hplc 常见故障分析及排除方法

高压液相色谱HPLC常见故障及排除方法

诊状 (一)保留时间变化

可能的原因 : 解 决 方 法 1.柱温变化 : 柱恒温

2.等度与梯度间未能充分平衡 : 至少用10倍柱体积的流动相平衡柱

3.缓冲液容量不够 : 用>25mmol/L的缓冲液 4.柱污染 : 每天冲洗柱

5.柱内条件变化 : 稳定进样条件,调节流动相

6.柱快达到寿命 : 采用保护柱

(二)保留时间缩短

可能的原因 : 解 决 方 法 1.流速增加 : 检查泵,重新设定流速

2.样品超载 : 降低样品量

3.键合相流失 : 流动相PH值保持在3~7.5检查柱的方向

4.流动相组成变化 : 防止流动相蒸发或沉淀

5.温度增加 : 柱恒温 (三)保留时间延长

可能的原因 : 解 决 方 法 1.流速下降 : 管路泄漏,更换泵密封圈,排除泵内气泡

2.硅胶柱上活性点变化 : 用流动相改性剂,如加三乙胺,或采用碱至钝化柱

3.键合相流失 : 同前(二)3 4.流动相组成变化 : 同前(二)4

5.温度降低 : 同前(二)5

(四)出现肩峰或分叉

可能的原因 : 解 决 方 法 1.样品体积过大 : 用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的15% 2.样品溶剂过强 : 采用较弱的样品溶剂

3.柱塌陷或形成短路通道 : 更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件

4.柱内烧结不锈钢失效 : 更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品

5.进样器损坏 : 更换进样器转子

(五)鬼峰 可能的原因 : 解 决 方 法 1.进样阀残余峰 : 每次用后用强溶剂清洗阀,改进阀和样品的清洗

2.样品中未知物 : 处理样品

3.柱未平衡 : 重新平衡柱,用流动相作样品溶剂 (尤其是离子对色谱)

4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽谱) : 每天新配,用抗氧化剂 5.水污染(反相) : 通过变化平衡时间检查水质量，用HPLC级的水

(六)基线噪声

可能的原因 : 解 决 方 法 1.气泡(尖锐峰) : 流动相脱气,加柱后背压

精品

可编辑 Agilent HPLC使用过程中常见问题及解决方法

一、如何处理 HPLC 中的盐带来的问题？

很多问题是由于流动相含有盐成分造成的。建议在清洗时将水加热后再冲洗，这样既可以将盐溶解的更好，也可以溶解一些脂溶性物质，会减少很多问题的发生,包括管路堵塞,盐析出，基线噪音……

二、安捷伦1100及1200液相泵的日常维护

泵是液相色谱的核心，泵将流动相从溶剂瓶输送到液相流路系统中，并要在高压下保持流量和压力的稳定。泵的状态正常是液相色谱准确分析的基础，所以平日一定要重视对泵的维护。下面就安捷伦1100/1200液相色谱泵的日常维护进行简要的介绍。

1. 流动相的准备

为了防止颗粒性物质对泵组件的磨损，流动相（特别是水相）应该新鲜配置并且过滤。上机前对流动相进行适当的超声脱气，以保证更好的在线脱气和在线混合的效果。

2. 比例阀溶剂通道的分配

四元泵的比例阀有A、B、C、D四个通道，建议将盐溶液接在下面的通道（A或D），将有机溶剂接在上面的通道（B 或C）上,也就是有机通道最好在盐溶液通道的上面。且建议用水定期冲洗所有比例阀通道除去可能在阀口析出的盐结晶。

3. 过滤白头的维护

过滤白头位于排气阀内，是一种聚四氟乙烯材质的微孔过滤芯，用于过滤流动相中的微粒，是经常需要维护的地方。当系统压力有异常增高时，首先需要检查过滤白精品

可编辑 头是否阻塞了。判断的方法是：打开排气阀，以纯水作流动相，将流速设为5mL/min，如果泵压超过10bar，则说明过滤白头需要更换了。对过滤白头的预防性维护通常可以是1~2个月更换1次，更换时同时检查一下过滤白头前面的密封金垫，如果发现变形，也应及时更换。 如果过滤白头更换过于频繁，则需要认真检查一下流动相的品质，确保流动相上机前过滤，确保使用了合适的过滤膜。如果流动相有长菌现象，除了配置新的溶剂，还应对相应的溶剂管线和脱气机通道进行彻底的清洗。

