葡萄中原花青素的提取
- 格式：doc
- 大小：47.00 KB
- 文档页数：5
葡萄中原花青素的提取
摘要 原花青素是抗氧化、清除自由基能力很强的物质，它能有效清除人体内多余的自由基，具有超强的延缓衰老和增强免疫力的作用。原花青素是一大类多酚化合物的总称， 最简单的原花青素是儿茶素、表儿茶素或儿茶素与表儿茶素形成的二聚体。本题我们通过标准曲线法对葡萄中原花青素含量进行定量分析；二我们利用超声波破碎提取法分别得出葡萄皮和葡萄籽中原花青素的得率。
关键词 原花青素 标准曲线法 定量 超声破碎提取法 得率
前言 原花青素，是一种有着特殊分子结构的生物类黄酮，是目前国际上公认的清除人体内自由基最有效的天然抗氧化剂。一般为红棕色粉末，气微、味涩，溶于水和大多有机溶剂。 一般为葡萄籽提取物或法国海岸松树皮 提取物。原花青素（葡萄籽提取物）是一种新型高效抗氧化剂，是目前为止所发现的最强效的自由基清除剂，具有非常强的体内活性。实验证明，OPC的抗自由基氧化能力是维生素E的50倍，维生素C的20倍，并吸收迅速完全，口服20分钟即可达到最高血液浓度，代谢半衰期达7小时之久。葡萄籽原花青素是清除自由基最强的抗氧化剂。在人体内的抗氧化和清除自由基的能力是维生E的50倍，是维生素C的20倍。其作用机理主要是原花青素能够自由基交换一个氢原子或电子，与欲清除的自由基有近似的氧化还原电位，生成的自由基通过离域化而稳定由于原花青素分子结构上有多个酚羟基，它们可以与暂存性自由基结合，生成稳定的自由基，螯合启动脂质过氧化的金属离子，参与抗氧化的协同作用。通过终止自由基链式反应，螯合金属离子，清除活性氧（与封闭系统中的氧反应），原花青素可以减少或消除氧自由基对机体组织和器官的损害作用。原花青素能够通过制造弹性蛋白和胶原纤维加固毛细血管壁，从而进一步防御自由基的侵蚀。高品质的低聚原花青素由于在水中和醇中具有良好的溶解性，加上色泽亮丽，资源丰富，疗效显著，副作用微小的特点，被广泛应用到药物、化妆品和功能性食品等领域。同时其既可作为营养强化剂，又可作为防腐剂替代合成防腐剂（如苯甲酸等），符合人们回归自然的要求，提高了其应用的安全性。原花青素类色素广泛存在于紫甘薯、葡萄、血橙、红球甘蓝、蓝莓、茄子皮、樱桃、红橙、红莓、草莓、桑葚、山楂皮、紫苏、 黑(红)米、牵牛花等植物的组织中。原花青素葡萄皮色素是开发最早且最丰富的原花青素类色素，而大量实验研究表明，葡萄籽中同样含有原花青素，且量比较多。所以本实验中，我们在借鉴一些有关葡萄籽中原花青素的提取的最佳方案的基础上，结合我们所学到的相关知识，设计出了能够分析葡萄中原花青素含量的有效实验方案，并分别得出葡萄籽和葡萄皮中原花青素的提取。
1材料
1．1 原料及主要试剂（皆为国产分析纯）
葡萄；儿茶素；香草醛；无水乙醇；浓硫酸；甲醇
1.2 主要仪器 榨汁机；旋转蒸发仪（RE-52AA-上海亚荣生化仪器厂）；超声波细胞粉碎机（VH-800A-天津奥特赛斯仪器有限公司）；电热恒温鼓风干燥箱（DHG-9070A上海精宏实验设备有限公司）；生化培养箱（SPX-250-长沙湘仪离心机仪器有限公司）；电子分析天平（AR2140-梅特勒-托利多仪器上海有限公司）；可见分光光度计（722N-上海精科）
2方法
2.1 标准曲线法
2.1.1对照品储备液，精密称取儿茶素10mg，至于50ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，配成0.2mg/ml的溶液。
2.1.2对照品溶液 分别精密量取对照品储备液 0.0ml、0.5ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml，分别置于10ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。分别配成0.00mg/ml、0.01mg/ml、0.02mg/ml、0.03mg/ml、0.04mg/ml、0.05mg/ml的儿茶素甲醇溶液。然后按照表一进行操作。
