微生物的接种技术及分离纯化 PPT课件

纯培养技术可用于病原微生物的分离、鉴 定和药物敏感性试验，为临床诊断和治疗 提供依据。
微生物纯培养技术
02
的基本原理
微生物的分离与纯化
微生物的分离
通过选择合适的培养基和培养条件， 将混合的微生物群体分离成单一的微 生物个体。
微生物的纯化
通过反复划线、稀释接种等方法，获 得纯培养的微生物，即同一菌种或纯 种微生物的培养。
微生物的培养基
培养基的组成
培养基是由水、碳源、氮源、无机盐 等组成，根据不同微生物的需求，培 养基的成分和比例会有所不同。
培养基的制备
根据配方和操作步骤，将各种成分混 合在一起，经过灭菌处理后，制成适 合微生物生长的培养基。
微生物的培养条件
温度
不同微生物对温度的需求不同，适宜的 温度可以促进微生物的生长和代谢。
生理生化特性分析
测定微生物的生理生化特性，如氧化酶试验 、糖发酵试验等。
应用前景探讨
探讨微生物纯培养技术在生产、科研等领域 的应用前景和潜在价值。
微生物纯培养技术04Fra bibliotek的应用实例
在医学领域的应用
抗生素生产
01
微生物纯培养技术用于分离和培养具有抗生素产生能力的菌株
，为医学领域提供大量抗生素。
疾病诊断
《微生物纯培养技术》 ppt课件
目 录
• 微生物纯培养技术概述 • 微生物纯培养技术的基本原理 • 微生物纯培养技术的实验操作 • 微生物纯培养技术的应用实例 • 微生物纯培养技术的挑战与展望
微生物纯培养技术
01
概述
微生物纯培养技术的定义
01
微生物纯培养技术是指通过一定 的物理、化学手段，将自然界中 混杂的微生物群体分离出来，获 得纯种微生物的技术。

20
目的要求
掌握从环境中分离培养细菌的方法，从 而获得若干种细菌纯培养技能。 掌握几种接种技术。
21
实验材料
无菌培养皿(直径90mm)10套、无菌移液管1mL2
支、10mL1支。
营养琼脂培养基1瓶，活性污泥或土壤或湖水1瓶， 无菌稀释水90mL1瓶、9mL5管。 其它：接种环、酒精灯、恒温箱。
22
c. 第三次蒸煮之后基本无菌，但为了确保无菌仍要放 在37℃恒温条件下培养24h，确定无菌才能使用。
18
实验程序4
（培养基和玻璃器材的灭菌方法）
过滤除菌法： 不能用加热灭菌的 液体物质（如维生 素、血清），一般 可用细菌过滤器进 行除菌。
19
第二部分 细菌纯种分离、培养和接
种技术
目的要求 实验材料 实验程序
9
实 验 程 序2
（培养基的配制方法和步骤） 3. 调pH值：用10％ NaOH调pH至7.6，用精 密pH试纸对照。 4. 分装：将培养基分装于5支试管，其余全部 倒入250mL锥形瓶中，分别塞上棉塞。注意 不要污染棉塞和瓶口。 5. 包扎成捆，挂上标签，注明何种培养基。 6. 灭菌备用：培养基灭菌后必须在37℃下恒 温培养24h，确定无菌生长，方可使用。
实验二
细菌培养基的配制、灭 菌及接种、培养技术
1
第一部分 细菌培养基的制备、灭菌
目的要求 实验材料 实验程序
2
目的要求
熟悉玻璃器皿的洗涤和灭菌前的准备。 掌握培养基和无菌水的制备方法。 掌握高压蒸气灭菌技术。
3
实验材料
药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、蒸馏水等。
高压蒸气灭菌锅、烘箱、细菌过滤器、酒精灯。 其它：培养皿、试管、移液管、锥形瓶、烧杯、玻 璃珠等。

