红色毛癣菌治疗方法有哪些

毛霉菌感染的治疗方法毛霉菌感染是一种由毛霉菌引起的真菌感染病，常见于皮肤、指甲、头发等部位。

毛霉菌感染通常会导致局部瘙痒、脱屑、发红等症状，严重者可能出现疼痛、溃疡等并发症。

因此，及时有效的治疗对于毛霉菌感染至关重要。

以下是关于毛霉菌感染的治疗方法的介绍。

首先，对于局部皮肤感染的毛霉菌，常见的治疗方法包括外用抗真菌药物。

例如，含有克霉唑、酮康唑等成分的外用药膏可以有效抑制毛霉菌的生长，减轻症状。

患者在使用外用药物时，应按照医生的建议进行正确的涂抹和使用方法，坚持使用一段时间，直至症状完全消失。

其次，对于指甲感染的毛霉菌，治疗方法相对复杂。

一般情况下，医生会建议患者口服抗真菌药物，如伊曲康唑、氟康唑等。

这些药物可以通过血液循环到达感染部位，对毛霉菌进行全面的抑制和清除。

同时，患者还需要定期到医院进行指甲的修剪和清洁，以加快痊愈的速度。

此外，对于头皮感染的毛霉菌，治疗方法也需要综合考虑。

除了外用抗真菌药物外，医生还可能会建议患者使用抗真菌洗发水，以帮助清洁头皮、减轻瘙痒和脱屑的症状。

在使用抗真菌洗发水时，患者应该按照说明进行正确的使用方法，坚持使用一段时间，才能取得较好的疗效。

总的来说，毛霉菌感染的治疗方法需要根据感染部位和症状的不同而有所调整。

患者在接受治疗时，应该密切配合医生的指导，坚持按时按量使用药物，避免自行增减剂量或中途停药。

同时，注意个人卫生和保持皮肤、指甲、头发的清洁干燥，有助于预防毛霉菌感染的再次发生。

综上所述，毛霉菌感染的治疗方法主要包括外用抗真菌药物、口服抗真菌药物和抗真菌洗发水等，患者在接受治疗时应密切配合医生，注意个人卫生，以期尽快康复。

希望本文所介绍的治疗方法能对患有毛霉菌感染的患者有所帮助。

猫藓快速治疗方法猫藓，又称为猫癣，是一种常见的皮肤病，通常表现为头部和颈部出现红色、瘙痒的斑块，严重影响患者的生活质量。

猫藓的治疗方法多种多样，但要选择适合自己的治疗方法并非易事。

本文将介绍一些猫藓的快速治疗方法，希望能帮助到有需要的朋友。

首先，对于猫藓患者来说，保持皮肤清洁是非常重要的。

每天用温水和温和的皂液清洁患处，然后用干净的毛巾轻轻擦干皮肤。

保持皮肤清洁可以减少细菌和真菌的滋生，有助于病情的好转。

其次，局部擦抹抗真菌药膏也是治疗猫藓的常用方法。

选择含有克霉唑、酮康唑等成分的药膏，按照医生的建议使用。

擦抹药膏前，要先将患处清洁干燥，然后将药膏均匀地涂抹在患处，按摩至完全吸收。

使用抗真菌药膏可以有效杀灭真菌，减轻症状。

另外，改善个人生活习惯也是治疗猫藓的重要环节。

保持良好的生活习惯，如定期更换床上用品、避免穿紧身衣物、保持充足的睡眠等，有助于减少病情的复发和扩散。

此外，饮食调理也是治疗猫藓的重要一环。

多摄入富含维生素和矿物质的食物，如新鲜蔬菜、水果、全麦食品等，有助于提高免疫力，加速病情的康复。

最后，如果猫藓症状严重，影响正常生活，建议及时就医。

医生会根据患者的具体情况，制定个性化的治疗方案，包括口服药物、局部药膏、光疗等。

遵医嘱进行治疗，可以更快地摆脱猫藓的困扰。

总之，猫藓是一种常见的皮肤病，但并不是不可治愈的。

通过保持皮肤清洁、使用抗真菌药膏、改善生活习惯、饮食调理以及就医治疗，猫藓患者可以快速摆脱病症的困扰，重拾健康和快乐的生活。

希望本文介绍的治疗方法能对猫藓患者有所帮助。

祝愿大家早日康复！。

红钱癣的治疗方法有什么
文章导读
\n 今天我们来看一下红钱癣，那什么是红钱癣呢？它有什么危害呢？大家心中对此不解，其实，红钱癣是平时由棒状杆菌属的微细棒状杆菌引起，常发生在皮肤表面，对皮肤的损害非常的大，大家平时不仅要注意卫生，预防这种皮肤病，还要懂得怎么去治疗红癣，那我们再看一下红钱癣的治疗方法。

首先，应该尽量寻找发病原因并去除之注意调整饮食要注意忌食辛辣刺激避免进食易致敏的物品如酒类海鲜贝类食物应禁用以清淡饮食为好;尽量减少外界不良刺激如手抓外用肥皂热水烫洗等;衣着应较宽松轻软避穿毛制品或尼龙织品.用湿疹锌软膏擦患处试试.
药物的话首选红霉素250mg口服，每日4次，连用10～14天，亦可用四环素。

外搽1％红霉素软膏或5％～10％硫磺软膏和抗真菌类制剂。

愈后再搽1～2周，以免复发。

在治疗过程仔细分析患者病情，准确查明疾病诱因，将疾病定型，确定病因、病位、病性，掌握疾病的发展态势，做预后分析，做好这一系列的前期工作之后，进行精确的对症治疗，以保证中药治疗红癣方法的充分辩证，在复发性很强的红打充分辩证，在复发性很强的牛皮癣防治方面具有显著的疗效。

