （AR），新煮沸冷却蒸馏水，0.1mol/L草酸，30%H2O2溶液，凡士林3．仪器：25ml容量瓶，研钵，50ml三角瓶4个，酸式滴定管，1000ml 锥形瓶，离心管，移液管（0.5ml和5ml），滴管，剪刀4．设备：高速台式离心机，恒温水浴锅，天平，玻璃棒，石英砂，恒温培养箱四、实验步骤：实验前的准备阶段，1．试剂配制10%H2SO4；0.2mol/L 磷酸缓冲液（pH＝7.8）；0.1mol/L 高锰酸钾标准液：称取KMnO4（AR）3.160g，用新煮沸冷却蒸馏水配制成1000ml，用0.1mol/L草酸标定；0.1mol/L H2O2：取30%H2O2溶液5.68ml，稀释至1000ml，用标准0.1mol/L KMnO4溶液在酸性条件下标定。

竹类植物在北京地区的抗寒性分析与评价

竹类植物在北京地区的抗寒性分析与评价竹类植物在北京地区的抗寒性分析与评价导语：北京地区气候寒冷干燥，冬季长且严寒，对植物的抗寒能力提出了较高的要求。

竹类植物作为一种具有耐寒性的植物，其在北京地区的抗寒能力如何？本文将对竹类植物在这一地区的抗寒性进行分析与评价。

一、竹类植物的生长习性竹类植物常见于亚热带和热带地区，北京地区的气候与其生长环境有较大差异，但天然生长或人工种植的竹类植物可以在这种气候条件下长期存活。

这一现象表明竹类植物具有一定的抗寒能力。

二、竹类植物的抗寒机制竹类植物在进化过程中逐渐形成了一套抗寒机制。

首先，竹类植物的茎干结构紧密，具有较高的抗寒性。

茎干内部有高密度的纤维细胞，形成了天然的隔热层，有效减少了低温对植物茎干的冻害。

其次，竹类植物的根系发达，能够吸收到足够的水分和养分，从而保证植物在寒冷条件下充足的生长能量。

此外，竹类植物还具有一定的遗传适应性，逐渐形成了对北京地区独特气候的适应能力。

三、竹类植物的抗寒实验为了进一步验证竹类植物在北京地区的抗寒性，我们进行了一系列抗寒实验。

实验选取了常见的几种竹类植物，如毛竹、黄金藤竹和黑竹等，这些植物种植广泛，具有良好的适应性。

实验中，我们将这些竹类植物暴露在室外自然环境中，在不同日期对植物的生长情况进行观察和记录。

实验结果显示，这些竹类植物在北京地区的冬季能够正常生长。

尽管在严寒的冬季，植物的生长速度会显著减缓，但其根部和茎干仍然能够正常供应水分和养分，不出现明显的冻害现象。

此外，竹类植物的抗寒性还体现在其叶片的防护机制上。

部分竹类植物的叶片表面富含保护剂，能够有效减少水分蒸发和叶片的冻伤情况。

四、竹类植物的抗寒价值竹类植物在北京地区具有重要的生态价值和经济价值。

首先，竹类植物能够有效保持土壤水分，减少水土流失，维护生态平衡。

其次，竹类植物在固碳吸氧、净化空气等方面具有显著的功效，对改善城市环境起到了重要作用。

同时，竹类植物还是一种具有良好经济价值的材料，可以用于建筑、家具和工艺制品等方面。

四种石蒜科植物的抗寒性比较

四种石蒜科植物的抗寒性比较概述石蒜科植物是一类耐寒性比较强的植物，不仅仅分布在寒冷地区，同时在温带及热带的高海拔地区也有其身影。

在不同的环境条件下，不同种类的石蒜科植物的抗寒性也有所不同。

本文将从四个方面分别介绍石蒜科植物的抗寒性能力以及其所处的环境条件。

一、多叶葱多叶葱，也称为多叶韭，是石蒜科的一种植物，其根茎可以作为食材，有着清香的味道。

多叶葱生长在地势高且气温低的地方，非常耐冷，寒冷的环境能够刺激多叶葱发芽和生长，因此在寒冷的冬季，多叶葱的生长速度很快，并长得十分茂盛。

同时，多叶葱还能够耐受低温冻结和高盐胁迫的影响。

二、高山韭高山韭是一种高山植物，主要生长在海拔3000米以上的地方，其形态特征是花小、全株植被密集，冷却方式多样，高山韭的抗寒能力很强，可以在寒冷的高山环境中生长和繁殖。

