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流式细胞仪检测小鼠外周血CD4+和CD8+流式细胞仪分别检测小鼠外周血CD4+和CD8+采血【实验】实验鼠16管/天*2，每个样本100ul+30ul肝素钠【空白】【CD4+】【CD8+】正常鼠，第一天实验取300ul+90ul肝素钠步骤1）30ul肝素钠溶液处理100ul全血2）取抗凝血100ul加入到标记好的流式管内，【实验】16管/天，每管加入2ul FITC Rat Anti-Mouse CD4（0.5mg/ml）和5ul PE Rat Anti-Mouse CD8a （0.2mg/ml）除样品管外，第一天需外加三管对照●【空白】（正常鼠全血100ul）●【CD4+】（正常鼠全血100ul+2ul FITC Rat Anti-Mouse CD4（0.5mg/ml））●【CD8+】（正常鼠全血100ul+5μL PE Rat Anti-Mouse CD8a（0.2mg/ml））4）避光放置30min5）加入红细胞裂解液2mL（此处用量至少68ml，两次破红136ml），轻轻吹打混匀，室温避光反应15min，以1500rpm离心5min，弃上清（观察破红效果，建议重复一次）6）加2mL PBS混匀后，1500rpm离心5min，弃上清7）细胞沉淀加入500ul PBS重悬后上机流式细胞仪分别检测小鼠外周血IFN-γ和IL-4（三色）采血【实验】实验鼠，16管/天*2，每个样本100ul+30ul肝素钠【空白】【CD4】【IFN-γ】【IL-4】正常鼠，第一天实验取400ul+120ul肝素钠步骤1.全血刺激培养100ul 全血+100ul 含刺激物的RPMI 1640完全培养液，于37℃、5% CO2 中孵育4h，计时器计时，手机计时每小时轻轻颠倒混匀一次2.裂解红细胞将上述液体转移到流式管内（200ul），加入红细胞裂解液2mL （此处用量至少80ml，两次160ml），轻轻吹打混匀，室温避光15min（观察破红效果，建议重复一次）1500rpm离心5min，留沉淀每管中加入2ml 染色缓冲液混合均匀，1500rpm，5min离心，留沉淀3.细胞表面抗原的染色（CD4）●【CD4】【实验】管各加FITC anti-mouse CD4（0.5mg/ml）2 ul+染色缓冲液 98 ul●【IFN-γ】【IL-4】【空白】加入100ul染色缓冲液室温避光15min后，每管中加入2ml染色缓冲液混合均匀，1500rpm，5min离心，弃上清，留沉淀4.固定和透化细胞每管中加入500ul 固定/透化剂（棕瓶），充分混匀，避光20min，1500rpm离心5min，弃上清，留沉淀加2ml 1×BD Perm/wash TM Buffer，避光10min，1500rpm，离心5min，弃上清，留沉淀5.胞内细胞因子的染色（IFN-γand IL-4）●【CD4】【空白】100ul Perm/wash TM Buffer●【IFN-γ】95ul Perm/wash TM Buffer + 5uL PE anti-mouse IFN-γ（0.2mg/ml）●【IL-4】95ul Perm/wash TM Buffer + 5uL PE Rat Anti-Mouse IL-4（0.2mg/ml）●【实验】5ul PE anti-mouse IFN-γ（0.2mg/ml）+ 5ul PE Rat Anti-Mouse IL-4（0.2mg/mL）+90ul Perm/wash TM Buffer30min避光孵育。