说到这里，我们是不是对红钱癣的治疗方法的有大致的了解了呢？建议大家不要单纯的了解怎么去预防它，疾病可能在不知不觉中找上你，最重要的是对红钱癣的治疗方法了解。

希望大家以后早日康复。

畜牧兽医学报 2023,54(4):1690-1702A c t aV e t e ri n a r i a e tZ o o t e c h n i c aS i n i c a d o i :10.11843/j.i s s n .0366-6964.2023.04.032开放科学(资源服务)标识码(O S I D ):侧柏叶抗红色毛癣菌主要活性成分α-蒎烯以E R G -3为靶点发挥抗真菌作用张 潇1,李丹丹1,田红利1,欧春敏1,杨 龙2,欧阳五庆2*,郑 寅1*(1.贵州大学动物科学学院,贵阳550025;2.西北农林科技大学动物医学院,杨凌712100)摘 要:红色毛癣菌(T r i c h o p h y t o n r u b r u m ,T .r u b r u m )是皮肤癣最主要病原;侧柏叶(C a c u m e nP l a t y c l a d i )是侧柏[P l a t y c l a d u s o r i e n t a l i s (L .)F r a n c o ]的干燥嫩枝梢及叶,被‘苗族医学“收录用于治疗皮肤癣㊂本研究旨在探讨侧柏叶抗T .r u b r u m 的主要活性物质及其抗真菌机制,为抗皮肤癣新药研发提供帮助㊂本研究通过测定最小抑菌浓度和孢子萌发率分析了侧柏叶活性物质对T .r u b r u m 的抑菌活性,使用电镜观察T .r u b r u m 菌丝形态和孢子超微结构,并检测侧柏叶活性物质对T .r u b r u m 细胞膜通透性㊁完整性和麦角甾醇含量的影响,从而阐述侧柏叶活性物质对T .r u b r u m 抑菌机理,最后采用G C -M S 和q R T -P C R 方法找到其抗T .r u b r u m 的作用靶点㊂结果显示,侧柏叶石油醚部位的α-蒎烯为主要抗菌活性成分,M I C 为32μg ㊃m L -1,极显著抑制孢子萌发(P <0.01);α-蒎烯可致细胞膜发生明显损伤和内容物流出㊁通透性极显著增加(P <0.01)以及24h 内细胞膜中麦角甾醇和24(28)脱氢麦角甾醇含量显著下降(P <0.05);引起脂质色谱图中E R G 3活性抑制相关的 麦角甾烷-7,24-二烯-3β-醇 色谱峰出现;可极显著降低E R G 3的相对表达量(P <0.01)㊂结果表明,α-蒎烯是侧柏叶中发挥抗T .r u b r u m 活性最主要成分且以E R G 3为其抗真菌靶点㊂关键词:红色毛癣菌;侧柏叶;α-蒎烯;细胞膜;麦角甾醇;E R G 3中图分类号:S 859.7 文献标志码:A 文章编号:0366-6964(2023)04-1690-13收稿日期:2022-08-08基金项目:贵州大学人才引进项目(贵大人基合字2018[13]号);贵州大学培育项目(贵大培育[2020]82号);贵州省科技厅基础研究计划项目(黔科合基础-Z K [2021]-170)作者简介:张 潇(1997-),男,贵州遵义人,硕士生,主要从事中草药抗皮肤癣研究,E -m a i l :836970241@q q.c o m *通信作者:郑 寅,主要从事中药活性成分分析㊁纳米新制剂和皮肤癣菌病防治研究,E -m a i l :y z h e n g @gz u .e d u .c n ;欧阳五庆,主要从事新兽药研发㊁纳米生物技术和细胞生物学研究,E -m a i l :o y w q 506@s i n a .c o m A l p h a -p i n e n e I s t h eM a i nA c t i v e I n gr e d i e n t o f C a c u m e nP l a t y c l a d i a g a i n s t T r i c h o p h y t o n r u b r u m w i t h E R G 3a s I t s T a r ge t Z H A N G X i a o 1,L ID a n d a n 1,T I A N H o n g l i 1,O U C h u n m i n 1,Y A N GL o n g 2,O U Y A N G W u q i n g 2*,Z H E N G Y i n 1*(1.C o l l e g e o f A n i m a lS c i e n c e ,G u i z h o uU n i v e r s i t y ,G u i y a n g 550025,C h i n a ;2.C o l l e g e o f V e t e r i n a r y M e d i c i n e ,N o r t h w e s t A&F U n i v e r s i t y ,Y a n g l i n g 712100,C h i n a )A b s t r a c t :T r i c h o p h yt o n r u b r u m (T .r u b r u m )i s a n i m p o r t a n t p a t h o g e n c a u s i n g d e r m a t o p h y t o s i s .T h e d r y t w i g a n d l e a f o f P l a t y c l a d u s o r i e n t a l i s (L .)F r a n c o i s c a l l e d C a c u m e nP l a t yc l ad i a n d re -c o r d e d i nt h e M i a o M e d i c i n ef o r t h e t r e a t m e n to f t i n e a s .T h es t u d y a i m e dt o i n v e s t i ga t e t h e m a i n a n t i -T .r ub r u mc o m p o n e n t s a n dm e c h a n i s m s o f C a c u m e nP l a t yc l ad i ,a n d t o p r o v i de p o t e n -t i a l c a n d i d a t e a n t i -T .r u b r u m a g e n t s .I n t h i s s t u d y ,t h e a n t if u ng a l a c t i v i t y o f C a c u m e nP l a t yc l a -d i m a i n i n g re d i e n t a g a i n s t T .r u b r u m w a sd e t e r m i n e db y m i n i m u mi n h i b i t o r y co n c e n t r a t i o na n d4期张潇等:侧柏叶抗红色毛癣菌主要活性成分α-蒎烯以E R G-3为靶点发挥抗真菌作用s p o r e g e r m i n a t i o n r a t e s.T h em y c e l i a lm o r p h o l o g y a n ds p o r e su l t r a s t r u c t u r eo f T.r u b r u m w e r e o b s e r v e db y u s i n g e l e c t r o n m i c r o s c o p y;a n dt h ee f f e c t so ft h ea c t i v es u b s t a n c e so f C a c u m e n P l a t y c l a d i o n t h e p e r m e a b i l i t y,i n t e g r i t y,a n de r g o s t e r o l c o n t e n to f T.r u b r u m c e l lm e m b r a n e w e r e f u r t h e r e x a m i n e d,s oa s t oe l u c i d a t e t h em e c h a n i s m o f T.r u b r u m i n h i b i t i o nb y t h ea c t i v e s u b s t a n c e s o f C a c u m e nP l a t y c l a d i.F i n a l l y,w eu s e dG C-M Sa n d q R T-P C Rt o f i n d i t s t a r g e t o f a c t i o na g a i n s t T.r u b r u m.T h er e s u l t ss h o w e dt h a tt h e p e t r o l e u m e t h e rf r a c t i o no f C a c u m e n P l a t y c l a d i e x h i b i t e d t h e s t r o n g e s t a n t i-T.r u b r u m a c t i v i t y a n d i nw h i c hα-p i n e n ew a s p r o v e d t o b e t h em a i n i n g r e d i e n tw i t haM I C32μg㊃m L-1.A l p h a-p i n e n e c o u l d i n d u c em e m b r a n e d a m a g e, h i g h e r s i g n i f i c a n t c e l l u l a r l e a k a g e(P<0.01)a n d e r g o s t e r o l a n d24(28)d e h y d r o e r g o s t e r o l a m o u n t s i g n i f i c a n t d e c r e a s i n g w i t h i n24h(P<0.05);C a u s eh i g h l y s i g n i f i c a n t r e d u c t i o n(P<0.01)o f t h e r e l a t i v e e x p r e s s i o no f E R G3g e n ea n d t h e E R G3i