细胞悬浮培养在口蹄疫疫苗中的研究进展

口蹄疫疫苗研究进展口蹄疫疫苗的研究进展【综述】【摘要】口蹄疫是被列为A类疫病的家畜传染病之一，接种疫苗是防止该病流行的有效措施。

本文就口蹄疫灭活疫苗、基因工程亚单位疫苗、转基因植物可饲疫苗、合成肽疫苗、蛋白质载体疫苗、基因工程弱毒疫苗、活载体疫苗、核酸疫苗及空病毒衣壳蛋白疫苗的最新研究进展作一综述。

【关键词】 I=1蹄疫；疫苗Progress in Research on Foot--and．-M outh Disease VaccineCHEN Li—xin，JIN Yu—zhu，HU Rong—liang(Department of印idemiology，Institute of Military Veterinary Medicine，Academy ofMilitary Medicine，Changchun 130062，China)【Abstract】 Foot．and．mouth disease is one of the infectious disease class A in animals．Vaccination is an effective measure forprevention of epidemic of the disease． This paper reviewed the development in research on inactivated vaccine，recombinant subunitvaccine，edible transgenic plant vaccine，synthetic peptide vaccine，protein vector-based vaccine，recombinant attenuated vaccine，livevector-based vaccine，DNA vaccine and empty capsid protein vaccine against foot—and-mouth disease．【Key words】 Foot—and—mouth disease；Vaccine口蹄疫(Foot．and—mouth disease，FMD)是由口蹄疫病毒(Foot．and．mouth disease virus，FMDV)引起的偶蹄动物烈性接触性传染病，主要危害牛、羊、猪等，发病率极高，传播速度极快。

1200L反应器悬浮培养BHK21细胞生产口蹄疫病毒技术一、技术背景国内口蹄疫布控形势仍严峻，高效、安全的病毒性疫苗是防止口蹄疫情发生的最有效方法。

BHK21细胞是繁殖FMDV的理想宿主，国外普遍采用了2000－5000L 反应器悬浮培养BHK21细胞技术生产口蹄疫苗。

目前国内主要通过大规模转瓶培养BHK21细胞生产口蹄疫苗，仅一家单位已采用上千升反应器悬浮培养BHK21细胞生产口蹄疫疫苗。

转瓶培养BHK21细胞生产口蹄疫苗工艺，因为每个转瓶均是独立的细胞培养单元，每瓶的细胞质量、病毒产量和滴度都不同，导致疫苗批间差大，隐性污染引起高内毒素，副反应大等缺点。

反应器悬浮培养BHK21细胞生产口蹄疫苗工艺，不仅能提高BHK21细胞密度，自动监控细胞生长或病毒繁殖时的最适生化条件，提高病毒滴度，而且工艺规模放大相对容易，管道化操作最大可能避免了污染的发生，能显著提高口蹄疫疫苗的质量。

MMBS已成功开发了BHK21反应器悬浮培养基、120L-650L-1200L反应器悬浮BHK21细胞技术、1200L反应器悬浮培养BHK21细胞生产口蹄疫疫苗工艺等关键技术，为反应器生产口蹄疫疫苗的产业化奠定了扎实的技术基础。

二、工艺技术1200L反应器悬浮培养BHK21细胞生产口蹄疫病毒工艺：利用BHK21悬浮培养基从液氮中复苏已适应悬浮培养的BHK21细胞株，种子细胞经摇瓶、5L反应器、120L反应器和650L反应器等逐级放大培养，最后在1200L反应器中悬浮培养BHK21细胞至合适密度，接种口蹄疫病毒种毒，维持一定的溶氧、pH值、温度等工艺参数，适时收获一次性收获培养液,制备成苗。

图1表示了反应器悬浮培养BHK21细胞的照片，细胞密度可以达到3×106cells/ml左右以上。

图2表示了悬浮培养的BHK21细胞接种口蹄疫病毒14hr 后的BHK21细胞。

从反应器中收获上清的口蹄疫病毒抗原量（146S完整病毒粒子）高于转瓶培养工艺。

细胞连续流悬浮培养技术在口蹄疫疫苗生产中的应用研究发布时间：2021-12-22T02:27:28.372Z 来源：《中国科技人才》2021年第26期作者：辛俊宝[导读] 将用于口蹄疫疫苗生产的细胞批式悬浮培养技术进一步改进为连续流悬浮培养方式，可缩短细胞培养时间，提高病毒粒子有效含量，提高生产效率，所生产的口蹄疫疫苗质量都很稳定。

杨凌金海生物技术有限公司陕西杨凌 712100摘要：将用于口蹄疫疫苗生产的细胞批式悬浮培养技术进一步改进为连续流悬浮培养方式，可缩短细胞培养时间，提高病毒粒子有效含量，提高生产效率，所生产的口蹄疫疫苗质量都很稳定。

关键词：口蹄疫灭活疫苗；连续流细胞悬浮培养；质量稳定口蹄疫(Foot-and-Mouth Disease，FMD)是一种高传染性的病毒性疾病，主要感染偶蹄动物。

口蹄疫传染性强，畜群一旦感染，发病率有的高达100%，可造成巨额经济损失和社会政治负面影响，国际动物卫生组织（OIE）将该病列在法定上报的动物传染病之首，中国政府也将其排在一类动物传染病的首位。