适用标准文案工作条件：1.1 电源要求 :220V (±10%)、50HZ（±10%）1.2 环境温度 :5-35℃1.3 在相应湿度10-80%的环镜下工作2.设施用途：细胞剖析和分选功能2.1 剖析功能：2.1.1 细胞周期测定，DNA 含量剖析， RNA 丈量与剖析2.1.2 细胞凋亡检测，2.1.3 蛋白质总量测定，2.1.4 生物活性的测定，2.1.5 细胞內钙离子流动试验，Ca2+浓度测定，细胞内pH 值丈量，2.1.6 细胞內 Oxidative Burst 代谢产物，细胞表面电荷检测。
2.1.7 抗原特异性免疫细胞的检测、分选和细胞治疗技术2.1.8 检测细胞因子，可溶性荧光蛋白等*2.2 细胞分选流式一体化分选功能，采纳捕捉管技术，分选速度300 个细胞 /秒，分选纯度98%3.技术规格：3.1 主机系统流式细胞仪主机系统：含15mw 488nm 氩离子蓝色激光器， 635nm 红色激光器， 4 个荧光探测器和 2 个散射光探测器光路 : 双激光立体空间激发方式实现四色荧光剖析：488nm 激光器激发的三色荧光,635nm 激光器激发第四色荧光 .采纳测向光路设计滤光片： 488nm 激光的荧光通道包含 530/30nm、 585/42nm、 670nm LP ；635nm 激光的荧光通道：661nmLP可采纳荧光： FITC, PE, PerCP,PI, PE-Cy5, PerCP-Cy5.5, PE-Cy ， APC, Rhodamine, Cyanine 等一定配流式一体化分选系统3.1.6 光电倍增管 :光谱检测范围300nm-1100nm 电压 150V-990V3.1.7 荧光检测敏捷度:<100MESF3.1.8 全峰宽变异系数:CV<2%3.1.9 样本获得速度 :>10 ，000 个细胞 /秒3.1.10 检测颗粒大小 : 0.1um(min)-50um （ max）3.1.11 最少样本体积：100μl3.1.12 流动室孔径： 430um X 180um3.1.13 自动抽吸系统 : 换样时自动吸去管道内节余样本，防止样本之间的互相扰乱*3.1.14 脉冲办理系统 :能同时剖析脉冲信号峰值、脉冲积分（面积）及脉冲宽度, 用脉冲宽度和面积区分双连体细胞（如假四倍体细胞）3.2 数据办理系统苹果 MAC Pro工作站3.2.1 CPU: 双核，主频3.2.2 内存： 2G3.2.4 独立显卡3.2.5 光驱： DVD-ROM, CD-RW3.2.6 显示器： 19 英寸液晶显示器3.3 应用软件3.3.1 全自动仪器校订软件3.3.2 多功能流式应用软件3.3.3 DNA 剖析软件4．资料4.1 有仪器全套电路图及中文操作手册4.2 有中华人民共和国医疗器材注册证工作条件：1.1 电源要求 :220V (±10%)、50HZ（±10%）1.2 环境温度 :5-35℃1.3 在相应湿度10-80%的环镜下工作2.设施用途：细胞剖析和分选功能2.1 剖析功能：2.1.1 细胞周期测定，DNA 含量剖析， RNA 丈量与剖析2.1.2 细胞凋亡检测，2.1.3 蛋白质总量测定，2.1.4 生物活性的测定，2.1.5 细胞內钙离子流动试验，Ca2+浓度测定，细胞内pH 值丈量，2.1.6 细胞內 Oxidative Burst 代谢产物，细胞表面电荷检测。
流式细胞仪检测细胞凋亡实验PI单染色法实验原理其原理主要是根据细胞凋亡时在细胞、亚细胞和分子水平上所发生的特征性改变。
这些改变包括细胞核的改变、细胞器的改变、细胞膜成分的改变和细胞形态的改变等，其中细胞核的改变最具特征性，主要包括以下几个方面：1. 细胞核的改变由于凋亡细胞核的改变，造成各种染色体荧光染料对凋亡细胞DNA可染性发生改变。
研究表明，用各种染色体荧光染料对经固定的凋亡细胞进行染色，其DNA可染性降低。
许多学者把这种DNA可染性的降低认为是凋亡细胞的标志之一。
2. 光散射特性凋亡细胞形态上的改变影响它们的光散射特性。
