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钙粘蛋白家族的主要作用钙粘蛋白家族是一类含有多个结构域和重复单元的蛋白质，其功能涉及到胚胎发育、信号转导和细胞间黏附等多个方面。
下面将详细介绍钙粘蛋白家族的主要作用。
一、胚胎发育钙粘蛋白家族的成员在胚胎发育过程中扮演着不可或缺的角色。
Axiale（AXL）、C-cadherin、Desmocollins和N-cadherin等钙粘蛋白家族成员在胚胎发育过程中发挥着重要的作用。
其中，C-cadherin是内皮细胞间黏附的基本分子。
在胚胎发育中，C-cadherin表达在神经胚中极化细胞纵向结构中，促进胚胎细胞的正常增殖和分化。
N-cadherin也被广泛地用于研究胚胎发育及其相关机制。
研究表明，N-cadherin在肿瘤中的异常表达可能会影响细胞黏附，导致肿瘤细胞的侵袭和转移。
二、信号转导钙粘蛋白家族成员可以调节细胞外基质与细胞间黏附，从而影响信号传输。
参与信号传导的主要成员包括VE-cadherin、β-catenin、N-cadherin和Desmoplakin等。
VE-cadherin是内皮细胞间的紧密连接点，在确认内皮细胞间的黏附和形成血管壁的过程中发挥重要作用。
VE-cadherin还是一种重要的信号转导蛋白，可以介导生长因子和细胞黏附分子，如血小板衍生生长因子（PDGF）、血小板凝集素（PA）和蛋白酶体蛋白酶抑制剂（PI）等信号的转导。
β-catenin主要与细胞膜下的cadherin结合并促进细胞黏附作用。
同时，它还与Wnt信号通路的核心成员结合，促进细胞核内信号转导，参与细胞生长、增殖和胚胎发育等过程。
三、细胞间黏附钙粘蛋白家族在细胞间的黏附中起到了主要的作用。
在此过程中，cadherin是一种重要的细胞间黏附分子。
通过cadherin间的配对，细胞膜上的钙离子能够与cadherin的结构域结合，从而影响细胞的黏附力。
人体内的许多重要细胞连接均通过cadherin介导，如肌肉细胞间连接、神经细胞间突触传递等等。
pd-1h基因名PD-1H（Programmed death-ligand 1 homolog）是一种与免疫调节相关的蛋白质，也被称为CD274或B7-H1。
它是产生于PD-L1基因上的一种配体，与免疫细胞表面的免疫检查位点PD-1（Programmed death 1）相互作用。
PD-1H与PD-1通过结合来调节正常免疫反应的平衡，以防止过度激活免疫系统和避免自身免疫损伤。
PD-1H的研究与免疫治疗密切相关，因为其在抑制肿瘤免疫逃逸中起到重要作用。
研究表明，获得性的PD-1H表达是肿瘤细胞内的一种逃逸机制，可以减少免疫细胞对肿瘤细胞的攻击。
PD-1H的过度表达与抗肿瘤免疫反应抑制有关，并且已被证明通过抑制T细胞活化和诱导肿瘤相关抑制性免疫细胞的形成来促进肿瘤细胞生长和转移。
然而，PD-1H在免疫调节中的独特作用也为免疫治疗提供了新的机会。
在抗PD-1H抗体的应用下，可以解除PD-1H与PD-1之间的抑制作用，从而增强T细胞活化和增加免疫细胞对肿瘤细胞的攻击。
抗PD-1H抗体已经显示出在多种肿瘤治疗中的潜在用途，并且在临床试验中取得了一些重要的进展。
此外，PD-1H在多个免疫相关疾病中也被广泛研究。
例如，在自身免疫性疾病中，PD-1H的活性可能会影响机体对自身组织的免疫耐受。
PD-1H通过抑制T细胞激活和促进抑制性免疫细胞的生成来限制免疫反应，从而可能导致自身免疫性疾病的发展。
因此，PD-1H可能是一种潜在的治疗靶点，可以通过抑制其活性来恢复免疫耐受并改善自身免疫性疾病的治疗。
总之，PD-1H是一个重要的免疫调节蛋白质，参与了肿瘤逃逸和免疫耐受的调节。
它可能成为新的免疫治疗目标，通过抑制其活性来增强抗肿瘤免疫反应或改善自身免疫性疾病的治疗。
