多酚提取步骤和含量计算

多酚沉淀法提取
多酚沉淀法提取植物多酚的过程主要包括以下几个步骤：
1. 用水溶液将植物多酚成分溶解出来。

2. 在一定的pH条件下，使多酚类物质与Al3+、Zn2+、Hg2+、Ca2+、Mg2+、Fe3+等金属离子产生络合沉淀。

3. 将沉淀离心分离出来后，加酸转溶。

4. 最后用有机溶剂抽提出多酚物质。

大量的实验结果均证明，沉淀法萃取植物多酚提取率可达到10-15%，有效成分含量在90%之上。

相比与溶剂萃取法，沉淀法所使用的溶剂含量少，所需提取设备、工艺简单，生产操作安全，并且可以得到纯度很高的植物多酚产品，因此应用较广。

但值得注意的是，在沉淀法提取过程中，由于提取过程耗费时间较长，植物多酚易被氧化遭受破坏，并且沉淀过程中残留的一些重金属离子对产品的安全也是一个巨大的隐患。

此外，关于超声波提取植物多酚的方法，是利用超声波的空化效应、热效应和机械作用，在一定的提取温度和时间控制下，选用合适的超声波功率，对植物多酚类成分进行提取。

福林酚法测多酚含量的原理多酚是一种重要的天然物质，具有多种生物活性和药理作用。

因此，测定多酚含量对于食品、药品、化妆品等领域具有重要意义。

福林酚法是一种常用的测定多酚含量的方法，本文将介绍福林酚法测多酚含量的原理。

一、福林酚法的基本原理福林酚法是以福林酚为试剂，测定多酚含量的方法。

福林酚是一种酚类化合物，可以和多酚发生氧化反应，生成深褐色的产物，其吸光度与多酚的含量成正比。

因此，通过测定深褐色产物的吸光度，可以计算出多酚的含量。

二、福林酚法的步骤福林酚法的具体步骤如下：1.制备福林酚试剂：将福林酚和氢氧化钠混合，加入水中搅拌至完全溶解。

2.制备标准曲线：取一定浓度的多酚标准品，加入福林酚试剂，混合均匀后，测定吸光度。

根据吸光度和多酚标准品的浓度，绘制标准曲线。

3.测定样品：取一定量的样品，加入福林酚试剂，混合均匀后，测定吸光度。

根据标准曲线，计算出样品中多酚的含量。

三、福林酚法的优缺点福林酚法测多酚含量具有以下优点：1.简单易行：福林酚法的操作简单，不需要复杂的仪器和技术。

2.灵敏度高：福林酚法对多酚的检测灵敏度高，可以检测到微量的多酚。

3.稳定性好：福林酚试剂具有较好的稳定性，可以长期保存。

但福林酚法也存在一些缺点：1.受干扰：福林酚法对一些物质具有交叉反应，如还原糖、蛋白质等，会对多酚含量的测定造成干扰。

2.适用性有限：福林酚法只适用于测定含有酚羟基的多酚，对于不含酚羟基的多酚无法测定。

四、福林酚法的应用举例福林酚法广泛应用于食品、药品、化妆品等领域的多酚含量测定。

以下是一些应用举例：1.测定茶叶中多酚含量：茶叶中含有大量的多酚，可以通过福林酚法测定其含量，从而评估茶叶的品质和功效。

2.测定葡萄酒中多酚含量：葡萄酒中含有丰富的多酚，可以通过福林酚法测定其含量，从而评估葡萄酒的品质和营养价值。

3.测定化妆品中多酚含量：化妆品中含有多种多酚，可以通过福林酚法测定其含量，从而评估化妆品的功效和安全性。

提取物中多酚类化合物的鉴定一、前言多酚类化合物是一类广泛存在于植物中的天然化合物，具有抗氧化、抗炎症、抗肿瘤等多种生物活性。

因此，对于提取物中多酚类化合物的鉴定具有重要意义。

本文将从样品制备、实验方法和数据分析三个方面介绍提取物中多酚类化合物的鉴定方法。

二、样品制备1. 样品来源样品可以来源于植物组织、食品或者药材等。

在选择样品时需要考虑样品的质量和含量，以及是否符合实验要求。

2. 样品制备（1）植物组织：将新鲜或干燥的植物组织粉碎成粉末，过筛筛选出适当大小的颗粒。

（2）食品：将食品切碎或者磨成粉末，过筛筛选出适当大小的颗粒。

（3）药材：将药材切碎或者磨成粉末，过筛筛选出适当大小的颗粒。

3. 样品储存为了保证实验结果的准确性，在制备好样品后需要储存好样品。

对于植物组织和食品，可以将其放置在密闭的塑料袋中，避免受潮、氧化和污染。

对于药材，可以将其放置在干燥、阴凉、通风的地方。

三、实验方法1. 总多酚含量测定总多酚含量是指样品中所有多酚类化合物的总量。

常用的测定方法有菲林-苏丹法和Folin-Ciocalteu法。

