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专题十六基因工程和细胞工程
1．(2017年天津市和平区生物一模)已知某传染性疾病的病原体为RNA病毒，该病毒表面的A蛋白为主要抗原。疫苗的生产和抗体的制备流程如图1所示。请回答下列问题：
(1)过程①代表的是___逆转录__，过程③构建A基因重组载体时，启动子和终止子是重新构建的，它们应该能被受体细胞的___RNA聚合酶__所识别，以便于其催化转录过程。
(2)如图2为A基因的结构示意图，已知Ⅱ区的碱基数是2000个，其中阴影区域碱基数是800个，空白区域中G和C的总数共有400个，则由该区域能指导蛋白质合成的片段转录产生的mRNA中A和U总数是___400__个。
(3)在给小鼠皮下注射A蛋白时，要重复注射几次的目的是通过二次免疫，增加小鼠体内的___浆细胞__数目。
(4)在将X进行扩大培养前，至少需要经过2次筛选，第一次是将___杂交瘤细胞__筛选出来，第二次是将___能分泌所需抗体的杂交瘤细胞__筛选出来。
(5)对健康人进行该传染病免疫预防时，可选用图中基因工程生产的___A蛋白__来制备疫苗。对该传染病疑似患者确诊时，可以从疑似患者体内分离出病毒与已知病毒进行核酸序列比较，或用图中的___抗A蛋白的单克隆抗体__与分离出的病毒进行特异性检测。
[解析] (1)由以上分析可知①是逆转录。启动子是RNA聚合酶识别和结合的位点，能启动转录过程。(2)已知图中Ⅱ区的碱基数是2000个，其中阴影区域碱基数是800个，则空白区域中碱基总数为1200个，又已知空白区域中G和C的总数为400个，则A＋T总数为800个，每条链中A＋T总数为400个，根据碱基互补配对原则，由该区转录形成的成熟mRNA 中A和U总数也是400个。(3)在给小鼠皮下注射A蛋白时，要重复注射几次的目的是通过二次免疫，增加小鼠体内的浆细胞数目。(4)在将X进行扩大培养前，至少需要经过2次筛选，第一次是用选择培养基筛选出杂交瘤细胞，第二次是采用抗体阳性检测法筛选出能够产生特异性抗体的杂交瘤细胞。(5)对健康人进行该传染病免疫预防时，可选用图中基因工程生产的A蛋白所制备的疫苗。对该传染病疑似患者确诊时，可以从疑似患者体内分离出病毒，与已知病毒进行核酸序列比较；或采用抗原—抗体杂交法，即用图中的抗A蛋白的单克隆抗体进行特异性结合检测。
2．(河北省衡水中学2017届高三下学期一模)转基因抗病香蕉的培育过程如图1所示，
图2表示PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ和ApaⅠ四种限制酶的识别序列及酶切位点。请据图回答下列问题：
(1)质粒的化学本质是___DNA__。
(2)利用基因工程培育转基因抗病香蕉的核心步骤是形成重组质粒，即___基因表达载体的构建__；将目的基因导入受体细胞的方式是___农杆菌转化法__。
(3)将抗病基因从含抗病基因的DNA 中切割下来，使用的限制酶是___PstⅠ和EcoRⅠ__，一个质粒被限制酶PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ同时切割后得到的DNA 片段和粘性末端分别为___3、
3－c__个。单独用ApaⅠ切割质粒后的片段是___—GGGCC —C 和C —CCGGG —
___。 (4)转基因抗病香蕉的培育发生了___基因重组__(变异类型)。卡那霉素会抑制香蕉愈伤组织细胞的生长，根据这一原理可利用含卡那霉素的培养基筛选已导入重组质粒的香蕉细胞。由此推断，重组质粒中应含有___卡那霉素抗性__基因作为标记基因。
[解析] (1)质粒是一种小型的环状DNA 分子。(2)基因工程的操作分四个步骤，其中构建目的基因的表达载体是核心步骤。图中将B 的基因导入受体细胞的方法是农杆菌转化法。
