龙华医院细菌鉴定药敏系统性能验证试验标准操作规程

引言概述：微生物鉴定与药敏分析系统校准是一项关键的过程，用于确保微生物鉴定和药敏分析结果的准确性和可靠性。

在临床诊断以及疾病治疗过程中，正确的微生物鉴定和药敏分析结果对于指导合适的治疗非常重要。

本文将详细介绍微生物鉴定与药敏分析系统校准的步骤和方法。

正文内容：一、校准前的准备工作1.1 熟悉鉴定系统的原理和操作手册：校准前需要详细了解微生物鉴定与药敏分析系统的工作原理和操作流程，特别是系统的标准曲线构建和质控样品的使用方法。

1.2 确认校准所需的质控样品：校准前需要确认所需的质控样品种类和规格，并购买或制备足够的样品用于校准。

1.3 严格按照操作规程准备实验室条件：校准实验需要在特定的实验室条件下进行，包括工作台的清洁、温湿度的控制等。

一、校准微生物鉴定系统2.1 准备标准菌株：收集并培养已知的标准菌株，用于构建标准曲线和评估系统的准确性和精确度。

2.2 实施标准曲线实验：根据操作手册中的说明，将标准菌株制备成一系列不同浓度的悬液，并进行系统的测量。

根据测量结果构建标准曲线。

2.3 评估系统的准确性和精确度：通过比较标准曲线与已知浓度的标准菌株的测量结果，评估系统的准确性和精确度。

确保系统能够准确鉴定各种微生物。

三、校准药敏分析系统3.1 准备标准药物溶液：根据临床常用的抗生素和抗真菌药物，制备一系列已知浓度的标准药物溶液，并进行验证。

3.2 使用标准药物溶液进行系统测量：将已知浓度的标准药物溶液加入药敏分析系统中，根据系统的操作手册测量药物的最低抑菌浓度和最低抗菌浓度。

3.3 评估系统的准确性和可靠性：比较系统测量结果与已知浓度的标准药物溶液的预期值，评估系统的准确性和可靠性。

确保系统能够准确测量药物的敏感性。

四、质控测试4.1 设计质控样品实验方案：根据不同的微生物鉴定和药敏分析系统要求，设计质控样品实验方案，包括样品的制备、浓度的选择和实验的重复次数等。

4.2 实施质控样品实验：根据实验方案，制备质控样品并进行实验。

微生物鉴定及药敏分析系统的操作流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。

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药敏实验的操作规程药敏实验是一种常用的实验方法，用于测试不同药物对细菌的敏感性。