（1）菲林-苏丹法：该方法基于菲林试剂与多酚类化合物反应产生的蓝色色素和苏丹红试剂与蛋白质反应产生的红色色素之间的差异。

步骤如下：① 取适量样品加入盛有5ml水的离心管中。

② 加入2ml 95%乙醇，振荡混匀。

③ 离心10分钟，取上清液加入新离心管中。

④ 加入1ml 0.5%菲林试剂和1ml 10%Na2CO3溶液，振荡混匀后放置30分钟。

⑤ 加入2ml 1%苏丹红试剂，振荡混匀后放置5分钟。

⑥ 用紫外可见分光光度计在760nm处测定吸光度。

（2）Folin-Ciocalteu法：该方法基于Folin-Ciocalteu试剂和多酚类化合物反应产生的蓝色色素之间的关系。

步骤如下：① 取适量样品加入盛有5ml水的离心管中。

② 加入2ml Folin-Ciocalteu试剂，振荡混匀后放置5分钟。

提取茶叶中的茶多酚
徐成郡
经济管理学院12-1班
实验名称：提取茶叶中的茶多酚
实验目的：计算茶叶中的茶多酚含量
实验器材：试管、烧杯、量筒、加热器、加压过滤器、胶头滴管、 移液管、比色皿
实验药品：磷酸氢二钾溶液、磷酸二氢钾、茶叶、酒石酸亚铁溶 液
实验原理：茶叶中含有很多的酚类，酚类会与酒石酸亚铁发生反 应生成紫蓝色络合物，通过测量器吸光度计算其含量
计算公式为：茶多酚（%）=
100**1*10002*957.1*m
V A % 实验步骤：
1.取磷酸二氢钾溶液15ml 和磷酸氢二钾溶液85ml
于
烧杯中混合均匀。

2.称取5g 茶叶，加入200ml 水煮沸，静止20分钟， 加压过滤，量取滤液体积，记为V=150ml.
3.准确吸取上述试液1ml ，注入25ml 容量瓶中，加 水4ml 和酒石酸亚铁溶液5ml ，充分混匀后，再 加PH7.5的缓冲溶液至刻度线。

然后取一个干净
的25ml 容量瓶，加入4ml 水和酒石酸亚铁溶液
5ml ，充分混匀后再加PH 7.5的缓冲溶液至刻度
线制得空白溶液。

4.用两个10mm 比色皿分别取上述两种溶液，测定
吸光度（A ）=1.315
实验结果：
茶叶中茶多酚的含量 =100**1*10002*957.1*m
V A =100*5*1150*10002*957.1*315.1%= 15.44% 实验总结：在这次的实验中感受到团队合作的重要性，因为我是 一个人做的，当有些东西不懂的时候也没有人可以 问，可以的话下次找个同学搭档，另外就是自己的动
手能力还有些不行，必须加强才行。

绿茶提取物中茶多酚含量测定方法（UV）
一、仪器与试剂
仪器：移液管（1ml）；容量瓶（100、25ml）；分析天平（1/10000）；紫外分光光度计
试剂：超纯水；硫酸亚铁（AR）；酒石酸钾钠（AR）；磷酸氢二钠（AR）；磷酸二氢钾（AR）
二、试剂的配制
酒石酸亚铁溶液：称取1g（精确至0.0001g）硫酸亚铁和5g酒石酸
钾钠（精确至0.0001g）用水溶解并定容至
1000ml。

PH7.5磷酸盐缓冲液：称取23.377g磷酸氢二钠，加水溶解并定容至
1000ml；称取9.078g磷酸二氢钾（磷酸二氢
钾在110℃干燥2h）加水溶解柄定容至1000ml;
二溶液按85：15（V/V）混合均匀。

三、样品处理
称取本品40-45mg，置于50ml容量瓶中，加水，振摇使溶解，定容至刻度，摇匀，取5ml至25ml置容量瓶中，加水4ml，酒石酸铁溶液5ml，用PH7.5磷酸盐缓冲液定容至刻度，摇匀，即得。

四、紫外条件
检测波长：540nm
以试剂空白溶液对照
五、含量计算
茶多酚的含量按下式计算 X(%)=%1001000
50.0957.121⨯⨯⨯⨯⨯⨯M V V A A ：供试液吸光度；
1V ：供试品提取液；
2V ：测定时的取用量；
M ：供试品的称样量（g ）；
1.957:当吸光度等于0.50时，1ml 供试品溶液中含茶多酚相当于
1.957mg 。

多酚提取方法：多酚含量的提取按照Chiou等（2007）年的方法进行，取1g果肉，0-4℃冰浴研磨，加入10ml 75%甲醇，然后放入离心管中，超声波处理15min，然后摇床摇动12h，10, 500g离心10min，取上清液，然后残渣加入10ml 75%甲醇重复提取2次，合并上清液，用50ml蒸馏烧瓶30℃低压蒸馏2h，然后用蒸馏水溶解定溶到10ml，用于多酚含量的测定。