虽然还有很多未知的研究领域，但PD-1H的研究已经为我们揭示了免疫调节机制的一部分，为免疫治疗提供了新的方向和希望。
钙黏蛋白名词解释细胞生物学
钙黏蛋白（Calmodulin）是一种非常重要的调节蛋白，能够实现细胞内部的信号转导、参与许多生命活动。
它是细胞内部一种能够与钙离子结合的核酸蛋白质，是一种活性调控蛋白。
它可以通过分解和积累钙离子，引发一系列的生理反应，调节生物体内的细胞活性。
钙黏蛋白的主要结构特征为两个二级结构相似的K弹性带，每个K弹性带中分别存在4个钙结合位点，可以与钙离子结合，形成一个双价的钙-钙黏蛋白复合物（CaM-Ca2+）。
当外部的钙离子浓度变化时，它可以引起钙调节应答蛋白的活性，促进细胞内部细胞代谢和转导过程。
钙黏蛋白主要参与细胞内细胞代谢、形态变化等各种生命活动，它可以调节细胞内多种关键酶的活性，可以增强或减弱细胞内活性，如参与钙离子浓度变化对细胞激素受体的调节，从而影响细胞内信号转导通路。
此外，钙黏蛋白也可以调控核内基因的表达，参与细胞内的转录调控，影响细胞的生理特性。
ptpn11基因作用PTPN11基因是人体中的一种重要基因，它在细胞信号转导中发挥着重要的作用。
本文将从PTPN11基因的功能、调控机制以及与人类疾病的关系等方面进行探讨。
PTPN11基因是编码蛋白酪氨酸磷酸酶SH2结构域的一种酪氨酸磷酸酶家族成员。
该基因位于人类染色体12号上。
PTPN11蛋白质是一种重要的信号调节分子，它可以通过去磷酸化作用调控多种细胞信号通路的传递。
PTPN11基因的突变与多种疾病的发生发展密切相关。
PTPN11基因在胚胎发育、免疫应答、细胞增殖和分化等生理过程中发挥着重要作用。
研究发现，PTPN11蛋白质可以与多种信号分子相互作用，如细胞表面受体、细胞内信号分子等，从而调控细胞的生长、分化和凋亡等过程。
此外，PTPN11基因还参与了胚胎发育过程中的细胞迁移、形态建立等重要过程。
PTPN11基因的功能调控机制非常复杂。
研究表明，PTPN11基因的活性可以通过磷酸化修饰、蛋白质相互作用、表观遗传修饰等多种机制进行调控。
此外，PTPN11基因的表达水平和活性还受到多种信号通路的调控，如Ras-MAPK通路、JAK-STAT通路等。
这些调控机制的紊乱往往会导致PTPN11基因功能异常，从而引发多种疾病的发生。
PTPN11基因突变与多种人类疾病的发生相关。
研究发现，PTPN11基因突变是Noonan综合征和LEOPARD综合征的主要致病原因。
这些综合征是一组常染色体显性遗传的遗传病，患者表现出心脏畸形、智力发育迟缓、生长发育异常等症状。
此外，PTPN11基因突变还与多个肿瘤的发生相关，如白血病、乳腺癌等。
这些研究结果揭示了PTPN11基因在疾病发生发展中的重要作用。
PTPN11基因作为人体中的一种重要基因，在细胞信号转导中发挥着重要的作用。
通过对PTPN11基因的功能、调控机制以及与人类疾病的关系的研究，我们可以更加深入地了解细胞信号传递的调控机制，为相关疾病的治疗和预防提供理论依据。
钙黏蛋白名词解释钙黏蛋白是一种重要的细胞分泌蛋白，在细胞间相互作用和细胞周围环境中发挥着重要作用。
这种蛋白主要由α链和β链组成，参与细胞黏附、细胞运动、细胞分化和细胞信号转导等多种活动，在生物学中有重要的生理功能。
钙黏蛋白是一种细胞外蛋白，是细胞内质网胞外结构的重要组成部分。
它是由α-和β-链组成的多肽链，由三种结构域（即EGF域、Fibronectin域和糖蛋白域）组成。
α和β链之间的螺旋结构具有三维空间结构，钙离子能够使钙黏蛋白与另一个钙黏蛋白结合形成“钙黏聚合体”，这是钙黏蛋白的重要特征。
钙黏蛋白的主要功能是参与细胞黏附、细胞运动、细胞分化和细胞信号转导等多种生物活动。