其操作规程如下：1. 准备工作a. 选择适当的培养基：根据实验目的和细菌的需求，选择适合的培养基。

常用的培养基有Muller-Hinton (MH) 培养基和血琼脂基质（Blood Agar）。

b. 准备药物：根据研究的需求，选择要测试的药物，先进行浓度调节并制备药物试液。

c. 选择试验细菌：选择需要测试的细菌菌株，可选择多种细菌进行测试。

2. 制备药物试液a. 根据药物的浓度和用途，按照配制方法将药物试液制备好。

b. 对于不同药物，可根据需要设定不同的浓度梯度。

通常使用两倍稀释法制备浓度梯度。

3. 制备细菌悬浮液a. 从培养基中取出所需菌株，并用无菌生理盐水进行洗涤，以去除残余培养基或其他杂质。

b. 将菌株悬浮于无菌生理盐水中，通过眼镜划线计数法或光密度测定法调整细菌悬浮液的浓度至合适的范围。

4. 进行测定a. 在MH培养基或血琼脂基质上均匀涂布细菌悬浮液，使其形成薄膜。

b. 将培养基上涂有菌株的培养皿分成数个区域，每个区域均加入一种药物试液。

c. 用无菌的扩菌针分别在每个区域上刺入药物试液，使药物试液与菌株接触。

d. 将培养皿孵育于适当的环境条件下，一般为37℃，孵育时间根据实验目的而定，通常为24小时。

5. 结果判读a. 在观察期间，观察每个区域的菌落生长情况。

b. 比较不同药物试液对细菌生长的影响，评定其敏感性。

c. 根据实验目的和相应参考标准，判断细菌对药物的敏感性、中等敏感性或耐药性。

6. 数据处理和分析a. 统计每个药物试液对细菌的抑菌效果，记录菌落生长情况。

b. 根据实验结果，绘制抑菌效果图或者计算药物的最小抑菌浓度（MIC）。

7. 实验注意事项a. 所有操作必须在无菌条件下进行，避免细菌的污染。

b. 实验人员必须戴上手套，避免药物对皮肤造成刺激。

c. 严格按照药物的安全操作规程进行操作，避免药物泄漏和误服。

临床细菌药物敏感试验的标准操作程序临床细菌药物敏感试验是用于确定细菌对特定药物的敏感性和耐药性的方法。

以下是一般的标准操作程序：1. 收集细菌样品：从患者体液样品（如血液、尿液、痰液等）或培养基中收集细菌样品。

2. 细菌培养：将细菌样品转移至含有适当培养基的培养皿中，并在恰当的温度和湿度条件下培养。

确保培养基的pH值和营养成分适宜。

3. 细菌纯化：如果细菌样品混有其他细菌，需要进行细菌纯化步骤，以确保测试结果准确。

4. 制备药物溶液：按照药物说明书中的要求，制备不同浓度的药物溶液。

通常会准备一系列两倍稀释的浓度，以便进行扩散法或微量稀释法。

5. 选择适当的试验方法：常见的药敏试验方法包括扩散法（如Kirby-Bauer方法）和微量稀释法（如MIC法）。

根据实验要求和实验室设备的可用性选择合适的方法。

6. 施加药物：将制备好的药物溶液施加在培养皿上，通常是使用无菌的药物敏感试验纸片或药片，或者使用微量稀释法将不同浓度的药物加入孔洞中。

7. 培养：将加药物的培养皿放置在适当的环境条件下培养一定时间，以允许细菌生长和观察。

8. 观察和记录：观察细菌在各个药物浓度下的生长情况，通常根据生长抑制圈直径或最低抑制浓度（MIC）来评估细菌对药物的敏感性。

9. 分析结果：根据观察和记录的数据，判断细菌对药物的敏感性或耐药性。

通常会参考临床实验室标准或已公开发布的敏感性解释表来进行分析。

10. 报告结果：将药敏试验结果报告给医生或临床实验室主管，以协助制定合适的治疗方案。

以上是一般的临床细菌药物敏感试验的标准操作程序，具体操作步骤可能会根据实验室的具体要求和实验目的而有所不同。

在进行任何实验之前，请确保严格遵守实验室的安全操作规程和规定。

药敏试验操作方法药敏试验是一种常用的实验方法，用于确定某种药物对细菌的敏感性或抗性。

下面是药敏试验的一般操作方法：1. 菌株的培养与准备：首先，选择要测试的细菌株。

常用的菌株包括大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等。

将菌株从冻存状态中转移到琼脂平板上进行培养，然后选取单个菌落进行继续培养。

2. 制备药物浓度梯度：为了测试细菌对不同浓度药物的敏感性，需要制备一系列药物浓度梯度。

可以选择常用的抗生素，如青霉素、利福平等。

根据药物的最小抑菌浓度（MIC）确定所需药物的最高浓度。

3. 制备洗涤液：制备1倍洗涤液，一般使用生理盐水或缓冲液。

如要进行中药药敏试验，可根据实验需求选择适当的提取液。

4. 制备菌悬液：从培养得到的菌落中选择单个菌落，接种到含有洗涤液的试管或培养皿中。

使用比例约为1:100（菌悬液：洗涤液），均匀混合。

5. 药物与细菌接触：将制备好的菌悬液均匀涂布在琼脂平板上，然后使用定量器将一定量的药物滴在琼脂平板上。

确定滴药量时应根据具体药物的MIC进行调整。

6. 培养与观察结果：将涂有菌悬液和药物的琼脂平板进行孵育，时间和温度可以根据具体的实验目的和菌株要求进行调整。

观察培养后的平板上是否出现菌落生长，以及菌落的数量和形态特征。

7. 结果解读与分析：根据观察到的结果，分析不同浓度药物对细菌的抑菌效果，评估细菌对药物的敏感性。

可以根据菌落的出现与否、数量的多少和生长的形态特征来判断细菌是否对药物敏感。

总结：药敏试验是一种重要的实验方法，可以评估细菌对药物的敏感性或抗性。

操作时需要注意菌株的选择和培养方法、药物浓度的制备、菌悬液的制备和药物与细菌的接触方法，以及培养和观察结果等。

通过药敏试验的结果，可以帮助医生选择适当的药物治疗感染病情。

医院抗菌药物敏感性试验的技术要求（2019年版）目录1 范围 (2)2 术语和定义 (2)3 常规药敏试验的药物选择和报告 (4)4 药敏试验方法 (7)5 各种属细菌药敏试验 (12)6 质量控制（Quality control, QC） (17)7 商品化药敏试验检测系统的性能验证 (19)附录 A （资料性附录）临床各种属细菌的药敏试验方法和试验条件 (23)附录 B （资料性附录）不常见苛养菌和非苛养菌药敏试验折点 (27)1 范围本标准规定了临床抗菌药物敏感性试验的技术要求，包括常规药敏试验的药物选择和报告、药敏试验方法、各种属细菌药敏试验、常见菌特殊耐药表型检测、药敏试验的质量控制、商品化药敏试验检测系统的性能验证。