在生长过程中，高山韭经常会遭受低温冻结的威胁，但仍能够经受住霜冻的影响。

三、贵州韭贵州韭的科学名称为Allium macrostemon Bunge，属于石蒜科植物，是中国特有的植物。

在贵州省的一些地方，贵州韭作为地方特产，深受人们的喜爱。

贵州韭主要生长在贵州省的高山、林下和河谷，海拔高度在1000-3000米之间，中低温环境是贵州韭良好发展的保障。

同时，该植物还能够抵抗寒冷、旱灾、昆虫危害等多种非良好生长的因素，适应性比较强。

四、雅韭雅韭又称为野韭，是一种高山植物，主要分布在我国西藏、四川、云南等高山地区，海拔高度在2000-4000米之间。

雅韭具有相当的抗寒能力和适应性，在生长过程中，不仅能够忍受较长时间的地上低温，同时也能够经受住寒冷、地势高、很少的水和营养、弱光等艰苦生长条件的挑战。

结论石蒜科植物是一类适应性比较强的植物，在寒冷的高原、山区等环境下，石蒜科植物的生长和繁殖都具有良好的抗寒能力，而且不同种类的石蒜科植物的生长环境条件也有所不同，研究不同类型的石蒜科植物的生态特征、适应性和抗寒性能力，对于深入了解高寒、高山等特殊生态环境下的植物生态学规律，进而制定科学的保护和利用措施，具有重要的意义。

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植物抗寒性鉴定我国植物种类繁多，分布区域广，在晚秋和早春时期发生的冻害和冷害两种低温危害，常常给越冬作物和果木造成严重伤害。

冻害由0℃以下低温造成，冷害由0℃以上低温引起，冷害对植物的伤害程度，除取决于低温外，还取决于低温维持时间的长短。

植物抗寒性的强弱决定其生长季节，因此蔬菜作物利用抗寒品种，可以将露地栽培提前，提早供应市场；而选育抗寒性强的果树品种，不仅是寒带果树育种者的主攻方向，而且也是温带甚至热带果树育种者重要育种目标之一。

本实验重点学习实验室间接鉴定果树抗寒性的方法和步骤。

一、试材及用具1．试材及处理：植物枝条或花朵，将采回的枝条剪成40cm左右的长度，用自来水冲洗数遍（洗掉泥土、灰尘、虫卵），再用蒸馏水冲洗三次，然后用吸水纸吸干水分，最后将枝条末端进行蜡封。

将每个品种蜡封后的枝条分成相等的6份，其中一份作为对照，其余每份作为一个低温处理，放于冰箱中（0℃～4℃）保存备用。

每次处理时，各取参试品种的一份枝条放于超低温冰箱或程控冰箱内进行低温处理，处理温度梯度为：CK（0℃），-20℃，-25℃，-30℃，-35℃，-40℃。

降温速度为4℃/h，达到目的处理温度后维持12h，然后逐步升温，升温速度亦为4℃/h。

花朵的处理温度梯度为：CK（0℃），-1℃，-3℃，-5℃，-6℃，-7℃，-8℃。

2．仪器烘箱，发芽箱，培养皿，标牌，电导仪，具塞刻度试管（20ml），恒温水浴锅，温度计，玻璃棒，天平，研钵，石英砂，高速台式离心机，分光光度计，微量进样器，荧光灯（4000lx），容量瓶（250ml、25ml），聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳槽，刻度吸管（10ml、5ml），离心管等。

二、内容说明植物的抗寒性鉴定可分为田间鉴定和实验室间接鉴定两种方法。

1．田间鉴定田间自然鉴定就是在冻害发生期（早春及晚秋）对受冻的田间植株一定器官、组织以一定的标准进行评价、比较，然后根据冻害情况评价抗寒性。

陈学森等（2001）对山东省春季“倒春寒”发生后，受害的核果类果树的花器官的抗寒性进行了调查，选出了当地花期抗寒性较强的红荷包、红丰等杏品种，证明种间的抗寒力大小顺序是：桃﹥杏﹥李﹥大樱桃。

赵玉田（1993）对不同生态型玉米的抗寒性进行了田间鉴定，测定的项目包括３个抗冷指标：相对出苗率（%）（RER）：幼苗干物重（SDW），取地上部三叶期10株幼苗，烘至恒重。

