D Audit--胆碱酯酶(ChE)

对于胆碱酯酶的检验生化特性及病理生理人体有两种胆碱酯酶(hlolinesterase，ChE)，乙酰胆碱酯酶和酯酰胆碱酯酶，两者都能水解乙酰胆碱，但生成组织和生理功能各有不同。

AChE主要用于诊断有机磷农药中毒和神经性化学武器中毒。

中毒后，AChE被抑制，使乙酰胆碱蓄积，引起乙酰胆碱样中毒症状，实验室检测此酶，可以判断中毒轻重，指导治疗及判定疗效。

病情严重时，AChE活力可降至“0”；治疗有效时，酶活力可迅速恢复。

此酶升高还见于精神分裂症、溶血性贫血和巨幼细胞性贫血等。

AChE活性在孕育神经管缺陷胎儿的羊水中显著增高。

(一)除外非疾病因素1．年龄在新生儿时期和随后的几周内，ChE在血清中浓度仅为成人的50%，然后逐渐增加，在6岁时达到成人水平，约在青春期趋于稳定，在此后终生保持不变。

2．个体差异血清值的个体间差异由于体重、身高和性别的不同而有差异。

3．绝经期妇女据报道：绝经期后的妇女，其血清的ChE水平比绝经期前的妇女高15%。

4．妊娠在怀孕初期3个月内，ChE活性下降20%～30%，在整个怀孕期间会保持下降水平，在产后几周内恢复正常。

5．避孕药使用口服含有炔雌醇的避孕药可致ChE活性下降20%。

6．溶血测定PChE时标本不能溶血，以免红细胞内的真性胆碱酯酶逸出，使结果假性增高。

(二)血清ChE活性病理性下降1．肝脏疾病血清内的非特异性或假性胆碱酯酶，主要由肝脏产生，因此大量地贮藏在肝内。

在肝实质损害时，由于肝内合成减少，酶活力可降低。

在肝硬化失代偿期或大块肝坏死时，酶活力常显著下降，而在肝昏迷时最为显著。

但本酶对于诊断肝炎或其他肝病的灵敏度远低于转氨酶或其他肝功能试验。

而对于评估肝脏的储备功能和肝病的预后有帮助。

8%的患者有独立的肝胆疾病，其中ChE值在参考范围之外的预期值为21%(预期值试验阳性)，其值在参考范围之内的预期值为97%(预期值为试验阴性)。

因此ChE的测定仅被推荐与ALT与GGT结合，用于肝病的诊断。

胆碱酯酶CHE测定1 检验目的指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确2 原理碳化丁酰胆碱+H2O 胆碱酯酶硫代胆碱+丁酸硫代胆碱+亚铁氰化钾 (Ⅲ) 亚铁氰化钾（II）+胆碱胆碱酯酶催化水解硫代胆碱和碳化丁酰胆碱。

硫代胆碱与黄色亚铁氰化钾（III）反映生成无色的亚铁氰化钾（II），这种颜色的减少可以在405和415纳米之间测得。

3 标本要求3.1使用新鲜血清,不使用血浆.3.2在采集血液后2h分离血清.3.3 8h内不能及时测定血清可存放于2—80C冰箱保存,3天后测定的血清置-150C―-200C 冰冻保存,但冰冻血清只能复融一次.3.4严重溶血或脂血的标本不能作测定.4 试剂4.1 试剂：上海罗氏诊断产品有限公司CHE试剂盒,国械注进20142405056YZB/GER 5724-2014）4.1.1试剂盒组成如下:R1 焦磷酸缓冲液:92 mmol/L,pH 7.7；亚铁氰化钾（III）：2.4 mmol/L。

R2 GOOD缓冲液：10 mmol/L，pH 4.0；碳化丁酰胆碱：46 mmol/L；稳定剂4.1.2 试剂准备：试剂为即用式。

4.1.3 试剂稳定性与贮存：2-8°C下保存期限：见试剂标签上的有效期；机上稳定期：4周4.1.4变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染则试剂不能使用。

4.2 校准品：使用罗氏多项生化校准品提供的CHE校准品对自动分析仪进行校准。

4.3 质控品：使用正常值、病理值复合控制品。

5 仪器AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪6 操作步骤6.1 样品的准备：将标好号的样品离心后放到仪器规定的位置。