在流式细胞仪上，前散射光与细胞的大小有关，而侧散射光反映的是光在细胞内的折射作用，与细胞内的颗粒多少有关。
在细胞凋亡时，细胞固缩，体积变小，故前散射光降低，这一特性往往被认为是凋亡细胞的特点之一。
此外细胞凋亡时由于染色体降解，核破裂形成，细胞内颗粒往往增多，故凋亡细胞侧散射光常增加。
细胞坏死时，由于细胞肿胀，其前散射光增大；侧散射光在细胞坏死时也增大，因此可根据前散射光和侧散射光区别凋亡细胞和坏死细胞。
但需要注意的是，根据前散射光和侧散射光判断凋亡细胞的可靠性受被检测细胞形态上的均一性和核胞浆比率影响很大。
因此在某些淋巴细胞凋亡中，用光散射特性检测凋亡的可靠性较好，而在肿瘤细胞凋亡中，其可靠性就较差。
根据光散射特性检测凋亡细胞最主要的优点是可以将光散射特性与细胞的表面免疫荧光分析结合起来，用以区别经这些特殊处理发生选择性凋亡的淋巴细胞亚型。
也可用于活细胞的分类。
实验材料细胞试剂/试剂盒PBS PI 蒸馏水乙醇仪器/耗材棕色瓶 400目筛网流式细胞仪实验步骤一、收集细胞收集细胞｛数目约（1~ 5）×106个/mL｝，500~ 1 000 r/min 离心5 min，弃去培养液。
二、细胞洗涤3 ml PBS洗涤1次。
三、乙醇固定离心去PBS，加入冰预冷的70%的乙醇固定，4℃，1-2小时。
流式细胞仪实验方法一、实验准备1．标本制备：2．最小化非特异性结合：二、凋亡1．凋亡的检测方法：和其它2．PI染色法3．Annexin V 法4．TUNNEL法三、细胞因子1．激活的细胞因子2．CBA四、血小板1．活化2．活化检测3．网织血小板五、红细胞1．网织红细胞2．PNH3．胎儿红细胞六、肿瘤学1．DNA 细胞周期2．蛋白3．多药耐药4．微小残留白血病第一部分标本处理一、流式细胞术常规检测时的样品制备(一)直接免疫荧光标记法取一定量细胞(约1X106细胞／ml)，在每一管中分别加入50μl的HAB，并充分混匀，于室温中静置1分钟以上(),再直接加入连接有荧光素的抗体进行免疫标记反应(如做双标或多标染色，可把几种标记有不同荧光素的抗体同时加入)，。
孵育20-60分钟后，用PBS(pH7．2—7．4)洗1-2次，加入缓冲液重悬，上机检测。
本方法操作简便，结果准确，易于分析，适用于同一细胞群多参数同时测定。
虽然直标抗体试剂成本较高，但减少了间接标记法中较强的非特异荧光的干扰，因此更适用于临床标本的检测。
(二)间接免疫荧光标记法取一定量的细胞悬液(约1X106细胞／ml)，先加入特异的第一抗体，待反应完全后洗去未结合抗体，再加入荧光标记的第二抗体，生成抗原—抗体—抗抗体复合物，以FCM检测其上标记的荧光素被激发后发出的荧光。
本方法费用较低，二抗应用广泛，多用于科研标本的检测。
但由于二抗一般为多克隆抗体，特异性较差，非特异性荧光背景较强，易影响实验结果。
所以标本制备时应加入阴性或阳性对照。
另外，由于间标法步骤较多，增加了细胞的丢失，不适用测定细胞数较少的标本。
二、最小化非特异性结合的方法1．荧光标记的抗体的浓度应该合适，如果浓度过高，背景会因为非特异性的相互作用的增加而增加。
2．在使用第一抗体之前，将样品与过量的蛋白一起培育，如小牛血清蛋白（BSA），脱脂干奶酪，或来自于同一寄主的正常血清来作为标记的第二抗体。
一、实验目的本实验旨在通过流式细胞术技术，对细胞群体进行快速、精确的分析和定量测定，研究细胞的物理与化学性质，并对细胞进行分类和分选。
通过本次实验，掌握流式细胞仪的工作原理，了解其在细胞生物学研究中的应用。
二、实验原理流式细胞术（Flow Cytometry，FCM）是一种对液流中排成单列的细胞或其它生物微粒逐个进行快速定量分析和分选的技术。
其基本原理是将经过荧光标记的细胞或微粒，在流动系统中以高速通过，同时利用激光束照射细胞，通过光散射和荧光信号来获取细胞的大小、形态、表面标记物等信息。
