拉萨裸裂尻鱼5种组织乳酸脱氢酶和苹果酸脱氢酶的电泳分析

2006年3月M a rch 2006色谱C h inese J ou rna l of C h rom a tog raphyVo l .24N o.2181～184收稿日期:2005203209第一作者:薄海波,女,高级工程师,博士研究生,Te l:(0971)8231571,Fax:(0971)8247496,E 2m a il:bohb 1212@.基金项目:中国科学院百人计划项目.碱催化法衍生化气相色谱/质谱法分析青海湖裸鲤鱼油中的脂肪酸薄海波1,2,　王　霞3,　翟宗德3,　李永民3,　陈立仁1(1.中国科学院兰州化学物理研究所,甘肃兰州730000;2.青海出入境检验检疫局,青海西宁810000;3.中国科学院研究生院,北京100039)摘要:用碱催化法将青海湖裸鲤鱼油甲酯化,以气相色谱/质谱法分析鱼油中的脂肪酸。

青海湖裸鲤可食用部分中鱼油含量为25113%。

从鱼油中共鉴定出47种脂肪酸,包括直链、单支链、多支链饱和脂肪酸,单不饱和、多不饱和脂肪酸,环丙烷基、呋喃基脂肪酸等。

不饱和脂肪酸含量为73.6%,其中多不饱和脂肪酸含量为2514%,以C 18∶2(419%),C 18∶3(311%),C 20∶4(113%),C 20∶5(二十碳五烯酸(EPA ),914%)和C 22∶6(二十二碳六烯酸(D HA ),617%)为主。

单不饱和脂肪酸含量为4812%,主要由C 16∶1(2013%),C 18∶1(2519%)构成。

饱和脂肪酸含量为2517%,主要有C 14∶0(314%),C 16∶0(1914%)和C 18∶0(111%)。

青海湖裸鲤鱼油中还存在不常见的环丙烷基和呋喃基脂肪酸及多种奇数碳链和支链脂肪酸。

因此,青海湖裸鲤是功能性脂肪酸的重要膳食来源。

关键词:气相色谱/质谱;脂肪酸;青海湖裸鲤;鱼油中图分类号:O 658 文献标识码:A 文章编号:100028713(2006)022******* 栏目类别:研究论文A n a lys is o f F a t ty A c id s in G ym n ocyp r is p rz ew a ls k ii O il b yG a s C h rom a to g rap h y /M a s s S p e c t rom e t ry w ithB a s e 2C a ta lyze d T ra n s e s te r if ica t io nBO H a ibo1,2,WAN G X ia 3,ZHA I Zongde 3,L I Yongm in 3,CH EN L iren1(1.L a n zhou In s ti tu te of Chem ica l Phys ics,the Ch in ese A ca dem y of Scien ces,L a n zhou 730000,Ch in a;2.Q in gha i En try 2Ex i t In sp ection a n d Q u a ra n tin e B u rea u,X in in g 810000,Ch in a;3.G ra du a ted School,the Ch in ese A ca dem y of Scien ces,B ei jin g 100039,Ch in a )A b s t ra c t:The com p os ition of fa tty ac ids (FA )in G ym n ocyp r is p rzew a lski i o il w as iden tified and quan tified by gas ch rom a tograp hy (GC )/e lec tron i m p ac t (E I )m ass sp ec trom e try (M S ).A base 2ca ta lyzed transes te rifica tion m e thod w as used to conve rt fa tty ac ids to m e thyl es te rs.The li p ids w e re ex trac ted us ing p e tro leum e the r and the to ta l lip ids in d ried m ea t and sk in of G ym 2n ocyp r is p rzew a lski i w e re abou t 25%.Fo rty 2seven fa tty ac ids w e re iden tified in the cu rren ts tudy .M a in typ es of fa tty ac ids found in the o ils w e re no r m a l sa tu ra ted,m ono 2b ranched,m u lti 2b ranched,cyc lop rop ane,fu rano id,no r m a l m onounsa tu ra ted and p o lyunsa tu ra ted fa tty ac ids.Sa tu ra ted fa tty ac ids w e re app rox i m a te ly 2517%of the to ta l,and the m a in com p onen ts w e re C 14∶0(314%),C 16∶0(1914%)and C 18∶0(111%).U nsa tu ra ted fa tty ac ids w e re to ta lly 7316%,and the m a jo r com p onen ts of m onounsa tu ra ted fa tty ac ids w e re C 16∶1(9)(1918%),C 18∶1(9)(1816%)and C 18∶1(11)(713%);p o lyunsa tu ra ted fa tty ac ids w e re m a in ly com p osed of C 18∶2(9,12)(418%),C 18∶3(9,12,15)(311%),C 20∶4(5,8,11,14)(112%),C 20∶5(5,8,11,14,17)(EPA,914%)andC 22∶6(4,7,10,13,16,19)(D HA,617%).Esp ec ia lly,fu ryl 2,cyc lop rop ane 2and seve ra l odd and b ranched cha in fa tty ac ids w e re found in G ym n ocyp r is p rzew a lski i o il .It is thus an i m p o rtan t d ie ta ryresou rce of func tiona l fa tty ac ids.Ke y w o rd s:gas ch rom a tograp hy /m ass sp ec trom e try (GC /M S );fa tty ac ids;G ym n ocyp r is p rzew a lski i;fish o il 青海湖裸鲤(G ym n ocyp r is p rzew a lsk i i )俗称湟鱼,是青藏高原最大的咸水湖———青海湖中唯一的一种大型野生经济鱼类,是我国名贵鱼种,为鲤形目鲤科裂腹鱼亚科裸鲤属,属高原冷水鱼种。