对于口蹄疫的防控，绝大多数地区、国家仍采取以免疫灭活疫苗为主的防控措施，我国也是主要采取这一方式防控口蹄疫。

口蹄疫灭活疫苗是一种以细胞培养技术为载体制备口蹄疫病毒液，并将病毒液彻底灭活，获得口蹄疫抗原，抗原与适宜佐剂进行配制最终形成疫苗。

因此，制备口蹄疫病毒液的细胞及细胞培养技术是疫苗制备过程中的关键技术，该技术的先进与否直接关系到疫苗的质量，包括疫苗的安全性、有效性、稳定性等质量指标和生产效率。

传统细胞悬浮培养技术一般采用批式培养，即一个批次的细胞培养完毕后用于接种口蹄疫病毒，制成抗原后再重新培养一个批次，每个批次的培养时间一般在72h或更长时间，疫苗的生产效率低，培养的病毒液有效含量低。

本文研究的目的是对传统悬浮培养工艺进行改进，成为连续流加的培养方式，可使培养时间缩短至不足24h，而且能保证细胞各项质量指标不受影响，这样大大提高了生产效率。

细胞悬浮培养技术在兽用疫苗领域的应用发布时间：2021-07-06T03:05:52.323Z 来源：《中国科技人才》2021年第10期作者：刘艳昭刘洋谭源[导读] 对悬浮细胞进行分析，不同条件下生长的细胞的驯化可能不同于对病毒的敏感性，不同的克隆菌株对同一病毒表现出不同的敏感性。

因此，如何使用细胞系统大规模生产疫苗，必须有一个可繁殖病毒的适应性选择，适用于悬浮作物的特点有：高生物稳定性、耐腐蚀性强，产品生产周期短，产品表现效率高，满足大规模生产需求等。

哈药集团生物疫苗有限公司黑龙江哈尔滨 150069摘要：目前，生物反应堆的悬浮液技术已广泛用于海外动物疫苗的生产。

由于我国细胞悬浮技术起步晚，与其他国家的差距仍然存在，但是也取得了令人鼓舞的进展。

此外，对生物技术反应堆中的悬浮液技术进行深入研究，加强和发展悬浮细胞培养技术，有助于进一步完善与细胞悬浮液有关的生产。

关键词：动物细胞；悬浮培养；兽用疫苗动物细胞培养始于20世纪初，以青蛙凝固的淋巴细胞被冻结作为基础，在无菌条件下，试验管成功地发展了青蛙的胚胎神经组织，并观察了细胞生长过程。

随着细胞培养技术的发展，悬浮液培养技术被用于大规模发展疫苗，并广泛用于生产。

悬浮培养法是一种技术，在生物技术反应堆中有效培育动物细胞，用于生物产品生产。

细胞悬浮液培养由于其生产效率高、质量控制简便，被广泛用于研究和开发体外生长的细胞，更重要的是将细胞培养技术应用于生产动物疫苗。

一、悬浮培养技术的核心要素对悬浮细胞进行分析，不同条件下生长的细胞的驯化可能不同于对病毒的敏感性，不同的克隆菌株对同一病毒表现出不同的敏感性。

因此，如何使用细胞系统大规模生产疫苗，必须有一个可繁殖病毒的适应性选择，适用于悬浮作物的特点有：高生物稳定性、耐腐蚀性强，产品生产周期短，产品表现效率高，满足大规模生产需求等。

1、细胞培养的选择。

在细胞悬浮过程中，选择营养介质也是一个重要的环节。

一般来说，血清是动物细胞生长所需的营养素之一，然而，由于血清的复杂性和各批血清的不均匀性，生产受到了阻碍。

悬浮培养口蹄疫病毒灭活工艺的生产规模扩展与产能提升
冯泽泰;蒲小峰;梁军;张满义;齐晓;张志刚
【期刊名称】《现代畜牧科技》
【年(卷),期】2024()3
【摘要】随着口蹄疫对全球畜牧业的不断威胁,悬浮培养口蹄疫病毒灭活工艺的研究与发展愈发成为关注的焦点。

该文旨在系统性地探讨该工艺在生产规模扩展与产能提升方面的关键问题,以满足不断增长的口蹄疫疫苗需求。

深入分析原材料供应链、设备与工艺流程的优化以及质量控制等关键因素,重点关注新型悬浮培养技术、先进的灭活工艺和自动化生产等前沿技术的应用。

安全与法规合规被特别强调,以
确保疫苗生产的可靠性和安全性。

在经济层面,进行生产成本与经济效益的全面评估,为决策者提供科学依据。

最后,对当前面临的技术与市场挑战进行深刻分析,并提出未来发展的战略建议,旨在推动悬浮培养口蹄疫病毒灭活工艺的可持续发展,为口
蹄疫防控提供更为有效的工具和战略支持。