本标准适用于开展临床微生物学检验的各级临床实验室。

2 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。

2.1抗微生物药物敏感性试验Antimicrobial susceptibility testing指检测微生物（本行业标准特指细菌）对抗微生物药物（本行业标准特指抗菌药物）的体外敏感性，以指导临床合理选用药物的微生物学试验，简称药敏试验。

2.2最低抑菌浓度Minimal inhibitory concentration；MIC指在琼脂或肉汤稀释法药物敏感性检测试验中能抑制肉眼可见的微生物生长的最低抗菌药物浓度。

2.3折点Breakpoint能预测临床治疗效果，用以判断敏感、中介、剂量依赖型敏感、耐药、非敏感的最低抑菌浓度（MIC）或者抑菌圈直径（mm）的数值。

2.3.1敏感Susceptible；S当抗菌药物对分离株的MIC值或抑菌圈直径处于敏感范围时，使用推荐剂量进行治疗，该药在感染部位通常达到的浓度可抑制被测菌的生长，临床治疗可能有效。

2.3.2中介Intermediate；I当菌株的MIC值或抑菌圈直径处于中介时，该数值接近药物在血液和组织中达到的浓度，从而治疗反应率低于敏感菌群。

欢迎共阅药敏试验操作方法药敏试验根据美国临床标准委员会（NCCLS）推荐的K-B琼脂法进行，药敏纸片选择中国生物制品鉴定所药敏纸片，试验所选择药物必须包括下列抗生素：氨苄西林（AMP），阿莫西林/克拉维酸（AMC），头孢噻吩（CFT），头孢噻肟（CTX），庆大霉素（GEN），萘啶酸（NAL），诺氟沙星（NOR），四环素（TBT），利福平（RFA），复方新喏明（SMZ）。

1 操作方法：(1)将待检菌接种于普通营养琼脂平板，37℃培养16～18小时，然后挑取普通营养琼脂平板上的纯培养菌落，悬于3ml生理盐水中，混匀后与菌液比浊管比浊。

以有黑字的白纸为背景，调整浊度与比浊管（0.5麦氏单位）相同。

(2)用无菌棉拭子蘸取菌液，在管壁上挤压去掉多余菌液。

用棉拭子涂布整个M-H培养基表面，反复几次，每次将平板旋转60度，最后沿周边绕两圈，保证涂均匀。

(3)待平板上的水分被琼脂完全吸收后再贴纸片。

用无菌镊子取药敏纸片贴在平板表面，纸片一贴就不可再拿起。

每个平板贴5张纸片，每张纸片间距不少于24mm，纸片中心距平皿边缘不少于15mm。

在菌接种后15分钟内贴完纸片。

(4)将平板反转，孵育18～24小时后取出，用游标卡尺测量抑菌圈直径，从平板背面测量最接近的整数毫米数并记录（附表5）。

抑菌环的边缘以肉眼见不到细菌明显生长为限。

有的菌株可出现蔓延生长，进入抑菌环，磺胺药在抑菌环内出现轻微生长，这些都不作为抑菌环的边缘。

结果判断依据鉴定所药敏纸片判定标准。

2 注意事项：(1)制备MH琼脂平板应用直径90mm平皿，在水平的实验台上倾注。

琼脂厚为4±0.5mm （约25-30ml培养基），琼脂凝固后塑料包装放4℃保存，在5日内用完，使用前应在37℃培养箱烤干平皿表面水滴。

倾注平皿前应用pH计测pH值是否正确(pH应为7.3)。

pH过低会导致氨基糖苷类，大环内酯类失效，而青霉素活力增强。

(2) 药敏纸片长期储存应于－20℃，日常使用的小量纸片可放在4℃，但应至于含干燥剂的密封容器内。

深圳市第六人民医院细菌室细菌K-B法药敏试验标准操作规程SOP编码：SOP-JY-XJ-13 页数：5页制定人签名：日期：审核人签名：日期：批准人签名：日期：生效日期：颁发日期：周期性审查：2 年一次修订登记：审查登记：I.目的：建立实验室细菌K-B法药敏试验标准操作规程，以保证实验室检测结果的可信性，确保临床试验的质量。