实验三十二聚丙烯酰胺凝胶电泳分离乳酸脱氢酶同工酶（活性染色鉴定法）目的要求(1)复习有关同工酶的知识．(2)掌握聚丙烯酰胺凝胶电泳分离乳酸脱氢酶同工酶、底物染色技术及有关原理.实验原理1959年Markert等用电泳的方法将牛心肌提纯的LDH结晶分离出5条区带，靠近阳极一端的称LDH₁,，靠近阴极一端的称为LDH₅，；其余3种，由阳极到阴极依次命名为LDH₂，LDH₃及LDH₄。

它们均具有LDH催化活性，从而首先提出了同工酶(1soenzyme)的概念．目前：已知LDH同工酶是由H亚基及M亚基按不同比例组成的四聚体，它们是H₄(LDH₁)，H₃M(LDH₂)，H₂M₂(LDH₃)，HM₃(LDH₄)及M₄(LDH₅)5种，这些LDH同工酶广泛分布于动物的各种组织以及微生物和植物中．心肌中以LDH₁，含量高，骨骼肌及肝中LDH₅含量高。

图是正常人血清、心肌和肝组织提取液的LDH同工酶图1.2.8 电泳模式图。

LDH同工酶底物染色显色反应如下：反应式中PMS为甲硫吩嗪(phenazine methosulfate)，NBT为氯化硝基四氮唑蓝(nitrroblue tetrazolium chloride)的缩写，它们都是接受电子的染料。

LDH与底物染色液在37℃温浴中脱下的氢最后传递给NBT生成蓝紫色的NBTH2称为甲 ，此物不溶于水，有利于显色后区带的保存，但可溶于氯仿及95%乙醇（9：1）的混合液。

因此，电泳后的显色区带可通过浸泡法浸出，于560nm比色，也可用光吸收扫描仪扫描得出LDH同工酶间相对百分含量。

目前，LDH及其同工酶检测已广泛用于临床，作为某些疾病鉴别诊断的依据，常用醋酸纤维素薄膜电泳，琼脂糖电泳及聚丙烯酰胺电泳分离LDH及其同工酶，这3种不同支持物电泳及染色原理完全相同，但灵敏度不同。

因而正常值不完全相同。

本实验用连续PAGE 法分离LDH及其同工酶。

试剂与器材（一）材料人（动物）未溶血新鲜血清，动物组织提取液[组织重量与组织匀浆缓冲液体积比为1：5或1：10（g/ml）]。

2016年天津市高考生物试卷一、选择题,共6题，每题6分，共36分、在每题给出的四个选项中，只有一项是最符合题目要求的、1、（6分）在紫色洋葱鳞片叶外表皮细胞的失水和吸水实验中，显微镜下可依次观察到甲、乙、丙三种细胞状态、下列叙述正确的是（）A、由观察甲到观察乙须将5倍目镜更换为10倍目镜B、甲、乙、丙可在同一个细胞内依次发生C、与甲相比，乙所示细胞的细胞液浓度较低D、由乙转变为丙的过程中，没有水分子从胞内扩散到胞外2、（6分）在适宜反应条件下，用白光照射离体的新鲜叶绿体一段时间后，突然改用光照强度与白光相同的红光或绿光照射。

下列是光源与瞬间发生变化的物质，组合正确的是（）A、红光，ATP下降B、红光，未被还原的C3上升C、绿光，[H]下降D、绿光，C5上升3、（6分）在丝瓜地生态系统中，丝瓜、昆虫甲、昆虫乙存在捕食关系、如图为某年度调查甲、乙两种昆虫种群数量变化的结果、下列叙述正确的是（）A、该丝瓜地的碳循环在丝瓜、昆虫与无机环境之间完成B、依据随机取样原则统计成虫数量可计算出昆虫种群密度C、乙与甲的数量比值代表两种昆虫间的能量传递效率D、乙数量的增加会减少甲种群对丝瓜的摄食量4、（6分）将携带抗M基因、不带抗N基因的鼠细胞去除细胞核后，与携带N 基因、不带抗M基因的鼠细胞融合，获得的胞质杂种细胞具有M、N两种抗性、该实验证明了（）A、该胞质杂种细胞具有全能性B、该胞质杂种细胞具有无限增殖能力C、抗M基因位于细胞质中D、抗N基因位于细胞核中5、（6分）枯草杆菌野生型与某一突变型的差异见下表：枯草杆菌核糖体S12蛋白第55﹣58位的氨基酸序列链霉素与核糖体的结合在含链霉素培养基中的存活率（%）野生型能0突变型不能100注P：脯氨酸；K：赖氨酸；R：精氨酸下列叙述正确的是（）A、S12蛋白结构改变使突变型具有链霉素抗性B、链霉素通过与核糖体结合抑制其转录功能C、突变型的产生是由于碱基对的缺失所致D、链霉素可以诱发枯草杆菌产生相应的抗性突变6、（6分）在培养人食管癌细胞的实验中，加入青蒿琥酯（Art），随着其浓度升高，凋亡蛋白Q表达量增多，癌细胞凋亡率升高。