多酚检测方法：色谱条件：C18柱（(250×4.6 mm）；波长：280；流速：1 mL min-1流动相：A：乙酸/水(1:50, v:v)B：乙腈/甲醇(10:15, v:v)设置梯度洗脱：0 min：90% A and 10% B10 min：80% A and 20% B15 min：70% A and 30% B25 min：60% A and 40% B30 min：50% A and 50% B40 min：50% A and 50% B.标样图谱：（自己做的数据）标准样品重量g 定容体积ml 稀释倍数浓度g/ml ug/ml 出峰时间gallic acid 0.0061 25 100 0.00000244 2.44 4.914546 (+)catechin 0.0067 25 40 0.0000067 6.7 12.91146 ferulic acid 0.0059 25 40 0.0000059 5.9 21.38777 chlerogenic 0.0063 25 100 0.00000252 2.52 11.72349 caffeic acid 0.0097 25 100 0.00000388 3.88 15.92295 香豆酸0.0048 25 100 0.00000192 1.92 22.75522 phlorizin 0.005 25 100 0.000002 2 27.58096。

多酚类化合物介绍：多酚类化合物是指同一苯环上有若干个酚性羟基的一类化合物。

植物多酚具有抗菌、消炎、抗血栓、抗病毒、抗癌和扩张血管等生理作用。

一些多酚类化合物及其衍生物具有较好的清除自由基的作用，因此是一类良好的天然抗氧化剂。

自然界植物中发现的具有抗氧化性的酚酸化合物主要有原儿茶酸、沒食子酸(山茱萸)、3-羟基苯乙酸、如绿原酸(金银花)、阿魏酸(当归)、咖啡酸、迷迭香酸(紫苏)、介子酸(蜂胶)等。

绿茶中所含多酚类的儿茶酚具有抗氧化作用，其活性优于相同浓度的а-生育酚，是人工合成抗氧化剂BHT(二丁基羟基甲苯)、BHA(丁基羟基茴香醚)的4～6倍，若与维生素C和维生素E配合还具有增效作用。

白藜芦醇以及沒食子酸和从葡萄籽及松树皮提取物中发现的原花青素等多酚物质也被证实有很强的抗氧化性，且已被证实强于某些抗氧化维生素。

清热解毒类中草药中总多酚的测定——Folin-Ciocalteu比色法[1.1 实验材料栀子、龙胆草和板蓝根购于贵阳三桥药材批发市场；射干产自贵州施秉牛大场GAP药材基地；黄柏、头花蓼分别产自习水和雷山。

1.2 试剂亚硝酸钠，硝酸铝，氢氧化钠，乙醇(均为分析纯)1.3仪器101-1A型电热鼓风干燥箱(天津市泰斯特仪器有限公司)；A200S型电子天平（Made in Germany）；循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司)；KDM型控温电热套(山东鄄城华鲁电热仪器有限公司)；UV2300分光光度计（上海天美科学仪器有限公司）；FZ102型微型植物粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司）。

1.4实验原理Folin-Ciocalteu比色法原理是基于Folin-Ciocalteu试剂中的钨钼酸可以将多酚化合物定量氧化，自身被还原生成蓝色的化合物，颜色的深浅跟多酚的含量呈正相关。

2.分析步骤⑴多酚的提取购买药材，清洗后晾干，将其放入微型植物粉碎机中粉碎，即得到相应的中药材粉末。

精密称取粉碎均匀的试样2.5g于250ml圆底烧瓶中，加溶剂（95%乙醇/水）100ml加热回流1小时，抽滤，滤渣再加溶剂（95%乙醇/水）100ml 再回流1小时，抽滤。

一、实验目的1. 学习和掌握多酚的提取和分离方法。

2. 掌握多酚含量的测定方法。

3. 了解多酚在食品、医药等领域的应用。

二、实验原理多酚是一类含有多个酚羟基的有机化合物，广泛存在于植物、茶叶、果实等天然产物中。

多酚具有抗氧化、抗炎、抗菌等多种生物活性，对人体健康具有重要意义。

本实验采用水提法提取多酚，采用福林-酚法测定多酚含量。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：茶叶、乙醇、氢氧化钠、硫酸铜、无水乙醇、碳酸钠、硫酸亚铁、福林-酚试剂等。

