百草枯中毒血、尿标本分析检测方法的研究进展

４
血液Ｓｙｍｍｅｔｒｙｓ ｈｉｅｌｄ ＴＭ 含２５ｍｍｏｌ／Ｌ Ｓｏｓ ０．００５
上清渡过柱后．用３０％甲醇水洗杂质．用Ｉ．０ｍｏｌ／ｌ氯化铵５０％甲
ＲＰｌ８柱
４５％的乙腈
醇液洗脱待测物．采用反相离子对高效液相色谱法，９６９ＰＤＡ检测
器，波长２５９ｎｍ，柠温２５℃．流速ｌｍｏｌ／ｍｉｎ。
５
血液 Ａｔｌａｎｔｉｓ ＨＵＣ Ｓｉｌｉｃａ 甲酸铵：乙腈（６０：４０ｖ１
第２７卷第６期 ２００９年１２月
实 验 与 检验 医学 ＥＸＰＥＲＩＭＥＮＴＡＬ ＡＮＤ ＩＡＢＯＲＡＴＯＲＹ ＭＥＤＩＣＩＮＥ
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Ｖ０１．２７ Ｎｏ．６ Ｄｅｅ．２００９
·综述·
百草枯中毒血、尿标本分析检测方法的研究进展
陈辉凤，宋乃国综述，田喜凤审校
ｆ华北煤炭医学院生物科学系，河北唐山０６３０００）
１．２固相萃取法同相萃取法目前是百草枯净化提取最常 用的方法，它将百草枯从非常稀释的溶液中富集起来．从而 有利于分析。现将国内外对于血、尿标本中百草枯的固相萃 取法归结为表ｌ弘ｍ。
百革枯固相萃取法操作简便、快速。萃取回收率高．重现 性好，适合提取微量样品，能满足基层实际检验的需要。不足 之处是常采用酸液或碱液作为洗脱液．提取液难以浓缩且易 损害分析柱．
相等的不同而异。现将国内外研究应用于血、尿标本中百草
供气相色谱Ｎ、Ｐ检测分析。以乙基百草枯为内标物，进行血
枯分析检测的液相色谱法归结为表２【，，１１－１３，１９－２１］。
衰２不同色谱柱、不同流动相中不同百草枯液相色谱法
方法 标本
色谱柱
流动相试剂
篆躲
实验条件．
１
血液 Ｉｎｅｒｔｓｉｌ ＯＤＳ一２
含ＳＯＳ的磷酸缓冲
（ＳＯＳ，回收率可达９０％以上唧，但ＳＤＳ比ＳＯＳ更便宜易得。另 外选用一般试剂：氯仿＋乙醇＋硫酸铵＋苯酚回收率也能达 ７６．６％嘲，均能满足实际检测的需求。但液一液萃取法使用了大 量有毒试剂，对环境和操作人员的身体健康造成威胁．操作 时引人外源性杂质较多，易产生乳化现象，萃取重现性较差． 操作也较费时费力不能及时进行检测．已经被其它提取方法 所取代。
标本中百草枯的定性和定量分析。其叫收率为９９１３％＋７．６％， 检测限为２０ｎｇ／ｍｌ。Ｄｒａｆｆａｎ ＧＨ等㈣用硼氢化钠与百草枯反应
行优化，明显提高了自由基的稳定性。
生成二烯六氢化衍生物，用有机溶剂提取后，以１，１，＿二乙
２．２气相色谱法
基－－４，４’一联吡啶二氯化物作内标物，用ＦＩＤ检测器血、尿中
３０℃．流速为０．８ｍｌ／ｍｉ。
３
血浆 Ｓｉｍｏｃｈｒｏｍ ＧＤＳ—ＢＰ 含ＳＯＳ的磷酸缓冲０．０ｌ
无需进化提取．血浆沉淀蛋白处理后高效液相色谱法．用二乙胺
分析Ｃ８预柱
液已腈Biblioteka 调ｐＨ为３．０，内标物为Ｅｔｈｙｌｖ ＶｉｏＩｏｇｅｎ Ｄｉｂｒｏｍｉｄｅ，ＳＰＤ一２０Ａ检测
器，波长２５８ｎｎｌ．柱温２８℃．流速为１．０ｍｌ／ｍｉｎ。
另一篇报道中Ｇａｌａｃｅｒａｎ等１２４１对缓冲液的ｐＨ值、温度、 应用电压缓冲液中阳离子种类和浓度及进样模式等因素对