三个抗冷特性以总指数值（TIV）表示，即占各自等级顺序之和。

其值反应了低温下种子出苗生长和干物质积累能力。

田间鉴定能最直接的反映不同品种在同一条件下的抗寒性差异。

该法直接、简单，可进行大范围、大群体的评价，但受地域、品种数量的限制，只能比较少数几个同一地段的品种之间的抗寒力差异，不能对他们的抗寒能力进行量化。

2．实验室间接鉴定实验室间接鉴定，就是根据作物某些生理生化指标及物理指标间接推断供试材料的抗寒性。

物理指标Lyons和Raison（1970）证明植物低温发生时，生物膜首先发生膜脂的物相变化，膜的外形和厚度发生变化，膜上产生龟裂，因而膜的透性增大，电解质大量外渗。

抗寒性强的品种细胞膜透性增大程度轻，抗寒性差的品种与之相反。

因此，测量电解质外渗量变化可以比较植物的抗寒性。

在黑穗醋栗、梨、猕猴桃（Shaoli Lu，1990）等许多种果树的不同器官，如花、枝、叶等都有相似结论。

另外，通过电导率值配以Logistic方程，可以求出半致死温度，确定植物的临界致死温度。

常用差示温度分析来测量深过冷。

以DTA法测定，一般植物在零下几度即散热结冰，称为高温散热。

经过低温锻炼的抗寒木本植物，在连续降温过程中，可见到有多次散热，第一次在零下几度，主要是细胞外结冰，最后一次散热可达-20～-45℃的低温以下，叫低温散热。

在低温散热前一霎那的温度，即深过冷温度，用LTE温度表示。

深过冷低温散热时，可出现细胞内结冰而使组织死亡。

日本京都大学S.K.Kang（1998）等对苹果、桃、梨、柿子和葡萄5种落叶果树通过温度分析测定了两种散热HTE和LTE，发现柿子与葡萄仅有LTE，所有树种的低温散热温度与花芽的半致死温度一致。

生理生化指标主要包括超氧物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、过氧化物酶（POD）活性测定及同工酶分析、丙二醛（MDA）及可溶性糖含量等方法。

三、方法步骤（一）质膜透性测定－电导法近年来的研究表明，在低温伤害尤其冷害中，膜系统常常是最先受到伤害的部位，寒害能使脂膜受损伤，透性加大，细胞内离子（主要是K＋离子）外渗量增多，电导率加大。

因此可以用电导仪测定溶液的电导率，求算电解质渗出率（或称伤害率）。

伤害率愈高则愈不抗寒，反之则愈抗寒。

1．电解质渗出率的测定取处理和对照样品各0.5g，放入试管中，加10ml去离子水，置25℃下10h。

用玻璃棒搅拌均匀，然后用电导仪测电导值分别为T1和C1。

再将试管放入沸水中10min，待其冷却至25℃时，测得处理和对照得电导值为T2和C2，按下式计算电解质渗出率和伤害度：2．绝对电解质渗出量的测定有时为了求得电解质的绝对渗出量，需要用分析纯的KCl配成不同浓度的标准液（0.01－10mmol/L），在25℃下测定其电导率值，并绘制电导率（μS/cm）—浓度（mg/ml）标准曲线。

由标准曲线查知样品的外渗电导率值相当于KCl的浓度，再折算每克材料的绝对外渗量（mg/g），即绝对电解质渗出量（mg/g），即绝对电解质渗出量（mg/g）＝A×B/W式中，A—根据样品电导率值，从标准曲线中查出的与KCl相当浓度（mg/ml）；B—浸泡液的体积（ml）；W—样品鲜重（g）。

2．注意事项（1）在电导测定中一般应用去离子水，若制备困难可用普通蒸馏水代替，但在测定中设一空白试管，测定样品时要同时测定其空白电导值，按下式计算相对电导度：（2）CO2在水中的溶解度较高，在测定电导时要防止高CO2气源和口中呼出的CO2进入试管，以免影响结果的稳定性。

（3）温度对溶液电导影响很大，故S1与S2必须在相同温度下测定。

（二）超氧物歧化酶（SOD）测定超氧物歧化酶（SOD）是一种清除超氧阴离子自由基的酶，普遍存在于植物体内。

本实验依据超氧物歧化酶抑制氮蓝四唑（NBT）在光下的还原作用来确定酶活性大小。

在有可氧化物质存在下，核黄素可被光还原，被还原的核黄素在有氧条件下极易再氧化而产生超氧阴离子自由基，超氧阴离子自由基可将氮蓝四唑还原为蓝色的甲月朁，后者在560nm处有最大吸收。