2. 实验仪器：电子天平、恒温干燥箱、微波炉、分光光度计、移液器、容量瓶、烧杯、试管等。

四、实验步骤1. 茶叶提取（1）称取一定量的茶叶，加入适量的乙醇，置于微波炉中加热提取。

（2）提取结束后，将提取液过滤，得到多酚提取液。

2. 标准曲线绘制（1）准确移取一定量的福林-酚试剂，加入容量瓶中，用无水乙醇定容至100mL，得到福林-酚储备液。

（2）准确移取一定量的硫酸铜溶液，加入容量瓶中，用无水乙醇定容至100mL，得到硫酸铜溶液。

（3）准确移取一定量的碳酸钠溶液，加入容量瓶中，用无水乙醇定容至100mL，得到碳酸钠溶液。

（4）准确移取一定量的硫酸亚铁溶液，加入容量瓶中，用无水乙醇定容至100mL，得到硫酸亚铁溶液。

（5）取一系列的多酚标准溶液，分别加入适量的福林-酚储备液、硫酸铜溶液、碳酸钠溶液、硫酸亚铁溶液，混匀，静置5min。

（6）在510nm波长下，用分光光度计测定吸光度。

（7）以多酚浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

3. 多酚含量测定（1）准确移取一定量的多酚提取液，加入适量的福林-酚储备液、硫酸铜溶液、碳酸钠溶液、硫酸亚铁溶液，混匀，静置5min。

（2）在510nm波长下，用分光光度计测定吸光度。

（3）根据标准曲线，计算多酚含量。

五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制根据实验结果，绘制标准曲线，线性方程为：y=0.0158x+0.0132，R²=0.9988。

植物总多酚常用的含量测定方法有Folin-Ciocalteu法,酒石酸亚铁法,普鲁士蓝法和高锰酸钾法等。

1.福林试液的配制：取钨酸钠10g与钼酸钠2.5g，加水70ml、85％磷酸5ml与盐酸10ml,置200ml烧瓶中,缓缓加热回流10小时，放冷，再加硫酸锂15g、水5ml与溴滴定液1滴煮沸约15分钟，至溴除尽，放冷至室温，加水使成100ml。

滤过,滤液作为贮备液。

置棕色瓶中,于冰箱中保存。

临用前，取贮备液2.5ml，加水稀释至10ml，摇匀，即得。

????用10mL乙醇溶液溶解0.5000g没食子酸，定容至100mL，分别移取3.0mL到100mL容量瓶中，用蒸馏水定容。

加入福林－薛卡多（Folin-Ciocalteu）试剂显色，在765nm波长下测定吸光度。

每个浓度做三个平行试验，取平均值，根据标准曲线。

??取样品溶液1mL值，计算样品中的多酚含量。

类化合物含量呈正相关，在波长2.酒石酸亚铁比色法。

提于再加酒石酸亚铁溶液10mL,加入pH为7.5的磷酸缓冲液,于波长540nm处测定吸光度(A),绘制出标准曲线。

一、实验原理??多酚类物质包括花青苷、黄酮苷、单宁等，具体又可分为若干种。

多酚类物质含有酚羟基，有的还含有羧基，属于极性有机化合物，常用极性溶剂提取，如甲醇、乙醇、乙酸乙酯、丙酮、水以及由这些溶剂按比例组成的复合溶剂。

由以上溶剂直接提取的多酚物质，实质为各种多酚的混合物（总多酚提取液），不同的原料中所含酚类物质的种类不同，需要进一步的分离鉴定。

常用的植物多酚总量的测定方法中较为普遍使用的方法有:酒石酸亚铁比色法、FD法、FC法、普鲁士蓝法等。

其中酒石酸亚铁分光光度比色法应用较多。

??酒石酸亚铁分光光度比色法的原理：过量的酒石酸亚铁与提取液中多酚反应生成稳定的紫褐色络合物，溶液颜色的深浅与溶液中多酚含量成正比。

测定总多酚时所用的标准物则需根据样品中所含多酚的种类而定，比如测定茶叶中茶多酚含量时，儿茶酚能较好地代表茶多酚，则以儿茶酚作标准物；而测定藤茶多酚时，则以没食子酸作标准物较合适。

设计性实验茶叶中茶多酚的提取与含量测定实验方案新疆农业大学食品科学与药学学院班级：葡工162班姓名：王勇峰学号：220162712指导老师：阿不都热依木茶叶中茶多酚的提取与含量测定一.实验目的及要求1.用无害溶剂从茶叶中提取茶多酚。

2.分离、纯化茶多酚粗品，掌握溶剂提取法提取茶多酚的原理及方法。

3.定量分析茶多酚产品含量。

二.实验原理有机溶剂萃取法：有机溶剂萃取法是传统的提取工艺。

是利用茶叶中不同化合物在不同溶剂中的溶解度不同进行提取分离。

在粗茶叶萃取溶液中，除含有茶多酚以外，还含有咖啡碱、酯质、色素、植物多糖、有机酸、以及悬浮物，且茶多酚含量仅为25%～40% ，所以大多数工艺用乙酸乙酯、氯仿等有机溶剂反复萃取的方法进一步除杂、纯化、精制。

