苹果品种鉴定技术规程 ssr分子标记法全文

SSR标记技术在种子纯度鉴定中的研究进展(一)论文关键词：种子纯度SSR标记研究进展论文摘要：种子纯度在种子生产中的地位日益提高，以往的形态鉴定等方法难以满足人们的要求。

随着分子标记技术的发展，越来越多地被应用到种子纯度鉴定中。

本文介绍了SSR分子标记技术的基本原理和特点，简要叙述了SSR标记技术在农作物种子纯度鉴定上的研究进展，并就其在杂交种纯度方面的应用潜力进行了探讨。

Keywords:Seedpurity;SSRmarkers;ResearchprogressesAbstract：ThestatusofSeedpurityareincreasedinseedproduction.Itisdifficulttomeetpe oplethatthemethodsofpastidentifications.Withthedevelopmentofmolecula rmarkers,SSRareappliedtotheidentificationofseedpurityincreasingly.Inthisp aper,SSRmolecularmarkertechnology,thebasicprinciplesandcharacteristicsa resummarized.ItisdescribedtheresearchprogressesofSSRmarkersinthepurit yofcropseed.And,itisdiscussedthepotentialapplicationsinthepurityofhybrid.1.前言随着我国农业经济的发展和种子市场的逐步规范，种子的真假和纯度对种子生产具有越来越重要的影响。

为了保护农民以及育种者的利益，发展快速、稳定、可靠的品种纯度鉴定方法具有重要的意义。

种子品种纯度鉴定主要包括品种真实性和品种纯度鉴定两个方面。

品种鉴定主要指对供检样品的真实性进行鉴定。

《探秘“苹果种质”：实验室里的酸甜大冒险》我打小就馋苹果，脆的、面的、甜的、酸的，各种口味都爱。

长大后误打误撞进了农科院的果树研究小组，这下可好，跟苹果打起了更“亲密”的交道，天天琢磨的就是那些五花八门的苹果种质资源。

不过，要摸清它们的“底细”，可不容易，全靠一套严谨的苹果种质资源鉴定技术规程“把关”。

上次为了鉴定一批新收集来的苹果样本，我、阿峰和小悠可着实经历了一场有惊无险、笑料不断的“鉴定大作战”，到现在，实验室里仪器嗡嗡作响、大伙忙得晕头转向的场景还跟放电影似的，在我脑袋里循环播放。

那天一大早，组长把一本厚厚的苹果种质资源鉴定技术规程手册“啪”地拍在桌上，神情严肃得像即将奔赴战场的将军，扯着嗓子说：“瞅见没？这批苹果样本珍贵着呢，关乎咱后续培育新品种的大计。

从外观特征到内在品质，再到基因测序，每一步都得严格按规程来，谁敢乱来，数据不准、品种特性摸不透，耽误了项目，可别怪我翻脸不认人！”我瞅着那密密麻麻的条款，捅了捅阿峰，小声嘀咕：“这鉴定技术规程，听着就像个絮絮叨叨的老妈子，事儿又多又细，咱能整明白吗？”阿峰挠挠头，满不在乎地摆摆手：“怕啥，不就是看看苹果长相、尝尝味道，再摆弄摆弄那些仪器，动手就是了。

”小悠在旁边轻咳一声，推了推眼镜，一脸郑重：“你想得太简单了，苹果种质鉴定稍有偏差，把普通品种当成优种，或者错过潜在的好苗子，那损失可大了去了，得严谨点儿。

”说干就干，第一步就是外观鉴定。

小悠戴上手套，拿起一个苹果，像捧着稀世珍宝似的，眼睛瞪得像铜铃，围着苹果转圈，嘴里还念念有词：“这果形得周正，歪瓜裂枣的多半品质不佳；表皮色泽要均匀，要是这儿红那儿绿，分布怪异，说不定有病虫害隐患，可别出岔子。