最后，通过数据分析和可视化展示，对细胞进行计数、分类和分析。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 细胞样本：小鼠脾细胞、Jurkat细胞- 荧光标记抗体：CD45-FITC、CD3-PE、CD4-APC- 溶液：磷酸盐缓冲盐溶液（PBS）、荧光染料（如PI）2. 实验仪器：- 流式细胞仪（如BD FACS Calibur）- 离心机- 恒温培养箱- 移液器四、实验步骤1. 细胞制备：- 收集小鼠脾细胞或Jurkat细胞，用PBS洗涤后，调整细胞浓度为1×10^6个/mL。
- 加入荧光标记抗体，室温下孵育30分钟。
- 用PBS洗涤细胞两次，去除未结合的抗体。
2. 流式细胞术分析：- 将处理好的细胞加入流式细胞仪，设置合适的参数进行检测。
- 收集数据，进行细胞分类和分析。
3. 数据分析：- 利用流式细胞术分析软件（如CellQuest、FlowJo）对数据进行分析，包括细胞计数、分类、DNA含量分析等。
五、实验结果与分析1. 细胞分类：- 通过流式细胞术，成功将小鼠脾细胞和Jurkat细胞分为不同的亚群，如T细胞、B细胞等。
2. DNA含量分析：- 通过PI染色，检测细胞的DNA含量，发现小鼠脾细胞和Jurkat细胞均处于G0/G1期。
3. 表面标记物分析：- 通过CD45-FITC、CD3-PE、CD4-APC抗体检测，发现Jurkat细胞为T细胞，小鼠脾细胞中含有B细胞和T细胞。
第1篇一、实验目的1. 掌握流式细胞术的基本原理和操作流程。
2. 学习流式细胞术检测细胞凋亡的方法和技巧。
3. 了解细胞凋亡在生物学研究中的重要性。
二、实验原理细胞凋亡（Apoptosis）是一种由基因调控的细胞程序性死亡过程，对于维持生物体内环境的稳定具有重要意义。
流式细胞术（Flow Cytometry，FCM）是一种基于激光的细胞分析技术，可以快速、准确地检测细胞的各种生物学特性。
通过流式细胞术检测细胞凋亡，可以了解细胞凋亡的发生过程、细胞凋亡相关基因的表达情况以及细胞凋亡在疾病发生发展中的作用。
三、实验材料1. 细胞：人肺上皮细胞（A549细胞）。
2. 试剂：Annexin V-FITC/PI染色试剂盒、RPMI-1640培养基、胰蛋白酶、EDTA、PBS缓冲液、胎牛血清等。
3. 仪器：流式细胞仪、细胞培养箱、细胞计数仪、显微镜等。
四、实验方法1. 细胞培养：将A549细胞接种于培养皿中，置于细胞培养箱中培养，待细胞生长至对数生长期。
2. 细胞凋亡诱导：将细胞分为实验组和对照组，实验组加入一定浓度的凋亡诱导剂（例如：顺铂），对照组加入等量的PBS缓冲液。
3. 细胞处理：将实验组和对照组细胞分别收集，用胰蛋白酶和EDTA消化细胞，用PBS缓冲液清洗细胞，调整细胞浓度至1×10^6个/mL。
4. 细胞染色：取100μL细胞悬液，加入5μL Annexin V-FITC和5μL PI，混匀，室温避光孵育15分钟。
5. 流式细胞术检测：将染色后的细胞悬液注入流式细胞仪，设置合适的参数进行检测。
6. 数据分析：利用流式细胞术分析软件对检测数据进行处理和分析，得到细胞凋亡率。
五、实验结果1. 细胞凋亡率：通过流式细胞术检测，实验组细胞凋亡率为30%，对照组细胞凋亡率为5%。
2. Annexin V-FITC/PI染色结果：实验组细胞在Annexin V-FITC/PI染色后，大部分细胞位于Annexin V-FITC/PI双阳性区域，表明细胞发生了凋亡；对照组细胞主要位于Annexin V-FITC/PI单阴性区域，表明细胞未发生凋亡。
流式细胞术实验报告流式细胞术实验报告引言流式细胞术（Flow Cytometry）是一种广泛应用于生物学研究和临床诊断的技术。
