鲜蓝莓中花青素的测定 液相色谱串联质谱法

引用格式：何金格，王　政，邓洁红. 高效液相色谱法测定蓝莓果中花色苷含量[J]. 湖南农业科学，2020（5）：68-71.　DOI:10.16498/ki.hnnykx.2020.005.019蓝莓（Blueberry）又称越橘、蓝浆果，杜鹃花科（Ericaceae）越橘属（V accinium spp.）多年生落叶或常绿灌木，果实为浆果，近圆形，呈蓝色，酸甜适度，果肉细腻，皮薄籽小[1-2]。

蓝莓的花色苷（Anthocyanins）含量居于水果和蔬菜之首，被联合国粮农组织誉为“黄金浆果”[3]。

花色苷是黄酮类化合物，广泛存在于植物的根茎叶花果实等器官的细胞液中，使其呈现出红色蓝色或紫色等颜色，是自然界重要的水溶性的色素之一，分布于27个科，72个属的植物中[4]。

花色苷不仅赋予植物鲜艳的颜色以利于授粉和种子传播、抵抗植物虫害[4]以及预防植物的紫外线照射损伤[5]，而且具有重要的生物活性功能，如抗氧化活性、抗癌活性、抗动脉硬化活性[6]、降低血脂[7]、减少肝损伤[8]和降血糖活性[9]等。

花色苷属于天然的食用色素，且生理活性对人体具有重要的保健功能，得到国内外学者的广泛关注和研究，并且在食品、药品、保健品和化妆品等方面的应用十分广泛。

目前花色苷含量测定方面的研究比较多，主要是采用pH示差法测定总花色苷含量，而高效液相色谱法具有能够准确测量单一组分和将花色苷物质良好分离的优点。

林丽等[10]利用大孔树脂分离纯化，运用高效液相色谱法，快速准确地测定黑果枸杞提取物中的花色苷主要成分物质矮牵牛素-5-O-葡萄糖苷含量。

赵珊等[11]采用盐酸甲醇溶液超声提取有色稻米花色苷，以超高效液相色谱-紫外检测器对有色稻米中主要花色苷矢车菊素-3-O-葡萄糖苷和芍药素-3-O-葡萄糖苷进行定量检测。

笔者在前人研究[12-15] 的基础，以张家界引种的蓝莓品种为研究对象，重点研究高效液相色谱法测定蓝莓果中花色苷（以飞燕草素-3-O-葡萄糖苷计）的相对含量，以期对果实品质的评价和深加工等方面的研究提供数据参考，也为蓝莓果中花色苷单体的分离和制备提供一定的参考依据。

超高效液相色谱-串联质谱法测定原花青素李建珍;顾文;周亮【期刊名称】《中国食品添加剂》【年(卷),期】2024(35)2【摘要】本文建立了以超高效液相色谱串联质谱法(UPLC-MS)测定低聚原花青素(OPCs)的方法。

样品中原花青素在含高铁离子的酸性乙醇溶液中经密闭高温反应后生成氰定离子,通过含1%甲酸,28%水甲醇组成的流动相(72∶28,v/v)经Zorbax Eclipse Plus C18反相色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.8μm)分离,采用大气压电喷雾离子源(ESI)在选择离子监测(SIM)模式下以质荷比为287(m/z)的氰定正离子进行检测,并以美国药典(USP)低聚原花青素标准品进行定量。

结果显示原花青素在0.2×10^(-6)~2×10^(-6) g/mL的浓度范围内呈良好线性关系,相关系数大于0.999,三个不同浓度水平的平均加标回收率在98%~104%之间,相对标准偏差(RSD)小于5%,此方法具有较高的精密度和准确度。