【总页数】3页(P116-118)
【作者】冯泽泰;蒲小峰;梁军;张满义;齐晓;张志刚
【作者单位】新疆方牧生物科技有限公司;动物生物医药兵团重点实验室
【正文语种】中文
【中图分类】S852.65
【相关文献】
1.悬浮培养生产口蹄疫病毒灭活工艺研究
2.悬浮培养生产口蹄疫病毒灭活工艺研究
3.GEM技术浓缩纯化O型口蹄疫病毒灭活抗原方法的建立
4.灭活的羊口疮病毒抑制口蹄疫病毒在BHK-21细胞中的复制
5.BHK-21悬浮细胞培养条件筛选及口蹄疫病毒悬浮培养工艺研究
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细胞悬浮培养研究进展「摘要」：细胞在培养液中呈悬浮状态生长与增殖的培养技术。

是一种通过振荡或转动装置使细胞始终处于分散悬浮于培养液内的培养方法。

非贴壁依赖性细胞的一种培养方式。

「关键词」：植物细胞的悬浮培养愈伤组织动物细胞悬浮培养展望「引言」：植物培养细胞中含有各种特殊的代谢产物，如生物碱、色素、甾体、萜等药用成分及香精等, 有的含量很高。

因此，利用植物细胞培养技术生产药物已成为当代生物技术的一个重要领域，特别是培养药用植物细胞直接生产天然药物的研究已成热点。

动物细胞培养在生物技术和生物医药研究中已得到了广泛的应用，通常动物细胞培养为病毒疫苗的生产提供培养基质同时也是多种生物药品生产不可缺少的工具包括单克隆抗体和基因治疗产品等。

（一）植物细胞悬浮培养植物细胞能合成许多具有重要价值的次级代谢产物,它们可作为农药、杀虫剂、调味剂及香精等。

这些产物传统上是从天然植物中直接提取,但天然植物生长周期较长,而且生长还受地域和环境因素的限制,所以采用直接提取具有较大的局限性。

化学合成法已用于多种产品的生产,但是有些物质不能通过化学法合成,或虽能合成,却比较困难。

植物细胞培养可大规模生产代谢产物,现已成为生产某些高价值产品的重要途径。

一般情况下,培养细胞中的次级代谢物含量明显高于原来植物细胞中的含量,而且这种方法还能避免地域和环境的影响。

19 0 2年,Haberlandt在营养液中成功地培育了单个植物细胞,尽管未能使其分裂生长但为植物细胞培养翻开了新的一页。

此后,许多科学家在植物细胞培养方面进行了研究,特别是近二十年里,植物细胞培养取得了飞速发展,悬浮培养日益完善,固定化培养逐步显示其优势,膜培养技术也已崭露头角。

以下介绍有关植物和动物细胞的悬浮培养情况。

1.悬浮培养特点植物细胞培养与微生物有许多相似的地方,但两者又存在着明显的不同,如植物细胞对剪切力敏感,培养要求小通气量,还需要C仇和光照等条件。

1.1对剪切力敏感:植物细胞的个体大,细胞壁僵脆且具有大的液泡,这些特性决定了其对剪切十分敏感。

口蹄疫（Foot-and-mouth dis-ease，FMD）是由口蹄疫病毒（Foot-and-mouth disease virus，FMDV）引起的偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病，以传播迅速、感染率高为其特点。

世界各国对本病的研究极为重视，世界动物卫生组织（Of-fice International Des Epizooties，OIE）将其列为A类传染病之首。

长期以来，FMD疫苗接种作为特异性免疫预防本病的有效手段之一，并在防治中被广泛应用，收到了显著的效果。

随着现代分子生物学技术的发展，FMD疫苗的研制不断深入，已从传统疫苗向新型疫苗方向发展。

1灭活疫苗1930年Frenkel H S等[1]首次成功地实现了FMDV的体外培养，满足了疫苗的规模化生产，并实现了对病毒量化研究。

1931年4月在柏林微生物学会首次召开了专题学术会议，确定了FMD疫苗研究的方向。

1962年英国的Mowat和Chapman等开始用乳仓鼠肾传代细胞(BHK-21)培养FMDV，生产灭活疫苗并迅速商业化。

目前应用的灭活剂，主要有乙酰乙烯亚胺(N-acetylethylenimine，AEI)，灭活曲线为线性。

主要作用于核酸，蛋白抗原性保持较好，但毒性较大。

后来改用二乙烯亚胺(Binary ethyleneimine，BEI)，其毒性较小，被广泛应用[2-5]。

FMD疫苗的免疫佐剂有氢氧化铝胶、司班、轻型矿物油。

由于疫苗佐剂的不断地更新，已由最初的水佐剂发展成现在的油佐剂，其他一些佐剂也相继问世并取得了一定的效果[6-8]。

尽管FMD灭活疫苗在FMD预防和控制上发挥了重要作用，但是灭活疫苗本身也存在许多安全隐患，国外学者先后用分子生物学方法证明欧洲暴发的FMD是因使用了灭活不彻底的抗原制备的疫苗所引起。

2活疫苗常规FMD活疫苗，是把原始强毒用生物学方法在生物媒介（如乳鼠、乳兔、鸡胚、细胞等）进行连续传代驯化。