它是细胞分泌蛋白，在细胞间隙形成了“橡皮胶状”物质，促进细胞在体细胞间的流动，同时参与细胞黏附，使细胞不易分离。
此外，钙黏蛋白还具有细胞外信号转导功能，可以促进细胞间的信号传递，在细胞分化和发育过程中起着重要作用。
钙黏蛋白的功能受到多种因素的影响，其中介绍最为重要的是钙离子浓度。
当细胞外钙离子浓度高时，钙黏蛋白可以形成紧密结合的二聚体，促进细胞黏附。
而当细胞外钙离子浓度低时，钙黏蛋白可以形成较宽松的三聚体，促进细胞运动。
此外，钙黏蛋白还受到其它蛋白质的调节，这些调节因子包括钙结合蛋白、酶、蛋白分解酶等，它们能够调节钙黏蛋白的表达水平和活性，从而影响它的功能。
钙黏蛋白的研究对于细胞生理学的许多机制和信号系统的理解是至关重要的，它与很多疾病的发生和发展都有关系，比如血管炎、癌症、心血管病等。
因此，这种细胞分泌蛋白的研究非常重要，可以帮助我们更好地理解这些疾病发生和发展的机制，从而更有效地治疗和预防疾病。
综上所述，钙黏蛋白是一种重要的细胞分泌蛋白，可以参与细胞黏附、细胞运动、细胞分化和细胞信号转导等多种活动，在生物学中发挥重要的生理功能。
它的表达水平和活性受到细胞外钙离子浓度和多种调节因子的影响，与很多疾病的发生和发展有关。
对它的研究可以帮助我们更好地理解疾病的发生机制，从而更有效地治疗和预防疾病。
人N 钙黏蛋白/神经钙黏蛋白(N-Cad)试剂盒使用说明书--上海谷研生物公司专业代理销售本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：0.6ng/ml - 16ng/ml使用目的：96T本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中 N钙黏蛋白/神经钙黏蛋白(N-Cad)含量。
实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人 N 钙黏蛋白/神经钙黏蛋白(N-Cad)水平。
用纯化的人 N 钙黏蛋白/神经钙黏蛋白(N-Cad)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微 孔中依次加入 N 钙黏蛋白/神经钙黏蛋白(N-Cad)，再与 HRP 标记的 N 钙黏蛋白/神经钙黏蛋 白(N-Cad)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。
TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样 品中的 N 钙黏蛋白/神经钙黏蛋白(N-Cad)呈正相关。
用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度 （OD 值），通过标准曲线计算样品中人 N 钙黏蛋白/神经钙黏蛋白(N-Cad)浓度。
试剂盒组成1 30 倍浓缩洗涤液 20ml ×1 瓶 7 终止液 6ml ×1 瓶马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP ）活性。
操作步骤1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
16ng/ml5 号标准品 150µl 的原倍标准品加入 150µl 标准品稀释液2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50µl，待测样品孔中先加样品稀释液40µl，然后再加待测样品10µl（样品最终稀释度为5 倍）。
钙黏蛋白的功能
钙黏蛋白是一种钙依赖性细胞粘附分子，在维持正常细胞形态、组织结构和细胞信号传导等方面起着重要的作用。
它有助于形成紧密连接和粘附连接，对上皮屏障功能至关重要，并且调节神经系统内的突触粘附，影响学习和记忆。