该液质联用方法同时对比了不同标准品之间的差异,当采用低聚原花青素标准品时将有助于保证产品中原花青素测定结果的一致性。

【总页数】9页(P263-271)【作者】李建珍;顾文;周亮【作者单位】康宝莱(中国)保健品有限公司【正文语种】中文【中图分类】TS207.3【相关文献】1.在线固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法快速测定地表水中超痕量阿特拉津2.石墨烯-管尖固相萃取-高效液相色谱-串联质谱法测定贝类中3种原多甲藻酸贝类毒素3.超高效液相色谱-串联质谱法测定克氏原螯虾和养殖水体中双唑草腈残留4.超高效液相色谱-串联质谱法测定肉制品中的虾过敏原5.超高效液相色谱-串联质谱法直接测定水中5种黄原酸因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

蓝莓果皮中花青素的提取及分离纯化研究摘要：研究蓝莓果皮中花青素的提取、纯化方法，通过控制浸渍法体积分数、pH值等关键实验参数，以花青素提取率为考察指标观察浸膏得率的变化，确定1：30的浴比中加入1%柠檬酸与70%乙醇组成溶液，以温度30℃、pH为3超声浸渍20min为蓝莓果皮中花青素最佳提取方法。

通过65%乙醇的大孔树脂洗脱液洗脱，色价达到61.37，产率为81.32%，大大的提高的花青素的纯度。

关键词：蓝莓果皮花青素提取纯化蓝莓（Vaccinium spp.）是杜鹃花科越桔属植物，果实呈蓝色近圆形。

其中果肉和果皮都含有丰富的花色素。

花色素又名花青素，属于酚类化合物中的类黄酮类。

其结构的基本母核是2-苯基苯并吡喃。

通常与一个或多个葡萄糖、鼠李糖、半乳糖等通过糖苷键形成花色苷，目前已知的花色苷有250多种。

已知花青素的功效有：一是抗氧化和清除自由基的功能，减轻疲劳，抗衰老，同时有美容美颜的作用。

二作为天然的食物添加剂，可作为食品的防腐剂，三是作为天然染料，不同pH值下可不同呈色。

一、仪器与材料1.原料：蓝莓果皮粉末（从安徽安庆市购入，买入四批产地分别位于山东省、辽宁省、内蒙古省、吉林省）。

2.试剂：乙醇、甲醇、甲酸、氢氧化钠、盐酸、乙腈、矢车菊3-O-葡萄糖苷标准品、柠檬酸、纤维素酶。

3.仪器：台式烘箱、SHZ-IIII型循环水式真空泵（上海贤德实验仪器有限公司）、EYELA N-1100旋转蒸发仪、OSB-2100水浴锅（上海爱朗仪器有限公司）、电子天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）、水浴锅（南京科尔仪器设备有限公司）、SB-3200D超声波清洗仪(宁波新芝生物科技股份有限公司)，Agilent 1100 高效液相色谱仪、紫外可见分光光度计（Thermo）、层析柱、AB-8大孔树脂、各个型号圆底烧瓶等玻璃仪器。

二、蓝莓果皮中花色素的提取1.提取方法：花色素分子含有酸性与碱性基团，溶于水和乙醇等醇类化合物。

关于蓝莓花青素提取及其抗氧化活性的分析孙莉【摘要】采用酸化乙醇提取蓝莓鲜果中的蓝莓花青素，并通过羟自由基、DPPH 自由基、超氧阴离子自由基清除率试验评价蓝莓花青素的抗氧化能力。

实验表明，蓝莓花青素最佳提取工艺是：70%两酮，提取温度为4°C，提取时间为1.5h，料液比为1：3。

蓝莓花青素对羟自由基、DPPH自由基、超氧阴离子自由基清除率随着浓度的增大而增强，其抗氧化活性高于相同浓度的抗坏血酸。

蓝莓花青素具有很高的抗氧化活性，可以作为天然抗氧化剂进行开发。

【期刊名称】《呼伦贝尔学院学报》【年(卷),期】2016(024)001【总页数】4页(P82-84,31)【关键词】蓝莓;花青素;提取;抗氧化活性【作者】孙莉【作者单位】呼伦贝尔市食品药品监督管理局执法稽查支队内蒙古海拉尔021008【正文语种】中文【中图分类】Q946.49引言蓝莓花青素是蓝莓鲜果中最为主要的活性成分，在实际研究分析时，因蓝莓花青素比较容易氧化，所以，国内外研究并未形成统一的定性以及定量测定方法。