n h i b i t i o n r e l a t e d m a r ks t e r o lE r g o s t a-7, 22-d i e n-3β-o l o c c u r e d i n s t e r o l s p a t t e r n.T h e r e s u l t s s h o w e d t h a tα-p i n e n e i s t h em o s t p o t e n t a n t i-T.r u b r u m c o m p o n e n t i n C a c u m e nP l a t y c l a d i a n d E R G3w a s i t s t a r g e t.K e y w o r d s:T r i c h o p h y t o n r u b r u m;C a c u m e nP l a t y c l a d i;α-p i n e n e;c e l lm e m b r a n e;e r g o s t e r o l;E R G3*C o r r e s p o n d i n g a u t h o r s:Z H E N G Y i n,E-m a i l:y z h e n g@g z u.e d u.c n;O U Y A N G W u q i n g,E-m a i l:o y w q506@s i n a.c o m皮肤癣菌病可引起严重的兽医公共卫生问题,据统计,全球约25%人口患有皮肤癣,我国畜牧业生产中兔㊁牛皮肤癣发病率分别为30.8%和15.35%,宠物猫狗皮肤癣发病率为34%,其中, 60%由红色毛癣菌(T r i c h o p h y t o nr u b r u m,T. r u b r u m)引起[1-5]㊂该病常导致动物瘙痒难忍㊁食欲降低和皮肤受损,严重危害动物福利和畜牧生产[6-7],同时,皮肤癣在人畜间传播迅速,威胁畜牧从业人员健康[8-9]㊂化学合成类抗真菌药防治该病效果好,然而,由于抗真菌药物靶点局限和药物种类少,导致耐药菌株频现㊁临床治疗难度增加和复发频繁[10]㊂基于此,近年来,从民族药中分离鉴定,抗皮肤癣菌活性好㊁结构明确㊁机制新颖的活性单体或先导分子成为抗皮肤癣菌新药研发热点[11]㊂当前,研究发现部分民族药含有可破坏T. r u b r u m膜完整性的活性成分,例如,T r i f a n等[12]发现厚朴酚和木兰酚能够抑制T.r u b r u m麦角甾醇合成,从而干扰细胞膜功能和孢子生长;L u o等[13]发现木兰花碱通过抑制角鲨烯环氧酶和C Y P51酶活性㊁降低菌体中麦角甾醇含量,从而破坏T. r u b r u m细胞膜;L i等[14]发现地锦草主要活性成分鞣花酸可破坏T.r u b r u m细胞膜完整性发挥抗真菌作用㊂本实验室选定‘苗族医学“[15]收录,治疗皮肤癣效果确切的侧柏叶为研究对象,通过活性追踪方法找到其抗T.r u b r u m的活性成分,采用G C-M S㊁透射电镜和q R T-P C R等技术,找到该活性成分抗T.r u b r u m分子靶点,以期为抗皮肤癣新药研发提供帮助㊂1材料与方法1.1材料1.1.1试验菌株红色毛癣菌(T r i c h o p h y t o n r u b r u m,A T C C28188)购自美国菌种保藏中心㊂1.1.2试验药物侧柏叶由贵州中医药大学附属第一医院初级药师辛加敏惠赠,样品粉碎,过40~ 60目筛,备用;酮康唑(k e t o c o n a z o l e,纯度ȡ98%)购自湖北恒硕化工有限公司;α-蒎烯(α-p i n e n e,纯度97%)㊁β-石竹烯(β-c a r y o p h y l l e n e,纯度90%)㊁3-蒈烯(3-c a r e n e,纯度90%)购自北京百灵威科技有限公司㊂1.1.3主要试剂无水乙醇㊁石油醚㊁乙酸乙酯㊁正丁醇㊁二氯甲烷购自重庆万盛川东化工有限公司;二甲基亚砜(D M S O)购自源叶生物;正庚烷购自阿拉丁公司;以上试剂均为化学分析纯㊂碘化丙啶(P I)㊁沙氏葡萄糖琼脂培养基(S a b o u r a u dD e x t r o s e A g a r,S D A)㊁沙氏葡萄糖肉汤培养基(S a b o u r a u dD e x t r o s eB r o t h,S D B)购自北京索莱宝科技有限公司㊂1.1.4主要仪器旋转蒸发仪购自上海亚荣生化仪器厂,恒温培养箱购自上海贺德公司,超净工作台购自上海博讯公司,超声波清洗机购自苏州创惠1961畜牧兽医学报54卷电子有限公司,T r a c e I S Q气相色谱四级杆质谱联用仪购自美国赛默飞世尔科技公司,A g i l e n t5975型气质联用仪购自安捷伦科技有限公司,紫外分光光度计购自上海天美科学仪器有限公司㊁B D A c c u-r i T M C6P l u s流式细胞仪购自美国B D医疗器械有限公司;H i t a c h i S-4800S扫描电镜㊁H i t a c h i(J E O L-1230)透射电镜购自日本日立电子株式会社㊂1.2方法1.2.1侧柏叶抗T.r u b r u m最佳活性部位筛选试验将100g侧柏叶粉末浸泡于1000m L无水乙醇12h,超声波振荡提取3次,滤液减压浓缩得到浸膏,随后用石油醚㊁乙酸乙酯㊁正丁醇㊁二氯甲烷萃取,所得萃取液再减压浓缩得到各提取部位,溶于D M S O中,配制药物终浓度为50m g㊃m L-1,于4ħ冰箱保存备用㊂通过微量肉汤稀释法检测侧柏叶各提取部位对T.r u b r u m的最低抑菌浓度(M I C),以气相色谱-质谱联用仪(g a sc h r o m a t o g r a p h-m a s ss p e c t r o m e t e r, G C-M S)检测分析抗菌活性最强提取部位,随后选取该部位3种主要成分进行抑菌试验,M I C最低者即为侧柏叶抗T.r u b r u m的主要活性成分㊂气相色谱条件[16]:E q u i t y-5毛细管色谱柱(20mˑ0.25m mˑ0.25μm);进样口温度260ħ,载气为氦气(99.99%),流速为1m L㊃m i n-1,分流比20ʒ1,进样量2μL,升温程序:初始柱温60ħ保持3m i n,以10ħ㊃m i n-1升温到280ħ,保持20m i n㊂质谱条件[16]:电子轰击离子源(E I),电子能量70e V,离子源温度230ħ,四极杆温度150ħ,传输线温度280ħ,扫描范围:35~600a m u㊂1.2.2T.r u b r u m孢子萌发试验采用L i u 等[17]的方法,以S D B配制T.r u b r u m孢子悬液(1.5ˑ104C F U㊃m L-1),加入α-蒎烯至2M I C和1M I C为药物测试组,同时设置阳性药物对照(1 M I C酮康唑)和阴性对照(无药物处理)组,随后,在28ħ,湿度65%下培养24h,取10μL菌液置于血球计数板,普通光学显微镜下观察计数各组孢子萌发率㊂孢子萌发率=各组孢子萌发数/阴性对照组孢子萌发ˑ100%,每组设立3个重复㊂1.2.3电镜观测1.2.3.1扫描电镜(S E M):将100μL T.r u b r u m 孢子悬液(1.5ˑ104C F U㊃m L-1)均匀涂布于S D A 平板上,在28ħ,湿度65%下培养5d后,取5m m 直径菌块移至含有1M I Cα-蒎烯的S D A平板中心作为药物测试组,含有1M I C酮康唑作为阳性药物对照组,以无药物处理作为阴性对照组,随后,在相同条件下继续培养5d,参考D a等[18]的S E M样品制备方案处理,最后,使用H i t a c h i-4800S显微镜(10k V)观察㊂1.2.3.2 透射电镜(T E M):以10m L含有T. r u b r u m(1.5ˑ104C F U㊃m L-1)㊁0.001%吐温80和1M I Cα-蒎烯的S D B为药物测试组,含有1M I C 酮康唑为阳性药物对照组,以无药物处理为阴性对照组;随后,置于28ħ,湿度65%恒温培养箱中培养5d;培养完毕后,离心(3000r㊃m i n-1)5m i n收集孢子,并用1ˑP B S(p H7.0)洗涤3次,将沉淀的孢子倒入55ħ琼脂水溶液(15%)中,在室温下冷却,制备为1m m3立方体,并在4%戊二醛中固定12h㊂最后,参考N i s h i y a m a等[19]T E M样品制备方案处理立方体,并使用H i t a c h i(J E O L-1230)显微镜在75k V下观察㊂1.2.4T.r u b r u m细胞内容物流出率试验采用L i a n g等[20]的方法,以S D B配制T.r u b r u m孢子悬液(1.5ˑ104C F U㊃m L-1),加入α-蒎烯至2和1M I C为药物测试组,同时设置阳性药物对照(1 M I C酮康唑)和阴性对照(无药物处理)组,以25%氢氧化钾-乙醇溶液处理为阳性对照组;随后,置于28ħ,湿度65%恒温培养箱中培养;于8和24h,离心(3000r㊃m i n-1)5m i n,取上清液并检测260n m 处紫外吸光值㊂细胞内容物流出率=各组吸光值/阳性对照组吸光值ˑ100%,每组设立3个重复㊂1.2.5T.r u b r u m细胞膜完整性试验采用L e e等[21]方法,以S D B配制T.r u b r u m孢子悬液(1.5ˑ104C F U㊃m L-1),加入α-蒎烯至1M I C为药物测试组,同时设置阳性药物对照(1M I C酮康唑)和阴性对照(无药物处理)组,放于28ħ,湿度65%恒温培养箱中培养;于8和24h,离心(3000r㊃m i n-1) 5m i n收集孢子并悬浮于1ˑP B S(p H7),加入碘化丙啶(P I)至1μg㊃m L-1,在35ħ水浴孵育1h,孵育结束,流式细胞仪分析细胞膜完整性㊂1.2.6T.r u b r u m麦角甾醇和24(28)脱氢麦角甾醇定性分析试验采用A r t h i n g t o n-S k a g g s等[22]的方法,以S D B配制T.r u b r u m孢子悬液(1.5ˑ104C F U㊃m L-1),加入α-蒎烯至2和1M I C为药物测试组,同时设置阳性药物对照(1M I C酮康唑)和阴性对照(无药物处理)组,随后,置于28ħ,湿度29614期张潇等:侧柏叶抗红色毛癣菌主要活性成分α-蒎烯以E R G-3为靶点发挥抗真菌作用65%恒温培养箱中培养,于5d后,过滤培养液收集菌丝,并用无菌蒸馏水清洗,置于60ħ烘箱中烘干;准确称取0.1g干燥菌丝置于5m L25%氢氧化钾-乙醇溶液,85ħ水浴1h;然后向上述液体中加入5m L水-正庚烷溶液(1ʒ3),混匀5m i n,待溶液分层后收集正庚烷层液体,于-20ħ放置24h;最后,利用紫外分光光度计在240~300n