它通过测量细胞在流动过程中的荧光信号，可以快速、准确地分析细胞的数量、大小、形态和功能等特征。
本实验旨在利用流式细胞术对细胞进行表型分析，并研究不同条件下细胞的变化。
材料与方法1. 细胞样本准备：从培养皿中取出细胞，用PBS洗涤，离心沉淀后，再用PBS 悬浮细胞，使其浓度达到所需的范围。
2. 细胞染色：将细胞悬浮液分装于离心管中，加入适量的荧光标记染料，轻轻摇匀，避免产生气泡。
3. 流式细胞术仪器设置：根据实验需要，调整流式细胞术仪器的参数，如激光功率、荧光信号检测通道等。
4. 样本检测：将细胞悬浮液注入流式细胞术仪器，开始检测。
记录细胞的散射信号和荧光信号，并设置相应的控制样本。
5. 数据分析：利用流式细胞术软件对获得的数据进行分析，包括细胞数量、比例、荧光强度等参数。
结果与讨论通过流式细胞术实验，我们成功地对细胞进行了表型分析，并观察到不同条件下细胞的变化。
以下是我们的结果和讨论。
1. 细胞数量和比例的变化我们首先对细胞数量和比例进行了分析。
结果显示，在不同处理条件下，细胞数量和比例存在显著差异。
例如，在处理A条件下，细胞数量明显增加，而在处理B条件下，细胞数量有所下降。
这表明不同条件对细胞生长和增殖有不同的影响。
2. 细胞大小和形态的变化我们进一步分析了细胞的大小和形态的变化。
通过测量细胞的散射信号，我们可以得到细胞的大小和形态信息。
结果显示，在处理A条件下，细胞的大小明显增加，形态变得更加圆润。
而在处理B条件下，细胞的大小和形态相对稳定。
这可能与处理A条件下的细胞分化和增殖有关。
3. 荧光信号的变化我们还对细胞中特定蛋白的表达进行了分析。
通过标记特定蛋白的荧光染料，我们可以测量细胞的荧光信号强度。
结果显示，在处理A条件下，特定蛋白的表达明显上调，而在处理B条件下，特定蛋白的表达下调。
流式细胞术基本原理与应用实验报告一、引言细胞是生命的基本单位，对于细胞的研究是生命科学的重要组成部分。
流式细胞术是一种高效、快速、准确的细胞分析技术，可以对单个细胞进行分析和排序，广泛应用于生命科学、医学、生物工程等领域。
本文将介绍流式细胞术的基本原理和应用实验。
二、流式细胞术基本原理流式细胞术是一种基于细胞荧光标记的技术，其基本原理是将细胞悬浮液通过细胞分离器，使细胞单个通过激光束，激光束照射到细胞上，激发荧光标记物，荧光信号被收集并转化为电信号，通过计算机进行分析和排序。
流式细胞术的主要组成部分包括细胞分离器、激光器、荧光探测器和计算机。
细胞分离器通过压力和速度的调节，使细胞单个通过激光束。
激光器产生激光束，激光束照射到细胞上，激发荧光标记物。
荧光探测器收集荧光信号，并将其转化为电信号。
计算机对电信号进行分析和排序，得到细胞的荧光信号和数量信息。
三、流式细胞术应用实验1.细胞表面标记物检测细胞表面标记物是细胞表面的蛋白质、糖类等分子，可以用于细胞的鉴定和分类。
流式细胞术可以通过荧光标记物检测细胞表面标记物，从而对细胞进行分类和分析。
实验步骤：（1）制备细胞悬浮液。
（2）加入荧光标记物，使细胞表面标记物与荧光标记物结合。
（3）将细胞悬浮液通过流式细胞术仪器，收集荧光信号。
（4）通过计算机对荧光信号进行分析和排序，得到细胞表面标记物的信息。
2.细胞周期分析细胞周期是细胞从一个细胞分裂到下一个细胞分裂的过程，包括G1期、S期、G2期和M期。
流式细胞术可以通过荧光标记物检测细胞DNA含量，从而对细胞周期进行分析。
实验步骤：（1）制备细胞悬浮液。
（2）加入荧光标记物，使细胞DNA与荧光标记物结合。
（3）将细胞悬浮液通过流式细胞术仪器，收集荧光信号。
（4）通过计算机对荧光信号进行分析和排序，得到细胞DNA含量的信息。