钙黏蛋白的功能主要表现在以下几个方面：
1.维持细胞形态和结构：钙黏蛋白可以维持细胞的形态和结构，通过与相
邻细胞之间的相互作用，形成紧密连接，维持细胞间的稳定性。
2.参与细胞信号传导：钙黏蛋白可以参与细胞信号传导，通过与其配体结
合，传递信号到细胞内部，调节细胞的增殖、分化和凋亡等过程。
3.参与免疫应答：钙黏蛋白可以参与免疫应答，通过与免疫细胞表面的受
体结合，调控免疫细胞的活化和功能，从而影响免疫应答的过程。
4.参与肿瘤转移：钙黏蛋白的表达异常与肿瘤转移有关。
在肿瘤细胞中，
钙黏蛋白的表达水平降低或失去功能，可能导致肿瘤细胞的转移和扩
散。
总的来说，钙黏蛋白在人体内发挥着重要的作用，其功能的异常或失调可能会导致多种疾病的发生和发展。
因此，对钙黏蛋白的研究和了解对于疾病的预防和治疗具有重要的意义。
人类钙黏着蛋白11是一种促细胞凋亡的肿瘤抑制因子，在共同的癌症中通过Wnt/b-连接蛋白信号传递和沉默调控细胞stemness16q21-Q22的遗传变异，6-钙黏着蛋白集群的位点，是频繁的涉及多种癌症，暗示这之中存在关键的肿瘤抑制基因（TSGs）。
采用1MB阵列比较基因组合杂交（aCGH），我们精确地定位了一个小的半合子删除位点(B1MB)在16q21-22.1，其中包含一个单一的钙黏着蛋白-11基因（CDH11，OB-cadherin）。
CDH11是广泛表达在人类正常成年和胎儿组织中，同时它的沉默和启动子CpG甲基化经常发现在肿瘤细胞株中，但是不会再正常的上皮细胞中永生。
异常甲基化也经常发生在多种肿瘤中。
CDH11沉默可能被颠倒由于药理化或者基因去甲基化，表明一种遗传学的机制。
CDH11的异位表达强烈地抑制了肿瘤基因和诱导肿瘤细胞凋亡。
此外，CDH11被发现是抑制Wnt/b-钙黏着蛋白和AKT/Rho A信号，以及肌动蛋白应力纤维的形成，从而进一步抑制肿瘤细胞的迁移和侵袭。
CDH11也抑制epithelialto间质转型及下调干细胞标记。
因此，我们的工作，确定了CDH11作为一种功能性肿瘤抑制因子和一个WNt/b-钙黏着蛋白和AKT/Rho A信号的重要拮抗剂，在共同的癌症中频繁的遗传性失活。
背景介绍：使用微卫星标记的各种基因分析已经证实了在多种肿瘤中16q的杂合性频繁流失，包括鼻咽癌，肝癌，乳腺癌，肺癌，前列腺癌和胃癌等。
一个决定性的缺失区域已被定位在16q22.1-16q24.3上，暗示候选癌症的抑制基因的出现（TSG）。
几个候选的TSGs已经被确定在这一区域了，包括WWOX，CBFA2T3，ATBF1，CMTM3和E-钙黏着蛋白。
钙粘素是构成细胞与细胞之间分子链接的重要组成，通过Ca2p依赖的同种相互作用介导实现细胞间粘附的。
通过形成二聚体，钙粘素能够聚集，通过一个拉链机制而实现的，而他们的细胞内区域对于肌动蛋白细胞骨架是一个固定区域通过a-钙粘素和b-钙粘素。
这些相互作用在维护关键角色组织架构和细胞极性以及限制在肿瘤细胞中运动和增值中起到重要作用，从而导致细胞抑制。
六种传统的钙黏着蛋白家族成员，包括CDH1，CDH3，CDH5，CDH8，CDH11和CDH13是位于16q22.1-16q24.3上，作为一个称为6-钙黏着蛋白集群。
有些钙粘素已经被确定为功能性的肿瘤抑制物，例如CDH1和CDH13/H-钙粘素，参与细胞增殖和侵袭能力，促进细胞凋亡。
TSGs遗传学改变，包括启动子CpG甲基化和组蛋白修饰，经常参与肿瘤的发生和发展。
值得注意的是，在肿瘤CDH1和CDH13遗传学上的沉默已经在多种上皮性肿瘤和造血系统恶性肿瘤中有所报道，表明启动子CpG甲基化介导的沉默是一个重要的监管机制在肿瘤发生破坏的钙黏着蛋白家族成员中。
之前我们已经进行了1MB阵列比较基因组杂交的肿瘤细胞株（aCGH）的分析，并确定为唯一的基因CDH11位于16q22.1检测在1MB半合子缺失。