m检测麦角甾醇和甾醇中间产物24(28)脱氢麦角甾醇含量变化趋势㊂1.2.7T.r u b r u m麦角甾醇质谱分析试验采用Mül l e r等[23]的方法,以S D B配制T.r u b r u m孢子悬液(1.5ˑ104C F U㊃m L-1),加入α-蒎烯至1 M I C为药物测试组,同时设置阳性药物对照(1M I C 酮康唑)和阴性对照(无药物处理)组;T.r u b r u m麦角甾醇提取方法同 1.2.6 ,随后,使用G C-M S分析T.r u b r u m甾醇型(s t e r o l s p a t t e r n)㊂气相色谱条件:V a r i a nV F-5m s毛细管色谱柱(20mˑ0.25m mˑ0.25μm);进样口温度300ħ,载气为氦气(99.99%),流速为1.3m L㊃m i n-1,进样量1μL,升温程序:初始柱温150ħ保持3m i n,以15ħ㊃m i n-1升温到250ħ,保持20m i n,接着以4ħ㊃m i n-1升温到310ħ,保持5m i n㊂质谱条件:电子轰击离子源(E I),电子能量70e V,气质接口部分温度为270ħ,离子源温度200ħ,传输线温度270ħ,采用S c a n模式,扫描范围:m/z50~600㊂1.2.8实时荧光R T-P C R分析以S D B配制T.r u b r u m孢子悬液(1.5ˑ104C F U㊃m L-1),加入α-蒎烯至1/2㊁1和2M I C为药物测试组,同时设置阴性对照(无药物处理)组,在28ħ,湿度65%下培养5d后,离心(3000r㊃m i n-1)5m i n收集孢子;随后,按照R N A提取试剂盒(武汉塞维尔生物科技有限公司)说明书提取T.r u b r u m总R N A,并应用紫外分光光度计测定R N A纯度和含量;按照试剂盒(北京索莱宝生物科技有限公司)说明书将R N A逆转录为c D N A进行实时荧光定量P C R㊂q R T-P C R 的基因引物序列见表1㊂表1用于q R T-P C R的基因引物序列T a b l e1G e n e p r i m e r s e q u e n c e s f o r q R T-P C R目标T a r g e t 序列(5'ң3')S e q u e n c e扩增大小/b pA m p l i f i c a t i o n s i z e参考文献R e f e r e n c e18S F:C G C T G G C T T C T T A G A G G G A C T A TR:T G C C T C A A A C T T C C A T C G A C T T 51[24]E R G3F:G C T C G G T G C T T C G C T A C T A TR:A C C T G G T T C T T G A G G A A G C G1021.3统计分析数据以 xʃs 和 百分数 表示㊂使用S P S S22.0统计软件进行卡方检验㊁最小显著差异分析㊁D u n c a n检验和独立t检验分析,P<0.05表示具有统计显著性,P<0.01表示具有统计极显著性㊂2结果2.1侧柏叶抗T.r u b r u m最佳提取部位筛选通过微量肉汤稀释法检测出侧柏叶各提取部位对T.r u b r u m的M I C分别为石油醚段M I C为125μg㊃m L-1,乙酸乙酯段为250μg㊃m L-1,正丁醇与二氯甲烷段均无抑菌活性;因此对抗T. r u b r u m活性最强的侧柏叶石油醚段进行G C-M S 分析(图1,表2),选取其中3种含量最高单体(α-蒎烯㊁β-石竹烯和3-蒈烯),随后检测3种单体对T. r u b r u m的M I C(表3),发现α-蒎烯的M I C低于其他单体,因此,α-蒎烯将作为后续研究对象㊂2.2α-蒎烯对T.r u b r u m孢子萌发率的影响将1和2M I C浓度的α-蒎烯与T.r u b r u m孢子共同培养24h,与阴性对照组相比,测试药物组T.r u b r u m孢子萌发率均极显著降低(P<0.01) (图2),证明α-蒎烯具有抑制T.r u b r u m孢子萌发的能力,并且该作用呈现剂量依赖性㊂2.3α-蒎烯对T.r u b r u m菌丝形态和孢子超微结构的影响扫描电镜结果显示,对照组菌丝体饱满,表面光滑㊁厚度均匀(图3A);而药物测试组菌丝体萎缩,表面粗糙㊁褶皱㊁厚度不一㊁扭曲干瘪(图3B㊁C)㊂3961畜 牧 兽 医 学 报54卷图1 侧柏叶石油醚段活性成分总离子流图F i g .1 T o t a l i o n c h r o m a t o g r a mo f C a c u m e nP l a t y c l a d i p e t r o l e u me t h e r s e g m e n t e x t r a c t 表2 侧柏叶石油醚段活性成分G C -M S 分析T a b l e 2G C -M S a n a l y s i s o f c o m p o n e n t s i n C a c u m e nP l a t y c l a d i p e t r o l e u me t h e r s e g m e n t e x t r a c t 编号N u m b e r 时间/m i n T i m e 化合物名称C o m p o u n dn a m e 分子式M o l e c u l a r f o r m u l a 相对含量/%R e l a t i v e c o n t e n t 16.628环烯C yc l o e n e C 10H 150.5227.161α-蒎烯α-p i n e n e C 10H 1618.3137.475B i c y c l o [2.2.1]h e p t a n e ,7,7-d i m e t h y l -2-m e t h yl e n e -C 10H 162.1647.9853-亚甲基-6-(1-甲基乙基)环己烯3-M e t h y l e n e -6-(1-m e t h y l e t h y l )c yc l o h e x e n e C 10H 162.7858.208β-蒎烯β-p i n e n e C 10H 161.0368.488B i c y c l o [3.1.0]h e x -2-e n e ,4-m e t h y l -1-(1-m e t h y l e t h yl )-C 10H 161.9278.7153-环己二烯3-C yc l o h e x ad ie n e C 10H 161.4288.881(1S )-(+)-3-蒈烯(1S )-(+)-3-C a r e n eC 10H 168.6399.208邻异丙基甲苯1-i s o p r o p y l -2-m e t h yl b e n z e n e C 10H 140.68109.701罗勒烯O c i m e n eC 10H 160.30119.871萜品烯g -T e r pi n e n e C 10H 160.501210.428B i c y c l o [4.1.0]h e p t -2-e n e ,4,7,7-t r i m e t h yl -C 10H 162.121313.625左旋乙酸冰片酯l -b o r n y l a c e t a t e C 12H 20O 20.721414.511乙酸松油酯T e r p i n e o l a c e t a t e C 12H 20O 22.611514.908α-毕澄匣油烯α-c u b e b e n e C 15H 240.431615.11α-榄香烯α-e l e m e n eC 15H 241.841715.468B -柏木烯(+)-b e t a -c e d r e n e C 15H 244.321815.536β-石竹烯β-c a r y o p h y l l e n e C 15H 2411.391915.691罗汉柏烯(-)-t h u j o ps e n e C 15H 245.292015.981α-石竹烯α-c a r y o p h yl l e n e C 15H 247.792116.389N a p h t h a l e n e ,1,2,3,4,4a ,5,6,8a -o c t a h yd r o -4a ,8-d i me t h y l -2-(1-m e t h y l e t h e n yl )-,(2R ,4a R ,8a R )-C 15H 243.792216.531(+)-α-长叶蒎烯(+)-α-l o n g-l e a f p i n e n e C 15H 241.832316.626(+)-花侧柏烯(+)-t h u je n e C 15H 220.26(转下页 C a r r i e df o r w a r d)49614期张 潇等:侧柏叶抗红色毛癣菌主要活性成分α-蒎烯以E R G -3为靶点发挥抗真菌作用(续表2 C o n t i n u e d)编号N u m b e r 时间/m i n T i m e 化合物名称C o m po u n dn a m e 分子式M o l e c u l a r f o r m u l a 相对含量/%R e l a t i v e c o n t e n t 2416.701N a p h t h a l e n e ,1,2,4a ,5,6,8a -h e x a h yd r o -4,7-d i me t h y l -1-(1-m e t h y l e t h y l )-C 15H 241.182516.804d -杜松烯d -c a d i n e n eC 15H 241.032617.019N a p h t h a l e n e ,1,2,4a ,5,6,8a -h e x a h yd r o -4,7-d i me t h y l -1-(1-m e t h y l e t h yl )-,(1S ,4a R ,8a R )-C 15H 240.322717.561氧化石竹烯C a r y o p h yl l e n e o x i d e C 15H 24O 0.942817.835雪松醇C e d a r i t o l C 15H 26O6.152921.382氧杂环十七烷-2-酮O x h e pt a d e c a n -2-o n e C 16H 30O 21.84表3 侧柏叶石油醚段3种主要单体对T .r u b r u m 最低抑菌浓度T a b l e 3 M I C s o f 3m a i nm o n o m e r s f r o m C a c u m e nP l a t y c l a d i p e t r o l e u me t h e r f r a c t i o na g a i n s t T .r u b r u m 单体名称M o n o m e r n a m e药物浓度/(μg ㊃m L -1)D r u g c o n c e n t r a t i o n 12864321684210.50.250.125α-蒎烯α-pi n e n e ---+++++++++++++β-石竹烯β-c a r y o p h y l l e n e --++++++++++++++++3-蒈烯3-c a r e n e --+++++++++++++++++-.