3.细胞凋亡检测细胞凋亡是细胞自我死亡的过程，是细胞生命周期的重要组成部分。
流式细胞术可以通过荧光标记物检测细胞凋亡，从而对细胞生命周期进行分析。
实验七流式细胞仪检测技术免疫细胞是一组不均一的细胞群体。
各种特定的细胞群其细胞表面表达有各自特异的表面标志分子，利用这些特异的表面标志，可以鉴定、分离和纯化相应的细胞群。
随着单克隆抗体技术的诞生和免疫标记技术（特别是荧光标记技术）的发展，以及计算机科学的应用，使利用仪器的方法检测特异的细胞膜表面分子成为可能。
本章介绍的荧光激活细胞分类技术就是采用单克隆抗体技术和免疫荧光标记技术，并结合光学检测和计算机分析技术而产生的鉴定和分离特定细胞亚群的技术。
实验原理流式细胞仪（flow cytometer）是一种能够探测和计数以单细胞液体流形式穿过激光束的细胞检测装置，由于在检测中使用的细胞标志示踪物质为荧光标记物，因此，用来分离、鉴定细胞的流式细胞仪有被称为荧光激活细胞分类仪（fluorescence activated cell sorter,FACS）,是分离和鉴定细胞群及亚群的一种强而有力的应用工具。
其原理是在一组混合的细胞群中，加入特异的针对特定靶细胞表面分子的荧光标记单克隆抗体，这种特异单克隆抗体与其对应的抗原靶分子结合，结合后的荧光标记抗体停留在特定细胞的表面，称为荧光抗体标记的靶细胞；将含有被标记细胞的混合细胞群混悬在一定容积的上样缓冲液中，再通过FACS的进样吸管孔，仪器就会将细胞悬液制成以单细胞排列的微细流束。
当每一个细胞通过仪器的激光束照射时，带在细胞上的荧光就会被相应的激光束激活并发出对应的荧光，通过敏感的光电倍增管即可检测到从细胞表面发出的荧光。
根据测得的散射光（scattered light ）可得到细胞大小及颗粒状态的信息；而从荧光的发射强度(fluorescence emissions)则提供了结合在细胞上的抗体信息，进而也被反映了该细胞表面相应分子的表达情况。
在流式细胞仪分离装置中，返回到计算机的信号，可用来产生一种电荷，这种电荷以特定准确的时间通过FACS的吸管孔，在与吸管孔的液体流相相遇时，可将液体流打碎成只含一个细胞的微滴。
竭诚为您提供优质文档/双击可除流式细胞仪实验报告篇一：流式细胞术实验报告流式细胞术实验目的掌握流式细胞仪的工作原理掌握用流式细胞仪测量细胞群体DnA含量分布的方法了解流式细胞术在细胞生物学研究中的应用实验原理流式细胞仪的工作原理是将待测细胞放入样品管中，在气体的压力下进入充满鞘液的流动室。
在鞘液的约束下细胞排成单列由流动室的喷嘴喷出，形成细胞柱。
通过对流动液体中排列成单列的细胞进行逐个检测，得到该细胞的光散射和荧光指标，分析出其体积、内部结构、Dn(:流式细胞仪实验报告)A、RnA、蛋白质、抗原等物理及化学特征。
细胞内的DnA含量随细胞周期进程发生周期性变化，如g0/g1期的DnA含量为2c，而g2期的DnA含量是4c。
利用pI标记的方法，通过流式细胞仪对细胞内DnA的相对含量进行测定，可分析细胞周期各时相的百分比。
仪器、材料与试剂仪器：流式细胞仪、离心机。
材料：hela细胞样品、试管、离心管、封口膜、微量移液器、Tip头、eppendorf管。
试剂：70％乙醇（保存于4℃），Rnase（-20℃保存），pI染液（避光保存于-20℃），pbs(ph7.4，保存于4℃)实验步骤样品细胞由老师于课前收集并置于70%(预冷)乙醇中4℃下固定过夜。
2000rpm15min收集固定细胞，pbs洗2次。
用100μLpbs重悬细胞并转至试管中轻轻吹打（防止细胞破碎）。
加pI染液50μL和Rnase约2μL室温放置15min。
上机检测。
样品测定并使用modFitLT软件分析结果。
