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第一节 生物成分的分离与测定技术1．掌握分离与测定生物成分中蛋白质的技术。
(难点)2．掌握采用醋酸纤维薄膜电泳的方法分离并纯化蛋白质.（重点）3．掌握采用水蒸气蒸馏法和脂溶性有机溶剂提取法提取脂肪成分.(重难点）分 离与 测 定 生 物 成 分 中 的 蛋 白 质1．抽提液的选择2．分离蛋白质的方法（1）离心沉降法：通过控制离心速率,使分子大小、密度不同的蛋白质发生沉降分层。
（2）薄膜透析法：利用蛋白质分子不能透过半透膜的特性，使蛋白质与小分子化合物分离开的纯化蛋白质的方法。
（3)凝胶色谱法:①概念：根据蛋白质分子的大小对其进行有效分离的方法。
②凝胶⎩⎨⎧ 形态:微小的多孔球体组成：大多由多糖类化合物构成结构：内部具有很细微的多孔网状结构③原理 是否进入凝胶颗粒 移动途径 路程 移动 速度 洗脱 次序大分子 蛋白质 不能 进入 凝胶颗粒 间隙 较短 较快 先洗脱出来小分子 可以 凝胶颗 较长 较慢后洗（4)电泳法：将所带电荷的数量和性质不同的蛋白质从混合样品中分离并纯化出来。
3．血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳配制试剂―→准备器材―→架滤纸桥―→浸泡薄膜―→细心点样―→平悬薄膜―→实施电泳―→染色―→漂洗―→脱色［合作探讨］探讨1：在抽提液中加入蛋白酶抑制剂的目的是什么？提示：防止提取过程中蛋白质被蛋白酶分解。
探讨2:在电泳过程中,影响泳动速度的因素有哪些?提示：带电颗粒的性质，即颗粒的大小、形状和所带电荷的多少；此外还有电场强度、溶液的pH等因素。
探讨3:洗涤红细胞时能否用蒸馏水代替生理盐水？提示：不能。
生理盐水能保持红细胞的渗透压稳定而不至于破裂，在未洗净血浆中的杂质蛋白前，红细胞如果提前破裂，就可能使血红蛋白质与杂质血浆蛋白混在一起加大了分离的难度。
［思维升华］1．蛋白质的分离方法（1）薄膜透析法：①原理：蛋白质水溶液具有亲水胶体溶液性质，不能透过半透膜。
②目的:去除小分子化合物杂质，如无机盐、单糖、二糖、氨基酸等。
高中生物第4章生物化学与分子生物学技术实践第2节分子生物学技术学案苏教版选修11、简述PCR技术的原理及基本操作步骤。
(重难点)2、尝试进行DNA片断的PCR扩增。
(难点)P C R 扩增的原理和过程1、细胞内DNA复制的条件原料4种脱氧核苷酸模板2条DNA 母链酶解旋酶和DNA聚合酶引物使DNA聚合酶能够从引物的3′端开始连接脱氧核苷酸2、PCR扩增技术(1)概念：在体外快速扩增特定基因或DNA序列(目的DNA片段)的实验技术，又称为体外基因扩增技术或DNA 扩增技术。
(2)PCR技术的原理：①条件：DNA模板、TaqDNA聚合酶、脱氧核苷酸引物、四种脱氧核苷酸。
②PCR扩增的特点：快速、简便和灵敏。
③进行PCR的先决条件：待扩增的DNA片段3′端的脱氧核苷酸序列要为已知。
④引物序列确定的依据是：被扩增区域的3′端边界DNA序列。
3、PCR反应的过程变性↓延伸GOH，复性结果为：HOGGCGOH 将HOGGCCGGCGCCG—5′(3)每个DNA分子各有一条链含32P1/2n(4)DNA解旋热变性(5)蛋白酶[能力提升]11、DNA扩增过程中，DNA片段经若干次扩增，与其数目的理论值变化相符的图是()【解析】PCR反应中DNA的扩增数目和生物体内的DNA复制是类似的，即1个DNA分子复制1次，产生2个DNA分子，复制2次，产生4个DNA分子，呈指数扩增，开始有1个DNA分子为模板，经过n 次复制后得到的DNA分子的数量为2n，与曲线C相符合。
【答案】C12、PCR过程与细胞内的DNA复制过程相比，主要有两点不同，它们是()①PCR过程需要的引物是人工合成的单链DNA或RNA②PCR过程不需要DNA聚合酶③PCR过程中DNA的解旋不依靠解旋酶，而是通过对反应温度的控制来实现的④PCR过程中，DNA不需要解旋，直接以双链DNA为模板进行复制A、③④B、①②C、①③D、②④【解析】PCR过程与细胞内的DNA复制过程相比，主要有两点不同：一是PCR过程需要的引物是人工合成的单链DNA或RNA，长度通常为20～30个核苷酸。