无生长;+.有生长-.N o g r o w t h ;+.G r o w th不同小写或大写字母表示显著或极显著差异(P <0.05或P <0.01)D i f f e r e n t l o w e r c a s e o r u p p e r c a s e l e t t e r s i n d i c a t e s i g n i f i c a n t o r h i g h l y s i gn i f i c a n t d i f f e r e n c e s (P <0.05o r P <0.01)图2 药物处理24h 的T .r u b r u m 孢子萌发率F i g .2 T h e s po r e g e r m i n a t i o n r a t e s o f T .r u b r u m a t 24h p o s t -t r e a t m e n t 5961畜 牧 兽 医 学 报54卷透射电镜结果显示,对照组孢子细胞壁,细胞膜完整,内部结构清晰,可见线粒体和液泡(图4A )㊂药物测试组孢子细胞膜破损严重,菌体呈现解体趋势,内部结构发生明显变化,液泡增大,细胞结构无法清晰辨明,大量内容物流出(图4B ㊁C )㊂A.空白对照;B .1M I Cα-蒎烯;C .1M I C 酮康唑㊂a .粗糙菌丝体;b .菌丝体出现凹痕;c .扭曲干瘪的菌丝体A.C o n t r o l ;B .1M I Cα-p i n e n e ;C .1M I Ck e t o c o n a z o l e .a .R o u g hm y c e l i u m ;b .M y c e l i u ma p pe a r s p i t t e d ;c .T w i s t e d s h r i v -e l e dm yc e l i u m 图3 药物处理T .r u b r u m 菌丝5d 后扫描电镜图F i g .3 S E Mi m a ge s of T .r u b r u m m y c e l i u m s t r e a t e dw i t hd r ug f o r 5d a ys A.空白对照;B .1M I Cα-蒎烯;C .1M I C 酮康唑㊂a .细胞膜;b .细胞壁;c .液泡;d .线粒体;e .细胞质;f .细胞膜受损;g .细胞内容物;h .肿胀的液泡A.C o n t r o l ;B .1M I Cα-pi n e n e ;C .2M I Ck e t o c o n a z o l e .a .C e l lm e m b r a n e ;b .C e l lw a l l ;c .V a c u o l e s ;d .M i t o c h o n d r i a ;e .C y t o p l a s m ;f .D a m a g e d c e l lm e m b r a n e ;g.C e l l u l a r c o n t e n t s ;h .S w o l l e nv a c u o l e s 图4 药物处理T .r u b r u m 孢子5d 后透射电镜图F i g .4 T E Mi m a g e s o f T .r u b r u m s p o r e s t r e a t e dw i t hd r u g f o r 5d a ys 2.4 α-蒎烯对T .r u b r u m 细胞内容物流出率的影响将1和2M I C 的α-蒎烯与T .r u b r u m 共同培养8和24h,经紫外分光光度计检测,结果如图5所示㊂发现各浓度α-蒎烯均能极显著增强T .r u b r u m 细胞膜渗透性(P <0.01),促进细胞内容物流出,并且该作用与α-蒎烯浓度和处理时间成正相关性㊂2.5 α-蒎烯对T .r u b r u m 细胞膜完整性的影响采用流式细胞仪检测摄入P I 的T .r u b r u m 孢子数量(图6,表4),发现药物测试组摄入P I 的T .r u b r u m 孢子明显多于阴性对照组,且随着时间的延长,T .r u b r u m 细胞孢子摄入P I 的比例在逐渐增大,这表明α-蒎烯能够破坏T .r u b r u m 细胞膜的完整性㊂69614期张 潇等:侧柏叶抗红色毛癣菌主要活性成分α-蒎烯以E R G -3为靶点发挥抗真菌作用图5 药物处理8和24h 的T .r u b r u m 细胞内容物流出率F i g.5 T h e e f f l u x r a t e s o f T .r u b r u m c e l l s a t 8a n d 24h p o s t -t r e a t m e nt A ㊁D.空白对照;B ㊁E .1M I Cα-蒎烯;C ㊁F .1M I C 酮康唑㊂左上象限细胞群代表膜受损的细胞,左下象限细胞群代表膜结构完整的细胞A ,D.C o n t r o l ;B ,E .1M I Cα-p i n e n e ;C ,F .1M I Ck e t o c o n a z o l e .C e l l s i n t h eu p p e r l e f t q u a d r a n t r e p r e s e n t c e l l sw i t hd a m -a ge dm e m b r a n e s ,a n d c e l l s i n t h e l o w e r l ef t q u a d r a n t i n d i c a t e c e l l sw i t h i n t a c tm e m b r a n e s t r u c t u r e s 图6 药物处理8(A ~C )和24(D ~F )h 的T .r u b r u m 孢子P I 荧光值F i g .6 P I f l u o r e s c e n c e v a l u e s o f T .r u b r u m s po r e s a t 8(A -C )a n d 24(D -F )h p o s t -t r e a t m e n t 7961畜 牧 兽 医 学 报54卷表4 药物处理8和24h 的T .r u b r u m 膜破损孢子占比T a b l e 4 T h e p e r c e n t a g e s o f T .r u b r u m m e m b r a n e d a m a g e d s p o r e s a t 8a n d 24h p o s t -t r e a t m e n t %处理时间/hT r e a t t i m e 空白对照B l a n kc o n t r o l1M I Cα-蒎烯α-p i n e n eM I C 1M I C 酮康唑K e t o c o n a z o l eM I C81.37ʃ0.33A a1.69ʃ0.38A b 12.68ʃ1.95B c242.62ʃ0.48A a 60.79ʃ2.89B b66.85ʃ2.74B c 数值以 平均值ʃ标准差 表示,同一行中不同小写或大写字母表示显著或极显著差异(P <0.05或P <0.01)V a l u e s a r e e x p r e s s e da sm e a n ʃs t a n d a r dd e v i a t i o n ,r o w sw i t hd i f f e r e n t l o w e r c a s eo ru p p e r c a s e l e t t e r s i n d i c a t es i gn i f i c a n to r h i g h l y s i gn i f i c a n t d i f f e r e n c e s (P <0.05o r P <0.01)2.6 α-蒎烯对T .r u b r u m 麦角甾醇和24(28)脱氢麦角甾醇定性分析进行了T .r u b r u m 菌丝体麦角甾醇和24(28)脱氢麦角甾醇含量定性检测(图7),结果表明T .r u b r u m 麦角甾醇和24(28)脱氢麦角甾醇含量为阴性对照组>1M I Cα-蒎烯组>2M I Cα-蒎烯组,说明α-蒎烯能够抑制T .r u b r u m 麦角甾醇和24(28)脱氢麦角甾醇的合成,并且该作用呈现剂量依赖性㊂A .空白组;B .1M I Cα-蒎烯;C .2M I Cα-蒎烯;D .1M I C 酮康唑A.B l a n kc o n t r o l ;B .1M I Cα-p i n e n e ;C .2M I Cα-pi n e n e ;D.1M I Ck e t o c o n a z o l e图7 药物处理5d 的T .r u b r u m 麦角甾醇和24(28)脱氢麦角甾醇含量变化趋势F i g .7 C h a n g e si ne r g o s t e r o la n d24(28)d e h y d r o e r go s t e r o l c o n t e n t o f T .r u b r u m a t 5d p o s t -t r e a t m e n t2.7 α-蒎烯对T .r u b r u m 甾醇型分析使用G C -M S 分析处理5d 后不同处理组T .r u b r u m 的甾醇型气相色谱图,共鉴定出15个甾醇(图8和表5),其中,空白组检出12个,1M I Cα-蒎烯组15个,1M I C 酮康唑组10个㊂在T .r u b r u m麦角甾醇合成通路中,E R G 3蛋白酶负责将表甾醇转换为5-脱氢表甾醇[25],结合表5,作者发现1M I Cα-蒎烯组相较于空白组,5-脱氢表甾醇含量下降但表甾醇的含量上升,这是因为α-蒎烯能够抑制E R G 3(s t e r o lC -5d e s a t u r a s e )的表达,从而阻断表甾醇向5-脱氢表甾醇的转换,同时,只有在1M I Cα-蒎烯组中鉴定出麦角甾烷-7,24-二烯-3β-醇和胆甾烷-7,24-二烯-3β-醇,其中,麦角甾烷-7,24-二烯-3β-醇是E R G 3被抑制时的标志甾醇[23]㊂2.8 α-蒎烯对T .r u b r u mE R G 3表达的影响根据麦角甾醇质谱分析,作者推测α-蒎烯可能抑制了E R G 3的表达,为了进一步证实这一猜测,采用q R T -P C R 进行检测,结果显示,药物测试组E R G 3酶m R N A 表达水平低于对照组(P <0.01,图9),并且该作用呈现剂量依赖性㊂3 讨 论T .r u b r u m 是引起皮肤癣的主要病原体,症状呈瘙痒㊁皮肤损伤和食欲减退,而治疗周期长㊁制剂低效和耐药性等问题,导致该病治疗困难[26],严重危害动物福利和畜牧生产;另外,传统化学抗真菌药物存在种类有限㊁副作用和耐药性等局限,因此,极需开发抗菌靶点新颖㊁效果确切的新型抗真菌药㊂选定治疗皮肤癣效果确切的中药民族药,应用现代研究手段确定其中抗T .r u b r u m 活性物质,是寻找疗效好㊁抗真菌谱广㊁毒副作用低和不易致耐药的新型抗真菌药的重要方法[11]㊂中草药活性单体是新药研发㊁药品制备的重要来源,在创新药物开发中发挥着重要的作用,通过G C -M S 发现侧柏叶石油醚段浸膏中含量最高的3种89614期张潇等:侧柏叶抗红色毛癣菌主要活性成分α-蒎烯以E R G-3为靶点发挥抗真菌作用A.