实验结果与讨论:所测样品中各周期时相的百分比：g1期68.48%g2/m期16.63%s期14.89%g2：g1=1:1.77cV12.16提示结果可能不可靠或存在多倍体细胞。
流式细胞术是一种对悬液中细胞、微生物或细胞器等进行单个快速识别、分析和分离的技术。
用以分析细胞大小、细胞周期、DnA含量、细胞表面分子以及进行细胞分选等。
这种技术具有以下特点1.测量速度快；2.可进行多参数测量；3.是一门综合性的高科技方法（Fcm综合了光学，电子学，流体力学，细胞化学，免疫学，激光和计算机等多门学科和技术）；4.既是细胞分析技术，又是精确的分选技术。
本次实验是通过流式细胞仪对细胞内DnA的相对含量进行测定，分析hela细胞样本中各细胞周期时相所占的百分比。
实验中所使用的hela细胞应为对数生长期的细胞，因为这一期的细胞分裂活动最为旺盛，各个周期的细胞均有存在。
篇二：外周血林白细胞流式细胞技术实验报告蚌埠医学院免疫学教研室《流式细胞技术》流式实验数据分析练习－报告姓名赵灯法学号11010910051专业生物科学系年级一．实验目的（1）.掌握流式细胞仪的工作原理。
（2）掌握用流式细胞仪测量外周血淋巴细胞的方法。
（3）了解流式细胞术在细胞生物学中的应用。
二．实验原理1、流式细胞仪系统流程：标本→激光系统→流动系统→信号处理系统→放大系统→计算机系统→结果打印2、基本原理：待测标本制备成单细胞悬液通过荧光染色后进入充满鞘液的流动室，鞘液压力与样品流压力是不同的，当二者的压力差异达到一定程度时，鞘液裹挟着样品流中细胞排成单列逐个经过激光聚焦区。
如果我们将细胞中感兴趣的部分特异性的标上荧光染料，那麽这些染料将在细胞通过激光检测区时受激光发出特定波长的荧光,通过一定波长选择通透性的滤色片,我们可将不同波长的散射光、荧光信号区分开来，并送到不同的光电倍增管中，经过一系列的信号转换、放大，数字化处理，我们就可以在计算机直观的统计染上各种荧光染料的细胞各自的百分率。
选择不同的单克隆">克隆抗体及荧光染料，我们可以利用Fc同时测定一个细胞上的多种不同特征；如果对具有某种特征的细胞有兴趣，我们还可以利用流式的分选功能将其分选出来，以便进一步培养、研究。
三．实验步骤1.取1mL外周抗凝血。
2.标记流式管①—③号，每管加血30μL（空白管加40μL）3.各管按表一加荧光抗体，混匀后避光作用30min。
4.溶血，每管加融雪剂1mL，RT作用10min，1500rpm*5min，弃上清。
5.洗涤，每管加洗涤液1mL，混匀，1500*5min，弃上清。
6.固定，每管加固定剂1%pFA300μL，混匀后上机检测。
四．实验结果及数据分析1.按流式细胞仪工作方法操作分析得到数据结果：①空白对照②同型对照③第一荧光补偿④第二荧光补偿⑤T/cD82.结果分析因为cD3是T细胞表面特有的表面标记分子所以cD3阳性的淋巴细胞就为T细胞。
根据第五组的数据可知：cD4T细胞百分率=50.47%cD8T细胞百分率=25.73%T细胞百分率=50.47+25.73=76.20%cD4/cD8=1.96结果分析：T细胞总数是正常的，cD8阳性细胞与cD4阳性细胞的比例也基本正常，但通过一次实验无法判断此外周血是否正常，还需要做进一步的分析确定！篇三：流式细胞仪数据分析流式细胞仪数据分析5.1数据采集及显示光信号转换成电压脉冲后，再通过模数转换器转换成为计算机能够储存处理的数字信号。
流式细胞仪的数据以Fsc标准格式存储，该标准由“分析细胞学协会”制定。
根据Fsc标准，数据存储格式应包括三个文件：样本获取文件，数据设置文件和数据分析结果。
4参数（Fsc，ssc，FITc和pe）的单细胞分析会生成8位数据。
当单个样品累计收集到10000个细胞时，Fcs数据文件为80kb。
数据采集存储完毕后，细胞亚群可以几种不同格式显示。
单参数如Fsc或FITc（FL1）可使用直方图，横轴表示荧光通道。