茶水用氯仿萃取可得到水层和有机层，咖啡碱存在于有机层，而茶多酚则存在于水层中，根据萃取及过滤原理，将有机层和水层分别进行浓缩、萃取，即可得到相应粗产物。

三.实验仪器及药品仪器：天平；分析天平；铁架台；抽滤装置；超级恒温水浴槽；长颈漏斗一个；滤纸若干张；分液漏斗一个；100毫升的烧杯（三个）；玻璃棒一个；药品：1.乙醇水溶液（50％）；2.干茶叶原料；3.氯仿（分析纯）；4.Na2SO4溶液馏水四.实验步骤1、温度设定:打开超级恒温水浴电源开关，使温度达到90℃2、称量：称取30克干茶叶，放在100毫升小烧杯中。

3、溶解：用量筒量取40毫升50％乙醇水溶液，倒入小烧杯中，用玻璃棒轻轻搅拌，使干茶叶完全浸润在乙醇溶液中。

4、加热：将干茶叶和乙醇水溶液的混合液置于超级恒温水浴槽中，加热20分钟。

5、过滤：将加热完毕的混合液取出，冷却到室温；用长颈漏斗对混合液进行过滤，滤除茶叶残渣。

再对残渣进行乙醇萃取.6、分离萃取：1)对分液漏斗进行试漏，调整好铁架台高度；2)用量筒量取20毫升氯仿①，置于100毫升小烧杯中；将茶叶滤液倒入分液漏斗中，再将氯仿倒入其中，再倒入少量Na2So4溶液②，轻轻摇匀，使之混合充分，静置，分层，上层应为茶多酚水溶液，呈茶色，下层为氯仿乙醇混合液，为无色。

实验方案1材料和方法1.1原料与试剂葡萄皮、甲醇、乙醇、KH2 PO4 、Na2HPO4 、FeSO4 、酒石酸钾钠、没食子酸等均为国产分析纯试剂。

1.2主要仪器722型分光光度计,电子天平，恒温水浴锅、粉碎机、减压抽滤机1.3 试验方法1.3.1 提取工艺原料预处理→溶剂浸泡→回流浸提→精密滤纸过滤→分离过滤液→旋转蒸发脱除溶剂→烘干1.3.2 操作要点(1) 原料的预处理:将葡萄皮自然晾干,粉碎过40目筛,避光保存。

(2) 浸提溶剂的选择: 称取葡萄皮粉末1g(准确至01000 1g) ,分别加入蒸馏水、体积分数60%乙醇、体积分数60%甲醇、体积分数95%乙醇、体积分数95%甲醇,在30℃水浴浸提1h ,趁热减压抽滤，定容至25 mL。

吸取1 mL 显色测定吸光度,平行测定3次,计算总酚含量。

(3) 浸提单因素试验:对可能影响葡萄皮多酚得率的几个因素(浸提剂浓度、料液比、浸提时间、浸提温度)分别作单因素试验,测定提取液的吸光度,平行测定3次,计算总酚含量。

(4) 最佳浸提条件的选择: 以浸提剂浓度、料液比、浸提时间、浸提温度为因素, 选择L9 (34) 正交表进行四因素三水平试验,各处理重复3 次,并进行方差分析。

1.3.3 总酚含量的测定1.3.3.1 样品吸光度的测定准确吸取1mL 试液,转移至25mL 容量瓶中,加蒸馏水4mL 和酒石酸亚铁溶液5mL ,充分混合,再加pH715 的缓冲溶液至刻度,用10mm 比色杯,在波长540nm 处,以试剂空白溶液作参比,测吸光度A 。

1.3.3.2 标准曲线的制作准确称取没食子酸标准样品0.15 g ,加蒸馏水溶解并移入100mL 容量瓶中定容,在6只100 mL 容量瓶中分别加入510 g/ L 没食子酸标准样品0、1、2、3、5、10 mL ,加入蒸馏水定容至100 mL ,各吸取1mL ,同1.3.3.1方法测定,绘制标准曲线。

1.3.3.3 结果计算葡萄皮总酚含量： w = CV/m式中:w ：多酚含量(mg/ g);C：,葡萄皮多酚质量浓度(mg/mL);V ：提取液的体积(mL);m：,葡萄皮质量(g)。

茶多酚提取实验蚌埠学院生物与食品工程系综合实验（1）（2）吸光度，绘制曲线图，找出最佳提取时间。

（2）称取得10.00g茶叶末置于500ml烧杯中，加入200mL蒸馏水，在所测得的最佳提取时间下，分别在75℃、80℃、85℃、90℃、95℃下浸提，测提取液的吸光度，绘制曲线，找出最佳提取温度。

（3）在上述的最佳提取温度，最佳提取时间下，分别用1:10、1:15、1:20、1:25、1:30的料液比浸提，绘制提取液的吸光度曲线，找出最佳料液比。

单因素：①料液比(g/L)：1:10 1:15 1:20 1:25 1:30②浸提温度(℃)：75 80 85 90 95③浸提时间(h)：0.5 0.75 1.0 1.25 1.5取单因素实验的每个因素的最佳范围内的值，做三因素三水平的正交实验。