Ⅱ.范围：适用于细菌室。

Ⅲ.规程：1 简介：细菌药敏试验结果可以为临床合理使用抗生素提供信息，以减少细菌耐药性。

2 仪器：2.1 35℃孵箱；2.2 纸片分离器；2.3 冰箱3 原理：K-B法纸片琼脂扩散法，将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸收琼脂中水分溶解后不断向纸片周围扩散形成递减的梯度浓度，在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成无菌生长的透明圈即为抑菌圈。

抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的MIC呈负相关关系。

4 试剂：4.1 MH平板，购自公司，2-8℃冰箱内保存；4.2 抗菌药物纸片，购自公司，-20℃冰箱内保存。

5 K-B法操作程序：5.1 用无菌棉签将平板上的细菌混悬于无菌生理盐水中，调至0.5麦氏；5.2 用无菌棉签蘸取菌液，在管内壁将多余菌液旋转挤去后，在琼脂表面均匀接种3次，每次旋转平板60º，最后沿平板内缘涂抹1周；5.3 平板在室温下干燥3-5分钟，用纸片分离器将含药纸片紧贴于琼脂表面，各纸片中心相距大于24毫米，纸片距平板内缘大于15毫米；5.4 置35℃孵箱16-18小时后阅读结果，对甲氧西林和万古霉素敏感试验结果应24小时；5.5 结果判断，用精确度为1毫米的尺量取抑菌圈直径，抑菌圈的边缘应是无明显细菌生长的区域；5.6 当葡萄球菌对苯唑西林的药敏试验或肠球菌对万古霉素的药敏试验，围绕纸片周围只要有极少细菌生长均提示为耐药；5.7 根据NCCLS标准，对量取的抑菌圈直径作出“敏感”、“耐药”和“中介”。

全自动微生物药敏鉴定系统操作规程1.开机确认仪器所接电源符合要求打开交流电源（AC）开关在ON的位置仪器按程序进行初始化。

仪器孵育转盘温度上升（约需要5-15分钟），以达到测试卡培养所需要的温度。

2.卡片选择◆鉴定卡GN：革兰阴性杆菌鉴定卡GP：革兰阳性球菌鉴定卡NH：奈瑟嗜血杆菌鉴定卡YST：酵母菌鉴定卡ANC：厌氧+棒状杆菌鉴定卡◆药敏卡AST-GN：革兰阴性菌药敏卡AST-GP：革兰阳性菌药敏卡AST-YST：真菌药敏卡3.配置菌悬液◆悬浮液：0.45% NaCL，PH 4.5-7.2。

每管中加入3ml 0.45% NaCl溶液◆菌悬液的配置：1)鉴定卡GN: 0.5 - 0.63 麦氏单位GP: 0.5 - 0.63 麦氏单位NH: 2.7 - 3.30 麦氏单位YST: 1.8 - 2.20 麦氏单位ANC: 2.7 - 3.30 麦氏单位2)2、药敏卡AST-GN: 3.0ml 盐水+ 145µl 0.5 –0.63 麦氏单位菌悬液AST-GP:3.0ml 盐水+ 280µl 0.5 –0.63 麦氏单位菌悬液AST-YST：3.0ml 盐水+ 280µl 1.8 –2.20 麦氏单位菌悬液4.上机操作流程◆18-24小时分纯细菌（新鲜菌）。

◆根据细菌先卡片（参照表一）◆使用前将卡片和盐水瓶从冰箱取出，放室温15-20分钟，充分复温。

◆在载卡架上放一次性塑料试管，每管中加入3ml0.45%NaCl溶液。

◆用比浊仪校正管(Ref 93059)校正比浊仪，测定的数值应在规定范围内。

◆按表一建议配制菌悬液，并用比浊仪测定菌液浓度。

◆将卡片按顺序放在载卡架上，输样管插入到菌液管中。

药敏卡应放在配对鉴定卡的后面。

◆进入仪器应用软件主界面，扫描载卡架条码（或者直接选取卡架号）。

扫描度卡条码，将鉴定试卡与药敏试卡链接，并输入标本信息。

5.结果处理◆鉴定卡的结果1)一般仅给出单一结果，无需进行补充试验，可给出结果的可信度评估。