表一
瓶号 1 2 3 4 5 6
儿茶素浓度（mg/ml） 0 0.01 0.02 0.03 0.04
0.05
儿茶素的取量（ml） 0.5
3%的香草醛甲醇溶液(ml) 2.5
30%硫酸溶液(ml) 2.5
反应条件 30度反应15分钟后，在500nm处比色测定吸光值
吸光值 0 0.0335 0.0647 0.0987 0.1336 0.1668
注：以儿茶素浓度为横坐标，比色值为纵坐标，计算回归方程。如图1
图1
儿茶素的标准浓度曲线y = 3.338x - 0.0006R2 = 0.9998-0.0500.050.10.150.200.010.020.030.040.050.06儿茶素浓度 mg/ml吸光值
2.2 葡萄的处理 2.2.1 分别收集葡萄皮和葡萄籽，放进恒温干燥鼓风箱至水分完全丧失掉。
2.2.2将干燥好的葡萄皮和葡萄籽分别称取5g，然后加入90ml70%的乙醇放入榨汁机中，进行粉碎。
2.2.3将粉碎好的葡萄皮和葡萄籽依次进行离心（4200rmp/min,10min），收集上清。
2.3 超声破碎提取
把收集好的溶液，进行超声波破碎30min、超声波功率达到600w、占空比5/5，保护温度70度，破碎完成后，放进生化培养箱30度培养15min,然后进行吸光度测定。
。
2.4将测定过的溶液再次离心（4200rmp/min,5min）取上清，然后放在旋转蒸发仪里进行浓缩提取后，再进行定容（加90ml70%乙醇），测吸光度。
3实验结果
根据实验中测出的吸光值，代入标准曲线方程可以求出原花青素的含量，最后算出提取率。如表二
表二
种类 葡萄籽 葡萄皮
提取前500nm处吸光值 2.798 1.163
含有的原花青素的量mg/ml 0.8384 0.3486
提取后500nm处吸光值 0.0951
0.0338
实际得到的原花青素量mg/ml 0.0287 0.0103
提取率% 3.399 2.906
注：为了方便观察，我们可以把此表格分成3部分，分别制作出柱形图，可更加直观的观察出，各个组分结果。如下图2、图3、图4
图2
提取前后的吸光度值00.511.522.53葡萄籽葡萄皮种类吸光度值破碎提取前500nm处吸光值破碎提取后500nm处吸光值 图3
提取前后的含量00.10.20.30.40.50.60.70.80.9葡萄籽葡萄皮种类含量 mg/ml含有的原花青素的质量mg/ml实际得到的原花青素质量mg/ml
图4
提取率2.62.72.82.933.13.23.33.43.5葡萄籽葡萄皮种类提取率%提取率%
4实验分析与讨论
4.1由表一，我们可以得到标准曲线方程（图1），把所测葡萄籽和葡萄皮的吸光值带入方程可得出原花青素的浓度，进而求出含量。
4.2由实验结果表二，再通过对比图2、图3、图4我们能够得出葡萄籽中原花青素的含量是葡萄皮中原花青素含量的2.4倍，提取率也是葡萄籽较高。
4.3 尽管葡萄籽中原花青素含量较高，但是日常生活中，我们无法直接吃葡萄籽，而葡萄皮却是可以消化。
5 实验总结
通过实验结果与分析，我们能够总结出，充分利用日常生活中被人们所丢弃的葡萄籽，通过超声破碎提取其中的原花青素，通过一定的加工，可制成人们可以直接食用的食品，起到抗氧化、抗过敏、抗疲劳增强体质、改善亚健康状态延缓衰老、改善烦躁易怒、头昏乏力、记忆力减退等症状的作用。
参考文献
[1]李超，王卫东，郑义，范东梅，谢鑫陟，原花青素的超声提取工艺研究，徐州工程学院食品工程学院，徐州 221008