”我在一旁帮忙递苹果、记录外观描述，时不时叮嘱两句：“慢点儿，别磕坏了果子。

”阿峰负责用卡尺量苹果的横纵径，眉头紧皱，嘟囔着：“这尺寸得量准咯，大小关乎产量，要是数据乱写，以后预估产量能差出十万八千里，可得盯紧了。

于少帅，赵文霞，姚艳霞，等．新疆野苹果和栽培苹果特异性ＳＳＲ标记开发及应用［Ｊ］．江苏农业科学，２０２０，４８（２１）：６８－７３，８３．ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０２０．２１．０１２新疆野苹果和栽培苹果特异性ＳＳＲ标记开发及应用于少帅１，赵文霞２，姚艳霞２，淮稳霞２，覃伟权１，阎　伟１（１．中国热带农业科学院椰子研究所，海南文昌５７１３３９；２．中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所／国家林业和草原局森林保护学重点实验室，北京１０００９１） 摘要：根据全基因组测序已完成的栽培苹果基因组，设计、筛选针对新疆野苹果的特异性ＳＳＲ引物。

通过ＰＣＲ扩增、基因测序筛选了１５对可以在新疆野苹果和栽培苹果中扩增出稳定性高且具备多态性目的条带的特异性ＳＳＲ引物；其中８对仅能在栽培苹果中扩增出特异性目的条带。

１５对特异性ＳＳＲ引物对新疆野苹果和栽培苹果不同居群的ＳＳＲ分析表明，新疆野苹果遗传多样性较为丰富，与栽培苹果不同居群分化程度较为显著，基因流水平较低。

聚类分析表明，这１５对特异性ＳＳＲ引物可以将新疆野苹果和栽培苹果不同居群清晰区分。

本研究利用新开发的ＳＳＲ引物不仅可以揭示新疆野苹果和栽培苹果的遗传多样性和系统发育关系，对初步了解ＳＳＲ变异位点的生物学功能以及丰富新疆野苹果和栽培苹果基因组的认识也有一定的作用，从而为更好地有效利用相关资源提供研究基础。

关键词：新疆野苹果；栽培苹果；ＳＳＲ标记；遗传多样性 中图分类号：Ｓ６６１．１０１ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００２－１３０２（２０２０）２１－００６８－０６收稿日期：２０２０－０２－０２基金项目：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金（编号：ＣＡＦＹＢＢ２０１７ＳＺ００３）；国家重点研发计划（编号：２０１６ＹＦＣ０５０１５０３）。

作者简介：于少帅（１９８７—），男，山东莱阳人，博士，助理研究员，主要从事分子植物病理学相关研究。

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910270157.9(22)申请日 2019.04.04(71)申请人 山西省农业科学院生物技术研究中心地址 030031 山西省太原市小店区龙城大街81号申请人 山西省农业科学院果树研究所(72)发明人 侯丽媛　邓舒　张春芬　肖蓉　曹秋芬　赵菁　(74)专利代理机构 太原晋科知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 14110代理人 王瑞玲(51)Int.Cl.C12Q 1/6895(2018.01)C12N 15/11(2006.01)(54)发明名称一种用于鉴定苹果新品种“赤霞”指纹图谱的SSR分子标记及其应用(57)摘要本发明属植物分子遗传学和苹果种质创新技术领域，提供一种用于鉴定苹果新品种‘赤霞’指纹图谱的SSR分子标记及其应用。

所述分子标记为14对SSR 共显性标记，分别为：SSR 标记CH01d08，SSR标记CH01f02，SSR标记CH01f07a，SSR标记CH02b10，SSR标记CH02d08，SSR标记CH02c02a，SSR标记CH05e03，SSR标记Hi03a10，SSR标记Hi04a05，SSR标记Hi23d06，SSR标记GD12，SSR标记GD 142，SSR标记GD 147，SSR标记NH009b；对苹果新品种‘赤霞’进行快速、准确的鉴定。

对新品种保护与种质资源收集提供依据。

权利要求书1页 说明书5页序列表5页 附图5页CN 109825636 A 2019.05.31C N 109825636A权　利　要　求　书1/1页CN 109825636 A1.一种鉴定苹果新品种‘赤霞’的SSR分子标记，其特征在于：所述分子标记为如下所示的14对SSR标记，分别为：SSR标记CH01d08，SSR标记CH01f02，SSR标记CH01f07a，SSR标记CH02b10，SSR标记CH02d08，SSR标记CH02c02a，SSR标记CH05e03，SSR标记Hi03a10，SSR标记Hi04a05，SSR标记Hi23d06，SSR标记GD 12，SSR标记GD 142，SSR标记GD 147，SSR标记NH009b；用于扩增上述标记的引物分别为：SSR标记CH01d08核苷酸序列如SEQ ID No.1、2所示；SSR标记CH01f02核苷酸序列如SEQ ID No.3、4所示；SSR标记CH01f07a核苷酸序列如SEQ ID No.5、6所示；SSR标记CH02b10核苷酸序列如SEQ ID No.7、8所示；SSR标记CH02d08核苷酸序列如SEQ ID No.9、10所示；SSR标记CH02c02a核苷酸序列如SEQ ID No.11、12所示；SSR标记CH05e03核苷酸序列如SEQ ID No.13、14所示；SSR标记Hi03a10核苷酸序列如SEQ ID No.15、16所示；SSR标记Hi04a05核苷酸序列如SEQ ID No.17、18所示；SSR标记Hi23d06核苷酸序列如SEQ ID No.19、20所示；SSR标记GD 12核苷酸序列如SEQ ID No.21、22所示；SSR标记GD 142核苷酸序列如SEQ ID No.23、24所示；SSR标记GD 147核苷酸序列如SEQ ID No.25、26所示；SSR标记NH009b核苷酸序列如SEQ ID No.27、28所示。