实验结果记录在附五的实验记录表格中。

通过对正交实验进行极差分析后选出最优组合，进行下一步实验。

2．盐析加氯化钠于茶叶浸提液中，质量分数为2-6％，静置0.5-1.5h 后过滤（可用抽滤或者离心的方式）。

3.沉淀在上述滤液中加入茶叶重量2％～5％的NaHSO3，然后加入茶叶重量20％的硫酸铝饱和水溶液，加热至70℃～80℃，用15%NaHCO3溶液在快速搅拌下调节pH至5～6，此时有大量沉淀析出，沉淀自然沉降一段时间后过滤，最后用等体积70℃热水洗涤沉淀三次。

4．酸溶将沉淀在快速搅拌下放入到一定料酸比体积下的pH＝2.5~4.5的硫酸水溶液中溶解沉淀，控制酸转溶液的pH、酸溶时间，少量胶状沉淀经抽提去除。

用附一的方法测酸转溶液中茶多酚的含量单因素实验步骤：（1）将上一步骤所得的沉淀放入有40mL、pH=3.0的硫酸水溶的烧杯中，溶解，分别溶解40min、45min、50min、55min、60min，离心除去沉淀，测酸转溶液的吸光度，绘制曲线，找出最佳酸转时间。

（2）取上一步骤所得的沉淀放入有40mL硫酸水溶液的烧杯中，控制硫酸的pH为2.5、3.0、3.、4.0、4.5，在（1）的最佳酸转时间下，溶解，离心去除沉淀，测酸转溶液的吸光度，绘制曲线，找出最佳酸转浓度。

茶叶中茶多酚的提取工艺及其含量测定一、本文概述本文旨在探讨茶叶中茶多酚的提取工艺及其含量测定方法。

茶多酚是茶叶中的重要成分，具有抗氧化、抗炎、抗癌等多种生物活性，对人体健康具有显著的益处。

因此，研究茶叶中茶多酚的提取工艺和含量测定方法，对于茶叶的品质控制、新产品开发以及茶产业的可持续发展具有重要意义。

本文将首先介绍茶多酚的基本性质及其在茶叶中的分布情况，为后续提取工艺和含量测定方法的研究提供理论基础。

接着，将详细阐述茶多酚的提取工艺，包括提取原料的选择、提取溶剂的选用、提取条件的优化等方面，以期获得高效、环保、经济的提取方法。

在此基础上，本文还将探讨茶多酚的含量测定方法，包括紫外可见光谱法、高效液相色谱法、气相色谱法等常用的分析方法，并对各种方法的优缺点进行比较和评价。

通过本文的研究，旨在为茶叶加工企业、科研机构以及广大茶叶爱好者提供一套科学、实用的茶多酚提取工艺和含量测定方法，为茶叶的品质控制和新产品开发提供技术支持，推动茶产业的健康发展。

二、茶多酚的提取工艺茶多酚（Tea Polyphenols）是茶叶中的重要活性成分，具有多种生物活性，如抗氧化、抗炎、抗癌等。

因此，提取茶多酚的工艺研究对于茶叶深加工和茶多酚的开发利用具有重要意义。

选择品质优良、无污染的茶叶作为提取原料。

通常，绿茶中茶多酚的含量较高，因此绿茶是提取茶多酚的首选。

将选好的茶叶进行粉碎处理，以提高后续提取过程中的传质效率。

茶多酚的提取通常采用有机溶剂提取法，常用的溶剂有乙醇、丙酮、甲醇等。

其中，乙醇因其毒性低、安全性高、提取效果好而被广泛应用。

乙醇的浓度、温度以及提取时间等因素都会影响茶多酚的提取效果。

常用的茶多酚提取方法包括浸提法、回流提取法、超声提取法等。

其中，回流提取法因其提取效率高、操作简便而被广泛应用。

回流提取法是将茶叶粉末与乙醇混合后，在加热条件下进行回流提取，使茶多酚充分溶解在乙醇中。

提取液经过浓缩后，可采用大孔树脂吸附法、柱层析法等方法进行纯化，以去除杂质，提高茶多酚的纯度。

茶叶中茶多酚类物质提取与含量测定系别：牛物医药工稈系班级：食品科学与工程一、目的要求1、了解茶叶中茶多酚及茶多酚的组成及性状；2、掌握溶剂提取法提取茶多酚的原理及方法；3、掌握萃取法分离有机溶剂中的茶多酚的操作方法；二、茶多酚总述1、组成:茶多酚是茶叶中酚类及其衍生物的总称，因此常称为多酚类。