4. 柱塞杆与柱塞密封圈的维护

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高效液相色谱仪应用常见问题分析

作者：郭林

来源：《商品与质量·学术观察》2013年第08期

摘要：本文探讨高效液相色谱仪在实际应用中的常见问题，分析相应的解决措施，旨在为有关工作提供参考。

关键词：高效液相色谱仪 问题 使用

中图分类号：TH833 文献标识码：B

高效液相色谱仪在环境监测、医疗卫生、食品检验等领域都被广泛应用，高效液相色谱仪具有分析效率高、分辨率高等优势，尽管如此，高效液相色谱仪在使用过程中仍然有一些常见的问题，为了提高工作效率，探讨相应的解决措施十分必要。

1、高效液相色谱仪检测结果的不确定度分析--以检测酱油中苯甲酸为例

1.1 检测方法

戚荣平根据GB/T5009.29-2003技术标准，将标准溶液的浓度确定为0.05mg/ml，酱油样品采用超纯水定容，采用0.45um水系滤膜进行过滤，分别配置苯甲酸浓度为10ng/ul、30ng/ul、20ng/ul、50ng/ul的标准溶液，均重复检测3次，检测后对标准曲线数据进行统计分析，具体数据如表1所示。

按照y=bx+a进行计算，结果a=6.1153546，b=72.2285736，因此数学模型确定为y=72.2285736x+6.1153546。

选取6份酱油样品，具体检测结果如表2所示。

可见不确定度的来源主要有重负检测、拟合工作曲线、标准贮存液、移液管、刻度吸管、容量瓶、峰面积量化误差、分析仪器。

2、高效液相色谱仪常见维护措施

2.1单向阀维护

单向阀故障主要是因为在球与阀座密封不严造成的，可导致压力不稳、液体倒流，而造成这一问题的主要因素就是污染或气泡，如果污染过于严重，甚至可以导致球与阀座粘连阻死。为了防止上述现象，应使用HPLC级的溶剂作为流动相，这样可以防止单向阀中的宝石球和阀座受到污染。同时可以用水、异丙醇、甲醇、二氯化钾来冲洗被微粒污染的泵。当气泡进入阀龙源期刊网

1 / 51 / 5 液相色谱常见问题及处理方法

HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法

1、样品量不足，解决办法为增加样品量

2、样品未从柱子中流出。可根据样品的化学性质改变流动相或柱子

3、样品与检测器不匹配。根据样品化学性质调整波长或改换检测器

4、检测器衰减太多。调整衰减即可。

5、检测器时间常数太大。解决办法为降低时间参数

6、检测器池窗污染。解决办法为清洗池窗。

7、检测池中有气泡。解决办法为排气。

8、流动相流量不合适。调整流速即可。

为什么HPLC柱柱压过高

柱压过高是HPLC柱用户最常碰到的问题。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的问题，您可按下面步骤检查问题的起因。

1、拆去保护预柱，看柱压是否还高，否则是保护柱的问题，若柱压仍高，再检查（在安装了保护预柱的情况下）；

2、把色谱柱从仪器上取下，看压力是否下降，若压力仍高则是管路堵塞，需清洗，若压力下降，再检查；

3、将柱子的进出口反过来接在仪器上，用10倍柱体积的流动相冲洗柱子，（此时不要连接检测器，以防固体颗粒进入流动池）。这时，如果柱压仍不下降，再检查；

4、更换柱子入口筛板，若柱压下降，说明您的溶剂或样品含有颗粒杂质，正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。若柱压还高，请与厂商联系。

液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么？

1、筛板堵塞或柱失效，解决办法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子。

2、存在干扰峰，解决办法为使用较长的柱子，改换流动相或更换选择性好的柱子

如何解决HPLC进行分析时保留时间发生漂移或急速变化

漂移现象

1、温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定

2、流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等

3、柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡

快速变化现象

1. 流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定

2、泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出。