空白对照;B.1M I Cα-蒎烯;C.1M I C酮康唑㊂1.角鲨烯;2.胆甾烷(内标);3.角鲨烯环氧化物;4.胆甾醇(内标);5.酵母甾醇;6.麦角甾醇;7.脱氢麦角甾醇;8.粪甾醇;9.5-脱氢表甾醇;10.表甾醇;11.羊毛甾醇;12.4-甲基雌甾醇;13.4,4-二甲基胆甾烷-8,24-二烯-3β-醇(T-MA S);14.4,4-二甲基胆甾烷-8,14,24-三烯-3β-醇(F F-MA S);15.麦角甾烷-7,24-二烯-3β-醇;16.胆甾烷-7,24-二烯-3β-醇A.B l a n kc o n t r o l;B.1M I Cα-p i n e n e;C.1M I CK e t o c o n a z o l e.1.S q u a l e n e;2.C h o l e s t a n e(i n t e r n a l s t a n d a r d);3.S q u a l e n e e p o x i d e;4.C h o l e s t e r o l(i n t e r n a l s t a n d a r d);5.Z y m o s t e r o l;6.E r g o s t e r o l;7.D e h y d r o e r g o s t e r o l;8.F e c o s t e r o l;9.5-D e-h y d r o e p i s t e r o l;10.E p i s t e r o l;11.L a n o s t e r o l;12.4-M e t h y l f e c o s t e r o l;13.4,4-D i m e t h y l c h o l e s t a-8,24-d i e n-3β-o l(T-M A S);14.4,4-D i m e t h y l c h o l e s t a-8,14,24-t r i e n-3β-o l(F F-M A S);15.E r g o s t a-7,22-d i e n-3β-o l;16.C h o l e s t a-7,24-d i e n-3β-o l图8药物处理5d的T.r u b r u m甾醇谱的气相色谱图F i g.8G C-M S o f T.r u b r u m s t e r o l s p e c t r u ma t5d p o s t-t r e a t m e n t活性单体分别为α-蒎烯㊁β-石竹烯和3-蒈烯,并发现α-蒎烯抗T.r u b r u m活性最强,M I C为32μg㊃m L-1,与C a v a l e i r o等[27]和F a h e d等[28]研究结果相似,随后,作者使用孢子萌发试验进一步验证α-蒎烯的抗T. r u b r u m活性,发现其1M I C和2M I C均能显著或极显著抑制孢子萌发,表明α-蒎烯是侧柏叶中主要的抗T.r u b r u m活性单体㊂为了初步探索α-蒎烯抗T.r u b r u m潜在靶点位置,作者采用了扫描电镜和透射电镜观察技术,扫描电镜观察到药物测试组T.r u b r u m菌丝体萎缩㊁表面粗糙㊁扭曲干瘪,并伴有多处凹陷;透射电镜结果显示,细胞膜发生严重破损㊁细胞内部结构无法清晰辨明和细胞膜内容物明显流出,这可能因为细胞膜内麦角甾醇合成受阻导致的细胞膜合成受阻[29];胞内液泡增大,可能是菌体9961畜 牧 兽 医 学 报54卷表5 药物处理5d 的T .r u b r u m 麦角甾醇合成途径的甾醇成分变化T a b l e 5 S t e r o l s p a t t e r n c h a n g e s o f e r g o s t e r o l b i o s y n t h e s i s p a t h w a y i n T .r u b r u m s p o r e s a t 5d p o s t -t r e a t m e n t 编号N u m b e r甾醇名称S t e r o l n a m e空白对照C o n t r o l α-蒎烯α-p i n e n e 酮康唑K e t o c o n a z o l e1角鲨烯S q u a l e n e 11.231.122胆甾烷(内标)C h o l e s t a n e10.980.993角鲨烯环氧化物S q u a l e n e e po x i d e 11.010.664胆甾醇(内标)C h o l e s t e r o l 10.970.995酵母甾醇Z y m o s t e r o l 10.680.616麦角甾醇E r g o s t e r o l 10.500.547脱氢麦角甾醇D e h y d r o e r g o s t e r o l 10.260.288粪甾醇F e c o s t e r o l 10.430.5895-脱氢表甾醇5-D e h y d r o e pi s t e r o l 10.49-10表甾醇E pi s t e r o l 11.29-11羊毛甾醇L a n o s t e r o l10.710.57124-甲基麦角甾醇4-M e t h yl f e c o s t e r o l 10.870.63134,4-二甲基胆甾烷-8,24-二烯-3β-醇(T -MA S )4,4-D i m e t h y l c h o l e s t a -8,24-d i e n -3β-o l 10.980.50144,4-二甲基胆甾烷-8,14,24-三烯-3β-醇(F F -MA S )4,4-D i m e t h y l c h o l e s t a -8,14,24-t r i e n -3β-o l 10.980.8215麦角甾烷-7,24-二烯-3β-醇E r g o s t a -7,22-d i e n -3β-o l -+-16胆甾烷-7,24-二烯-3β-醇C h o l e s t a -7,24-d i e n -3β-o l -+-结果显示为特定甾醇量与对照相比的平均倍数; - 未检测到; +检测到,量未知R e s u l t sa r e s h o w na s t h e a v e r a g e f o l d o f t h e s p e c i f i c s t e r o l a m o u n t c o m pa r e d t o t h e c o n t r o l ; - w a s n o t d e t e c t e d . + d e t e c -t e d ,t h e a m o u n t i su n k n o wn不同小写或大写字母表示显著或极显著差异(P <0.05或P <0.01)D i f f e r e n t l o w e r c a s eo ru p p e r c a s el e t t e r si n d i c a t es i gn i f i c a n t o r h i g h l y s i gn i f i c a n t d i f f e r e n c e s (P <0.05o r P <0.01)图9 α-蒎烯对T .r u b r u mE R G 3相对表达量F i g .9 R e l a t i v e e x p r e s s i o no f α-pi n e n e t o T .r u b r u mE R G 3的一种解毒反应,即将药物收集于液泡内,隔离于其他细胞器[30],这些现象表明,α-蒎烯抗T .r u b r u m的靶点可能存在于细胞膜,并且可能位于麦角甾醇合成通路㊂为了验证α-蒎烯抗T .r u b r u m 的靶点是否位于细胞膜和麦角甾醇通路,作者开展了细胞内容物流出率测定㊁流式细胞和麦角甾醇定性分析试验,发现随着α-蒎烯浓度的提升,T .r u b r u m 细胞膜发生明显损伤和内容物流出㊁通透性极显著增加(P <0.01)和24h 内细胞膜中麦角甾醇和24(28)脱氢麦角甾醇含量显著下降(P <0.05),表明α-蒎烯的作用靶点位于麦角甾醇合成路径㊂为了明确靶点,作者应用G C -M S 技术分析α-蒎烯对T .r u b r u m 甾醇型的影响,发现甾醇型中E R G 3抑制相关的标志物麦角甾烷-7,24-二烯-3β-醇 色谱峰出现,这可能因为E R G 3活性降低㊁含量降低,或者E R G 3表达量降低;由于麦角甾醇合成通路的中间体结构异常相似,且E R G 3与内质网膜紧密结合,导致蛋白分离困难㊁分离后不稳定,导致无法直接测定酶活071Copyright ©博看网. All Rights Reserved.4期张潇等:侧柏叶抗红色毛癣菌主要活性成分α-蒎烯以E R G-3为靶点发挥抗真菌作用性[31-32],并且尚无商品化抗体,酶表达量无法通过试验获得,因此,仅对α-蒎烯是否影响E R G3表达量进行了q R T-P C R分析,发现E R G3基因的表达被极显著抑制(P<0.01),这一结果与甾醇型结果相符,另外,M a r t i n s等[33]㊁H i r a y a m a等[34]和O u y-a n g等[35]有相似报道,即E R G3是多种霉菌和白色念珠菌的毒力因子或必须基因,常作为重要新药研发靶点,并且,E R G3不同于当前临床抗真菌药物的主要靶点,即E R G11㊁E R G1和E R G2[36],提示α-蒎烯的抗T.r u b r u m靶点是新发现㊂4结论本研究证实α-蒎烯是侧柏叶中抗T.r u b r u m 的主要活性成分,其能够通过降低麦角甾醇合成路径相关基因E R G3表达,引起T.r u b r u m细胞膜破坏,从而发挥抗T.r u b r u m作用,但其是否对E R G3量或活性产生影响,仍有待进一步研究㊂参考文献(R e f e r e n c e s):[1] T A R T O R Y H,E L-N E S HWY W M,M E RWA D AM A,e t a l.R i n g w o r m i n c a l v e s:r i s k f a c t o r s,i m p r o v e d m o l e c u l a r d i a g n o s i s,a n d t h e r a p e u t i ce f f i c a c y o fa n A l o ev e r a g e le x t r a c t[J].B M C V e tR e s,2020,16(1):421.