因此，我们推测，在肿瘤发生中有牵连，CDH11可能是一个重要的抑癌因子。
目前，我们的遗传学上和功能上的研究表明，经常有CDH11是灭火多个癌基因的启动子甲基化和作为一种肿瘤抑制基因而起作用，诱导肿瘤细胞凋亡和抑制细胞运动侵袭，以及细胞的干性，并通过Wnt/b-catenin和AKT/Rho信号。
实验结果：1、在16q21-22.1上CDH11的识别作为一个候选TSG2、在常见的癌症中启动子CpG甲基化使CDH11频繁沉默3、在多种原发性癌症中去甲基化恢复的CDH11的表达和CDH11频繁的甲基化4、CDH11抑制肿瘤细胞的集落形成和诱导细胞凋亡5、CDH11抑制Wnt/b-catenin信号通路6、CDH11调节激动蛋白细胞骨架组织，细胞迁移和入侵7、CDH11管制了上皮-间质转化和干性实验讨论：在这项研究中，我们发现，虽然CDH11是广泛表达在人类正常成年人和胎儿组织中，它通常是在多种常见的癌症细胞中出现甲基化沉默，但很少在正常组织中沉默。
药物或者基因甲基化导致了CDH11表达的恢复。
我们还发现，CDH11作为促凋亡的肿瘤抑制基因，通过拮抗Wnt/b-catenin和AKT/Rho信号通路和破坏应力纤维的形成，进一步抑制肿瘤细胞的EMT 和干性、迁移侵袭。
我们的研究是第一次研究，展示了CDH11的功能机制，并大力支持了CDH11是抑癌因子的概念。
CDH11，一个二型古典钙粘素，最初确定在成骨细胞中，后来发现在一定具有侵入功能的肿瘤细胞中过度表达。
此前有研究表明，CDH11是一些肿瘤候补致癌基因如前列腺癌、乳腺癌和口腔癌等。
最近，越来越多的证据表明，CDH11可能是抑癌因子的候选者，在16q位点的杂合性区域频繁的缺失，在多种癌症中。
例如，CDH11遗传性缺失已发现超过一半的视网膜母细胞瘤，作为一个在视网膜母细胞瘤的潜在霍芬海姆牵连CDH11。
使用16q专一性的aCGH，在乳腺癌的发生中CDH11被确定为肿瘤候选抑制因子。
结合表观基因组学分析，恶性嗜咯细胞瘤也证实了CDH11作为候选抑癌因子的潜力。
CDH11的过表达抑制在体内骨肉瘤肺转移中发现。
这些结果均符合我们所支持认为的CDH11是一种烈性肿瘤抑制因子。
TSGs更经常通过遗传学灭活机制，如启动子CpG甲基化，或者组合遗传和表观遗传失活，比等位基因遗传灭活。
三种钙黏着蛋白家族成员作为TSGs基因灭活和或者表观遗传学在多种肿瘤细胞中和包括在肿瘤洗吧的侵润和转移中，这些之前都是有报道的。
我们这里还发现，CDH11是第四种钙黏着蛋白在多种肿瘤细胞霍芬海姆成员运作中起作用，但是由于CpG甲基化在多种癌症中发生沉默。
我们还发现，没有检测到甲基化，在一些癌细胞株中CDH11表达减少，这表明组蛋白修饰可能是一种替代机制在肿瘤发生下调中。
在小鼠视网膜母细胞瘤模型中通过促进肿瘤细胞死亡中，CDH11首次发现作为一个候选肿瘤抑制因子，但是它是如何在人类肿瘤中发生功能的至今没有很好的解决。
CDH11是唯一在钙黏着蛋白中作为两种选择性剪接形式同时表达的：完整形式和一个羧基截断变种而导致同种细胞与细胞的粘附能力丧失。
因此，作为一个显性负产品也是一种分泌形式。
我们还发现，当全长CDH11是被引入到肿瘤细胞中的，它的完整形式是主要的异构体，虽然一个微小的截断变异量也发现了，在与以往的研究中。
在CDH11表达的癌症细胞中CDH11的亚细胞定位展示了钙黏着蛋白家族成员清晰的膜化功能。
此外，我们发现，CDH11完整形式显示了抑制转染细胞的恶性增殖，迁移/入侵和促进肿瘤细胞的凋亡特性，作为一个功能的肿瘤抑制基因与以前发现的相似，完整的CDH11抑制了乳腺癌细胞的侵袭。
虽然入侵的促进作用已有报道，但是需要更多的研究来界定CDH11截断变异在不同肿瘤发生中所扮演的角色。