革兰染色法
Gram staining
临床微生物与免疫学检验教研室
一、实验目的
1.掌握细菌涂片制作方法； 2.掌握革兰染色法和细菌的基本形态； 3.了解革兰染色法的临床意义。
二、革兰染色原理
原理
细胞壁学说 等电点学说 化学学说
革兰阳性菌 细胞壁肽聚糖形成网状 结构，乙醇处理时，脱水 引起网状结构孔径变小， 通透性降低，结晶紫-碘 复合物不易脱去
实验步骤和方法
1)连续划线分离法：①将接种环火焰灭菌，待冷后取标 本少许；②左手持平板，五指固定平皿盖边缘，向外反 转手掌，装有培养基的平板于手掌内用拇指、小指和 无名指固定，并将平板边缘稍微提高呈现30～45度角， 置酒精灯前上方5～6cm；③右手持已取材的接种环， 先在平板一端涂布，然后快速大幅度左右来回以密而 不重的曲线形式作连续划线接种，使整个平板布满曲 线④划线完毕，将平板作好标记，置35℃孵育18-
革兰阴性菌
细胞壁肽聚糖含量低， 脂类物质含量高，乙醇处 理时，脂类物质溶解，细 胞壁的通透性增加，结晶 紫-碘复合物易脱去
三、实验器材和试剂
1.标本 ：金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的培养物。 2.试剂 ：革兰染液。 3.其他 ：载玻片、生理盐水、接种环、酒精灯、显微镜。
四、操作步骤
1. 细菌涂片制备 ⑴涂片：取洁净载玻片一张，按无菌的方法取1~2环生 理盐水于载玻片上，按无菌的方法各取葡萄球菌和大肠埃 菌 培养物少许，在生理盐水中均匀研磨，涂好的菌膜直径 1cm左右。 ⑵干燥：室温下自然干燥或于酒精火焰半尺高处烘干。 ⑶固定：火焰加热法。目的是杀死细菌，并使菌体与载 玻片粘附牢固，染色时不致于被染液和水冲掉。
培养方法
2 二氧化碳培养法 (1)二氧化碳孵箱：能自动调节二氧化碳的含量和温度， 使用较为方便。 (2)烛缸法：取有盖磨口标本缸或玻璃干燥器，在盖及磨 口处涂以凡士林。将接种细菌的培养基放入缸中，点燃 缸内蜡烛，加盖密封。当蜡烛燃烧时会消耗缸内氧气并 产生CO2，随着缸内氧气的逐渐减少，蜡烛会自行熄 灭，此时缸内CO2浓度约为5％左右。 (3)化学法(重碳酸钠一盐酸法)：（自学）

液体培养基分离纯培养 同一稀释度做多个平行管，95%表现为不生长 。
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二、微生物纯培养技术
稀释平板分离法使用过程中的几个问题 1) 梯度稀释度的确定： 需分离微生物在样品中的数量 2) 选择菌落接种的依据： a、菌落特征； b、菌体的特征 3) 微生物纯培养的标准： 菌落特征一致性 4) 操作要点： 无菌操作
基中是不能含有N源，这种培养基就比较适于能利用空气中N2的微生物。另一种方 法是在培养基中加入某种化学物质，以抑制人们所不需要的微生物的生长繁殖。分
离土壤中真菌，往往在分离真菌的马丁培养基中加入适当的孟加拉红，链霉素和金
霉素等化学药品，目的在于抑制细菌生长，这样更有利于获得其纯培养。
• tupian
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（二）划线分离纯化
• 1、用已溶化至50oC阿斯毕培养基倒入平板。 • 2、用接种环挑取上述菌落少许，在冷凝平板上进行划线分离，而后置28oC培养4
天。 • 划线方法如图：
2 1
3 4
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（三）纯化、镜检，得到纯种培养
• 1、平板上出现单菌落，按无菌操作移入阿斯毕培养基斜面试管中，28oC培养4 天。
选择培养分离
1、利用选择培养基进行直接分离。 2、富集培养（多次培养后再分离）
二元培养物：培养物中/共17页
•
为了获得某种微生物的纯培养，可采用下列两种方法：一种是提供有利于该微
生物生长繁殖的最适培养基及培养条件。如要从土壤中分离自生固氮菌，则其培养
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三、材料与仪器
•1、培养基：阿斯毕无氮 培养基。 •2、菜园土。 •3、灭菌培养皿、镊子、 剪刀、接种针、酒精灯
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栏目 导引
第一章
微生物培养技术
2.灭菌和消毒 灭菌 消毒 强烈 用_____的理化 用相对____的理化方 温和 因素杀死环境 法杀死环境或物体上 概念 或物体内外 的病原微生物和有害 所有 ____的微生物 微生物的营养细胞 _____消毒法和 射线 常用 高温灭菌 __________法 ___________消毒法 化学药剂 方法 适用 所用器材、培 工作场所 对象 养基
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第一章
微生物培养技术
【解析】
(1)大肠杆菌具有体积小、结构简
单、变异类型容易选择、易培养、生活周期 短等优点,培养过程中，除考虑营养条件外， 还要考虑温度、酸碱度和渗透压等条件。
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第一章
微生物培养技术
(2)灭菌是用强烈的理化因素杀死物体内外所
有的微生物，所以对培养基和培养皿要进行 灭菌；而消毒是用较为温和的物理或化学方 法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害 的微生物，所以操作者的双手需要进行清洗
和消毒；紫外线能使蛋白质变性，还能损伤
DNA的结构。
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第一章
微生物培养技术
(3)稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯 度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布 到琼脂固体培养基的表面，进行培养，应保 证样品稀释的比例合适。 (4)对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、
大小等菌落特征对细菌进行初步的鉴定。
第一章
微生物培养技术
第一章
微生物培养技术
第一章
微生物培养技术
第1节 微生物的分离和纯培养
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第一章
微生物培养技术
学习导航 1.了解有关微生物及其培养基的基础知识。 2.理解消毒和灭菌的原理、方法、进行无菌技 术的操作。[重点] 3.理解微生物接种的方法步骤，进行大肠杆菌 的分离和纯培养。 [重、难点]