百草枯及其他除草剂分离的影响做了研究。毛细管电泳具有 分离效率高、分离速率快、消耗成本低等特点，且样品的前处 理方法简易、避免了分析柱的损害等问胚，是气相色谱和液 相色谱的补充．
２．５质谱联用法 质谱联用是近几年发展起来的一类新型分离检测技术。
液乙腈
ｆｌｏ：９０ｖ）的混合液为洗涤液．以二乙基ｆｌ－草枯为内标物。
７
尿觑 Ｓｈｉｕｒｐａｃｋ ＣＬＣ—ＯＤＳ 含庚烷磺酸钠的磷酸
Ｏ．００ｌ
采用离子对ＳＰＥ一高效液相色谱法，ＤＡＤ检测器。波长２５８ｎｍ。柱
缓冲液乙腈
温３５℃．流速ｌｍｌ／ｎｆｉｎ。二己胺调磷酸缓冲液ｐＨ４．０。
纵观上述方法发现．通常情况下百草枯液相色谱法选用 离子对试剂的流动相、富集特性强的色谱柱。更能获得显著
万方数据
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受影响．针对此不足，蔡春平等ｌｉＴ／在（ＡＯＣＯ测定农药百草枯 含量方法的不足和改进》一报道中对操作方法和还原条件进
为还原剂的水溶液中还原法较易推广应用。由于百草枯极性
２．３液相色谱法
强，通常情况下较难气化裂解．所以有关气相色谱检测百草
液相色谱法尤其是高效液相色谱法是最常用的百草枯
枯的报道较少。张婷等１１０Ｊ将血中百草枯用国产阳离子交换树
检测方法。检测效果和具体分析方法因选择的色谱柱、流动
脂同相提取后．在碱性提取条件下用硼氢化钠还原为三级胺
０．１
采用在线样品预处理柱切换高效液相色谱法．磷酸缓冲液调
液乙腈
ｐＨ２．０，ＵＶ３０００检测，波长２８０ｎｍ，桂温２５℃，流速为ｏ．８ｍｌ／ｍｉｎ。
２
血液ＶａｒｉａｎＯＤＳ Ｃ１８
含ＳＯＳ磷酸缓冲液
Ｏ．２
采川在线样品预处理柱切换反相离子对高效液相色谱法．用
甲醇
ＴＥＡ调磷酸缓冲液ｐＨ２．８，ＵＶ—ＤＡＤ检测，波长２５８ｎｍ，柱温为
中图分类号Ｒ４４６．１１，Ｒ４４６．１２
文献标识码Ｃ 文章编号１６７４—１１２９（２００９）０６—０６４９—０３
［亟叵Ｑ墅曼蚴』墅！匝ｊ！堑：巫匦匿亟匝］
百草枯（ｐａｒａｑｕａｔ。ＰＱ）又名对草快、杀草快．是目前全世界 使用最广泛的除草剂之一。虽然百草枯为中等毒性农药．但 对人畜有很强毒性。由于目前尚无特效解毒剂．中毒死亡率 较高。口服吸收率为５％。１５％．其血浆浓度与死亡率密切相 关。对中毒患者血中百草枯浓度检测及监测对临床救治有很 大作用。另外，由于百草枯吸收后不经代谢．在肾小管中不吸 收．多以原形从肾脏排出．故尿也作为监测中毒患者体内百 草枯浓度变化的常用检材．同时取样难度不大。本文主要对 近年来国内外对于血液和尿液中百草枯分析方法的研究作 了综述．以便临床检验工作者选择更有效的检测方法。
１提取方法百草枯的的提取方法有液一液萃取法、固相萃 取法、渗透一超滤一热凝固法、水浸法及柱切换法等很多种．目 前主要常用的是液一液萃取法和固相萃取法。
１．１液一液萃取法液一液萃取是最早用于提取检材中百草 枯的方法。通常情况下．依据所选用的萃取试剂不同．萃取效 果也不相同。对于血、血浆和尿液一般选用离子对试剂：十二 烷基硫酸钠ｆＳＤＳ。回收率均在８０％以上ｌ，１或辛烷磺酸钠