纵轴表示在该通道内收集到的细胞数量（如图5-1）。
处在同一通道的每一细胞均符合该通道的信号值，而且具有相同的信号密度。
通道右侧信号的荧光强度明显高于左侧，越靠右侧荧光亮度越强。
图5-1流式数据分析图双参数可在二维散点图中同时显示，x轴显示通道1（FL1），Y轴显示通道2（FL2）。
3维图通过x，Y，Z三个轴分别显示每个通道的细胞量（如图5-1）。
习题：数据采集及显示1在直方图中横轴和纵轴分别表示。
2二维点图用于显示3在cellQuest软件中3维图中Z轴代表5.2设门通过设门的方法可以定义细胞亚群的区域。
如：血样本是混合细胞群，如果想单独分析淋巴球细胞，可根据Fsc或细胞大小，在Fsc，ssc的散点图中设门，其数据结果只反映淋巴细胞亚群的荧光特性。
图5-2全血样本中淋巴细胞亚群的数据分析图习题：设门1设门的方法通常用于分析样本内的指定细胞。
（对错）5.3细胞亚群的数据分析数据分析包括从点图中的list-mode文件中显示数据,然后统计点图中的细胞分布情况。
如前所述，分别有几种形式的点图用于显示数据，而且可通过设门的方法区分指定的细胞亚群。
如图5-3所示，在淋巴细胞亚群周围设门，以单独分析或分选该亚群细胞。
图5-3选定淋巴细胞亚群设门门内细胞的数据结果可在随后的图中显示。
在下面的实例中，我们将详尽阐述细胞亚群百分含量的不同分析方法。
我们可以通过单参数直方图，二维点图和三维图来分析结果。
单参数直方图可定位边界，二维点图可设置象限标志。
如果需要，还可以建立数据统计表以输出结果。
直方图可直观单个参数的细胞数量。
阴性对照用于决定直方图中单参数的左右边界（见图5-4）。
左图中m1为阴性对照峰。
右图中m2为cD3FITc阳性峰。
图5-4阴性对照峰m1（noRm001）和cD3FITc阳性峰m2（noRm002）图5-5的统计结果表明，整个事件共记录了6000个细胞，门内淋巴细胞2891个。
其中m1（阴性）细胞619个，m2（cD3阳性）细胞2272个细胞。
淋巴细胞亚群cD3阳性百分含量的统计结果为：m2：2272/2891=78.59%。
图5-5直方图统计结果二维点图以双参数显示结果，每个点表示一个或多个细胞。
图5-6为阴性对照图，用于设定阴性对照边界，全图划分为四个象限，以区分阴性细胞、单阳性细胞以及双阳性细胞。
左下象限（LL）为双阴性细胞，左上象限（uL）为Y轴阳性细胞（cD19pe），左下象限（LR）为x轴阳性细胞（cD3FITc），右上象限（uR）为双阳性细胞（cD19+/cD3+）。
图5-6阴性对照组(noRm001)和cD3FITc/cD19pe双染样本(noRm002)如图5-7所示，淋巴细胞亚群双阳性细胞（cD19+/cD3+）的百分含量为：296/2839=10.43%。
图5-7散点图统计结果另一个分析方法是划定区域，也就是设门。
我们可以用不同形状的绘图工具定义所选区域（如图5-8所示）；然后统计该区域内指定细胞亚群的百分含量。
在图5-9中，R4门内为cD4阳性，cD3阴性的淋巴细胞亚群，其结果为：40/2866=1.40%。
图5-8cD3FITc/cD4pe双染样本分析图图5-9cD3FITc/cD4pe双染样本数据统计结果这种方法在分析不同的供体细胞时存在一个缺陷，因为如果事先定义好细胞亚群的区域或边界，在随后的文件中，下一个样本的细胞亚群位置会发生变化，这就需要操作者重新调整区域或边界位置。
为避免这种情况的发生，我们采用一种称为集群分析（clusteranalysis）的新方法。
bD公司的multiseTTm和AttractorsTm软件就属于集群分析软件。
该软件的特点是会随着整个细胞亚群的移动而移动，自动变换区域或边界到相应的细胞亚群位置（见图5-10）。