鉴别肠道细菌 鉴别水中大肠菌群 鉴别水中大肠菌群
液体培养基分离纯培养
工
稀释法进行液体分离必须在同一个稀释度的
业
微 生
许多平行试管中，大多数（一般应超过95%）表
物 与
现为不生长。
育
种 学
单细胞（孢子）分离
实
验
——
一般采用显微操作仪，在显微镜下进行；操
宜
宾 作难度与细胞或个体的大小成反比；
学
院
（3）形态观察
与 育
面划线接种
种 学
• 浅盘固体接种
实
验
——
宜 宾 学 院
无菌操作：在无菌箱或操作室内无菌的环境下进行
工 业 微 生 物 与 育 种 学 实 验
宜 宾 学 院
——
工 业 微 生 物 与 育 种 学 实 验
宜 宾 学 院
——
工
业
划线分离
微
生
物
与
育
种
学
实
验
——
宜 宾 学 院
工 业 微 生 物 与 育 种 学 实 验
各大类
3~6月 简便
细菌、酵母菌 6~12月 简便
各大类** 1~2年 简便
产孢子微生物 1~10年 简便 有效
各大类
5~15年 简便 以上 有效
微
生
工
物
业 微
学
生 物 与
实 验
育 种
室
学
的
实 验
常
——
规
宜 宾
操
学 院
作
程
序
培养基特征性变化 蛋白水解圈 明胶液化 由淡红色变成深红色
主要用途 鉴别产蛋白酶菌株 鉴别产蛋白酶菌株 鉴别产脂肪酶菌株

完整版课件
15
固体斜面培养特征
完整版课件
16
液体培养特征
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17
半固体穿刺培养特征
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18
3 微生物的无菌操作接种原理
• 1) 斜面接种
菌种管和待接试管在手中的拿法
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19
试管拔塞后的灭菌
完整版课件
20
试管拔塞后的取菌
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• 2) 穿刺接种
穿刺接种
（a）水平穿刺接完种整；版（课件b）垂直穿刺接种
• 10 体表不同部位的微生物
• 取一个平板, 用记号笔在平板背面化分为几部分,每部分标 记好要检测的部位,如手,头发,衣服等, 可将洗手前后分别 检测.然后用不同的人体部位按在标记好的平板部位上,将 平板倒转, 恒温37℃培养两天后观察.
22
三 实验器材
• 1 培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基,倒平 板, 斜面,液体,半固体培养基.
• 2 器材：花园土，99mL无菌水1瓶，9mL无 菌水4支，1mL枪头, 0.1mL, 直径9cm的无 菌平皿，天平，试管架，无菌称量纸，酒 精灯，火柴，接种环，涂布棒，记号笔等.
• 3 菌种: 金黄色葡萄球菌, 变形杆菌,枯草杆 菌.
了研究某种微生物的特性或者要大量培养和使用某种微生 物，必须从这些混杂的微生物群落中获得纯培养，这种获 得纯培养的方法称为微生物的分离与纯化。 • 在自然界中，上壤是微生物生活的良好环境，其中生活的 微生物数量和种类都是极其丰富的。土壤中的微生物数量 与种类非常多,在通气良好的花园土中，好气性微生物占 有绝对优势。本实验以花园土为材料分离土壤中的好气性 细菌. • 分离微生物常用的方法有稀释平板分离法和划线分离法， 根据不同的材料，可以采用不同方法，其最终目的是要在 培养基上出现欲分离微生物的单个菌落，必要时再对单菌 落进一步分离纯化。在用稀释平板法分离微生物时，还可 以同时测定待分离的微生物的数量。

在工业领域的应用
食品工业
在食品工业中，细菌分离培养用 于检测食品中的病原菌，保障食
品安全。
生物能源
利用细菌发酵产生生物燃料，如乙 醇、生物柴油等，替代化石燃料。
生物降解
某些细菌能够降解污染物，对环境 保护和治理具有重要意义。
06
展与未来发展方向
新技术的开发与应用
基因编辑技术
人工智能与机器学习
《细菌分离培养》 PPT课件
• 细菌分离培养概述 • 细菌分离技术 • 细菌培养技术 • 细菌的鉴定与分类 • 细菌分离培养的应用 • 展望与未来发展方向
目录
01
细菌分离培养概述
细菌分离培养的定义
细菌分离培养是指从混合菌群中分离 出单一菌种的过程，通过选择性培养 基和特定的培养条件，使目的菌种得 以繁殖并从其他微生物中分离出来。
高了分离效率。
03
细菌培养技术
培养基的种类与制备
固体培养基
用于细菌分离和纯化， 制备时需添加琼脂作为
凝固剂。
液体培养基
用于大量繁殖细菌，制 备相对简单。
选择性培养基
加入特定成分抑制某些 细菌生长，突出所需分
离的细菌。
鉴别培养基
根据细菌代谢产物不同 ，通过指示剂变化鉴别
不同细菌。
培养方法
01
02
05
04
菌种分离
将样品中的微生物接种到选择好的培 养基上，通过培养得到单一菌落。
02
细菌分离技术
划线分离法
总结词
通过在固体培养基上划线，使细菌分散生长的方法。
详细描述
划线分离法是最早的细菌分离技术之一，通过在固体培养基表面划线，使细菌 在划线区域内生长繁殖，形成单个菌落。该方法适用于细菌的纯培养分离。