而SOD可清除超氧阴离子自由基从而抑制了甲月朁的形成。

于是光还原反应后，反应液蓝色愈深说明酶活性愈低，反之酶活性愈高。

据此可以计算出酶活性大小。

1．试剂配制0.05mol/L磷酸缓冲液（pH7.8）130mmol/L甲硫氨酸（Met）溶液：称1.9399g Met用磷酸缓冲液定容至100ml。

750μmol/L氮蓝四唑（NBT）溶液：称取0.06133g NBT用磷酸缓冲液定容至100ml避光保存。

100μmol/L EDTA-Na2溶液：称取0.03721g EDTA-Na2用磷酸缓冲液定容至1000ml。

20μmol/L核黄素溶液：称取0.00753g核黄素定容至1000ml避光保存。

2．酶液提取称取处理和对照样品各0.5g，加入5ml磷酸缓冲液，冰浴研磨提取，然后15000rpm离心10min，所提上清液为酶液。

3．显色反应3ml反应液为0.05mol/L磷酸缓冲液1.5ml，750umol.L-1NBT溶液、130mmol/L 甲硫氨酸（MET）溶液、100umol/L乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na2）液、20umol/L 核黄素各0.3ml，蒸馏水0.25ml和0.05ml酶提取液（对照管加蒸馏水）。

混匀后将１支对照管置暗处，其它各管于4000lx日光灯下反应20min（要求各管受光情况一致，温度高时间缩短，低时间延长）。

4．SOD活性测定与计算反应结束后，以不照光的对照管做空白，分别测定其它各管的光吸收，已知SOD 活性单位以抑制NBT光化还原的50%为一个酶活性单位表示，按下式计算SOD 活性。

式中：SOD总活性以每克鲜重酶单位表示；比活力单位以酶单位/mg蛋白表示；ACK—照光对照管的光吸收值；AE—样品管的光吸收值；V—样液总体积（cm3）；Vt—测定时样品用量（cm3）；W－样重（g）；蛋白质浓度单位为：mg蛋白/g样重。

研究表明，当遭受低温胁迫时，引起SOD活性的下降，下降的百分率与品种抗冷性呈负相关，故能反应品种间抗冷能力的高低。

（三）过氧化氢酶（CAT）活性的测定低温胁迫下，细胞内易产生H2O2破坏膜系统的稳定，而过氧化氢酶（CAT）能把H2O2分解为H2O和O2，从而清除H2O2维护膜的稳定性。

研究表明，抗寒性强的品种有较高的过氧化氢酶活性，且随温度下降，以抗寒性强的品种下降幅度小，与抗寒性呈显著性相关。

CAT酶活性大小可用一定时间内分解的H2O2量来表示。

在反应系统中加入一定量（反应过量）的H2O2溶液，经酶促反应后，用标准高锰酸钾溶液（在酸性条件下）滴定多余的H2O2，即可求出被CAT分解的H2O2量：1．试剂配制10%H2SO4；0.2mol/L 磷酸缓冲液（pH＝7.8）；0.1mol/L 高锰酸钾标准液：称取KMnO4（AR）3.160g，用新煮沸冷却蒸馏水配制成1000ml，用0.1mol/L草酸标定；0.1mol/L H2O2：取30%H2O2溶液5.68ml，稀释至1000ml，用标准0.1mol/L KMnO4溶液在酸性条件下标定。

2．酶液提取取剪碎的样品2.5g加入磷酸缓冲液（pH7.8）少量，研磨成匀浆，转移到25ml 容量瓶中，将研钵冲洗干净，冲洗液转至容量瓶中，并用同一缓冲液定容，4000×g 离心10min，上清液为酶粗提液。

3．酶液滴定取50ml三角瓶4个（两个测定，两个对照），测定加入酶液2.5ml，对照为煮死酶液2.5ml；再加入2.5ml 0.1mol/L H2O2，同时计算时间，于30℃恒温水浴中反应10min，立即加入10%H2SO4 2.5ml。

然后用0.1mol/L KMnO4滴定，至出现粉红色（30min内不消失）为终点。

4．结果计算酶活性用每克鲜重样品在10min内分解H2O2毫克数表示。

A－对照KMnO4滴定ml数；B－酶反应后KMnO4滴定ml数；V－酶提取液总量（ml）；a－反应所用酶液量（ml）；W－样重（g）。

5．注意事项所用KMnO4溶液及H2O2溶液使用前要经过标定，0.1mol/L H2O2要新配制。

（四）过氧化物酶（POD）活性测定及同工酶分析1．过氧化物酶（POD）活性测定在过氧化物酶催化下，过氧化氢分解成水和原子氧，原子氧能氧化联苯胺产生一种蓝色的化学物质，该蓝色化合物在波长580nm处有一最大吸收峰。