[2] L ID J,Z H O U Y F,L I U JB,e ta l.P r e v a l e n c ei n v e s t i g a t i o no fd e r m a t o p h y t e s i nr a b b i t s i n Q i n g d a or e g i o n,C h i n a[J].JA n i m V e tA d v,2012,11(7):883-885.[3] G U O Y N,G ES,L U O H F,e ta l.O c c u r r e n c eo fT r i c h o p h y t o n v e r r u c o s u m i n c a t t l e i n t h eN i n g x i aH u iA u t o n o m o u s r e g i o n,C h i n a[J].B M CV e tR e s,2020,16(1):187.[4] MO R I E L L O K A,C O Y N E R K,P A T E R S O N S,e ta l.D i a g n o s i sa n dt r e a t m e n to fd e r m a t o p h y t o s i si nd o g sa n dc a t s.c l i n i c a lc o n se n s u s g u i d e l i n e so ft h ew o r l da s s o c i a t i o n f o r v e t e r i n a r y d e r m a t o l o g y[J].V e tD e r m a t o l,2017,28(3):266-e68.[5] MO N O D M,F E U E R MA N N M,S A L AM I N K,e ta l.T r i c h o p h y t o n r ub r u m a z o l e r e s i s t a nc em ed i a te d b yan e w A B Ct r a n s p o r t e r,T r u M D R3[J].A n t i m i c r o bA g e n t sC h e m o t h e r,2019,63(11):e00863-19.[6]李代军,周玉法,刘敬博,等.微卫星引物P C R快速鉴定兔皮肤病原真菌方法的建立及应用[J].畜牧兽医学报,2012,43(5):779-784.L IDJ,Z H O U Y F,L I U JB,e ta l.D e v e l o p m e n ta n d a p p l i c a t i o n o f m i c r o s a t e l l i t e-p r i m e r e d P C R f o rr a p i d l y i d e n t i f y i n g d e r m a t o p h y t e sf r o m r a b b i t s[J].A c t a V e t e r i n a r i a e t Z o o t e c h n i c a S i n i c a,2012,43(5):779-784.(i nC h i n e s e)[7] A G N E T T I F,R I G H I C,S C O C C I A E,e t a l.T r i c h o p h y t o n v e r r u c o s u m i n f e c t i o n i nc a t t l e f a r m so fU m b r i a(C e n t r a l I t a l y)a n dt r a n s m i s s i o nt oh u m a n s[J].M y c o s e s,2014,57(7):400-405.[8]侯志军,张智杰,刘伟石,等.毛皮动物饲养场饲养员感染貉源真菌病一例[J].黑龙江畜牧兽医,2010(20):61.H O U Z J,Z HA N GZ J,L I U WS,e t a l.T h e c a s e o fa k e e p e ri n f u r a n i m a lb r e e d i n g f a r m i n f ec t w i t hr a c c o o n d o g d e r m a t o p h y t e s[J].H e i l o n g j i a n gA n i m a l S c i e n c e a n dV e t e r i n a r y M e d i c i n e,2010(20):61.(i nC h i n e s e)[9]夏修蛟,刘泽虎,沈宏,等.64组家庭人畜共患皮肤癣菌病分析[J].中华皮肤科杂志,2015,48(3):154-157.X I A XJ,L I U Z H,S H E N H,e ta l.A n a l y s i so fz o o n o t i cd e r m a t o p h y t o s e si n64f a m i l y-b a s e d g r o u p s[J].C h i n e s e J o u r n a l o f D e r m a t o l o g y,2015,48(3):154-157.(i nC h i n e s e)[10] A T A N A S O V A G,Z O T C H E VSB,D I R S C H V M,e ta l.N a t u r a l p r o d u c t si nd r u g d i s c o v e r y:a d v a n c e sa n do p p o r t u n i t i e s[J].N a tR e vD r u g D i s c o v,2021,20(3):200-216.[11] L O P E S A I,T A V A R I A F K,P I N T A D O M E.C o n v e n t i o n a l a n d n a t u r a l c o m p o u n d s f o r t h et r e a t m e n t o f d e r m a t o p h y t o s i s[J].M e dM y c o l,2020,58(6):707-720.[12] T R I F A N A,B O S TǍN A R U AC,L U C ASV,e t a l.H o n o k i o l a n d m a g n o l o l:i n s i g h t s i n t o t h e i ra n t i d e r m a t o p h y t i c e f f e c t s[J].P l a n t s(B a s e l),2021,10(11):2522.[13] L U O N X,J I N L,Y A N G C Q,e ta l.A n t i f u n g a la c t i v i t y a n d p o t e n t i a l m e c h a n i s m o f m a g n o f l o r i n ea g a i n s t T r i c h o p h y t o n r ub r u m[J].J A n t i b i o t(T o k y o),2021,74(3):206-214.[14] L I ZJ,A B U L A A,A B U L I Z IA,e t a l.E l l a g i ca c i di n h i b i t s T r i c h o p h y t o nr u b r u m g r o w t h v i a a f f e c t i n ge r g o s t e r o lb i o s y n t h e s i sa n da p o p t o t i ci n d u c t i o n[J].E v i d B a s e d C o m p l e m e n t A l t e r n a t M e d,2020,2020:7305818.[15]陆科闵,王福荣.苗族医学[M].贵阳:贵州科技出版社,2006.L U K M,WA N G F R.M i a o m e d i c i n e[M].1071Copyright©博看网. 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(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201911377643.7(22)申请日 2019.12.27(71)申请人 温海地址 200003 上海市黄浦区凤阳路415号申请人 杨连娟　谭静文(72)发明人 温海　杨连娟　谭静文　(74)专利代理机构 北京路浩知识产权代理有限公司 11002代理人 陈征(51)Int.Cl.A61K 31/785(2006.01)A61P 31/10(2006.01)A61P 17/00(2006.01)A61L 31/10(2006.01)A61L 31/16(2006.01)(54)发明名称聚六亚甲基双胍在抑制、杀灭红色毛癣菌、须癣毛癣菌、犬小孢子菌及白念珠菌中的应用(57)摘要本发明涉及微生物技术领域，具体公开了聚六亚甲基双胍在抑制、杀灭红色毛癣菌、须癣毛癣菌、犬小孢子菌及白念珠菌中的应用。