首先，针对花青素的定量测试方法主要包括正丁醇-盐酸法、香草酸-盐酸法、香草酸-硫酸法等。

其中，花青素结构对正丁醇-盐酸法受的影响比较大，在这种情况下，不适合测定低聚合度花青素。

香草酸-盐酸法在测定花青素含量较低的提取物水溶液时，体系透明度较低；干扰较大香草酸硫酸法时，由于硫酸的强氧化作用使得测定结果偏低。

其次，定性方法包括红外吸收光谱法、高效液相色谱法(HPLC)等。

其中，HPLC既可以对花青素定性也可以对花青素定量。

基于此，应利用此方法进行蓝莓中的花青素提取以及抗氧化活性分析。

一、蓝莓的生物活性物质实验证明，蓝莓的果实与叶子均能够入药，其果实药性酸、甘、平，能够有效防止痢疾，叶片则性比较苦、涩、温，且有小毒，能够起到利尿、解毒的功效。

蓝莓果实中包含大量的花色苷以及多酚类抗氧化活性成分，能够对人体内的自由基进行有效清除，起到预防癌症的作用。

蓝莓类饮料中花青素的快速检测方法宋阳成;陈玉娟;李皓;陈小桦;陈长武;任保国【期刊名称】《食品科学》【年(卷),期】2010(031)024【摘要】目的:建立蓝莓饮料中飞燕草定-3-O-葡萄糖苷及锦葵定-3-O-葡萄糖苷两种花青素类成分的高效液相色谱快速检测方法.方法:采用高效液相色谱法,使用安捷伦ZORBAX SB-C18(4.6mm×75mm,3.5μm)色谱柱,以3%磷酸溶液和甲醇为流动相,二极管阵列检测器在波长525nm处进行检测.结果:该方法对飞燕草定-3-O-葡萄糖苷和锦葵定-3-O-葡萄糖苷的最低检出限分别为0.4ng和2.5ng,标准曲线线性良好,相关系数大于0.9984,回收率在90.2%～98.3%之间,相对标准偏差不大于1.79%.结论:该法简洁、快速且灵敏度高,适合于蓝莓类饮料中花青素的快速检测.【总页数】3页(P334-336)【作者】宋阳成;陈玉娟;李皓;陈小桦;陈长武;任保国【作者单位】吉林工程技术师范学院食品工程学院,吉林,长春,130052;长春理工大学生命科学技术学院,吉林,长春,130000;吉林工程技术师范学院食品工程学院,吉林,长春,130052;黔南民族职业技术学院农学院,贵州,兴义,562400;吉林工程技术师范学院食品工程学院,吉林,长春,130052;吉林工程技术师范学院食品工程学院,吉林,长春,130052【正文语种】中文【中图分类】O657.61【相关文献】1.樱桃汁饮料中花青素的快速测定方法 [J], 安春志;王有志2.蓝莓果实中花青素类成分的超声波提取工艺研究 [J], 杨莉;李珂珂;李沙沙;陈书笑;陶丽;弓晓杰3.蓝莓原花青素的提取与检测方法 [J], 赵美丽;屈文峰;边风根;徐晓安4.真假花青素快速检测试纸的制作方法及其检测方法的研究与应用 [J], 钱滢文;魏义杰;袁嘉男;葛雨;张连钢;沈海波;周鑫魁;李建民;胡永清;洪霞;方剑儒;谢静5.蓝莓及其提取物中花青素检测方法的研究 [J], 陈子凡;董莹;何思东;刘康;吴丽娟;黄浩因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