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２．５．２液一质联用法 王朝虹等［２７１以ＡｔｈａｎｔｉｓＨＬｌＣ ｓｉｌｉｃａ为色谱柱，以乙腈：
２００ｒｅｔｏｏｌ／１甲酸铵（甲酸调ｐＨ ３．３）＝（４０：６０ｖ，ｖ）为流动相，在流 速为０．２ｍｌ／ｍｉｎ，柱温３０。Ｃ条件下．利用ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ法测定肝 脏中百草枯。检测限为１０ｎｇ／ｍｌ。且此方法采用水溶性正相液 相色谱柱。既克服了普通正相液相色谱法应用的高毒性挥发 性有机溶剂的缺点。叉避免了使用离子对反相液相色谱柱带 来的诸多不使。
百草枯是离子型有机物质．挥发性差，必须转化为具有
百草枯的检测限为０．１ｍｇ／Ｌ，用ＮＰＤ检测器检测限为
挥发性的物质后才能进行气相色谱分析。已报道的转化方法０．０２５ｍｇ／Ｌ。上述方法均需要对样品进行特殊的衍生或裂解处
有热解法．催化氢化法、水溶液中还原法。其中以硼酸氢化钠
理后才能进行检测，操作比较复杂。
的分析检测结果．最低检测限可达ｌｎｇ／ｍｌ。 ２．４毛细管电泳法 对于百草枯毛细管电泳检测方法的研究国外起步较早．
国内却比较滞后。国外，Ｖｉｎｎｅｒ Ｅ等［２２１用三氯甲烷和硫酸铵将 血清样本去蛋白处理后ｆ尿液标本直接离心后取上清进样）。 利用熔融石英毛细管载５０ｒａｍｏｌ／Ｌ的磷酸盐缓冲液（ｐＨ ２．５）为 载体进行毛细管电泳分析．紫外波长２００ｈｍ处检测。其血、尿 中百草枯回收率分别为５２％、７１．４％，线性范围为４ｍｇ／Ｌ，检 测限均达５ｐｇ／ｍ１．国内，赵燕燕㈤等用推扫富集胶柬电动毛细 管色谱法检测了血清中的百草枯。实验将血清样品用ｌＯ％＝三 氯乙酸去蛋白处理后．以５０ｍｍｏｌ／Ｌ磷酸盐一８０ｍｍｏＩ／ＩＳＤＳ （ｐＨ＝２．５）为缓冲液，５５ＫＰａ压力进样，利用未涂层的溶硅弹性 石英毛细管在电压为２２ＫＶ下进行电泳分析，ＤＡＤ波长 ２６０ｎｍ处检测。检测限为０．００２ｍｇ／Ｌ，ＲＳＤ为２．９５％。同时将 该方法与百草桔的紫外分光光度法作了多方面比较。
２．６其它方法 血、尿标本中百草枯的检测方法还有免疫法，核磁共振
法、薄层层析法等。这些方法操作简便、快速，但要求检材量 大、纯度高，浪费较严重．在临床实际检测中不宜推广应用。
３展望 纵观国内外百草枯中毒分析检测方法现状．再依据百草
枯独有特性。离子对固相萃取方法研究仍为今后百草枯提取
方法的主流方向。另外，随着分析方法的优化改进．百草枯的 前处理方法将更加简化。固相萃取与在线预富集技术的结合 也将进一步降低百革桔的检测限。反相离子对高效液相色 谱、液一质联用、毛细管电泳、毛细管电泳一质谱联用、芯片毛 细管电泳等分析方法在今后均将得到大量研究。尤其芯片毛 细管电泳在成本、效率和便携性等方面更具优势．在百草枯 分析乃至整个农药分析方面都有很大的潜力。
０．０１
采用离子交换同相萃取法提取水溶性正相高效液相色谱法．
５ｔｕｎ柱
ｐＨ ３．３
９９６ＰＤＡ检测器．波长２５９ｎｍ，柱温３０℃．流速０．１ｍｌ／ｍｉｎ。高氯酸：甲
醇ｆ６：９４ｖ）混合液对检材前处理，
６
血液ＮｏｖａｐａｋＣｌ８
禽ＳＯＳ的磷酸缓冲