6.2 试剂的检测：仪器开机后，检查各种试剂的位置，体积等确认无误后方可进行测定。

6.3 项目基本参数：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪项目测定参数。

胆碱酯酶（CHE）的测定
一、原理：血清及组织中CHE使乙酰胆碱水解成胆碱和乙酸，未被水解的剩余乙酰胆碱与羟胺作用生成乙酰羟胺，再与铁离子在酸性溶液中形成棕色复合物，根据颜色深浅推算出酶的活力。

二、试剂：
1、试剂一：溶液60ml×1瓶，室温保存。

2、试剂二：乙酰胆碱粉剂×1支，-20℃保存，稀释液5ml×1瓶，4℃保存。

80μmol/ml 乙酰胆碱底物贮备液的配制：将一支乙酰胆碱碱粉剂倒入5ml稀释液中即成，4℃。

8μmol/ml 乙酰胆碱应用液的配制：贮备液：试剂=1：9稀释。

3、试剂三：甲粉剂×1支；乙液30ml×1瓶；丙液30ml×1瓶；室温保存。

试剂三应用液的配制：每次测试前将甲粉倒入乙液中，充分摇匀，根据需要量将甲乙混合液与丙液等量混合，充分混匀，配成试剂三应用液，现用现配。

4、试剂四：溶液30ml×1瓶，室温保存。

5、试剂五：溶液20ml×1瓶，室温保存。

6、试剂六：粉剂×1瓶，稀释液30ml×1瓶，测试前将稀释液倒入粉剂中，充分混匀，避光
4℃冷藏。

测各管吸光度值。

四、计算：
1、定义：血清中CHE的计算：每毫升血清在37℃和底物作用20分钟，分解1μmol乙酰胆
碱为1个活力单位。

2、计算公式：
血清中CHE活力。

血清胆碱酯酶的检测和临床应用摘要】血清胆碱酯酶是临床生化检查中的一个常规项目，广泛应用于有机磷农药中毒、肝功能损害的诊断与预后观察。

近年来的研究表明，血清胆碱酯酶与许多临床疾病都有一定的相关性，如脑梗死、慢性阻塞性肺疾病、心力衰竭、感染、恶性肿瘤等。

本文就血清胆碱酯酶的变化与临床相关疾病的研究进展做一综述，为研究人员及临床医生对血清胆碱酯酶的认识提供新的思路。

【关键词】胆碱酯酶；临床应用【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2017）19-0098-02胆碱酯酶(Cholinesterase，ChE)是一类催化酰基胆碱水解的酶类。

对胆碱酯酶的研究早期主要集中在有机磷农药中毒和肝脏疾病方面，近年来血清胆碱酯酶在神经系统、呼吸系统、心血管系统、感染等方面的研究也取得了一定进展。

1.胆碱酯酶的生物学特性胆碱酯酶分为两种，一种为乙酰胆碱酯酶(AChE)，主要分布于神经组织，小部分分布于红细胞和血清等非神经组织中。

另一种为丁酰胆碱酯酶（PchE），大多数分布于肝、脑白质和血清中，对乙酰胆碱（ACh）的特异性较低，PchE能与有机磷毒剂或杀虫剂结合，并能水解许多酯类、肽类等化合物，参与某些药物的代谢过程。

血清中的胆碱酯酶主要来源于PChE，AChE含量极少。

2.胆碱酯酶的检测方法胆碱酯酶的检测，早期有放射化学测定法，灵敏度高，但因其放射性对人体的危害，不利于大范围推广；临床上也有用试纸法或干片法测定全血和血清中胆碱酯酶，但灵敏度和特异性均受到限制；后续又研发有乙酰胆碱酯酶(AChE)ELISA测定试剂盒，灵敏度和特异性均得到了提高，但因其操作繁琐且耗时较长，不利于大批量标本的检测及基层医院的开展。