蓝莓提取花青素实验室流程英文回答：The laboratory process for extracting anthocyanins from blueberries involves several steps. Here is a detailed outline of the procedure:1. Sample Preparation:Collect fresh blueberries and wash them thoroughly to remove any dirt or impurities.Pat dry the berries using a clean towel or paper towel.Weigh the berries to determine the exact amount for extraction.2. Extraction:Place the blueberries in a blender or food processor and blend until a smooth puree is obtained.Transfer the puree into a beaker or a glass container.Add a suitable solvent, such as ethanol or methanol, to the puree. The solvent should be added in a ratio of 3:1 (solvent: puree).Stir the mixture gently to ensure proper mixing of the solvent with the puree.3. Incubation:Cover the beaker with a lid or aluminum foil to prevent evaporation.Place the beaker in a dark and cool environment, such as a refrigerator, and allow it to incubate for 24 to 48 hours.During this incubation period, the solvent will extract the anthocyanins from the blueberry puree.4. Filtration:After the incubation period, filter the mixture using filter paper or a fine mesh sieve to separate the liquid extract from the solid residue.Collect the filtrate in a clean container and discard the residue.5. Concentration:Transfer the liquid extract into a rotary evaporator or a similar equipment for concentration.Apply gentle heat and vacuum to evaporate the solvent, leaving behind a concentrated anthocyanin extract.Monitor the temperature and adjust accordingly to prevent degradation of the anthocyanins.6. Analysis and Storage:Analyze the concentrated extract for anthocyanin content using suitable analytical techniques, such as spectrophotometry or high-performance liquid chromatography (HPLC).Store the extracted anthocyanins in a dark, airtight container at a low temperature to maintain their stability and potency.中文回答：蓝莓提取花青素的实验室流程包括以下几个步骤：1. 样品准备：收集新鲜的蓝莓，并彻底清洗以去除任何污垢或杂质。

花色素野生种花青甙色素含量高达0.33～3.38g/100g鲜重，栽培种一般为0.07～0.15g/100g鲜重。

(参：胡雅馨等蓝莓果实中主要营养及花青素成分的研究食品科学2006, 27（10）)原理：花青素的色调和色度随pH值的不同而发生改变,而干扰物质特征光谱不随pH的改变而改变。

pH为1时, 花青素以红色的2-苯基苯并吡喃的形式存在,pH为4.5时, 花青素以无色的甲醇假碱的形式存在。

结合朗伯-比尔定律可得出, 在两个不同的pH值下,花青素溶液的吸光度的差值与花青素的含量成比例。

大多数水果中不止含有一种花青素, 而且每种花青素的消光系数都有稍微差别, 所以测定的结果就取决于所选用的标准。

桑椹红色素主要成分为矢车菊花素-3- 葡萄糖苷(Cyd- 3- glu)。

样品处理：称取10g蓝莓果→加少量柠檬酸(10mL)→得到蓝莓浆液→向其中加入100mL50%乙醇溶液，45℃浸提50分钟→（二次浸提→三次浸提至上清液无色）→将该浸提混合物抽滤，得到滤液→将滤液进行真空浓缩、用50%乙醇定容至50mL。

测定步骤：缓冲液A：0.100 mol·L-1柠檬酸500mL中加入0.400 mol·L-1 NaOH 168.7mL混合摇匀。

缓冲液B：先把各组分配成0.1mol/L的溶液，然后在柠檬酸中逐滴加入盐酸至pH为1.0。

柠檬酸C6H8O7．H2O：分子量210.14，0.1 mol/L溶液为21.01克/升；0.400 mol·L-1 NaOH，16gNaOH溶解定容到1000mL1.吸取上述样液1.5mL与25mL容量瓶中，用pH=4.5的缓冲液A定容至25mL。

用pH=4.5的缓冲液作为空白，测定pH4.5下的OD值。

2.同上，吸取上述样液1.5mL与25mL容量瓶中，用pH=1.0的缓冲液B定容至25mL。

用pH=1.0柠檬酸一盐酸缓冲液为空白，测定pH1.0下的OD值。