SSR分子标记实验操作及其注意事项SSR(Simple Sequence Repeats ) 又称微卫星DNA，是一类由几个(多为1~6个) 碱基组成的基序(motif )串联重复而成的DNA序列，其长度一般较短，它们广泛分布于整个基因组的不同位置上，每个座位上重复单位的数目及重复单位的序列都可能不完全相同，因而造成了每个座位上的多态性。

SSR标记数量丰富，覆盖整个基因组，而且分布均匀，多态性高，呈共显性遗传，重复性好，操作简便，是一种理想的分子标记技术，被广泛应用于构建基因连锁图分子辅助育种品种鉴定遗传资源的保存等方面。

一、试剂配制1.0.2%亲水binding silence（现配现用）：1500μL95%乙醇，7.5μL冰醋酸，再加入3μLbinding silence，混匀后使用。

2.0.5%疏水repel silence（购买后可直接使用）3.TBE母液（5×TBE）：Tris Base,54g;硼酸,7.5g;EDTA(0.5M pH8.0),20ml.搅拌溶化，定容至1000ml，无需灭菌，室温保存，母液的pH值应保持在8.3左右。

4.Urea－TBE(一块胶板用量)：5×TBE,12ml;尿素,27g.加双蒸水溶解后定容至51ml，使用漏斗过滤。

5.40％丙烯酰胺：丙烯酰胺,380g;甲叉双丙烯酰胺,20g.加热至37℃使之溶解，加水定容至1000ml，用醋酸纤维素滤膜（入Nalge滤器，0.45μm孔径）过滤，棕色瓶避光保存于室温。

6.10％APS（过硫酸铵）：超纯过硫酸铵,2g;超纯水,18ml.溶解后，4℃保存。

7.TEMED（购买后可直接使用）：电泳级的TEMED可购自Bio-Rad，Sigma或其他供应商。

8.Loading buffer：去离子甲酰胺,50ml;0.5MEDTA(pH8.0),1ml;二甲苯腈蓝cyanol,0.125g;溴酚蓝,0.125g.混匀后置于4℃保存。

农业部公告第2036号――《大麦品种鉴定技术规程SSR分子标记法》等77项农业行业标准目录
文章属性
•【制定机关】农业部(已撤销)
•【公布日期】2013.12.12
•【文号】农业部公告第2036号
•【施行日期】2014.04.01
•【效力等级】部门规范性文件
•【时效性】现行有效
•【主题分类】标准化
正文
农业部公告
（第2036号）
《大麦品种鉴定技术规程SSR分子标记法》等77项标准业经专家审定通过，现批准发布为中华人民共和国农业行业标准，自2014年4月1日起实施。

特此公告。

附件：《大麦品种鉴定技术规程SSR分子标记法》等77项农业行业标准目录
农业部
2013年12月12日附件。

SSR分子标记在苹果研究中的应用作者：季晓钒等来源：《安徽农业科学》2014年第21期摘要SSR（simple sequence repeat ）分子标记是以聚合酶链式反应（PCR）技术为基础的共显性分子标记，也称为微卫星标记（microsatellite markers），其具有多态性高、通用性好、易检测且操作简单等优点，已被较多应用于苹果的品种鉴定、遗传多样性分析以及遗传图谱构建和基因定位等方面。