(3)从图1中的目的基因的三种限制酶的切割位点可以看出，不能使用SmaⅠ，否则会破坏目的基因的结构，只有利用另外两种限制酶才能将目的基因切割下来。用三种限制酶切割环状DNA ，能得到3个DNA 片段和3个黏性末端。根据图2中的ApaⅠ识别的碱基序列及切割
位点可知，该酶切割质粒后得到的黏性末端是—GGGCC —C 和C —CCGGG —
。 (4)基因工程的原理是基因重组，利用含卡那霉素的培养基能筛选出抗卡那霉素的细胞，由此可以推断重组质粒中的标记基因是卡那霉素抗性基因。
3．(2017年福建省泉州市生物一模)利用基因工程技术培育转基因抗冻番茄。该过程需要用多种限制酶，如图依次表示EcoRⅠ、SmaⅠ、NaeⅠ三种限制酶的识别序列及切割位点。
请回答：
(1)上述限制酶在特定位点切割DNA ，其实质是断开DNA 分子每条链中特定部位的两个核苷酸之间的___磷酸二酯键__切割后产生了___黏性末端和平__末端。
(2)利用EcoRⅠ和NaeⅠ酶切得某种鱼的抗冻蛋白基因，可与被EcoRⅠ和SamⅠ酶切后的质粒连接成重组质粒，原因是___相同的黏性末端之间可连接，且不同的平末端之间也可以连接__。
(3)重组质料导入番茄后，欲检测抗冻蛋白基因是否转录出mRNA，需利用___标记的含有目的基因的DNA片段(或“标记的抗冻蛋白基因”或“标记的含有目的基因的DNA单链”)__作探针。
(4)利用抗冻蛋白制备出相应的___抗体__，然后进行抗原－抗体杂交，观察到杂交带出现，尚不足以确定转基因抗冻番茄培育是否成功。因此，还应将转基因番茄___置于寒冷环境培养(或进行个体水平检测或进行抗冻实验)__，以确定其耐寒能力是否提高。
[解析] (1)限制酶能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，产生黏性末端和平末端。(2)EcoRⅠ酶切出黏性末端，SmaⅠ和NaeⅠ酶切出平末端，利用EcoRⅠ和NaeⅠ酶切得某种鱼的抗冻蛋白基因，可与被EcoRⅠ和SamⅠ酶切后的质粒连接成重组质粒，原因是相同的黏性末端之间可连接，且不同的平末端之间也可以连接。(3)欲检测目的基因是否转录出mRNA，需利用标记的含有目的基因的DNA片段作探针，进行核酸分子杂交，若出现杂交带，说明目的基因转录出了mRNA。(4)利用抗冻蛋白制备出相应的抗体，然后进行抗原－抗体杂交，观察到杂交带出现，尚不足以确定转基因抗冻番茄培育是否成功。因此，还应进行个体生物学水平的鉴定，将转基因番茄置于寒冷环境培养，以确定其耐寒能力是否提高。
4．(2017年东北三省三校高考生物一模)马铃薯是重要的经济作物，在基因育种方面取得丰硕成果。
(1)马铃薯是双子叶植物，常用___农杆菌转化__方法将目的基因导入马铃薯素体细胞中。构建好的基因表达载体基本结构有：目的基因、___启动子__、___终止子__、___标记基因__、复制原点五部分。
(2)马铃薯易患多种疾病，导致产量下降。基因工程中常用的抗病基因为___病毒外壳蛋白基因、病毒复制酶基因、抗毒素合成基因、几丁质酶基因__(写一种即可)。
(3)科学家还培育出抗除草剂的转基因马铃薯，主要从两个方面进行设计：
①修饰除草剂作用的靶蛋白，使其对除草剂___不敏感(抵抗)__，或使靶蛋白过量表达，植物吸收除草剂后仍能正常代谢。
②引入酶或酶系统，在除草剂发生作用前___被降解(分解)不敏感(抵抗)__。
(4)将目的基因导入受体细胞后，还需对转基因植物进行___检测和鉴定__。
[解析] (1)马铃薯是双子叶植物，常用农杆菌转化法将目的基因导入双子叶植物体细胞中。构建好的基因表达载体基本结构有目的基因、标记基因、启动子、终止子、复制原点五部分。(2)基因工程中常用的抗病基因为病毒外壳蛋白基因、病毒复制酶基因、抗毒素合成基因、几丁质酶基因。(3)①除草剂只能作用于杂草，不能作用于马铃薯，因此需要修饰