与钙粘蛋白相关的B-catenin联合体，其核转录作用有一个独特的作用。
作为一个功能性粘合交界分子，CDH11介导钙依赖性的细胞粘附，通过a-catenin、b-catenin和p120ctn与细胞膜，参与Wnt/b-catenin信号通路调节。
在我们的研究中，发现核外电子封存在b-catenin，并降低了b-catenin/TCF介导的增殖和转录活性，从而破坏Wnt/b-catenin信号，以及一个以rho,AKT和JNK交叉的CDH11信号。
按照这个机制，我们观察到破坏激动蛋白聚合后CDH11表达和逆转EMT表型。
EMT促进细胞的自我更新，从而有利于入侵和转移的级联反应。
Cadherin家族成员的角色在细胞中所起的作用是复杂的，取决于协调监管的钙粘素。
E-cadherin蛋白已被确定为胚胎肝细胞多功能性的关键分子。
在我们的研究中，CDH11的几个干细胞标记物下调表明在调节肿瘤细胞的干性的CDH11的潜力，这可能是由于E-cadherin 的增加和抑制了肿瘤的作用。
总之，我们的研究确定了CDH11的抑癌功能和Wnt/b-catenin和AKT/Rho A信号的重要调节。
我们的研究进一步扩展了当前对钙粘素家族在肿瘤形成中所起作用的理解。
材料和方法：细胞系和组织样本使用了一系列的肿瘤细胞株。
永生，不改变正常的上皮细胞株（HET-1A,NP69，NE083，NE1，NE3，CCD841-CON,HMEC和HMEpC）被用作正常对照。
HCT116细胞株与DNMTs遗传KO：HCT116 DNMT1/(1KO),HCT116 DNMT3B/(3BKO)和HCT116 DNMT1/DNMT3B/(DKO)细胞，也可使用。
细胞株无论是从美国典型培养物或者从合作者中忽的都按要求保藏。
细胞株，用10nmol/L 的5-氮杂-20-脱氧胞苷保藏3天或进一步处理与100nmol/L的典古菌素A额外B16 h为先前所诉。
正常成人和胎儿组织的RNA和蛋白质样品均购于商业。
正常的鼻咽癌和乳腺癌组织DNA样本，来自亚洲的中国NPC，匹配香港中文食管癌和匹配手术边缘正常组织和其他癌，如先前描述。
抗体使用的抗体是裂解caspase-7，裂解caspase-9，裂解caspase-3，裂解poly，polymerase，phospho-b-Caenin,phosphor-GSK-3b，phospho-AKT (Ser473), phospho-SAPK/JNK(Thr183/Tyr185), RhoA (2117) 和E-cadherin。
Flag M2,Vimentin 和active b-catenin。
Total b-catenin ,antimouse lg G-HRP, anti-rabbit lg G-HRPCCND1,c-myc,phosphor-RhoAMMP7Monoclonal CDH11 antibodyAtubulin半定量RT-PCR如前所述。
GAPDH的扩增作为对照。
通过多重PCR CDH11的缺失分析CDH11纯合性缺失研究采用多重PCR，如前所述的基因组DNA PCR。
亚硫酸盐处理和启动子甲基化分析重亚硫酸盐修饰的DNA，MSP和BGS进行如前所述。
CDH11表达载体构建和稳定细胞株的增殖CDH11的全长cDNA PCR克隆来自人类气管RNA引物和序列验证。
pcDNA3.1(þ)-Flag-CDH11质粒构建如前所述。
这个表达载体构造转入HONE1和KYSE150细胞中，使用脂质体2000细胞培养于10%胎牛血清的RPMI-1640培养基中，并选定在400mg/ml的G418中20-30天，以建立稳定的细胞集群。
集落形成实验如先前进行了克隆形成实验。
简言之，细胞过夜培养在12孔板上合转染空载体或CDH11表达质粒用脂质体2000。