就以上方面对苹果中SSR分子标记的应用进行概述并提出SSR分子标记在未来苹果中的研究重点和方向。

关键词苹果；SSR；品种鉴定；遗传多样性；遗传连锁图谱中图分类号S188文献标识码A文章编号0517-6611（2014）21-06942-04Application Status of SSR Molecular Markers in AppleJI Xiaofan，XIE Yinfeng et al （School of Forest Resource and Environment，Nanjing Forestry University，Nanjing，Jiangsu 210037）Abstract SSR （simple sequence repeat） is a codominant marker based on the polymerase chain reaction technique（PCR），also known as microsatellite markers. It has high polymorphism，good commonality，easy detection and simple operation etc，have been more applied in apple variety identification，genetic diversity analysis，genetic map construction and gene location. In this paper，the above aspects are summarized and the research emphasis and direction of application of SSR molecular markers in apple for the future are put forward.Key words Apple； Simple Sequence Repeat； Variety identification； Genetic diversity；Genetic map construction基金项目江苏省农业自主创新资金项目[CX12（2043）]；江苏省科技支撑计划项目（BE2012442）；江苏高校优势学科建设工程资助项目（PAPD）。

ICS 65.020.99 B 21DB51杂交玉米品种真实性和纯度 SSR 分子检测技术方法Identifying genuineness and purity of maize hybrid using SSR molecular marker四川省质量技术监督局 发布目次前言................................................................................ .II1 范围............................................................................... .12 规范性引用文件..................................................................... .13 术语和定义......................................................................... .14 原理............................................................................... .2 5试验方法. (2)6核心引物筛选 (2)7品种纯度检测程序 (2)8品种真实性检测程序 (2)9结果计算 (3)10检验报告 (3)附录A（规范性附录）检验报告 ......................................................... .4前言本标准的附录A为规范性附录。

本标准由四川省农业厅提出并归口。

本标准由四川省质量技术监督局批准。

本标准起草单位：四川省种子站、四川省农业科学院作物研究所、成都市种子站。

本标准主要起草人：杨俊品、苏秀、何芳、林勇、谭君杂交玉米品种真实性和纯度SSR分子检测技术方法1范围本标准规定了玉米(Zea mays L.)单交种、自交系的品种真实性和纯度的SSR分子标记检测方法和对检测结果的判定标准。

苹果品种鉴定技术规程 ssr分子标记法全文苹果品种鉴定技术规程序号一：引言苹果品种鉴定是农业领域中的一个重要课题，对于苹果种植者和消费者来说具有重大意义。

很多时候，我们在购买苹果时往往无法准确地辨别不同品种之间的差异，这导致了市场上出现了一些品质不佳、假冒伪劣的苹果。

苹果品种鉴定技术规程的制定和实施对于保障苹果产业的健康发展以及消费者的权益至关重要。

序号二：苹果品种鉴定技术概述苹果品种鉴定技术经过多年的发展和实践，目前已经有了多种方法和技术供我们选择。

其中，ssr分子标记法是一种被广泛接受和应用的分子遗传学技术。

相比传统的鉴定方法，ssr分子标记法具有高效性、准确性和可重复性的优势。

序号三：ssr分子标记法原理ssr分子标记法是通过特定的引物与DNA序列中的简单序列重复（simple sequence repeat, SSR）区域发生特异性扩增，从而形成特定的标记。

这种标记具有多态性，不同苹果品种的SSR标记图谱也会有所差异，因此可以通过分析苹果品种样品的SSR标记图谱来进行鉴定和识别。

序号四：ssr分子标记法的实施步骤1. 提取DNA样品：从苹果树的叶片或果实中提取DNA样品，以获取作为鉴定和分析的基础材料。

2. 扩增SSR标记：使用特定的引物和PCR反应体系，对提取得到的DNA进行PCR扩增，以获得苹果品种的SSR标记图谱。

3. 电泳分析：将PCR扩增后的产物进行电泳分析，在聚丙烯酰胺凝胶上进行分离和检测。

根据不同品种之间的SSR标记差异，可以进行苹果品种的鉴定和识别。

4. 数据处理和结果分析：对电泳结果进行图谱绘制和数据分析，根据不同苹果品种的SSR标记图谱特征，可以确定苹果品种的身份。

序号五：ssr分子标记法的应用价值ssr分子标记法作为一种先进的苹果品种鉴定技术，具有多种应用价值。

它可以帮助种植者确认自己所种植的苹果品种，避免因品种不符导致的收益损失。

它可以帮助监管部门加强市场监管，检测和防止假冒伪劣苹果的流入市场。