其主要成分是黄烷醇类、羟基-4-黄烷醇类、花色甘类、黄酮醇类和黄酮类。

这些化合物都具有2-苯基苯并吡喃的基本结构，故统称为类黄酮物质。

茶叶中绿原酸、鸡鈉酸、咖啡酸等酚酸类化合物也是茶多酚的组分之一。

在茶多酚各组分之一黄烷醇类为主，黄烷醇类优异儿茶素类物质为主。

2、性状：茶多酚是介于淡黄色至茶褐色之间的无定型粉末，味涩，略有吸湿性，易溶于水，可溶于乙醇、甲醇、乙醚、丙酮、乙酸乙酯，微溶于油脂，不溶于氯仿及苯等有机溶剂。

茶多酚具有较好的耐酸性，在pH<7时较稳定，在pH>7时则不稳定且氧化变色加快，呈红色。

3.茶多酚的提取方法茶多酚提取工艺效果较好的是有机溶剂萃取法、离子沉淀提取法、树脂吸附分离法、超临界二氧化碳萃取法，其次是超声波浸提法、层析法、膜技术。

4.贮存方法：贮存于阴凉通风干燥环境，并与有毒、有气味的物品隔离，避免直接与三价铁离子及碱性物质接触。

三、实验原理有机溶剂萃取法：有机溶剂萃取法是传统的提取工艺。

是利用茶叶中不同化合物在不同溶剂中的溶解度不同进行提取分离。

在粗茶叶萃取溶液中，除含有茶多酚以外，还含有咖啡碱、酯质、色素、植物多糖、有机酸、以及悬浮物，且茶多酚含量仅为25%- 40%，所以大多数工艺用乙酸乙酯、氯仿等有机溶剂反复萃取的方法进一步除杂、纯化、精制。

茶水用氯仿萃取可得到水层和有机层，咖啡碱存在于有机层，而茶多酚则存在于水层中，根据萃取及过滤原理，将有机层和水层分别进行浓缩、萃取，即可得到相应粗产物。

溶剂萃取法一般的工艺路线图所示溶剂萃取法一般的工艺路线本法的优点是：稳定、可靠；缺点是：有效成分的含量和提取 率较低，通过以上工艺获得的茶多酚含量通常仅能达到 50%- 65%四、 仪器和药品仪器：天平；分析天平；铁架台；抽滤装置；超级恒温水浴槽； 长颈漏斗一个；滤纸若干张；分液漏斗一个；100毫升的烧杯（三个）； 玻璃棒一个；药品：1. 乙醇水溶液（50%）；2. 干茶叶原料；3. 氯仿（分析纯）；4. Na2So4溶液馏水，五、 实验步骤1、 温度设定:打开超级恒温水浴电源开关，使温度达到 90 °CI 茶叶 I —— | |乙醇2、称量：称取30克干茶叶，放在100毫升小烧杯中。

实验方案1材料和方法1.1原料与试剂葡萄皮、甲醇、乙醇、KH2 PO4 、Na2HPO4 、FeSO4 、酒石酸钾钠、没食子酸等均为国产分析纯试剂。

1.2主要仪器722型分光光度计,电子天平，恒温水浴锅、粉碎机、减压抽滤机1.3 试验方法1.3.1 提取工艺原料预处理→溶剂浸泡→回流浸提→精密滤纸过滤→分离过滤液→旋转蒸发脱除溶剂→烘干1.3.2 操作要点(1) 原料的预处理:将葡萄皮自然晾干,粉碎过40目筛,避光保存。

(2) 浸提溶剂的选择: 称取葡萄皮粉末1g(准确至01000 1g) ,分别加入蒸馏水、体积分数60%乙醇、体积分数60%甲醇、体积分数95%乙醇、体积分数95%甲醇,在30℃水浴浸提1h ,趁热减压抽滤，定容至25 mL。

吸取1 mL 显色测定吸光度,平行测定3次,计算总酚含量。

(3) 浸提单因素试验:对可能影响葡萄皮多酚得率的几个因素(浸提剂浓度、料液比、浸提时间、浸提温度)分别作单因素试验,测定提取液的吸光度,平行测定3次,计算总酚含量。

(4) 最佳浸提条件的选择: 以浸提剂浓度、料液比、浸提时间、浸提温度为因素, 选择L9 (34) 正交表进行四因素三水平试验,各处理重复3 次,并进行方差分析。

1.3.3 总酚含量的测定1.3.3.1 样品吸光度的测定准确吸取1mL 试液,转移至25mL 容量瓶中,加蒸馏水4mL 和酒石酸亚铁溶液5mL ,充分混合,再加pH7.5的缓冲溶液至刻度,用10mm 比色杯,在波长540nm 处,以试剂空白溶液作参比,测吸光度A 。

1.3.3.2 标准曲线的制作准确称取没食子酸标准样品0.15 g ,加蒸馏水溶解并移入100mL 容量瓶中定容,在6只100 mL 容量瓶中分别加入510 g/ L 没食子酸标准样品0、1、2、3、5、10 mL ,加入蒸馏水定容至100 mL ,各吸取1mL ,同1.3.3.1方法测定,绘制标准曲线。

1.3.3.3 结果计算葡萄皮总酚含量： w = CV/m式中:w ：多酚含量(mg/ g);C：,葡萄皮多酚质量浓度(mg/mL);V ：提取液的体积(mL);m：,葡萄皮质量(g)。