目前胆碱酯酶的检测主要是采用羟戊酸铁比色法和改良的Ellman法，反应时间短，且可以在全自动生化分析仪上检测，保证了检测的时效性和结果的准确性。

3.胆碱酯酶的临床应用3.1 胆碱酯酶与有机磷农药中毒有机磷农药是目前被广泛应用的农药，也引起了目前临床上最常见的农药中毒。

胆碱酯酶（CHE ）测定标准操作程序1. 摘要血清拟胆碱酯酶是在肝脏中生成然后分泌到血液中的酶，可将胆碱酯水解成胆碱和有机酸。

2. 适用范围程序适用于日立7600自动生化分析仪检测血清中胆碱酯酶（CHE ）的活力3. 职责使用日立7600自动生化分析仪进行测定胆碱酯酶（CHE ）活力的工作人员要严格按照本SOP 程序进行,室负责人监督管理；本SOP 的改动，可由任一使用本SOP 的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。

4. 检测方法上海科华生物工程股份有限公司生产的胆碱酯酶（CHE ）试剂盒采用的是丁酰硫代胆碱-铁氰化钾法。

5. 原理丁酰硫代胆碱-铁氰化钾法（DGKC1994new ）[1]---++−→−+++−−−→−+462362])([2)(2])([2CN Fe O H OH CN Fe O H 胆碱双二硫代硫代胆碱硫代胆碱丁酸丁酰硫代胆碱胆碱酯酶底物碘化丁酰硫代在血清中拟胆碱酯酶的作用下水解为丁酸和硫代胆碱，然后试剂中的铁氰化钾被硫代胆碱还原为亚铁氰化钾，引起在波长405 nm 处吸光度下降，下降速率与血清中CHE 活力成正比6. 仪器日立7600自动生化分析仪7. 试剂7.1 试剂来源：上海科华生物工程股份有限公司提供7.2 试剂瓶内主要成分：R1：焦磷酸盐缓冲液（PH7.6）、铁氰化钾、稳定剂；R2：碘化丁酰硫代胆碱、稳定剂7.3 试剂稳定性：未打开试剂在2-8℃避光保存可失效期，测定液打开后冷藏于分析仪中2-8℃避光可以保存42天，本试剂有效期为12个月，试剂不可冰冻。

7.4 试剂准备：试剂为即用式。

8. 标准品和质量控制8.1 校准程序：使用某某公司提供的标准品对自动分析仪进行校准。

按照公司标准品使用要求，并以9g/L氯化钠溶液或去离子水为空白，经校准测定，仪器自动对标准品响应量通过合适的数学模型绘制校准曲线。

8.2质控品某某公司提供的生化复合定值质控血清做为室内质控品。

胆碱酯酶（CHE）测定操作规程一、用途本产品用于体外定量测定血清、血浆样品中胆碱脂酶（CHE）的活性。

二、临床意义（一）概述胆碱脂酶可以分为乙酰胆碱酯酶和假性胆碱酯酶，前类亦称真性胆碱酯酶，主要存在于胆碱神经末梢突触间隙。

乙酰胆碱酯酶可以在神经末梢、效应器接头或突触间隙等部位终止乙酰胆碱作用。

（二）临床意义1. 病理性升高：肾病综合征，甲状腺功能亢进，糖尿病，脂肪肝，原发性家族性高CHE血症，血清CHE变异，原发性肝癌等。

2. 病理性降低：重症肝炎，慢性肝炎活动型，肝硬化，肝脓肿，各种癌，低蛋白血症(营养不良，贫血，感染，皮肌炎，急性心肌梗死)，遗传性血清CHE异常症，有机磷中毒(轻度中毒降低30%，中度中毒降低50%，重度中毒降低70%)，溃疡性结肠炎，肾功能不全，天疱疮，烧伤等。

（三）检验原理胆碱酯酶催化S-碘化丁酰基硫代胆碱水解，生成丁酸与硫代胆碱，硫代胆碱与黄色的铁氰化钾[Fe(CN)6]3-反应后形成无色的[Fe(CN)6]4-，在405nm吸光度下降的速率与标本中胆碱酯酶活性成正比。

四、样品血液样品原则上采集晨起空腹血（禁食12小时）；患者处于平静、休息状态，减少患者由于运动、饮食带来的影响；静脉采血时患者应取坐位或卧位；止血带使用后1分钟内采血，回血后立即松开；正确使用抗凝剂；防止溶血；防止过失性采样。

