培养基配方

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培养基配方

1、PDA培养基(用于分离、培养植物内生真菌):

马铃薯(去皮)200g , 葡萄糖20g , 蒸馏水1000 ml , 琼脂粉15g。用于分离内生真菌时在倒平板之前加入已过滤除菌的氯霉素和硫酸链霉素各50 μ g/ml,用于抑制细菌的生长。2、NA培养基(用于分离、培养植物内生细菌):

牛肉膏3g,蛋白胨5g,葡萄糖2.5g,琼脂粉15g,蒸馏水1000ml,pH 7.0。用于分离内生细菌时在倒平板之前加入已过滤除菌的放线菌酮50μg/ml,用于抑制真菌生长。115℃,20min 灭菌。

3、LB培养基:胰蛋白胨10 g,酵母提取物5 g,NaCl 10 g 蒸馏水至1000 mL,pH=7.0;

4、DSM1培养基:磷酸三钾26.631 g(pH=7.0),二水柠檬酸三钠9.999 g,硫酸镁0.2465 g,硫酸铵19.821 g,牛肉膏3 g,NaCl

5 g,胰蛋白胨10 g,葡萄糖1 g 蒸馏水至1000 mL,pH=7.0;

5、DSM2培养基:磷酸三钾26.631 g(pH=7.0),二水柠檬酸三钠9.999 g,硫酸镁0.2465 g,硫酸铵19.821 g,牛肉膏3 g,NaCl

5 g,细菌学蛋白胨10 g,葡萄糖1 g 蒸馏水至1000 mL,pH=7.0;

6、Msgg培养基:磷酸钾5 mmoL/L(pH7.0),MOPs 100

mmoL/L(pH7.0),MgCl2 2 mmoL/L,CaCl2 700 mmoL/L,MnCl2 50 μM,FeCl3 50 μM,ZnCl2 1 μM,VB1 2 μM,甘油0.5 %,谷氨酸0.5 %,色氨酸50 μg/mL,苯丙氨酸50 μg/mL,蒸馏水1000

mL,pH 7.0。

7、N%NA培养基:牛肉膏3.0 g,细菌学蛋白胨10 g,NaCl 5

g,琼脂粉N*10 g,

8、BGM1培养基:牛肉膏3 g,胰蛋白胨10 g,NaCl 5 g,磷酸三钾26.631 g(pH7.0),二水柠檬酸三钠9.999 g,硫酸镁0.2465

g,硫酸铵19.821 g,葡萄糖1 g,蒸馏水1000 mL,pH 7.0。

9、BGDM培养基:牛肉膏3 g,细菌学蛋白胨10 g,NaCl 5 g,磷酸三钾26.631 g(pH7.0),二水柠檬酸三钠9.999 g,硫酸镁0.2465 g,硫酸铵19.821 g,葡萄糖1 g ,蒸馏水1000 mL,pH 7.0。

10、镰刀菌酸配制:10 mM标准品FA储存液(40 μg/mL)的配制:精密称取0.1792 g定溶于18%(v/v)谱纯甲醇100L,用1N

NaOH 调节pH到6.5。换算的质量浓度(w/v)=1792 μg /mL。

11、LB培养基:胰蛋白胨1 g,酵母提取物0.5 g,NaCl 1 g,琼脂1.5 g,水100 mL,pH7.0, 121℃20 min。

24、PCR产物的电泳

主要仪器:

电泳仪、电泳槽、凝胶成像系统、水浴锅、微波炉、离心机等。

主要实验试剂:

1、50×TAE (2 M Tris,1M 醋酸,50 mM EDTA(pH8.0))

2、10×上样缓冲液(loading buffer)

3、分子量标准DNA Marker

4、琼脂糖

5、EB (溴化乙锭)(黑暗保存)

25、琼脂糖凝胶电泳检测基因组DNA

三羟甲基氨基甲烷(Tris)、硼酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、溴酚蓝、蔗糖、琼脂糖、溴化乙锭、DNA marker(λHindIII digest,自带6×loading Buffer,在103房间海尔冰箱中存放)