植物多酚化学成分的提取及含量研究植物多酚是指分子量较小、质子数较少的多羟基苯类物质，是植物中广泛存在的一类天然化合物，具有较高的生物活性。

在医学、保健品、食品加工等方面有广泛应用。

因此，对植物多酚的提取及含量研究具有非常重要的意义。

一、植物多酚的提取方法常见的植物多酚提取方法有离子交换法、分子筛法、溶剂法、醇沉法、水漂法、超声波提取法、微波辅助提取法等。

1. 离子交换法：是将植物材料粉碎，加入固体离子交换树脂中，通过树脂的交换作用将目标成分分离出来，再用酸或有机溶剂洗脱得到。

这种方法操作简单，但提取效率不高，可能导致产品含量不稳定。

2. 溶剂法：是将植物材料加入有机溶剂中，然后加热浸泡提取，得到提取液后蒸去溶剂，得到多酚提取物。

这种方法提取效率较高，但有机溶剂对环境污染较大，提取液中可能会含有有害物质。

3. 醇沉法：将植物材料加入醇中，用搅拌器或超声波震荡混合，然后冷却离心，去掉上清液即为多酚提取液，之后经过浓缩即可得到多酚分离物。

这种方法操作简单，提取效率较高，且较为环保。

4. 超声波提取法：对植物材料进行粉碎处理，随后将其与适当溶剂混合，并经过超声波震荡提取，最后将浸出液过滤、浓缩，得到较高纯度的多酚产品。

这种方法对于提取速率较快，但易造成提取失效。

二、植物多酚含量的测定方法目前，常用的植物多酚含量测定方法有盐酸铝标准曲线法、铁离子法、Folin-Ciocalteu法、铁还原法、高效液相色谱法、氢离子浓度滴定法等多种方法。

1. Folin-Ciocalteu法：该方法是常见的测定多酚含量的方法。

原理是利用多酚与Folin-Ciocalteu试液中的重铜离子反应生成蓝色化合物，然后通过比色法测定吸光度，得出多酚含量。

该方法具有准确性高、可靠性好而得到广泛应用。

2. 盐酸铝标准曲线法：该方法先用多酚标准品制备标准曲线，再将待测样品用溶剂溶解后经过加盐酸铝试液反应生成浅黄色沉淀，使用标准曲线比较得到多酚含量。

原理以没食子酸为主的多酚类化合物在碱性溶液中可将钨钼酸还原成蓝色化合物，该化合物在765nm处有最大吸收，且吸收值与多酚化合物含量成正比，以没食子酸为标准物质，标准曲线法定量。

试剂（1）钨酸钠——钼酸钠混合溶液：称取50.0g钨酸钠，12.5g钼酸钠，用350ml水溶解到1000ml的回流瓶中，加入25ml磷酸及50ml盐酸，充分混匀，小火加热回流两小时，再加入75g硫酸锂、25ml蒸馏水、数滴溴水，然后继续沸腾15min（至溴水完全挥发为止），冷却后，转入500ml容量瓶定容，过滤，至棕色瓶中保存，使用时稀释一倍。

（2）75g/L碳酸钠溶液：称取37.5g无水碳酸钠溶于250ml温水中，混匀，冷却，稀释至500ml，过滤到储液瓶中备用。

（3）没食子酸标准储备液：准确称取0.1100g一水合没食子酸，溶解并定容至100ml，此溶液没食子酸质量浓度为1000mg/L,在冰箱中2——3度可保存五天。

（4）没食子酸标准使用液：分别称取1000mg/L的没食子酸标准储备液0、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml和5.0ml至100ml容量瓶中，定容，溶液质量浓度为0、10.0mg/L、20.0mg/L、30.0mg/L、40.0mg/L、50.0mg/L。

分析步骤（3）标准曲线的绘制：吸取0、10.0mg/L、20.0mg/L、30.0mg/L、40.0mg/L、50.0mg/L的没食子酸标准使用液各1.0ml，分别加5.0ml水，1.0ml钨酸钠——钼酸钠混合溶液和3.0ml 碳酸钠溶液，混匀，没食子酸标准溶液浓度分别为0、1.0mg/L、2.0mg/L、3.0mg/L、4.0mg/L、5.0mg/L，显色，放置2小时，以标准曲线的“0”管为空白，在765nm波长下测定标准溶液的吸光度，以没食子酸浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。

（4）样品的测定：吸取1.0ml试样提取液，分别加入5.0ml水，1.0ml钨酸钠——钼酸钠混合溶液和3.0ml 碳酸钠溶液，显色，放置2小时，以标准曲线的“0”管为空白，在765nm 波长下测定试样溶液的吸光度，根据标准曲线求出试样溶液的多酚浓度，以没食子酸计，如果吸光度值超过5.0mg/L没食子酸的吸光度时，将样品提取液稀释后重新测定。