样品运送过程中应防止过度振荡、防止样品容器的破损、防止样品被污染、防止样品及唯一性标志的丢失和混淆，防止样品对环境的污染、水分蒸发。

CHE测定样品为不溶血的血清、血浆（肝素抗凝）。

样品应在低温条件下运输并及时测定。

不能使用EDTA抗凝剂的标本。

五、试剂（一）试剂组成不同批号试剂中各组份不能互换。

（二）试剂准备R1和R2试剂为即用型液体试剂，开瓶装载即可使用，用后应及时冷藏保存。

（三）试剂的保存及稳定性1. 不能冰冻试剂。

2. 未开瓶的R1和R2试剂应在2～8℃密闭避光贮存，稳定期为瓶签标示的有效期。

1 性能指标
2.1外观
试剂应为清澈透明的液体，无沉淀、悬浮物和絮状物。

2.2净含量
液体试剂的净含量应不少于标示值。

2.3试剂空白
2.3.1试剂空白吸光度
试剂以水为空白在37℃±1℃，405 nm 波长条件下，吸光度应大于 1.0 A。

2.3.2试剂空白吸光度变化率
试剂以水为空白在37℃±1℃，405 nm 波长条件下，吸光度变化率应小于0.003 A/min。

2.4分析灵敏度
当样本浓度为7400 U/L 时，吸光度变化率应不小于0.07 A/min。

2.5线性范围
试剂盒在（400~20000）U/L 范围内：
a)线性相关系数r 应不小于0.9900；
b)当样本浓度不大于3930 U/L 时，线性绝对偏差应不大于±393 U/L；当样本浓度大
于3930 U/L 时，线性相对偏差应不大于±10.0%。

2.6测量精密度
2.6.1重复性
变异系数：CV 应不大于 3.0%。

2.6.2批间差
相对偏差：R 应不大于 5.0%。

2.7准确度
测定校准品，测定结果与靶值的相对偏差应不大于±10.0%。

2.8分析特异性
血红蛋白浓度在1000 mg/dL 内、抗坏血酸浓度在60 mg/dL 内、内源性酯浓度在1000 mg/dL 内、胆红素浓度在60 mg/dL 内，对试剂检测结果的偏差影响应在±10%以内。

1。

胆碱酯酶（CHE）测定试剂盒（丁酰硫代胆碱底物法）适用范围：该试剂盒用于体外定量测定人血清中胆碱酯酶的活性。

1.1 产品规格试剂1:40mL×5，试剂2:10mL×5；试剂1:40mL×5，试剂2:50mL×1；试剂1:40mL×2，试剂2:10mL×2；试剂1:40mL×2，试剂2:20mL×1；试剂1:40mL×4，试剂2:10mL×4；试剂1:40mL×4，试剂2:40mL×1；试剂1:40mL×4，试剂2:20mL×2；试剂1:40mL×3，试剂2:10mL×3；试剂1:40mL×3，试剂2:30mL×1；试剂1:40mL×1，试剂2:10mL×1；试剂1:32mL×1，试剂2:8mL×1；试剂1:400mL×1，试剂2:100mL×1；试剂1:4000mL×1，试剂2:1000mL×1；1.2 组成成分该试剂盒由试剂1（R1）、试剂2（R2）组成。

1.2.1试剂组成试剂1：磷酸盐缓冲液≥50.0mmol/L铁氰化钾≥0.1mmol/L试剂2：磷酸盐缓冲液≥50.0mmol/L丁酰硫代胆碱≥5.0mmol/L2.1 外观a) R1应为无色至淡黄色溶液，无混浊，无未溶解物。

b) R2应为无色溶液，无混浊，无未溶解物。

2.2 净含量液体组分不少于标示值。

2.3 试剂空白2.3.1试剂空白吸光度应不大于1.500。

2.3.2试剂空白吸光度变化率应不大于0.005/min2.4 分析灵敏度CHE试剂盒测定活性10000U/L的被测物时，吸光度变化率（ΔA/min）应不小于0.050。

2.5 准确度回收试验：回收率应在85%-115%之间。

2.6 精密度2.6.1重复性变异系数应不大于5%。