本发明提供了聚六亚甲基双胍在抑制和/或杀灭红色毛癣菌中的应用、聚六亚甲基双胍在抑制和/或杀灭须癣毛癣菌中的应用、聚六亚甲基双胍在抑制和/或杀灭犬小孢子菌中的应用、聚六亚甲基双胍在抑制和/或杀灭白念珠菌中的应用。

本发明扩大了聚六亚基双胍的应用范围，并为制备由上述真菌引起的疾病的药物、抗真菌医疗器械或抗真菌医用材料提供了新思路。

权利要求书1页 说明书10页 附图1页CN 110898075 A 2020.03.24C N 110898075A1.聚六亚甲基双胍在抑制和/或杀灭红色毛癣菌(Trichophyton rubrum)中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，当将所述聚六亚甲基双胍应用于红色毛癣菌(Trichophyton rubrum)的抑制时，所述聚六亚甲基双胍的浓度为1-4μg/ml；当将所述聚六亚甲基双胍应用于红色毛癣菌(Trichophyton rubrum)的杀灭时，所述聚六亚甲基双胍的浓度为2-8μg/ml。

脸上长红癣怎么办才好呢每个人的皮肤都是不一样的，但是很多人由于身体免疫力低下加之平时一些不良的生活习惯容易导致身体出现一些疾病，其中脸上长红癣就是比较常见的一种，有的时候甚至还会特别痒和脱皮的现象，这对自身形象影响是非常大的，有的时候总用手去抓容易形成伤疤，下面一起了解下脸上长红癣怎么办才好呢。

红癣是由棒状杆菌属的微细棒状杆菌引起的一种皮肤局限性浅表的感染，易发于皮肤摩擦部位。

皮肤主要损害为境界清楚、边缘不规则的斑片。

皮损颜色依据存在时间长短而不同，开始呈红色，随后变成褐色或棕红色，表面可伴有糠秕样鳞屑。

常见于大腿根与阴囊接触的腹股沟部、腋窝、臀缝、乳房下、第四五趾间等皱褶部位的皮肤。

病因红癣曾被认为是由放线菌引起，现已从红癣的鳞屑中分离出微细棒状杆菌，近来用电子显微镜已证实此种棒状杆菌是红癣的病原菌。

该菌属棒状杆菌属，是一种类白喉杆菌，革兰染色阳性，常寄生在正常人的鼻、咽、眼、外耳道及皮肤表面，当局部温暖潮湿或皮肤损伤时，该菌侵入角质层引起感染。

临床表现典型损害为境界清楚、边缘不规则状的斑片。

皮损颜色依据存在时间长短而不同，开始呈红色，随后变成褐色或棕红色，表面可伴有糠秕样鳞屑。

常见于大腿根与阴囊接触的腹股沟部、腋窝、臀缝、乳房下、第四五趾间等皱褶部位的皮肤。

一般没有自觉症状，在腹股沟部和肛门周围等易受摩擦部位可引起瘙痒及苔藓样变。

另外一种红癣多见于糖尿病及其他虚弱疾病的患者。

表现为泛发性红癣皮损为境界清楚的红褐色斑片，广泛分布于躯干和四肢。

病程长，瘙痒明显。

有研究认为糖尿病可能是发生此种红癣的促发因素。

脸上长红癣怎么办才好呢局部应用唑类抗真菌药膏有效，可用克霉唑或咪康唑等，疗程2周。

对于面积较大者可口服红霉素，每日4次，共用2周，效果显著。

也可外用硫磺水杨酸软膏、夫西地酸霜或口服四环素。

身体出现什么问题只要掌握好方法就能得到更好的缓解，上面就是对脸上长红癣怎么办才好呢的介绍，出现这样的问题时一定要及时到医院进行检查和治疗，另外切记不能盲目涂抹化妆品，一定要接到医院进行检查听取医生的意见。

毛霉菌感染的治疗方法毛霉菌感染，又称真菌感染，是由毛霉菌引起的一种真菌性疾病。

毛霉菌是一种常见的真菌，它可以在土壤、植物、动物和人体中找到。

毛霉菌感染可以影响皮肤、指甲、头发和内脏器官，给患者带来不同程度的痛苦和困扰。

针对毛霉菌感染，我们需要采取有效的治疗方法来控制病情，下面将介绍一些常见的治疗方法。

首先，对于皮肤、指甲和头发的毛霉菌感染，局部治疗是首选。

医生会根据病情的轻重选择外用抗真菌药物，比如克霉唑、特比萘芬等。

患处清洁干燥后，涂抹适量的药膏或药水，按照医嘱持续使用一段时间，通常可以见到症状逐渐缓解。

同时，患者要保持良好的个人卫生习惯，勤换洗衣物、被褥，避免潮湿环境的刺激。

其次，对于内脏器官的毛霉菌感染，需要采用口服抗真菌药物进行治疗。

口服抗真菌药物通常需要医生开具处方，患者在医生的指导下按时按量服用，严格遵循药物使用说明书上的用药指导。

在服药期间，患者应定期到医院复查，以便及时调整治疗方案，确保病情得到有效控制。

此外，对于一些顽固性的毛霉菌感染病例，可能需要采取手术治疗。

比如对于顽固性指甲毛霉菌感染，医生可能会建议患者接受指甲切除手术，以便更彻底地清除感染灶。

手术治疗需要在专业医疗机构进行，手术后患者需要严格遵循医嘱进行术后护理和康复。

总的来说，毛霉菌感染的治疗方法主要包括局部治疗、口服抗真菌药物治疗和必要时的手术治疗。

在接受治疗的同时，患者还应该注意个人卫生，避免接触潮湿环境，保持皮肤、指甲和头发的清洁干燥。

此外，患者在治疗期间应该注意饮食调理，保持充足的睡眠，增强体质，提高抵抗力，有利于病情的康复。

总之，针对毛霉菌感染，及时有效的治疗至关重要。

患者在发现症状后应尽早就医，接受专业医生的诊断和治疗方案，切忌盲目使用药物或延误治疗时机。

只有科学合理地进行治疗，才能更好地控制病情，减轻患者的痛苦，提高生活质量。

希望本文介绍的治疗方法能对患者有所帮助，祝愿患者早日康复！。

对红色毛癣菌的研究摘要：红色毛癣菌是毛癣菌属下的一个种。

红色毛癣菌是一种人源的皮癣菌，引起常见的皮肤浅部真菌病，如手癣、足癣、头癣等。

对红色毛癣菌的结构成分，对药物的敏感度等方面进行了综述，并探讨了抗红色毛癣菌的研究前景。

近二十年来，由皮肤癣菌及其他真菌引起的感染明显增多。

目前发现有四十余种皮肤癣菌主要有红色毛癣菌，须癣毛癣菌，犬小孢子菌等。

红色毛癣菌（Trichophyton rubrum）属于有丝分裂孢子真菌，ichangjiande亲人性治病性皮肤癣菌。

为世界性分布，也是我国最常见的一种皮肤癣菌。

一、红色毛癣菌的分布分别根据1986年1月1日至12月31日和1996年1月1日至12月31日在全国25各省、市、自治区41个代表点上，共分离培养出9096株及18085株致病真菌，从其分布情况及各大区排列次序可以看出：从1986及1996前后所分离出的致病真菌菌种中，都是以红色毛癣菌占首位，但其比率从1986年占45.4%到1996年则以下降至34.5%。

在此期间，以华东、西南、华北、东北分布最广。

二、红色毛癣菌的体外药物敏感性及测定方案的选取皮肤癣菌包括毛癣菌属、小孢子菌属及表皮癣菌属, 可引起患者体癣、股癣, 手癣、足癣, 头癣及甲癣等浅部真菌病。

很多抗真菌药物用来治疗皮肤癣菌的感染, 大多都有着明显的疗效。

但随着抗真菌药物的广泛应用、新的菌种的出现及患者个体情况的差异, 抗真菌药物的耐药问题也越来越严重, 对其敏感性的研究就越显得重要和必要。

目前对于皮肤癣菌这种生长相对缓慢的丝状真菌, 国际上还没有统一的、稳定的药敏试验方法标准。

经过笔者对参考文献的研究大致总结出一些经过实验探究得出的最佳实验方案及其对应的最佳抗菌药物的搭配。

1. 纸片扩散法对红色毛癣菌的体外药物敏感性研究的探讨纸片扩散法是用琼脂扩散的药敏方法, 其抗真菌成分设计在纸片[ 1][ 2] [ 3] 中, 曾用于细菌、酵母菌及霉菌体外药物敏取得满意的结果。