藏羚羊骨骼肌肌红蛋白含量及乳酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶活力的研究马兰;杨应忠;格日力【摘要】目的:探讨藏羚羊骨骼肌对低氧环境的适应机制.方法:以生活在同海拔高度(4 300 m)的藏绵羊和低海拔绵羊(1 800m)为对照,用分光光度法测定三种动物骨骼肌中肌红蛋白(Mb)含量、乳酸(LA)含量,酶活力法测定三种动物骨骼肌中乳酸脱氢酶(LDH)和苹果酸脱氢酶(MDH)活力.结果:藏羚羊骨骼肌中Mb含量明显高于藏绵羊和低海拔绵羊(P＜0.05),而藏绵羊和低海拔绵羊间无明显差异.LA含量和LDH活力明显低于藏绵羊和低海拔绵羊(P＜0.05),而MDH活力及MDH/LDH比值显著高于藏绵羊和低海拔绵羊(P＜0.05),藏绵羊和低海拔绵羊间无明显差异.结论:藏羚羊可能通过增加骨骼肌中Mb的含量,提高其在低氧环境获取氧的能力,且藏羚羊骨骼肌组织中有氧代谢比例高,这可能与肌肉中Mb含量较高有关,推测藏羚羊较高的Mb含量可能是其适应高原缺氧条件的分子基础之一.【期刊名称】《中国应用生理学杂志》【年(卷),期】2012(028)002【总页数】4页(P118-121)【关键词】藏羚羊;骨骼肌;肌红蛋白;能量代谢【作者】马兰;杨应忠;格日力【作者单位】青海大学医学院高原医学研究中心,西宁810001;青海大学医学院高原医学研究中心,西宁810001;青海大学医学院高原医学研究中心,西宁810001【正文语种】中文【中图分类】Q494肌红蛋白(myoglobin,Mb)是一种主要存在于人及哺乳动物肌肉细胞中的蛋白质,是脊椎动物肌肉中的血红素蛋白。

它的主要功能是把氧从肌细胞附近毛细血管的血液通过细胞膜运到肌细胞线粒体中,以氧合肌红蛋白(oxymyoglobin,MbO2)形式暂时贮氧,并可携带氧在肌肉中运动,在肌肉急剧运动,机体高能量需求时把氧释放出来,从而维持细胞的呼吸作用,以保障肌肉强烈代谢对氧的需要,在机体的氧利用中发挥了重要作用。

麦洼牦牛乳酸脱氢酶-B基因多态性的PCR-RFLP分析马晓琴;黄林;刘薇;刘浩浩;陈洁玲;郑玉才【摘要】为了从分子水平上检测麦洼牦牛Bos grunniens乳酸脱氢酶-1(LDHl)的H亚基编码基因Ldhb的多态性,实验提取79头麦洼牦牛基因组DNA,采用PCR-RFLP技术分析Ldhb基因多态性,并测定牦牛背最长肌中肌红蛋白含量.实验建立的牦牛Ldhb的G896A突变位点的PCR-RFLP检测方法,在79头麦洼牦牛中检测到Ldhb-AA和Ldhb-AG两种基因型,其中AG基因型频率为16.46％,并且这些样品的乳酸脱氢酶-1的电泳迁移率快于Ldhb-AA样品.本实验未检测到Ldhb-GG基因型；麦洼牦牛Ldhb基因多态性与背最长肌中的肌红蛋白含量之间未见相关性.【期刊名称】《四川动物》【年(卷),期】2013(032)002【总页数】3页(P192-194)【关键词】牦牛;乳酸脱氢酶;多态性;PCR-RFLP;肌红蛋白【作者】马晓琴;黄林;刘薇;刘浩浩;陈洁玲;郑玉才【作者单位】西南民族大学生命科学与技术学院,成都610041;西南民族大学生命科学与技术学院,成都610041;西南民族大学生命科学与技术学院,成都610041;西南民族大学生命科学与技术学院,成都610041;西南民族大学生命科学与技术学院,成都610041;西南民族大学生命科学与技术学院,成都610041【正文语种】中文【中图分类】Q959.8;Q754牦牛Bos grunniens 主要分布在我国海拔3000 m以上的青藏高原，是该地区最主要的家畜。

牦牛乳酸脱氢酶-1(LDH1，由4个H 亚基组成)不同于普通牛，存在遗传多态性(郑玉才，陈智华，1997;毛永江等，2001)。

麦洼牦牛中LDH1 有快、慢2种表型(Zheng et al.，2008)，在九龙牦牛中LDH1 存在快、中、慢3种表型(毛永江等，2001;Kuang et al.，2010)。